四盐酸精胺抑制血小板活化的初步研究

目的 初步探究不同浓度的多胺类一氧化氮供体四盐酸精胺对血小板保存期内不同存储时间节点的血小板活化的影响,讨论相关作用机制。方法 将储存1 d、3 d、5 d的单采血小板分别分为实验组(A、B、C、D、E组)和对照组(F组),向实验组分别加入10 mmol/L、20 mmol/L、30 mmol/L、40 mmol/L、50 mmol/L的四盐酸精胺40 μL,向对照组中加入等量的PBS溶液。采用荧光酶标法检测血小板的一氧化氮含量,采用流式细胞仪检测血小板膜表面CD62p的表达。结果 不同储存时间节点的单采血小板添加四盐酸精胺后,单采血小板的一氧化氮含量均有升高,CD62p表达减少,差异有统计学意义 (P<0.05);添加的四盐酸精胺浓度越高,血小板一氧化氮浓度越高,CD62p表达越少,四盐酸精胺浓度为40 mmol/L左右后趋于稳定。结论 多胺类一氧化氮供体四盐酸精胺可以向血小板提供一氧化氮,在一定程度上抑制血小板的活化,这与四盐酸精胺浓度有一定关系。     

两种血小板保存箱保存富血小板血浆效果的比较

目的　探讨血小板体外保存指标 ,验证国产血小板保存箱实际保存效果。方法　取新分离的富血小板血浆 (PRP) 12袋 ,每袋平均分成两袋 ,分别放入国产XHZ IA型血小板保存箱和进口FORMA 36 0 6型血小板保存箱中保存 5天 ,每天取样检测血小板聚集功能、低渗休克反应回复功能、CD6 2p表达率等体外保存指标。结果　两种保存箱保存PRP各项体外保存指标无显著差别。结论　XHZ IA血小板保存箱与FORMA血小板保存箱保存PRP的实际保存效果无差别。     

DMSO冰冻保存对血小板表面CD62表达的影响

随着医疗技术水平的不断提高，浓缩血小板的临床使用量不断增加，为了解决血小板的应急供应，一些采供血单位开展了血小板的冰冻保存工作。为了观察冰冻保存对血小板活化的影响，笔者检测了冰冻保存前后的血小板表面CD62分子表达，现报告如下。     

单独采集血小板和浓缩血小板在保存期中的活化情况

研究单独采集血小板 (单采血小板 )和浓缩血小板在保存期中的活化情况。用流式细胞术对这两种血小板的CD62 p和CD41表达量进行测定。结果表明 :在保存 0 ,1 ,3和 5天时 ,单采血小板的CD62 p阳性率和CD41的平均荧光强度分别为 (1 8 91± 6 2 5) % ,(1 9 48± 8 2 7) % ,(2 2 82± 6 0 6) % ,(56 71± 1 1 79) %及 (8 0 9±2 38) % ,(8 1 3± 2 45) % ,(8 44± 2 51 ) % ,(1 9 87± 6 1 3) % ,而浓缩血小板的分别为 (30 65± 1 2 33) % ,(31 46± 1 1 86) % ,(32 51± 1 3 0 5) % ,(63 55± 1 3 2 7) %及 (1 0 33± 4 37) % ,(1 1 0 9± 6 61 ) % ,(1 3 46± 9 69) % ,(2 4 41± 1 0 1 5) %。二项指标均随保存时间推移而上升。对这两种血小板的计数和 pH值测定显示 ,二者均随保存时间推移而下降。在保存 0 - 3天内两种血小板的计数 ,pH值 ,CD62 p和CD41表达量无显著差异。在第 5天血小板计数和pH值出现显著下降 (P <0 0 0 1 ) ;而CD62p和CD41表达量出现显著上升 (P <0 0 0 1 )。结论 :单采血小板优于浓缩血小板     

优化流式细胞术测定保存血小板CD62p表达

CD62p阳性率是保存血小板质量监测的重要指标之一。为在静脉全血内血小板CD62p测定方法的基础上优化建立流式细胞术(FCM)测定保存血小板表达CD62p的方法，在血小板检测标本内加入0．1mmol/L潘生丁稳定血小板；对TBS溶液进行了改良，添加了1．1mmol/L的EDTA和100μmol/L潘生丁，用以代替PBS；采用新鲜富含血小板血浆(FPRP)制备的阴、阳性对照；进行方法学评价。结果表明：加入0．1mmol/L潘生丁和1．1mmol/L的EDTA可以有效防止实验过程中的血小板人为激活；采用新鲜富含血小板血浆(FPRP)制备的阴、阳性对照既可优化FCM分析方法，还可用于检验所购荧光抗体的质量，保证实验结果的有效性。采用泛血小板特异性标志物CD61可灵敏特异地识别血小板，提高了实验抗干扰能力。制备保存血小板时采用的是专用大号采血针，抽血流畅，对血小板CD62p表达测定人为影响很小，明显优于用注射器采集患静脉全血的做法。CD62p测定灵敏度可达1％，制备的标本可稳定48小时。结论：利用该流式细胞术可以灵敏而特异地测定保存血小板的CD62P表达率；该方法简便易行，提高了结果的准确性，具有良好的稳定性和重复性。     

流式细胞术联合测定保存血小板表达的磷脂酰丝氨酸和CD62p

人类血小板通过不同的技术进行离体保存后，其特性改变差异较大。建立适用于各种保存血小板特性分析的流式细胞术（FCM）对保存血小板的质量监测和新保存方法研究有重要意义。本研究通过对FCM分析方法主要条件的优化评估，建立了联合测定血小板膜表面包括磷脂酰丝氨酸在内的多参数FCM定量分析方法。在标本制作中，血小板不需要洗涤即可直接进行标记，减少了血小板离心洗涤过程中的激活。除了FCM常用的同型对照外，中还将新鲜富含血小板血浆（FPRP）、凝血酶激活FPRP和液氮处理FPRP作为血小板标准阴性、阳性对照，直接应用于FCM分析，且效果良好。该方法中Gly-Pro-Arg-Pro乙酸盐（GPRP）的选择应用，既防上了血小板聚集和纤维蛋白的形成，同时可稳定血小板，减少制备过程中人为激活，克服了在血小板、Ca^2 和血浆共存条件下FCM定量分析血小板的困难，尤其是为深低温处理血小板包括PS在内的多参数分析提供了良好的方法基础。研究表明该方法标本处理简单，结果分析简便、准确，重复性好。作还通过低温、低渗或激活剂的方法制备了几种膜表面分子标记显不同的血小板应用于FCM分析，不仅证实了所建立的FCM分析方法在各种不同膜表面分子标记的血小板分析中的实用性，又表明了中制备的4种不同膜表面分子标记的血小板在FCM分析保存血小板方法学中的实用价值。     

白膜富集法制备浓缩血小板方法的优化及质量评价

目的优化白膜富集法制备浓缩血小板的离心制备条件,并对其质量进行评价。方法第1次离心：选择4档转速、4个离心时间组合成16组离心条件,对满足血小板得率血小板初产品进行CD62p表达率及再表达率检测;第2次离心：3档转速、3个离心时间组成9组离心条件,对所得血小板终产品进行血小板得率、白细胞残留量、红细胞残留量检测。结果第1次离心共有4组离心条件所得血小板得率达到国家标准,其中2 400 r/min（1 861 g）、15 min离心条件所得血小板初产品CD62p表达率最低,CD62p再表达率最高,与其他3组比较差异有显著性（P〈0.01）;第2次离心：仅1 100 r/min（391g）、6 min所得血小板得率、白细胞残留率、红细胞残留率符合国家标准。结论第1次2 400 r/min、离心15 min;第2次1 100r/min、离心6 min制备的血小板在满足国家标准的同时,血小板损伤最低,功能储备最佳。     

机采血小板常温保存过程中代谢及体外功能变化的研究

目的 研究机采血小板常温保存过程中代谢及体外功能的变化规律。方法 通过对15U保存0～9d机采血小板的血气指标、葡萄糖、乳酸、乳酸脱氢酶、血小板膜表面CD62p表达率、凝血酶激活后CD62p再表达水平、血小板低渗休克反应进行系统监测,分析机采血小板体外保存过程中代谢指标与体外功能的关系。结果 血小板在体外保存9d的过程中,乳酸与H^＋逐渐堆积,pH值随之下降;血小板低渗休克反应在7d时开始明显下降;CD62p表达率随保存天数增加而逐渐增高,凝血酶激活后CD62p再表达率逐步下降;血气、葡萄糖、乳酸等代谢指标与血小板低渗休克反应、CD62p的表达率及再表达率具有显著相关性。结论 对代谢指标的监测可以间接反映血小板体外功能的变化,从而对血小板保存质量作出系统评价。     

脑梗死患者活化血小板的检测及其临床意义

目的探讨脑梗死患者全血血小板膜糖蛋白Ⅱb／Ⅲa（PAC-1）、血小板颗粒膜糖蛋白140（CD6p）的变化及其临床意义。方法用全血流式细胞术测定76例脑梗死患者急性期和恢复期、30例高血压病患者和28例糖尿病患者外周血中血小板PAC-1、CD62P的表达水平，并与20例健康对照者比较。结果脑梗死组急性期、恢复期、高血压病组、糖尿病组PAC-1、CD62p的表达均明显高于正常对照组（均P〈0．01）。脑梗死患者急性期PAC-1、CD62P的表达大梗死灶组〉中梗死灶组〉小梗死灶组，各组之间比较有显著性差异（P〈0．01～0．05）。脑梗死患者急性期PAC-1、CD62P的表达重型〉中型〉轻型，各组之间比较有显著性差异（P〈0．01～0．05）。结论脑梗死急性期、恢复期、高血压病患者、糖尿病患者均存在血小板活化；脑梗死病人血小板活化与病情及梗死灶大小有关，PAC-1、CD62p可作为判断病情的指标。     

TEG技术在血小板保存过程中功能评价的应用研究

本研究旨在通过血栓弹力图（thmmbelastography，TEG）技术探讨血小板保存过程中功能的变化。随机选择各项指标均符合国家标准的单供者机采血小板12个单位并在（22±2）℃条件下振荡保存。分别在保存1、2、3、4、5天检测血栓弹力图参数，包括反应时间（R）、凝血时间（K）、α角（ANG）和最大振幅（MA），同时检测血小板计数、平均血小板体积、低渗休克反应（HSR）水平、CD62p阳性率及凝血酶激活CD62p再表达率的变化，综合评价血小板保存过程中体外功能的变化情况。结果显示：平均血小板体积随保存时间延长而轻度增大，但无统计学差异（p〉0．05）；血小板膜表面CD62p表达率随保存时间延长而显著升高（P〈0．01）；凝血酶激活后CD62p再表达率随保存时间的延长而显著下降（p〈0．01）；血小板低渗休克反应水平在1-5天无明显变化（P〉0.05）；R值随保存时间延长而明显延长（P〈0．01），K值无明显变化（P〉0.05），α角虽呈轻度下降趋势，但无显著差异（P〉0．05）；MA值在保存1-4天无显著变化，保存5天时仅有轻度下降（P〈0．05）。结论：虽然血小板随保存时间延长激活率明显升高，但反映血小板综合凝血功能的最大振幅（MA值）和HSR水平在整个保存期内并无显著变化，说明保存期末的血小板仍然具有良好的止血功能；血栓弹力图参数MA值可以作为一项重要指标用于血小板保存过程中的功能评价。     

复方丹参滴丸对自发性高血压大鼠血小板CD62 p和CD63表达的影响

目的：观察复方丹参滴丸对自发性高血压大鼠（SHR）血小板CD62p和CD63表达的影响。方法按所给药物不同,将80只SHR随机分为复方丹参滴丸加阿司匹林组、复方丹参滴丸组、阿司匹林组和生理盐水对照组各20只,各组持续给药4周,于实验12周末采用流式细胞仪检测治疗后SHR血小板CD62p和CD63的表达水平,并对各组结果进行比较。结果第12周末复方丹参滴丸组血小板CD62p、CD63表达水平低于对照组（P＜0.05）,复方丹参滴丸加阿司匹林组CD62p、CD63表达水平较阿司匹林组或复方丹参滴丸组低（P＜0.05）。结论复方丹参滴丸具有抑制血小板CD62p、CD63表达的作用,复方丹参滴丸与阿司匹林合用治疗效果更显著。     

哮喘病人血一氧化氮及其合成酶、血管内皮素的变化

目的:为探讨支气管哮喘与血一氧化氮及其合成酶、血管内皮素的关系。方法:测定了轻度发作的支气管哮喘病人31例及对照组30例的全血一氧化氮及其合成酶、血管内皮素。结果:哮喘组与对照组的血管内皮素分别为(44.45±25.76)pg/ml和(33.43±22.88)pg/ml(P<0.05),血一氧化氮两组分别为(37.65±17.20)μmol/ml和(42.81±19.42)μmol/ml(P>0.05),血一氧化氮合成酶活性分别为22.81±5.53和22.14±4.53(P>0.05)。结论:研究观察到血管内皮素可能在支气管哮喘气道炎症之中起重要病理生理作用,但未观察到一氧化氮及其合成酶在轻度发作的支气管哮喘病人中的变化。     

不同剂量氯吡格雷对冠状动脉粥样硬化性心脏病患者血清CD62p水平的影响

目的 观察不同剂量氯吡格雷对冠状动脉粥样硬化性心脏病（冠心病）患者血清CD62p水平的影响.方法 选择观察对象191例,其中稳定型心绞痛（SAP）患者95例,非ST段抬高型急性冠状动脉综合征（NST-ACS）患者66例,SAP患者随机分为A组（48例）、B组（47例）,NST-ACS患者随机分成C组（33例）、D组（33例）,健康对照人群30名为E组.A组确诊后给予氯吡格雷75 mg/d,B组确诊后给予氯吡格雷150 mg/d;C组确诊后立即给予负荷剂量氯吡格雷300 mg,后予维持量75 mg/d,D组确诊后立即给予负荷剂量氯吡格雷300 mg,后予维持量150 mg/d.分别于服药前、服用负荷剂量氯吡格雷24h、服用氯吡格雷第5天抽取外周静脉血,应用酶联免疫吸附试验法测定血清CD62p的浓度.结果 （1）服药前血清CD62p的浓度：SAP患者[A组（7.62±2.99） ng/L、B组（8.48±3.13） ng/L]和NST-ACS患者[C组（9.50±3.32） ng/L、D组（10.22±5.14） ng/L]均高于健康对照者[（E组（5.49±1.99）ng/L,P均＜0.01],且NST-ACS患者高于SAP组患者（P＜0.05）.（2）SAP患者服药后第5天血清CD62p浓度[（A组（6.79±2.51） ng/L、B组（6.37±1.80） ng/L]均较服药前[A组（7.62±2.99） ng/L、B组（8.48±3.13） ng/L]降低（t=2.390、t=4.520,P＜0.05和P＜0.01）,且两组患者服药后血清CD62p浓度相比较差异无统计学意义（P均＞0.05）.（3）C、D两组患者服药后第5天血清CD62p浓度[C组（8.21±2.62） ng/L、D组（8.17±2.37） ng/L均明显低于服药前[C组（9.50±3.32） ng/L、D组（10.22±5.14） ng/L],差异有统计学意义（t值分别为2.084、2.157,P均＜0.05）,且两组患者服药后血清CD62p浓度比较差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 冠心病患者血清CD62p水平高于健康人群,服用氯吡格雷可降低冠心病患者的血清CD62p水平.     

妊高征患者血浆一氧化氮与内皮素及全血血小板聚集性变化的研究

目的：探讨妊高征患者全血血小板聚集性,内皮素（ET－1）水平的变化以及与一氧化氮（NO）水平变化的相关性。方法：分别采用电阻法,放射免疫法及硝酸还原酶法测定59例妊高征患者,20例正常晚孕妇女的全血血小板聚集（PAg)性,血浆ET－1与NO水平。结果：与正常晚孕组比较,重度妊高征组血浆NO水平显著下降（P＜0．01）,而妊高征各组血浆ET－1水平升高（P＜0．01）,同时全血PAg性增强（P＜0．05,P＜0．01）且ET－1和PAg二者与NO水平呈显著负相关（P＜0．01）,结论：ET－1及全血PAg性与妊高征的病情发展有关。NO与ET－1在妊高征发病中起相互拮抗作用。     

Modulation of nitric oxide synthase by nitric oxide donor compounds in migraine

A controlled study was performed to assess the involvement of the nitric oxide pathway in migraine pathophysiology. Thirteen patients with migraine without aura and seven clinically healthy subjects (C) were selected. All of the migraine patients were studied both before, during an asymptomatic phase (t ₀), and 1 h after the administration of 5 mg isosorbide dinitrate, a nitric oxide donor able to induce an experimental migraine attack (t ₁). The nitric oxide levels were analyzed as nitrite accumulation in serum samples, in peripheral blood mononuclear cell extracts, and culture supernatants. Basal nitrite levels in serum samples and peripheral blood mononuclear cell culture supernatants of migraine patients and healthy subjects indicated that migraine patients possess an activated nitric oxide synthesis pathway (t ₀ vs. C F=8.16,P<0.01 and F=16.2,P<0.01, respectively). As expected, in the migraine patients treated with the nitric oxide donor, a marked increase of nitrite levels was observed in sera (t ₁ vs.t ₀ P<0.05,t=3.05). In contrast, during the nitric oxide donor-induced migraine attacks a statistically significant decrease of nitrite levels in peripheral blood mononuclear cell culture supernatants was observed (t ₁ vs.t ₀ P<0.01,t=−4.03), whereas a significant increase of nitrite in total cell extracts was detected (t ₁ vs.t ₀ P<0.001,t=−6.89). These preliminary data suggest that nitric oxide could be involved in the neurovascular modifications leading to a migraine attack.     

肝性脑病与一氧化氮关系的初步研究

目的 :研究血浆NO水平与肝性脑病发生的关系。方法 :用镉还原法测定正常对照、无肝性脑病肝硬化组、肝性脑病组血浆NO(NO-2 /NO-3 )的水平 ,并测心率、平均动脉压。结果 :肝性脑病组血浆NO水平 (5 5 .1± 18.6umol/L)比单纯肝硬化组(4 4.1± 2 0 .3umol/L)高 ,两组均比正常对照组 (2 9.6± 11.4umol/L)高 ,肝性脑病组、肝硬化组血浆NO与平均动脉压呈负相关。肝性脑病Ⅳ级患者血浆NO水平显著高于Ⅰ级患者。结论 :NO除与肝硬化的高动力循环有关外 ,尚与肝性脑病的发生、发展有关     

血小板保养液与血浆混合保存血小板的初步研究

目的探讨血小板保养液与不同比例血浆混合保存单采血小板的效果。方法选用枸橼酸钠、醋酸钠、磷酸钠和氯化钠等组成血小板保养液,(22±2)℃振荡条件下保存单采血小板7d;按保养液与血浆混合比例,实验组分为实验Ⅰ组(50%保养液+50%血浆)和实验Ⅱ组(80%保养液+20%血浆),分别于1、3、5、7d取样检测血小板数(Plt)、pH值、葡萄糖消耗量、乳酸产生量和血小板膜CD62p的表达情况,并与100%血浆保存的血小板(对照组)比较。结果血小板保存到5d时,实验组与对照组比较Plt差异无统计学意义(P>0.05),其pH值较对照组均有明显下降(P<0.05),但pH仍>6.0;实验组血小板膜CD62p阳性表达率分别为32%和36%,比对照组的28%略高(P<0.05)。血小板保存到第7天时,Plt、pH和血小板膜CD62p阳性表达率,实验各组较对照组为差(P<0.05);1—7d葡萄糖平均消耗量实验Ⅱ组比对照组和实验Ⅰ组为高(P<0.05),而乳酸平均产生量则实验各组较对照组明显为高(P<0.05)。结论采用血小板保养液与20%或50%比例的血浆混合,短期(5d)保存单采血小板的pH值和血小板数量与用100%血浆保存单采血小板的效果基本相同,但保存在保养液与血浆混合液中的血小板更易激活。     

幽门螺杆菌与一氧化氮及胃粘膜病理变化的关系

目的 :通过观察 Hp感染后血清 NO及 NOS水平变化及其对胃粘膜病理改变的影响 ,来探讨 Hp的可能致病机理。方法 :随机选取 Hp阳性患者 5 0例 ,Hp阴性患者 35例 ,病理学检查的同时检测其血清中 NO及 NOS的含量。结果 :Hp阳性组血清 NO和 NOS含量分别高于 Hp阴性组 (P<0 .0 1)。在 Hp阳性患者中 ,血清中 NO和 NOS含量在慢性炎症组明显低于其他 3组 (P<0 .0 5 )。但在 Hp阴性组中 ,慢性胃炎患者血清中 NO含量低于其他 3组 (P<0 .0 5 ) ,而血清中 NOS含量在各组之间无明显差异。结论 :Hp诱导的 NO表达水平可能与胃癌前期病变相关。除 Hp可导致 NO合成增加外 ,癌前期病变还可通过其他炎症介质激活 NO的产生途径。     

精神分裂症患者治疗前后一氧化氮血清浓度研究

目的了解精神分裂症患者病情变化与一氧化氮(NO)血清浓度之间的关系。方法对36例精神分裂症患者治疗前及治疗4周后NO血清浓度进行检测,采用PANSS量表进行疗效评定,以18例正常体检为对照。结果精神分裂症患者的NO血清浓度高于正常对照组,NO血清浓度与PANSS评分之间未见相关。结论精神分理解症患者存在较高的NO血清浓度,但它并不直接反映精神分裂症患者病情的轻重。     

静脉全凭异丙酚诱导对体内一氧化氮含量及血压的影响

目的：探究全凭异丙酚（得普利麻，propofol)静脉诱导对患者体内一氧化氮（NO）含量及血压变化的影响。方法：经全麻胸外科手术患者30例，随机分成异丙酚组、输液异丙酚组及依托咪酯组，每组各10例，于麻醉诱导用药前后测定体内NO含量并记录血压，心率。结果：（1）麻醉诱导前三组NO含量及血压心率无差异。（2）诱导后异丙酚组和输液异丙酚组NO含量明显增高，与术前及依托咪酯组比有显著差异，P＜0．05。（3）诱导后三组血压均下降，异丙酚组最明显，输液异丙酚组有下降，依托咪酯组稍有下降。结论：（1）异丙酚可刺激体内NO分泌增加，此为异丙酚在诱导期易使血压下降的原因之一。（2）诱导前输液500－1000ml可减少低血压的发生率。