甲钴胺对神经源性痛大鼠脊髓神经元凋亡和疼痛的干预效应

目的:通过结扎大鼠坐骨神经以建立神经源性痛模型,探讨甲钴胺对神经源性痛大鼠坐骨神经结扎后脊髓神经元凋亡和疼痛的影响,并从药物对促炎性细胞因子表达的干预这一角度分析其作用途径,从而为神经源性痛的治疗提供实验依据。方法:实验于2003-10/2004-01在武汉大学人民医院动物实验中心完成。选取健康成年雄性Wistar大鼠66只,随机分为3组:假手术组6只、生理盐水组30只、甲钴胺组30只。①生理盐水组与甲钴胺组采用BennettandXie模型行坐骨神经结扎术,要求仅留下缢痕而不阻断神经血供。假手术组仅暴露坐骨神经而不进行结扎。②甲钴胺组在坐骨神经结扎后腹腔内注射600μg/kg的甲钴胺0.25mL,以后每天腹腔内注射相同剂量,连续3d。假手术组和生理盐水组在相同时间点给予等量生理盐水。③各组分别于术前、术后6h,1,3,7,14d进行行为学测定,记录缩足、热水尾弹阈值。应用免疫组织化学方法和图像分析系统检测脊髓中肿瘤坏死因子和白细胞介素6的表达,采用原位凋亡检测法观察脊髓神经元的凋亡,同时观察脊髓的病理形态学改变。结果:实验共选用大鼠66只,全部进入结果分析。①坐骨神经结扎后不同时间点各组大鼠缩足痛阈值、热水尾弹痛阈值的变化:与假手术组比较,生理盐水组及甲钴胺组大鼠于术后6h即出现机械性痛觉超敏和热诱发的持续性疼痛(P<0.05);术后14d甲钴胺组的缩足痛阈值、热水尾弹痛阈值均已经恢复至基线,而生理盐水组仍较低(P<0.01)。②坐骨神经结扎后各组脊髓病理学变化:假手术组无明显病理改变。坐骨神经结扎后生理盐水组脊髓灰质神经元细胞内尼氏小体呈中心性或周边性溶解,细胞数明显减少,脊髓白质水肿;甲钴胺组病理改变与生理盐水组相似,但神经元肿胀程度和数量减少程度均较生理盐水组轻(P<0.05)。③坐骨神经结扎后各组大鼠脊髓肿瘤坏死因子、白细胞介素6表达的变化:假手术组脊髓中均只有少量表达。生理盐水组在坐骨神经结扎后6h,1,3d肿瘤坏死因子、白细胞介素6的表达均明显高于假手术组(P<0.01);损伤后14d表达均明显减弱,并接近正常。而甲钴胺组则能显著抑制肿瘤坏死因子、白细胞介素6的表达,与生理盐水组比较各时间点均有显著差异(P<0.01或0.05)。④坐骨神经结扎后各组脊髓神经元凋亡指数的变化:生理盐水组在术后6h及1d可见少量标记的阳性细胞,并于术后3d达高峰,术后14d则仅有少量表达;甲钴胺组大鼠脊髓中阳性神经细胞在各时间点均明显少于生理盐水组(P<0.01),高峰发生在损伤后3d。凋亡指数与疼痛、肿瘤坏死因子、白细胞介素6表达阳性细胞率间均呈正相关(r=0.9,P<0.01)。结论:结扎坐骨神经可引起脊髓神经元的凋亡和促炎性细胞因子的过度表达,并与神经源性痛的发展相一致。甲钴胺对大鼠的脊髓能够起到保护作用,可能与其抑制促炎性细胞因子的表达以及神经元凋亡、减轻疼痛有关。     

坐骨神经结扎大鼠脊髓神经元凋亡与痛敏的关系

目的：探讨坐骨神经结扎大鼠脊髓神经元凋亡与痛敏的关系。方法：成年雄性Wistar大鼠50只，采用坐骨神经中段结扎模型，于术前、术后6h、1、3、7及14d分别测定抬足和甩尾潜伏期。应用免疫组织化学方法和图象分析系统检测脊髓中肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor—α，TNF—α）和白细胞介素6（interleukin-6，IL-6）的表达，采用TUNEL法观察脊髓神经元凋亡，同时用HE及尼氏染色法观察脊髓的病理改变。结果：坐骨神经结扎后6h可诱发出大鼠机械性触诱发痛和热痛觉过敏；TNF—α于结扎后6h开始表达，1d达高峰，并于术后14d恢复到基线水平；IL-6于结扎后1d开始表达，术后3d达峰值并持续到术后7d，而后慢慢降低；术后6h脊髓中开始有少量凋亡神经元出现，凋亡指数于术后1d开始迅速增加，术后3d达峰值。结论：结扎坐骨神经可诱发神经源性痛，并导致脊髓神经元的凋亡，其机制可能与促炎性细胞因子TNF—α和IL-6的过度表达有关。     

甲钴胺对皮肤移植后神经再支配的影响

目的：为改善植皮后感觉功能恢复，研究猪皮肤移植后神经纤维再生及甲钴胺对基再生的促进作用。方法：实验于2003-09／2004-04在上海第二医科大学动物房完成选择8头白色小猪．随机分为两组．于背部分别给了不同厚度皮片移植．一组术后注射甲钴胺．一组术后不给任何处理。术后2，4，8周取材．切取所植皮肤．切片进行嗜银染色．观察神经再生的情况显微镜下对神经纤维数量进行计数并进行统计学检验．两组结果进行比较。结果：使用甲钴胺组的神经密度同末使用组做团体t检验．2周时差异有显著性意义(t=2．85；P=0.013)；4，8周差异均无显著性意义(t=1．015，1．16；P=0．33，0．27)，中厚皮片同刃厚皮片相比2，4周差异无显著性意义(t=1．19，1．11；P=025，0.24)。8周时差异有显著性意义（t=2．26；P=0．04)。结论：甲钴胺对皮肤移植后神经再支配有促进作用．尤以植皮后早期较为明显。中厚皮片的神经再生优于刃厚皮片。     

乌梅丸对溃疡性结肠炎大鼠组织细胞因子的干预效应

目的：观察中草药乌梅丸对溃疡性结肠炎大鼠组织促炎细胞因子肿瘤坏死因子α、白细胞介素6，8和抗炎细胞因子白细胞介素10的影响，并比较乌梅丸与柳氮磺胺吡啶治疗效果。方法：实验于2002—10／2003—03在湖北中医学院中心实验室完成。①选用健康SD大鼠56只，雌雄各半。按雌雄随机分4组：正常组、乌梅丸组、柳氮磺胺吡啶组、模型组，每组14只（雌雄各半）。应用2，4-二硝基氯苯免疫加储酸局部灌肠法建立溃疡性结肠炎大鼠模型，除正常组外，其余组均造模。②乌梅丸组：给予配制的乌梅丸液（中草药乌梅丸为本院自制，成分：乌梅16g．细辛6g．干姜10g．黄连16g，当归4g，附子6g，蜀椒4g，桂枝6g，生晒参6g，黄檗6g。按传统方法配制成含生药浓度分别为515g/L的水煎剂）3mL灌胃，1次／d；柳氮磺胺吡啶组：给予柳氮磺胺吡啶混悬液3mL在造模后灌胃，1次／d；模型组和正常组：均以蒸馏水3mL灌胃，1次／d。各组均给药15d。（固然后于第16天，采用酶联免疫吸附法检测结肠组织白细胞介素6，8，10，肿瘤坏死因子α含量。④计量结果差异比较采用t检验、方差分析（q检验）。结果：由于每组大鼠在灌胃前随机抽取2只进行病理检查以及部分标本采集不合格，正常组、模型组、柳氮磺胺吡啶组、乌梅丸组分别脱失2，4，5，3只，最终进入结果分析以上各组大鼠分别为12，10，9，11只。①大鼠结肠组织白细胞介素6，8，肿瘤坏死因子“含量：模型组均明显高于正常组（P〈0．01），柳氮磺胺吡啶组和乌梅丸组明显低于模型组（P〈0．01），乌梅丸组明显低于柳氮磺胺吡啶组（P〈0．01）。②大鼠结肠组织白细胞介素10含量：模型组明显低于正常组（P〈0．01），柳氮磺胺吡啶组和乌梅丸组明显高于模型组（P〈0．01），乌梅丸组明显高于柳氮磺胺吡啶组（P〈0．05）。结论：乌梅丸有上调抗炎细胞因子白细胞介索10。下调促炎细胞因子肿瘤坏死因子α、白细胞介素6，8的作用，使溃疡性结肠炎大鼠免疫功能恢复正常，达到治疗的目的；乌梅丸对溃疡性结肠炎干预效果优于柳氮磺胺吡啶。     

甲钴胺治疗面神经炎疗效观察

目的：探讨甲钴胺治疗面神经炎的有效性。方法：观察40例,甲钴胺组（A）21例,普通维生素B12组（B）19例,分别治疗2周与4周后评判其治愈率及总有效率。结果：甲钴胺组2周的治愈率19.0%,总有效率66.7%;4周的治愈率76.2%,总有效率95.2%。维生素B12组2周的治愈率0%,总有效率26.3%;4周的治愈率10.5%,总有效率63.1%。两者比较有统计学意义（P〈0.05）。结论：甲钴胺治疗面神经炎是简单、易行且有效的一种方法。     

甲钴胺联合前列腺素E1治疗糖尿病周围神经病变疗效观察

糖尿病周围神经病变是糖尿病最常见的慢性并发症之一，其病因主要与长期高血糖及由此导致的代谢和微循环障碍有关，在严格控制血糖的基础上，辅助营养神经和改善微循环治疗可降低和延缓糖尿病周围神经并发症的发展。     

β-七叶皂甙钠联合甲钴胺治疗特发性面神经麻痹疗效观察

目的探讨β-七叶皂甙钠联合甲钴胺治疗特发性面神经麻痹的临床疗效。方法选择应用β-七叶皂甙钠联合甲钴胺治疗特发性面神经麻痹患者43例,为治疗组;另选应用口服泼尼松、肌注维生素B1、B12注射液上述疾病患者43例,为对照组。两组均辅以抗病毒药物,针灸,理疗等传统治疗方法。结果治疗组治愈率、总有效率与对照组比较差异无统计学意义（P〈0．05）,显效率显著优于对照组。结论β-七叶皂甙钠联合甲钴胺治疗特发性面神经麻痹疗效优于对照组,同时避免了糖皮质激素的不良反应,值得临床推广。     

舒血宁注射液联合甲钴胺治疗糖尿病周围神经病变临床观察

糖尿病周围神经病变（DPN）是临床常见的糖尿病慢性并发症之一,是糖尿病患者致残的主要病因,严重影响患者的生存质量。而DPN的临床治疗目前缺乏特异性,常用的治疗方法往往疗效不理想,因此积极寻求新的治疗方法十分必要。2007—06／2009—03笔者应用舒血宁注射液联合甲钴胺治疗DPN患者,取得了满意的疗效,报告如下。     

乌梅丸对溃疡性结肠炎大鼠组织细胞因子的干预效应

目的:观察中草药乌梅丸对溃疡性结肠炎大鼠组织促炎细胞因子肿瘤坏死因子α、白细胞介素6,8和抗炎细胞因子白细胞介素10的影响,并比较乌梅丸与柳氮磺胺吡啶治疗效果。方法:实验于2002-10/2003-03在湖北中医学院中心实验室完成。①选用健康SD大鼠56只,雌雄各半。按雌雄随机分4组:正常组、乌梅丸组、柳氮磺胺吡啶组、模型组,每组14只(雌雄各半)。应用2,4-二硝基氯苯免疫加醋酸局部灌肠法建立溃疡性结肠炎大鼠模型,除正常组外,其余组均造模。②乌梅丸组:给予配制的乌梅丸液(中草药乌梅丸为本院自制,成分:乌梅16g,细辛6g,干姜10g,黄连16g,当归4g,附子6g,蜀椒4g,桂枝6g,生晒参6g,黄檗6g。按传统方法配制成含生药浓度分别为515g/L的水煎剂)3mL灌胃,1次/d;柳氮磺胺吡啶组:给予柳氮磺胺吡啶混悬液3mL在造模后灌胃,1次/d;模型组和正常组:均以蒸馏水3mL灌胃,1次/d。各组均给药15d。③然后于第16天,采用酶联免疫吸附法检测结肠组织白细胞介素6,8,10,肿瘤坏死因子α含量。④计量结果差异比较采用t检验、方差分析(q检验)。结果:由于每组大鼠在灌胃前随机抽取2只进行病理检查以及部分标本采集不合格,正常组、模型组、柳氮磺胺吡啶组、乌梅丸组分别脱失2,4,5,3只,最终进入结果分析以上各组大鼠分别为12,10,9,11只。①大鼠结肠组织白细胞介素6,8,肿瘤坏死因子α含量:模型组均明显高于正常组(P<0.01),柳氮磺胺吡啶组和乌梅丸组明显低于模型组(P<0.01),乌梅丸组明显低于柳氮磺胺吡啶组(P<0.01)。②大鼠结肠组织白细胞介素10含量:模型组明显低于正常组(P<0.01),柳氮磺胺吡啶组和乌梅丸组明显高于模型组(P<0.01),乌梅丸组明显高于柳氮磺胺吡啶组(P<0.05)。结论:乌梅丸有上调抗炎细胞因子白细胞介素10,下调促炎细胞因子肿瘤坏死因子α、白细胞介素6,8的作用,使溃疡性结肠炎大鼠免疫功能恢复正常,达到治疗的目的;乌梅丸对溃疡性结肠炎干预效果优于柳氮磺胺吡啶。     

高原地区慢性肺源性心脏病患者不同病期血液和痰中细胞因子变化与肺功能的关系

目的：探讨高原地区慢性肺源性心脏病(肺心病)患者急性期、缓解期血液和痰中白细胞介素8(白介素8)和肿瘤坏死因子α的变化与肺功能的关系。方法：选择2002-01／2004—06解放军第四医院兰州军区呼吸内科中心住院的慢性肺心病患者50例(急性期)，男32例，女18例，年龄55～76岁。纳入患者均确诊为急性加重期肺心病，均居住在海拔2260～3300m地区，并同意参加实验。另选2003—03／05同海拔本院健康查体自愿者20人作对照组，男13人，女7人，年龄54～74岁。入院当天检测血液中性粒细胞百分比；采取静脉血4mL制备血清，收集痰液，用酶联免疫吸附反应法检测痰上清液和外周血浆白介素8和肿瘤坏死因子α水平。然后给予常规综合治疗，其中住院期间死亡4例，其余46例病情缓解后3周重复上述检查。50例慢性肺心病患者在急性期和治疗3周病情缓解后(46例)作血常规及第1秒用力呼气量占预计值百分比测定。结果：最终进入结果分析急性期和缓解期肺心病患者分别为50和46例，健康人20人。①急性期患者外周血浆白介素8和肿瘤坏死因子水平明显高于缓解期[(286．55&;#177;52．14)，(45．67&;#177;7．34)ng／L，(133．39&;#177;35．13)，(31．58&;#177;5．23)ng／L，t=10．53，8．97，P&;lt;0．01]；而第1秒用力呼气量占预测值百分比明显低于缓解期[(35．98&;#177;6．22)％，(44．66&;#177;5．34)％，t=5．43，P&;lt;0．01]。急性期和缓解期患者外周血浆白介素8和肿瘤坏死因子水平明显高于对照组(t=9．12～25．14，P&;lt;0．01)，第1秒用力呼气量占预测值的百分比明显低于对照组(t=29．08，18．76，P&;lt;0．01)。②急性期患者痰液中白介素8和肿瘤坏死因子水平[(40．52&;#177;7．36)，(19．42&;#177;3．25)ng／L]明显高于缓解期[(16．42&;#177;2．16)，(9．30&;#177;2．64)ng／L，t=19．06，14．53，P&;lt;0．01]。③血液中白介素8与第1秒用力呼气量占预测值的百分比呈显著负相关(r=-0．633，P&;lt;0．01)；痰液中白介素8、肿瘤坏死因子与第1秒用力呼气量占预测值百分比呈显著负相关(r=-0．588，-0．607，-0．531，P&;lt;0．01)。结论：高原慢性肺心病患者缓解期血液和痰液中自介素8和肿瘤坏死因子水平明显低于急性期；血液和痰液中白介素8水平及痰液中肿瘤坏死因子水平越高，肺功能越差。     

重组人红细胞生成素对大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡的保护作用

目的 观察大鼠脊髓损伤(SCI)后损伤段脊髓神经细胞凋亡机制和相关因子的表达,以及重组人红细胞生成素(rHu-EPO)对其的影响。方法 30只SD大鼠分为4组,建立SCI模型,观察rHu EPO对大鼠神经功能的影响;免疫组化法检测损伤脊髓神经细胞凋亡因子(Bcl 2、Bax、Fas)的表达;TUNEL标记凋亡细胞;比较各组间差别。结果 治疗组的神经功能较损伤组提高(P<0.05);损伤组的凋亡阳性细胞多于治疗组;治疗组Bcl 2阳性表达细胞多于损伤组(P<0.05)。结论 凋亡是 SCI后神经细胞死亡的一种重要方式;rHu-EPO能抑制脊髓神经细胞凋亡,对损伤脊髓的神经功能有保护作用。     

针刺对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后神经元凋亡的影响

目的观察针刺对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后海马区细胞周期因子和神经元凋亡的影响。 方法选取成年健康雄性Sprague-Dawley大鼠30只，分为对照组、缺血再灌注组和针刺组，采用大脑中动脉线栓法建立脑缺血再灌注损伤模型，针刺组大鼠造模成功后给予针刺治疗。应用免疫印迹法检测细胞周期素D1（Cyclin D1）和细胞周期素依赖性激酶4（CDK4）的表达，采用流式细胞计数法检测细胞凋亡率。 结果与对照组比较，缺血再灌注组再灌注48 h后海马细胞Cyclin D1、CDK4表达升高，凋亡细胞增多（P<0.01）；与缺血再灌注组比较，针刺组Cyclin D1、CDK4表达下降，凋亡细胞明显减少（P<0.05或0.01）。 结论针刺对脑缺血再灌注损伤有拮抗作用，其机制可能与其调控细胞周期因子从而抑制细胞凋亡有关。     

Neurohormonal effects of oxytocin and vasopressin receptor agonists on spinal pain processing in male rats

Oxytocin (OT) and arginine vasopressin (AVP) are 2 neuropeptides that display well-known effects on the reproductive system. Although still controversial, oxytocin and vasopressin were demonstrated to exert potent effects on the nociceptive system when administered directly in various central nervous structures. On the other hand, little is known about their peripheral (hormonal) actions on nociception and pain responses. The aim of the present work was to characterize the effects of physiological blood concentrations of OT and AVP on spinal nociception and on pain responses. To do so, growing doses of OT or AVP were administered intravenously and the nociceptive processing by spinal cord neurons was analyzed in anesthetized male rats in vivo. We observed that the action potentials mediated by C-type nociceptive fibers was strongly reduced (antinociception) after intravenous injections of low doses of OT (<5 μg) or AVP (<500 pg), whereas an increase (pronociception) was observed at higher doses. Interestingly, antinociceptive and pronociceptive effects were fully abolished in the presence of the OT receptor antagonist and the AVP receptor antagonist type 1A (V_1A), respectively. We confirmed this result with a behavioral model of forced swim stress-induced analgesia associated with plasmatic release of OT (and not vasopressin). Stress-induced analgesia was transiently lost after i.v. administration of OTR antagonist. Together, the present work provides straightforward evidence that blood levels of OT and AVP modulate nociception, windup plasticity and pain responses. The final target structures explaining these effects remains to be identified but are likely to be C-type nociceptors.     

次声对大鼠神经元细胞凋亡与Tau蛋白表达的影响

摘要 目的：探索声压级水平是8Hz、90dB的次声连续7d和14d暴露对大鼠海马区神经元细胞凋亡与Tau蛋白表达的影响。 方法：建立次声暴露模型。将24只SD大鼠平均分为对照组、1d组、7d组和14d组等四组。1d组次声暴露2h,7d组次声暴露7d每天2h,14d组次声暴露14d每天2h。对照组放置于无次声暴露仓内2h。运用TUNEL染色、Western Blot、ELISA等实验方法探索次声对大鼠海马区神经元细胞凋亡与Tau蛋白的影响。 结果：连续7d和14d的次声暴露组大鼠海马区神经元细胞凋亡增多,与对照组和1d组相比差异均有显著性意义且Tau蛋白表达也增多,与对照组和1d组相比差异也具有显著性意义,呈现随暴露时间的延长而增多的趋势。 结论：连续7d和14d次声暴露可能会导致大鼠神经功能损害。     

电针对脊髓损伤患者膀胱功能影响的尿动力学分析

目的应用标准的尿动力学测定方法分析电针刺激对脊髓损伤患者神经源性膀胱的影响。方法对15例逼尿肌反射亢进的脊髓损伤患者在尿流动力学测定的同时电针刺激关元(Ren4)、中极(Ren3),比较针刺前后膀胱容量(VH2O)、膀胱压(Pves)、逼尿肌压力(Pdet)和膀胱顺应性(BC)的变化情况。结果患者VH2O)由(124.00±77.37)ml增加至(144.47±85.87)ml(P<0.01),Pves由(65.33±23.90)cmH2O降为(55.27±17.52)cmH2O(P<0.05),Pdet由(52.87±18.68)cmH2O降为(44.93±15.82)cmH2O(P<0.05),BC由(2.35±2.05)ml/cmH2O增至(3.48±3.04)ml/cmH2O(P<0.01)。结论电针刺激对脊髓损伤患者的膀胱功能有良性的调节作用。     

Bcl-2 in suppressing neuronal apoptosis after spinal cord injury

BACKGROUND:

Apoptosis plays an important role in central neural diseases and trauma. B-cell lymphoma/Leukemia-2 (Bcl-2) can inhibit apoptosis in a wide variety of cells including neurons. In this experiment, by studying Bcl-2 over-expression transgenic (TG) mice subjected to spinal cord injury (SCI), we investigated whether Bcl-2 could reduce posttraumatic neuronal apoptosis, reduce the range of damage, and improve the behavioral functional recovery after contusive SCI.

METHODS:

Nine Bcl-2 TG mice and nine control mice were subjected to SCI of moderate severity at T10, with the use of weight dropping (WD) method (impact force 2.5×3.0 g/cm). At times up to 1 day, 7 days and 14 days after SCI, functional deficits were evaluated with Basso, Beattie, and Bresnahan (BBB) scales, and apoptosis of neurons was investigated by using the TUNEL method. Another three control mice only underwent lamina opening, but were not subjected to SCI, to provide blank comparison.

RESULTS:

The mean functional scores for the control mice (5.05 ±0.35) were lower than those for the Bcl-2 TG mice (5.45 ±0.15), although the unpaired T-test revealed no significant difference (P=0.67). On the other hand, the number of TUNEL positive neurons and integrated option density (IOD) scores for the Bcl-2 TG mice were both significantly lower than those for the control mice (P<0.05).

CONCLUSIONS:

This experiment suggests that overexpression of Bcl-2 may suppress neuronal apoptosis after SCI. Bcl-2 may be an important factor within the central nervous system that can relieve the damage after trauma.KEY WORDS: Spinal cord injury, Bcl-2, Apoptosis of neurons, Weight dropping, Transgenic mouse