枸杞皂苷通过调控Suv39H1/JAK2/STAT3通路对鼻咽癌细胞增殖、侵袭和凋亡的影响

目的　探究枸杞皂苷介导Suv39H1/JAK2/STAT3通路对鼻咽癌CNE-2细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。方法　将人鼻咽癌CNE-2细胞株分为枸杞皂苷干预组（5,10,50 μmol/L枸杞皂苷）及对照组,采用CCK-8检测不同浓度枸杞皂苷作用0,24,48和72 h时CNE-2细胞增殖率,Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测枸杞皂苷干预48 h后CNE-2细胞凋亡率,Transwell小室实验检测CNE-2细胞侵袭能力,实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）与蛋白免疫印迹法（Western blot）分别检测组蛋白甲基化酶Suv39H1的表达水平;采用qRT-PCR和Western blot分别检测Suv39H1在鼻咽癌组织和癌旁组织,以及鼻咽癌细胞系（HONE1,C666-1,CNE-1和CNE-2）和人鼻咽癌上皮细胞（NP69）中的表达差异;构建Suv39H1过表达载体（pcDNA-Suv39H1）以及针对Suv39H1的小干扰RNA（Suv39H1 siRNA）,分别转染于CNE-2细胞,检测细胞增殖、侵袭和凋亡;将pcDNA-Suv39H1载体转染于50 μmol/L枸杞皂苷干预的细胞中,分别检测细胞增殖、侵袭和凋亡。Western blot检测JAK2/STAT3通路相关蛋白p-JAK2和p-STAT3的表达。结果　与对照组相比,枸杞皂苷干预鼻咽癌CNE-2细胞呈剂量依赖性降低细胞增殖（F=12.030,P=0.002 5）和侵袭（F=4.807,P=0.031 5）,增加细胞凋亡率（F=5.232,P=0.026 1）,抑制Suv39H1蛋白表达（F=14.64,P=0.001 3）;与正常组织和NP69细胞相比,鼻咽癌组织和HONE1,C666-1,CNE-1,CNE-2细胞中Suv39H1表达水平显著升高（P<0.01）;转染pcDNA-Suv39H1组细胞增殖、侵袭率增强、凋亡率降低;转染Suv39H1 siRNA组细胞增殖、侵袭率降低,凋亡率升高,差异与对照组相比具有统计学意义（P<0.01） ;与50 μmol/L枸杞皂苷干预组相比,转染pcDNA-Suv39H1组细胞增殖、侵袭率增加、凋亡率降低,p-JAK2和p-STAT3蛋白表达升高（P<0.01）。结论　枸杞皂苷通过下调Suv39H1/JAK2/STAT3通路抑制鼻咽癌CNE-2细胞增殖、侵袭,促进凋亡。     

14-3-3σ蛋白表达下降在鼻咽癌发病中的意义

目的探讨14-3-3σ在鼻咽癌(NPC)中的表达及其临床病理学意义。方法应用W estern b lot检测14-3-3σ在不同分化程度和不同转移潜能鼻咽癌细胞系中的表达;采用免疫组织化学S-P法检测98例原发NPC组织、30例正常鼻咽黏膜上皮组织及20例颈淋巴结转移NPC组织中14-3-3σ蛋白的表达情况;采用SPSS 13.0软件包对数据进行统计分析。结果 NPC细胞中,14-3-3σ表达与分化及转移有关(P<0.01);14-3-3σ在原发NPC组织中的表达较正常鼻咽黏膜上皮组织明显下调(P<0.01);14-3-3σ在颈淋巴结转移NPC中的表达水平较原发NPC明显下调(P<0.01);98例鼻咽癌组织标本中,14-3-3σ的表达水平与NPC的病理分化程度、临床分期、复发及局部淋巴结和远处转移有关,14-3-3σ低表达的肿瘤较高表达的肿瘤有更晚的临床分期、更容易复发、更容易发生局部淋巴结和远处转移(P<0.05)。结论 14-3-3σ在鼻咽癌中表达降低可能与其发生、发展有关,有望成为NPC分化的标志物及潜在的治疗靶标。     

14-3-3σ逆转录病毒载体的构建及稳定转染HaCat细胞系的建立

目的:构建14-3-3σ逆转录病毒载体,并建立高表达14-3-3σ的HaCat细胞系.方法:以人基因组为模板,通过PCR扩增出14-3-3σ基因的编码序列,定向插入到pLEGFP-N1质粒中,并在STBL3内进行扩增,刷选阳性克隆,酶切和测序验证后,转染293vr细胞进行病毒包装、扩增、纯化、获取逆转录病毒栽体.将逆转录病毒载体感染HaCat细胞后Western、实时荧光定量PCR法检测14-3-3σ的表达情况.结果:连接重组后经酶切和测序筛选出pLEGFP-N1-14-3-3σ;稳定转染的HaCat细胞系在倒置荧光显微镜下呈绿色荧光.Western和实时荧光定量PCR法表明14-3-3σ表达明显增强.结论:成功构建了14-3-3σ逆转录病毒载体,并构建了英稳定转染的HaCat细胞系.     

癌基因PIM-1通过调控mir-17-5p表达调控鼻咽癌细胞的转移

目的：探讨PIM-1蛋白参与鼻咽癌细胞转移的机制。方法采用shRNA将CNE-2Z鼻咽癌细胞中的PIM-1的表达进行沉默,并采用realtime对mir-17-5p的表达进行检测;采用shRNA将CNE-2Z鼻咽癌细胞中的mir-17-5p的表达进行沉默,采用transwell实验比较mir-17-5p转染前后sh1-PIM-1细胞的迁移能力。结果 Realtime及Western Blot结果显示PIM-1沉默后mir-17-5p的表达水平显著升高。transwell结果显示,mir-17-5p的过表达增强CNE-2Z细胞的迁移能力。结论癌基因PIM-1通过调控mir-17-5p的表达,可以调控鼻咽癌肿瘤细胞的转移。     

LY294002对Jeko-1细胞的增殖抑制及作用机制研究

本研究旨在探讨磷脂酰肌醇3-激酶/丝氨酸苏氨酸激酶（PI3K/Akt）特异性抑制剂LY294002对人套细胞淋巴瘤Jeko-1细胞生长、细胞凋亡的影响及其作用机制.四甲基偶氮唑盐（MTT）方法检测细胞增殖率;流式细胞术检测细胞凋亡水平;Western blot检测凋亡相关蛋白Cyclin D1、Bcl-2、procaspase-3及PI3 K/Akt信号通路相关蛋白p-Akt、p-mTOR、p-P70S6K的变化.结果表明,LY294002能抑制Jeko-1细胞的增殖.Jeko-1细胞经LY294002 0、5、10和20 μmol/L作用24 h后,凋亡率分别为（3.25±1.27）％、（11.34±2.35）％、（22.81±2.74）％和（43.61±3.48）％,差异有统计学意义（P＜0.01）;Westem blot检测发现,凋亡相关蛋白Cyclin D1、Bcl-2、procaspase-3表达下降,PI3K/Akt信号通路相关蛋白p-Akt、p-mTOR、p-P70S6K磷酸化水平降低.结论：LY294002可明显抑制Jeko-1细胞增殖,其机制可能通过下调PI3K/Akt信号通路中的p-Akt、p-mTOR、p-P70S6K磷酸化水平,抑制PI3K/Akt信号通路,促进细胞凋亡.     

c-Met抑制剂对人鼻咽癌细胞株CNE-1的生长抑制作用

目的:探讨c-Met抑制剂PHA-665752对人鼻咽癌细胞的生长抑制作用,为c-Met抑制剂在鼻咽癌中的应用提供实验依据。方法:Western blot法检测鼻咽癌细胞经HGF和(或)PHA-665752处理前后CNE-1细胞中相关信号分子的磷酸化状态变化。MTT法检测肝细胞生长因子(HGF)的促鼻咽癌细胞CNE-1的增殖作用。同时检测PHA-665752对CNE-1细胞的生长抑制作用。流式分析PHA-665752对鼻咽癌细胞CNE-1凋亡的影响。结果 :HGF可促进CNE-1细胞的增殖。而PHA-665752抑制了CNE-1细胞的增殖,并增强细胞凋亡。PHA-665752抑制c-Met磷酸化,同时降低下游信号分子Akt、Erk1/2和STAT3的磷酸化。结论:PHA-665752显著抑制鼻咽癌细胞CNE-1增殖,诱导细胞凋亡,其机制与调节下游MAPK、PI3K和STAT通路有关。     

氢吗啡酮后处理经PI3K/Akt通路减轻大鼠心肌缺血-再灌注细胞凋亡

目的:探讨PI3K/Akt信号通路在氢吗啡酮后处理减轻大鼠心肌缺血-再灌注细胞凋亡中的作用。方法:健康雄性SD大鼠40只,按照随机数表法随机分为5组,每组8只,假手术组（Sham组）、缺血-再灌注组（I/R组）、缺血-再灌注+氢吗啡酮组（I/R+H组）、缺血-再灌注+PI3K抑制剂组（I/R+W组）、缺血-再灌注+氢吗啡酮+ PI3K抑制剂组（I/R+ H+ W组）。采用左冠状动脉前降支结扎30 min、再灌注120 min的方法建立心肌缺血-再灌注损伤模型。实验结束后,用TTC染色法测心肌梗死面积;用比色法检测血清乳酸脱氢酶（LDH）漏出量;末端标记法（TUNEL）测心肌细胞凋亡;Western blot法检测p-Akt、Bcl-2、Bax蛋白表达。采用SPSS 13.0软件行统计分析。采用单因素方差分析进行组间比较。结果:与Sham组比较,I/R组心肌梗死面积、血清LDH漏出量及心肌细胞凋亡增多,p-Akt表达和Bax表达上调,Bcl-2表达下调（ P<0.05）;与I/R组比较,I/R+H组心肌梗死面积、血清LDH漏出量及心肌细胞凋亡减少,心肌p-Akt及Bcl-2表达上调,Bax表达下调（ P<0.05）;与I/R+H组比较,I/R+H+W组心肌梗死面积、血清LDH漏出量及心肌细胞凋亡增多,p-Akt表达和Bcl-2表达下调,Bax表达上调（ P<0.05）。 结论:氢吗啡酮后处理可减轻心肌缺血-再灌注引起的心肌细胞凋亡,其心肌保护机制可能与激活PI3K/Akt信号通路有关。     

重组质粒pENTR-CMV-EGFP-hsa-mir-16-1/15a的构建与表达

目的:构建针对人鼻咽癌CNE-2Z细胞Bcl-2基因pENTR-CMV-EGFP-hsa-mir-16.1/15a真核表达质粒,转染至CNE-2Z细胞并检测其表达.方法:采用PCR法从重组质粒PGH-16-1/15a中获得16-1/15a-X2370G全长序列,在T4 DNA Ligase连接酶作用下连接入重组载体pENTR-CMV-EGFP.重组质粒经酶切及测序鉴定.将构建成功的重组质粒转染入人鼻咽癌细胞株CNE-2Z,用荧光显微镜观察转染结果.结果:重组质粒pENTR-CMV-EGFP-hsa-mir-16-1/15a经酶切与测序证实构建成功,转染至鼻咽癌CNE-2Z细胞后,荧光显微镜观察证实该重组质粒能在CNE-2Z中表达.结论:成功构建真核表达质粒DENTR-CMV-EGFP-hsa-mir-16-1/15a,并在鼻咽癌CNE-2Z细胞中得到表达,可用于进一步检测其抗肿瘤机制.     

靶向联合阻断EGFR信号通路影响鼻咽癌细胞生长的研究

目的 本研究利用tarceva(EGFR-酪氨酸激酶拮抗剂)阻断EGFR介导的信号通路,观察其对鼻咽癌细胞株CNE-２生长的影响,并探索其机理。方法　用不同浓度的 tarceva处理鼻咽癌细胞株CNE-２,采用CCK-8法检测细胞生长抑制率,流式细胞术进行细胞周期、凋亡率的分析,western bloting检测相关蛋白表达。结果　（1）tarceva呈剂量依赖性抑制CNE-2细胞生长;( 2 )处理组细胞G1期细胞比例和凋亡率明显高于对照组（P<0.05）;（3）与对照理组相比,处理组出现明显的p-EGFR表达下调。结论 tarceva通过抑制EGFR的磷酸化阻断EGFR信号通路,增加G1期阻滞,从而抑制鼻咽癌细胞生长。     

14-3-3ζ对HL-60和HL-60/VCR细胞增殖的抑制作用

本研究旨在进一步探讨14-3-3ζ在急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)敏感细胞HL-60和耐药细胞HL-60/VCR中的表达和作用。用半定量RT-PCR和Western blot分别检测多药耐药基因mdr1 mRNA和Pgp的表达以验证基因芯片的结果,用Western blot检测Pgp、14-3-3ζ以及抗凋亡分子BCL-2、MCL-1蛋白的表达;免疫荧光法和激光共聚焦法检测14-3-3ζ在HL-60和HL-60/VCR亚细胞中的定位。采用将小干扰RNA(siRNA)通过脂质体LipofectamineTM2000介导,瞬时转染HL-60和HL-60/VCR细胞,以观察细胞生长的变化。细胞增殖指标采用生长曲线和细胞周期测定法测定。采用RT-PCR和Western blot方法检测Pgp、14-3-3ζ以及抗凋亡分子BCL-2、MCL-1表达的变化。结果表明,mdr1 mRNA和Pgp仅在HL-60/VCR细胞中高表达。与HL-60细胞相比,除了14-3-3σ之外,其他14-3-3亚型均在HL-60/VCR细胞中高表达,尤其是14-3-3ζ同时伴有BCL-2和MCL-1高表达。另外,研究发现14-3-3ζ主要定位于细胞浆和核。通过RNA干涉抑制14-3-3ζ的表达能抑制HL-60和HL-60/VCR细胞的生长,下调BCL-2和MCL-1蛋白。结论:14-3-3ζ可能通过BCL-2和MCL-1介导调控HL-60和HL-60/VCR细胞的增殖,是治疗难治复发AML的潜在新靶点。     

日本血吸虫(中国大陆株)14-3-3信号蛋白的真核表达

目的从日本血吸虫成虫cDNA中扩增出信号蛋白Sj14-3-3编码基因，并亚克隆至真核表达载体pcDNA3．1( )，旨在制备重组诊断抗原和分子疫苗。方法提取日本血吸虫成虫总RNA，分离mRNA，RT-PCR法制备cDNA．并扩增出Sj-4-3-3编码基因，通过线性TA克隆载体pGEM-T连接，亚克隆至真核表达载体pcDNA3．1( )，经转染至COS-7细胞中表达，Western blotting鉴定。结果RT-PCR产物、pGEM-T-Sj14-3-3及pcDNA3．1( )-Sj14-3-3分别经双酶切后均获得一特异性基因片段，经SDS-PAGE及Western blotting鉴定后的分子量为29kD。结论真核表达重组质粒pcDNA3．1( )-Sj14-3-3在COS-7细胞中的表达产物是一分子量为29kD的蛋白，并能被抗Sj14-3-3单克隆抗体识别。     

磷脂酰肌醇-3激酶上的一段多肽对Jurkat细胞的周期阻滞作用

视网膜母细胞瘤蛋白（pRb）通过与转录因子E2F的结合调控细胞的增殖.磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）是生长因子调节通路中的基本成分,也参与细胞的增殖和分化。近年来的研究表明P13K可通过AKT途径调控细胞周期，Xia等发现，P13K的调节亚基p55γN端有1个含24个氨基酸的多肽（N24^p55γ），可直接与Rb蛋白结合，参与调控Rb蛋白对细胞周期的调节作用，其过表达可与内源性的p55γ竞争性地和pRb结合，阻断pRb-E2F介导的信号传导通路，从而抑制肿瘤细胞的增殖。     

IRS-1/PI3K/Akt2信号通路调控miR-139-5p对2型糖尿病大鼠的干预效果

目的分析基于胰岛素受体底物1(IRS-1)/磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt2)信号通路调控微小核糖核酸139-5p(miR-139-5p)对2型糖尿病大鼠的干预效果。方法选取52只雄性SPF级Wistar大鼠,12只大鼠作为对照组,另外40只建立2型糖尿病模型,将建模成功36只大鼠采用随机数字表法分为模型组、沉默组、过表达组,每组各12只。对照组、模型组大鼠注射同剂量0.9%氯化钠溶液,沉默组大鼠尾静脉注射10μL miR-139-5p沉默慢病毒悬液,过表达组大鼠尾静脉注射10μL miR-139-5p过表达慢病毒悬液,于miR-139-5p转染后,对各组大鼠毛发光泽度、活动、形态等一般情况进行观察。对各组大鼠miR-139-5p、IRS-1、PI3K、Akt2表达量、血糖相关指标[胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、空腹胰岛素、空腹血糖、胰岛β细胞功能指数(HOMA-β)]、炎症因子[白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)]水平、血脂变化水平、IRS-1/PI3K/Akt2信号通路蛋白表达量进行检测。结果与对照组相比,模型组、沉默组、过表达组miR-139-5p表达量、HOMA-β、IRS-1、PI3K、Akt2 mRNA表达量、IRS-1、磷酸化IRS-1(p-IRS-1)、PI3K、磷酸化PI3K(p-PI3K)、Akt2、磷酸化Akt2(p-Akt2)表达量均降低,HOMA-IR、空腹胰岛素、空腹血糖、IL-6、TNF-α、总胆固醇、甘油三酯均升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,沉默组、过表达组miR-139-5p表达量、HOMA-IR、空腹胰岛素、空腹血糖、IL-6、TNF-α、总胆固醇、甘油三酯均降低,HOMA-β、IRS-1、PI3K、Akt2 mRNA表达量、IRS-1、p-IRS-1、PI3K、p-PI3K、Akt2、p-Akt2表达量均升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与沉默组相比,过表达组miR-139-5p相对表达量、HOMA-IR、空腹胰岛素、空腹血糖、IL-6、TNF-α、总胆固醇、甘油三酯降低,HOMA-β、IRS-1、PI3K、Akt2 mRNA表达量、IRS-1、p-IRS-1、PI3K、p-PI3K、Akt2、p-Akt2表达量升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论上调miR-139-5p表达,可调节2型糖尿病大鼠体内血糖、血脂水平,其机制可能与IRS-1/PI3K/Akt2信号通路有关。     

鼻咽癌患者血清miR-144-3p及miR-151-3p的表达水平及临床价值

目的　探讨鼻咽癌患者血清miR-144-3p及miR-151-3p的表达水平及临床价值。方法　选取2016年1月～2020年7月涿州市医院收治的106例鼻咽癌患者和50例健康对照组作为研究对象，采用实时定量PCR法检测miR-144-3p及miR-151-3p表达水平。应用受试者工作特征（ROC）曲线分析miR-144-3p及miR-151-3p诊断鼻咽癌的价值。Pearson相关分析鼻咽癌患者血清miR-144-3p与miR-151-3p表达水平的相关性。结果　鼻咽癌组血清miR-144-3p（2.36±1.05 vs 0.82±0.27）及miR-151-3p（3.58±1.73 vs 0.97±0.36）表达水平均明显高于对照组，差异有统计学意义（均P <0.001）。鼻咽癌患者血清miR-144-3p及miR-151-3p表达水平升高与临床分期高、分化程度低、淋巴结转移及远处转移有关（t=5.824~19.307，均P <0.01）。ROC曲线显示， miR-144-3p为1.61及miR-151-3p为2.25是诊断鼻咽癌的最佳截断值，二者联合诊断鼻咽癌的曲线下面积（0.937，95%CI:0.875~0.99）最大，其敏感度和特异度为95.3%和87.0%。鼻咽癌患者血清miR-144-3p表达水平与miR-151-3p呈正相关（r=0.872，P<0.001）。结论　鼻咽癌患者血清miR-144-3p及miR-151-3表达水平明显升高，二者联合诊断鼻咽癌的价值较高。     

人鼻咽癌CNE-2细胞转染方法的比较研究

目的比较三种非病毒载体转染方法转染人鼻咽CNE-2细胞。方法分别采用脂质体转染法、电穿孔转染法、磷酸钙纳米颗粒转染法将pEGFP-N1质粒DNA转染人鼻咽癌CNE-2细胞,转染24h后荧光显微镜观察EGFP的表达,计算转染率;MTT实验比较各转染方法对CNE-2细胞的细胞毒性。结果脂质体转染组的转染率为（51．9±2．8）％;电穿孔转染组的转染率为（42．8±2．6）％;磷酸钙纳米颗粒转染组的转染率为（48．1±2．3）％。经统计学分析,三种方法转染CNE-2细胞的转染率相互之间有显著的差异（P〈0．001）;MTT结果显示,磷酸钙纳米颗粒转染法的细胞毒性最小。结论磷酸钙纳米颗粒转染法转染效率相对较高,而细胞毒性小,可作为转染CNE-2细胞的首选转染方法。     

pI3K、p-Akt和PTEN在鼻咽癌中的表达及意义

目的观察鼻咽癌（NPC）组织中pI3K、p-Akt和PIEN表达,探讨它们在鼻咽癌发生中的作用。方法应用免疫组化方法检测60例NPC组织和23例鼻咽部慢性炎症组织中pI3K、p-Akt和PTEN的表达。结果NPC与慢性炎症组pI3K的表达率分别为86．7％（52160）和60．9％（14／23）（P〈0．05）;p-Akt表达率分别为76．7％（46／60）和47．8％（11／23）（P〈0．05）;PIEN的表达率分别为41．7％（25160）和65．2％（15／23）（P〈0．01）。pI3K／p-Akt表达率NPC组明显高于慢性炎症组;PTEN表达率NPC组明显低于慢性炎症组,二组表达均与PTEN表达呈负相关。结论pI3K／Akt信号通路的激活、PrEN的抑制,可能在鼻咽癌的发生中起重要作用。     

S1P/S1PR信号通路对中性粒细胞功能的影响

本研究旨在检测1-磷酸鞘氨醇(S1P)对fMLP活化的中性粒细胞的引发作用,检测粒细胞活化后发生呼吸爆发的产物,并探究S1P引发作用的信号通路。流式细胞术检测新鲜分离的中性粒细胞的状态;高铁细胞色素C还原法间接计算超氧阴离子(O2-)释放量;二氢罗丹明123流式细胞术检测粒细胞的呼吸爆发程度;免疫印迹法检测PI3K-Akt信号通路相关蛋白的表达。结果表明,S1P预处理后fMLP活化的粒细胞所释放的O2-量明显增高;S1P引发的fMLP活化组中,罗丹明123的平均荧光强度明显高于fMLP单独处理组;PI3K及Akt蛋白参与了粒细胞呼吸爆发的信号传递。结论:S1P是一种新的粒细胞引发试剂,较高浓度S1P(10-6μmol/L)能够引发fMLP活化的中性粒细胞发生呼吸爆发;该信号通路可能为S1P与粒细胞上的S1P受体作用,活化下游的PI3K,再通过Akt传递信号,最终活化NADPH氧化酶,发生呼吸爆发。     

PI3K/Akt信号传导通路与肿瘤多药耐药研究进展

磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B[phosphatidylinositol-3-kinase(PI3K)/protein kinase B(Akt),PI3K/Akt]信号传导通路作为细胞生存重要通路之一,在促进细胞生长、增殖,促进细胞运动、侵袭,抑制细胞凋亡,促进血管生成,抵抗化疗和放疗等方面起重要作用.近年来,关于PI3K/Akt 信号通路与药物耐药性关系的研究越来越多,并被认为是化疗耐药治疗的新靶点.Akt是PI3K/Akt 通路中的关键性效应分子,多种肿瘤组织中都有Akt 的过度表达和活化.多项实验表明,化疗药物可增加Akt 磷酸化水平,使肿瘤细胞产生化疗耐受,深入研究其作用机制,可能为肿瘤的基因治疗、抗肿瘤药物开发提供新靶点.     

H_2O_2致PC12细胞凋亡与细胞内14-3-3蛋白表达水平下调的关系

目的:探讨用H2O2处理PC12细胞制作PD氧化应激细胞模型的最佳浓度与最适处理时间,以及H2O2致PC12细胞凋亡与14-3-3蛋白表达水平的关系。方法:采用MTT法、荧光分光光度计、流式细胞术及免疫印迹技术分别检测PC12细胞活力、Caspase酶活性、细胞凋亡率以及14-3-3蛋白表达量。结果:当H2O2浓度为100μmol/L时Caspase活性最高;100μmol/LH2O2处理PC12细胞24h时细胞凋亡率最高;PC12细胞的凋亡率与14-3-3蛋白表达的水平呈显著负相关。结论:100μmol/L和24h分别为用H2O2制作PD氧化应激模型的最佳浓度和处理时间,H2O2致PC12细胞的凋亡与细胞内14-3-3蛋白表达水平下调有关。     

长链非编码RNA MEG3对鼻咽癌细胞增殖和侵袭的影响

目的探究长链非编码RNA母系表达基因3(MEG3)对鼻咽癌细胞增殖和侵袭的影响。方法体外培养鼻咽癌细胞系5-8F、CNE-2,转染MEG3分为空白对照组(转染试剂转染)、阴性转染组(MEG3阴性对照质粒转染)、MEG3转染组(MEG3 mimis质粒转染)。实时定量PCR(qRT-PCR)检测MEG3 mRNA表达;MTT法检测细胞增殖情况;平板细胞克隆实验检测菌落形成情况;流式细胞仪检测细胞凋亡以及周期分布情况;裸鼠模型肿瘤形成实验评估体内肿瘤生长情况;蛋白免疫印迹法(WB)检测细胞中Snail、N-钙黏着蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、E-钙黏着蛋白(E-cadherin)蛋白表达情况。结果与正常鼻咽上皮细胞系NP69相比,5-8F、CNE-2细胞中MEG3 mRNA表达均降低(P0.05)。在5-8F、CNE-2细胞中,与空白对照组、阴性转染组相比,MEG3转染组细胞中MEG3mRNA表达升高(P0.05)。在5-8F、CNE-2细胞中,随着细胞培养时间延长,MEG3转染组细胞抑制率逐渐升高;同一时间点,与空白对照组、阴性转染组相比,MEG3转染组细胞抑制率均升高(P0.05)。与空白对照组、阴性转染组相比,MEG3转染组细胞菌落数量、细胞迁移、侵袭数量均降低(P0.05)。与空白组、阴性转染组对比,MEG3转染组细胞凋亡率、G1期DNA含量均升高,差异有统计学意义(P0.05)。与空白组、阴性转染组对比,在1、2周MEG3转染组肿瘤体积均变小(P0.05)。与空白组、阴性转染组相比,MEG3转染组Snail、N-cadherin、Vimentin蛋白表达均降低,E-cadherin蛋白表达升高(P0.05)。结论 MEG3在鼻咽癌中表达降低,MEG3表达升高后可抑制鼻咽癌细胞的增殖、侵袭、迁移,使细胞周期停留在G1期,促进细胞凋亡,其机制可能与抑制上皮细胞-间充质转化有关。