Lin-CD34-与Lin-CD34+细胞差异表达基因的鉴定

目的 克隆并鉴定Lin^-CD34^-细胞区别于Lin^-CD34^ 细胞的可能与其性状相关的基因。方法 以uLin^-CD34^-细胞作为检测对象，Lin^-CD34 细胞作为驱动细胞，应用抑制消减杂交技术构建Lin^-CD34^-细胞的cDNA消减库。选取部分克隆测序，测序结果与GenBank进行同源性比较和功能分析。结果 共获得593个含有插入片段的克隆，片段的长度为300～500bp。随机选取53条EST进行测序，其中37条EST代表了10个已知基因，其余16条EST。代表了4个未知序列。结论 利用抑制消减杂交技术鉴定出部分Lin^-CD34^-细胞特异表达的基因，可能与Lin^-CD34^-细胞的特性相关。     

小鼠不同胚龄造血组织卵黄囊的基因表达谱研究

胚胎期小鼠的体内外实验证实，不同阶段卵黄囊来源的造血干细胞（HSC）造血重建能力有所不同。为了研究哺乳动物胚胎期造血的发生与调控，以利于对人类的相应生理过程的了解，我们共构建了地模式生物体－小鼠胚龄第9天与第12天造血组织卵黄囊的cDNA文库，通过表达序列标签（EST）测序初步识别了其基因表达谱。从胚龄第9天卵黄囊文库（YS9）共获得2173条有用序列，包括已知基因443种，已知EST151种；从胚龄第12天卵黄囊文库（YS12）共获得1710条有用序列，包括已知基因298种，山知EST392种。在2个文库中均出现的已知EST共89种。通过测序发现在后期卵黄囊中存在较原始的具多系分化潜能的细胞，并发现线粒体基因在胚胎期表达较高。本文描述了9dpc、12dpc卵黄囊的基因表达谱，对它们的比较有助于认识不同阶段的HSC的造血能力的差异，以上工作将为深入了解人类造血系统的起源与发生提供有用的线索。     

长期培养后小鼠造血基质细胞差异表达基因的筛选

为了进一步研究长期培养体系（long-term culture,LTC)中造血基质细胞调控造血的分子基础及其作用机制，并发现新型造血调控因子，以LTC体系培养后小鼠髓髓造血基细胞（LTC－St)为被扣除杂交组，以未经培养的小鼠骨髓细胞（BMC）为扣除杂交组，3用抑制性扣除杂交法（SSH）进行杂交，将杂交产物克隆并测序，进行生物信息学分析，结果：获得了131个差异表达EST克隆，这些克隆代表了26种已知或部分已知的不同基因和7条无任何线索的全新基因，5条具有完整开放阅读框架，无功能线索的新基因中3条有信号肽。结论：通过本实验得到了LTC体系中特异性表达的一个消减库，获得了几条可能与造血调控相关的新型基因或EST，为揭示造血微环境支持造血的分子机制提供了有意义的线索。     

能量代谢基因表达改变在大鼠卒中发病学中的意义

目的　探讨能量代谢基因表达改变在卒中发病学中的意义。方法　应用冷刺激加高盐饮食复合环境因素作用于Wistar大鼠 ,诱发大鼠高血压脑卒中作为模型 ,应用抑制性差减克隆技术对卒中样发作鼠和正常对照鼠脑的差异基因进行筛选。经过两轮杂交后 ,产生的克隆均为脑卒中鼠脑组织特异表达的序列。每组随机挑取 2 88个克隆 ,进行测序及GenBankBlast生物信息分析。结果　两组共有 4 5 6个可用序列 ,我们对每个与已知基因高度同源的序列以功能为参照进行了分类 ,发现大鼠卒中后脑组织能量代谢基因出现的频数高达 2 6 5 % ,5 1个克隆与能量 /三羧酸循环基因高度同源 (P <0 0 1) ,能量 /三羧酸循环基因表达明显上调。结论　能量代谢基因表达发生改变 ,可能造成脑卒中的敏感性增加     

小鼠造血组织卵黄囊与胎肝的基因表达谱初步研究

目的　以C5 7BL/6小鼠胚胎期造血组织卵黄囊与胎肝为对象 ,识别在不同的发育阶段c kit 与Sca 1 早期造血细胞的变化 ,以及在基因表达水平上的主要特点 ,了解造血组织在原始造血向永久造血转移阶段造血能力变化的机制。方法　用流式细胞仪计数分离到的单个细胞中c kit 与Sca 1 细胞的比例 ,以总RNA建立的cDNA文库通过随机测序的方法 ,识别这些细胞总体的基因表达情况。结果　随胚胎发育 ,卵黄囊和胎肝中的Sca 1 细胞比例逐步升高 ,交配后 9～ 1 2d卵黄囊Sca 1 细胞比例为 0 .2 4 %～ 2 .5 0 % ,而卵黄囊中c kit 细胞的比例有明显下降 ,交配后 9～ 1 2d卵黄囊c kit 细胞比例为 6 .1 0 %～ 1 .77% ;对交配后第 9天和第 1 2天的卵黄囊和交配后第 1 2天的胎肝 3个文库的部分基因测序 ,识别的已知功能基因显示表达量较高的基因为各型珠蛋白 ,且以胚胎型为主。结论　细胞表面标志和基因表达的水平测定显示胚胎期的红系造血相对较为活跃 ;卵黄囊和胎肝基因表达存在明显差异     

多发性骨髓瘤相关抗原的免疫学筛选及生物信息学分析

本研究采用“cDNA表达文库的血清学分析（ serological analysis of cDNA expression library, SEREX ）”技术筛选骨髓瘤HMy2细胞cDNA表达文库。将得到的30个阳性克隆全部进行测序,并进行BLAST同源序列比对分析。结果表明：获得已知基因6条,骨髓瘤相关肿瘤抗原新基因12条。经部分序列EST拼接,已知基因6条如环指蛋白167、KLF10因子、TPT1蛋白、p02蛋白、cDNA FLJ46859 fis、DNMT1甲基转移酶等,它们与其他肿瘤的形成、发展与预后有一定的关系。利用生物信息学对新基因结构和功能初步分析和预测显示,其中MMSA-3、MMSA-8和MMSA-11有完整的编码区,编码的蛋白长度分剐为215、160和122个氨基酸;除MMSA-1可能定位于性染色体,其余均可能定位于常染色体;MMSA-4和控制转录的肿瘤蛋白高度相似,MMSA-5可能参与细胞的吞噬作用,MMSA-7可能使NF-κB失活,MMSA-12可能为淋巴细胞的胞质蛋白。CrELISA初步分析表明,MMSA-3和MMSA-7等新基因特异性较高。结论：本项研究所筛选和鉴定的肿瘤抗原可用于多发性骨髓瘤的早期免疫学诊断、残留病灶监测、判断预后及肿瘤疫苗制备等多种研究。     

HLA-DRB1基因全长序列分子克隆及测序方法的建立

目的建立可靠的HLA-DRB1等位基因全长序列的分子克隆和测序方法。方法设计、合成HLA-DRB1基因全长序列PCR引物和探索PCR反应体系,采用长距离PCR技术,对10份经PCR产物直接测序、基因型已知的标本,扩增HLA-DRB1基因5'-UTR区、6个外显子、5个内含子和3'-UTR区,全长约11 kb。PCR产物纯化后作长片段分子克隆,筛选阳性克隆,提取质粒DNA,采用自行设计的测序引物测序。结果 PCR扩增获得了特异性目的片段,克隆测序后获得了全部10种等位基因的全长序列。将HLA-DRB1等位基因全长序列划分为9个亚区,群体遗传学分析发现第2外显子的平均核苷酸变异率(π)8.653%,高于其他外显子,并且非同义突变率(dn)9.029%大于同义突变率(ds)7.846%。第5内含子的平均核苷酸变异率高达13.690%,DRB1*09∶01∶02和DRB1*07∶01∶01∶02这2个等位基因第5内含子的序列与其他等位基因序列差别较大。结论采用HLA-DRB1基因全长序列分子克隆及测序方法获得了HLA-DRB1基因各亚区多态性分布特点等基础资料。     

儿童急性淋巴细胞白血病差异表达基因文库的构建和筛选

目的克隆和分离儿童急性淋巴细胞白血病（ ALL）差异表达基因，探讨小儿白血病的发病机制。方法 Ficoll密度梯度离心法分离单个核细胞，抽取mRNA，逆转录成cDNA；经RsaⅠ酶切，实验组cD-NA被分成两组，分别与两种不同的接头连接后，与对照组cDNA进行两次消减杂交和两次抑制性聚合酶链反应（ PCR），提取、纯化PCR产物，与PT-Adv载体连接构建cDNA消减文库，利用PCR扩增、测序和同源性分析差异表达的序列。结果选取文库中60个克隆进行菌落PCR分析，可以检出大小为200～600 bp的插入片段。从中随机挑选20个克隆进行测序、生物信息学分析，其中18个克隆与已知基因有高度序列同源性，符合率为98％～100％，共编码17种基因。这些基因大多涉及基因表达调控、DNA损伤修复、细胞周期、物质代谢等，均与细胞增殖、分化有关。此外发现2个新基因。结论本实验表明我们已成功构建小儿ALL相关消减cDNA文库，为小儿ALL发病机制的研究奠定了基础。     

新型肠球菌万古霉素耐药基因簇——vanM基因簇

目的从屎肠球菌临床分离株中克隆一种介导屎肠球菌对万古霉素耐药的新基因簇。方法采用16SrRNA测序对临床株Efm-HS0661进行菌种确认，并行多位点序列分型（MLST）；通过药敏试验及接合试验，了解菌株耐药性及其可转移性；通过PCR扩增、步移法测序、限制性内切酶片段克隆获取万古霉素耐药基因及其周边序列，并将获得序列与已知万古霉素耐药基因簇进行比对。结果临床株经16SrRNA测序确认为屎肠球菌，MLST分型属ST78型；该菌株对万古霉素及替考拉宁耐药，且可通过接合试验发生转移；测序获得一6592bp核苷酸序列，为含6个万古霉素耐药相关基因的基因簇，其基因结构与已知耐药基因簇不同，命名为vanM型基因簇。其中vanM全长1032bp，其编码蛋白VanM与VanA、VanB、VanD、VanF基因氨基酸序列同源性分别为79．7％、69．7％、66．0％和78．5％。结论从万古霉素耐药屎肠球菌临床株中发现了一种新型万古霉素耐药基因簇——vanM型基因簇。     

采用cDNA芯片结合聚类分析研究大鼠心肌缺血预适应的基因表达谱改变

中南大学湘雅医院袁灿、肖献忠等为深入研究心肌缺血预适应的分子机制 ,采用含 4 2 0 0个基因的ｃＤ ＮＡ芯片检测了大鼠心肌缺血预适应不同时间点的基因表达改变情况 ,并采用ＳＯＭ对具有相同表达模式的基因进行聚类分析 ,获得了多个新的与心肌缺血预适应相关的已知基因和可能代表新基因的ＥＳＴ片段。进一步分析这些已知和未知基因可能为揭示心肌缺血预适应的分子机制提供新的线索和思路采用cDNA芯片结合聚类分析研究大鼠心肌缺血预适应的基因表达谱改变@肖献忠     

护理干预对提高中风患者生活质量的效果观察

目的探讨提高中风患者生活质量的护理方法。方法将50例中风患者随机分为对照组23例和实验组27例,对照组给予针灸内科常规护理,实验组在此基础上给予心理护理和康复训练。结果两组患者治疗护理后日常生活活动(ADL)能力和贝克抑郁量表(BDI)评分均有好转,但实验组疗效明显优于对照组(P<0.05)。结论实施针对性心理护理和康复训练可明显提高中风患者的治疗效果。     

中国人四肢瘫日常生活能力评定量表的信度研究

目的研究四肢瘫日常生活能力评定量表评测四肢瘫患者的重测信度及观察者间信度。方法由1位评定者应用四肢瘫日常生活能力评定量表对20例四肢瘫患者进行评定,评定后1周内再次对该患者进行评定;另1位评定者在第1位评定者初次评定后2 d内对该患者进行评定。结果第1位评定者两次评定总分的组内相关系数为0.994(P<0.01);第1位评定者与第2位评定者评定总分的组内相关系数为0.971(P<0.01)。结论四肢瘫日常生活能力评定量表具有良好的重测信度及观察者间信度。     

肇庆市居民颈椎病流行病学调查

目的 :调查肇庆市居民颈椎病发病情况及相关问题。方法 :通过分层随机抽样选择该市区18～70岁居民5000人为研究对象 ,入户或至单位询问调查。结果 :该市居民颈椎病发病率为8.11% ,男女差异无显著性 ,随着年龄的增长 ,发病率逐渐增加。经多因素分析 :体位姿势不正确、情绪紧张、潮湿、疲劳是发病的主要诱因。结论 :该病严重影响肇庆市居民的健康 ,做好防治应从早做起 ,综合防治。     

产科新生儿不同部位经皮测黄报警预值的可靠性观察

目的对比观察产科新生儿不同部位经皮胆红素（TCB）报警预值的可靠性。方法132例产科新生儿采取随机数字分组法分为正常产组和剖宫产组各66例,新生儿均于产后第4天同一时间点应用KJ8000经皮测黄仪分别测量额、胸、腹、额胸、额胸腹TCB值,TCB〉12．9mg／dl者,取得亲属同意抽取静脉血检测血清胆红素（SB）,对比分析不同部位TCB及其与sB值的差异。结果两组分别有17例或21例达到TCB报警预值。两组TCB或sB相同方法及相同部位比较,差异无统计学意义（P〉0．05）;两组TCB不同部位对比,额部值最低、胸部值最高,且与其他部位同组对比差异均有统计学意义（P〈0．01）;两组sB值对比差异无统计学意义（t=1．53,P〉0．05）,与不同部位TCB对比均以胸部数值差异无统计学意义（P〉0．05）,而与其他部位TCB两组差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论正常产与剖宫产新生儿术后sB对比差异无意义;TCB动态监测以胸部结果更接近SB。     

韶关市农村留守儿童孤独感状况调查

目的了解广东省韶关市农村地区留守儿童孤独感现状及其影响因素。方法对韶关市某地区两所农村小学3～6年级学生中的489名留守儿童采用儿童孤独量表和自编调查表进行问卷调查。结果17．6％留守儿童存在孤独感，不同性别孤独感发生率无差异性，不同年龄及不同年级间孤独感发生率差异均有极显著性（P〈0.01）；随年级增加，孤独感发生率呈下降趋势（X^2趋势=5．970，P〈0.05）。留守儿童孤独感与健康状况、学习成绩、学习困难程度、父母教育方式、父母间关系和老师教育方式等因素显著相关（P〈0.01～0．05）。结论农村地区留守儿童中存在一定程度的孤独感问题，老师和家长应以正确的态度和方法对待留守儿童，以减少其孤独感的发生。     

胰腺癌治疗的Cochrane系统评价证据

目的评价胰腺癌治疗的Cochrane系统评价证据,以及纳入系统评价的临床随机对照试验（RCT）的方法学质量。方法检索Cochrane Library数据库（2009年第4期）中有关胰腺癌治疗的系统评价,并运用RewMan5.0.21对所纳入研究的偏倚进行评估。结果共检索到胆道支架置入术姑息治疗梗阻型胰腺癌的系统评价、放化疗治疗不能手术的进展期胰腺癌的系统评价共2篇系统评价,共纳入79个RCT。依照Cochrane协作网推荐的质量评价方法,对所纳入RCT的偏倚进行评估,表明均存在不同程度的偏倚,方法学质量普遍较低。结论 Cochrane系统评价是公认的最高质量的研究证据,但目前缺少足够强度的证据来支持胆道支架置入术姑息治疗梗阻型胰腺癌的疗效。其他治疗手段的疗效如胰腺癌围手术期的营养支持治疗等还需要通过进一步的完成系统评价来评估。建议推行临床试验透明化,实施临床试验注册制度以及按照CONSORT声明严格规范RCT的报告,以便于总结胰腺癌治疗的临床证据。     

脑卒中二级预防干预模式应用体会

目的:探讨脑卒中二级预防干预模式的实施效果.方法:将180例脑卒中患者随机分为观察组和对照组各90例,两组均建立健康档案,应用自行设计的脑卒中复发危险因素评估表对出院患者进行评估.观察组根据评估结果进行个体化强化教育和行为干预,对照组实施常规治疗和基本知识健康教育,分别在干预前和干预后3个月、6个月收集两组相关资料进行评价.结果:干预后观察组患者在疾病知识掌握正确率、不良生活方式改善情况及治疗依从性方面明显高于干预前及对照组(P＜0.01),观察组患者脑卒中复发率显著低于对照组(P＜0.05).结论:二级预防干预模式可有效降低脑卒中复发,提高患者生活质量.     

早产儿视网膜病危险因素分析

目的调查瑞安市人民医院早产儿视网膜病（ROP）的发生率和高危因素。方法2005年8月1日至2008年8月1日对瑞安市人民医院新生儿监护病房（NICU）住院并符合筛查标准的540例新生儿进行了ROP筛查。结果在接受筛查的540例新生儿中,44例发生了ROP,发生率为8.1%。Ⅰ～Ⅲ期病变分别为35、7、和2例;其中2例需激光治疗,无失明病例。结论ROP相关因素的logistic回归分析结果表明,孕周、出生体重、吸氧时间、呼吸窘迫综合征是ROP形成的高危因素。     

护理干预对哮喘患者生活质量的影响

目的:探讨护理干预对哮喘患者生活质量的影响。方法:将62例哮喘患者随机分为干预组32例和对照组30例,对照组给予哮喘病常规治疗及保健知识教育,干预组在此基础上给予认知、心理及行为干预。观察两组生活质量及肺功能等的变化。结果:干预组哮喘症状计分、半年急诊次数、误工及误学天数、β2激动剂喷数及AQLQ中活动受限均较对照组有明显改善(P<0.01,P<0.05)。结论:对支气管哮喘患者实行护理干预可以明显改善其生活质量。     

壶腹癌的超声诊断分型在外科治疗中的意义

目的 探讨壶腹癌超声诊断分型在外科治疗中的临床意义。方法 将３１例手术病理证实的得癌根据超声表现分为３型∶Ⅰ型、胆总管下段无肿块型;Ⅱ型,胆总管下段小肿块型;Ⅲ型,胆总管下段明显肿块型。各型均与手术方式对照。结果 ３１例中Ⅰ型５例（１６．１％）,Ⅱ型１１例（３５．５％）,Ⅲ型１５例（４８．４％）。Ⅰ型与Ⅱ型合并手术切除率（１００％）与Ⅲ型的手术切除率（６０．０％）比较差异有显著性意义（Ｐ〈０．０１）。结论 壶腹癌超声诊断分型对术前制定手术方案、进一步提高手术切除率以及估计得癌的预后有重要的临床意义。