周期性应力刺激对成牙骨质样细胞增殖的影响

背景：成牙骨质细胞在牙根形成、牙周病牙骨质的再生以及正畸牙根吸收的修复中起着重要的作用,其在体外培养状态下对力学信号反应特性的变化,在国内外少见报道。目的：分析正畸牙移动张力侧及压力侧两种不同受力形式与牙骨质改建的关系。方法：采用四点弯曲细胞力学加载仪,对体外培养的成牙骨质样细胞OCCM30分别施加2000με张、压应力,应用流式细胞术检测应力刺激3,6,12,24h后OCCM30细胞周期及增殖指数的变化。结果与结论：2000με张、压应力加载3,6h后,成牙骨质样细胞OCCM30在S期的细胞百分率明显减小,细胞增殖活性降低;随着加力时间的延长,S期细胞百分率回升,加载24h后S期细胞百分率与对照组无明显差异,细胞增殖活性恢复。张、压应力对增殖活性的影响趋势一致,相互之间差别无显著性意义。     

周期性张应力对C2C12成肌细胞增殖的影响

背景：在力学刺激下,肌肉组织发生改建,其中的成肌过程是一个多阶段的发育过程,细胞外基质的许多信号参与了成肌过程,其中力学信号是肌肉形成和再生的重要外界因子。目前国内外有许多关于周期性张应力刺激成肌细胞凋亡和增殖的报道,但是力学刺激在成肌作用中的具体机制目前还明确。目的：探讨周期性张应力对C2C12成肌细胞增殖的作用及影响机制。方法：采用FX4000T应力加载系统对体外培养的C2C12成肌细胞施加10%的周期性张应力,分别作用6,12,24 h。结果与结论：MTT结果显示,随着加力时间的延长C2C12成肌细胞的增殖情况及S期的细胞周期率逐渐增加,在应力作用12 h时增殖效果最明显（P〈0.05）,随后开始降低。Western blot检测显示,C2C12成肌细胞中核转录因子κB蛋白的表达随加力时间增加而不断减少,加力24 h时表达量又开始上升。结果提示,周期性张应力可以诱导C2C12成肌细胞增殖,能够改变其细胞周期,核转录因子κB可能也参与了此调节过程。     

p38丝裂素活化蛋白激酶与周期性张应力介导牙周膜成纤维细胞的增殖

背景:体内环境的复杂多变,使得在体外研究机械应力对细胞的作用存在着一定难度。目的:探讨p38丝裂素活化蛋白激酶信号通路在周期性张应力对人牙周膜成纤维细胞增殖中所产生的影响及其机制。方法:构建人牙周膜成纤维细胞体外培养-力学刺激模型,利用多通道细胞牵张应力加载系统,分别对细胞加以1,6,12,24h的周期性张应力,不加力组作为对照组,并在对照组和加力12h组分别加入p38丝裂素活化蛋白激酶特异性抑制剂SB203580。细胞计数试剂8检测细胞增殖情况;RT-PCR检测细胞和增殖细胞核抗原的表达。结果与结论:加力1h时细胞增殖得到促进,6h时继续上升,12h时达到高峰,24h增殖受到抑制;SB203580可抑制细胞增殖和增殖细胞核抗原mRNA的表达。说明在一定时间范围内,周期性张应力可促进人牙周膜成纤维细胞增殖,但随时间延长,增殖受到抑制;p38丝裂素活化蛋白激酶信号通路在周期性张应力介导的人牙周膜成纤维细胞增殖中发挥重要作用。     

姜黄素对角质形成细胞增殖、周期及相关分子表达的影响

[目的]探讨姜黄素对人角质形成细胞(HaCaT细胞)增殖、周期及其相关分子表达的影响.[方法]MTT法检测姜黄素不同药物浓度和作用时间对HaCaT细胞增殖的影响;用流式细胞仪检测姜黄素作用24 h后细胞周期变化情况;荧光定量PCR检测姜黄素作用24 h后增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白D1 (Cyclin D1)的mRNA的表达情况,并与未加入姜黄素的对照组比较.[结果]姜黄素随着浓度增加对HaCaT细胞增殖的抑制作用逐渐增强(P＜0.05);随着作用时间的延长,对细胞增殖的抑制作用也逐渐增强(P＜0.05);姜黄素处理24 h后,细胞G1期比例与对照纽相比显著增加(P＜0.05);姜黄素各浓度组的PC-NA、CyclinD1的mRNA的表达与对照组相比均下降(P＜0.05).[结论]姜黄素能够抑制HaCaT细胞增殖,引起细胞周期阻滞于G1期,以上作用与其能够下调PCNA、Cyclin D1的表达有关.     

牵张应力对人骨髓间充质干细胞增殖及细胞周期的影响

目的:观察周期性机械牵张应力对人骨髓间充质干细胞的增殖活性与细胞周期的影响。方法:实验于2006-02/06在同济医院矫形外科实验室完成。①建立体外细胞周期性机械牵张力学装置,并利用三维有限元的方法分析基膜的力学分布。②使用密度梯度离心法分离人骨髓间充质干细胞。③取第3～6代细胞接种于弹性硅胶膜培养板,分组:实验组细胞接受力学装置1.0Hz的频率,不同大小的应力(3%,6%,9%,12%,18%)、不同时间(12,24,36,48,60,72h)的机械信号刺激,对照组细胞不受力学信号刺激,其他培养条件与实验组一致。④细胞行力学干预后,用相差显微镜观察行细胞形态、排列,分别用细胞计数法、四甲基偶氮唑和流式细胞仪测量细胞增殖和细胞周期。结果:①自行建立的力学装置性能稳定,细胞接种硅胶6孔板后12～24h贴壁,贴壁良好,24h后细胞覆盖率约达70%,无细菌污染现象,可以用于应力刺激体外细胞效应的实验研究。②应力干预人骨髓间充质干细胞12h后,细胞形态稍变细长,轮廓鲜明,并沿受力环切线方向规则排列,干预24h变化更明显。③通过细胞计数、四甲基偶氮唑、流式细胞周期检测,发现适当大小的力学刺激对人骨髓间充质干细胞具促细胞增殖作用,增殖指数增大,其中12%的应力作用最明显,其增殖指数约为对照组的1.86倍;过强的机械应力(18%)对细胞不具有促增殖效应,并可能存在毒性作用;早期力学干预可以促进细胞增殖,干预时间过长(48h以后)反而表现为抑制生长趋势。结论:适当的周期性牵张应力可以提高人骨髓间充质干细胞的增殖能力。     

丝素蛋白/壳聚糖复合支架材料的细胞相容性

背景：大量研究表明丝素蛋白、壳聚糖为天然高分子材料,具有良好的细胞生物相容性。目的：探讨丝素蛋白/壳聚糖复合支架材料与诱导的兔骨髓间充质干细胞的生物相容性。方法：将兔骨髓间充质干细胞分离培养、诱导后,与丝素蛋白/壳聚糖三维支架材料体外共培养,以材料的细胞毒性、细胞增殖活力、材料细胞黏附率及扫描电镜等检测评价材料的细胞相容性。结果与结论：经诱导后的骨髓间充质干细胞在支架材料上黏附、生长良好,保持正常的分裂增殖速度;随时间的增加,细胞黏附率增加,材料组较对照组黏附率强,差异有显著性意义（P〈0.05）。扫描电镜观察发现细胞接种48h后细胞生长良好,与支架黏附紧密,增殖分裂活跃。说明丝素蛋白/壳聚糖三维支架材料具有良好的细胞相容性。     

周期性压力培养对兔骨髓间充质干细胞增殖的影响

背景：各种外界应力对细胞增殖有重要作用,但涉及骨髓间充质干细胞最佳压力及加载时间的力学研究尚少。目的：探讨周期性压力培养对兔骨髓间充质干细胞增殖活性及细胞周期的影响。设计、时间及地点：细胞学体外对照实验,于2008-01/08在南昌大学重点分子生物实验中心完成。材料：健康6周龄雄性新西兰大白兔4只,由南昌大学实验动物中心提供。自行改制的细胞压力加载装置专利号ZL2006-2-0097266.3。方法：使用密度梯度离心法体外分离培养兔骨髓间充质干细胞,取生长良好的第3代细胞,按4×104个/孔接种于6孔板,设立5组：5.32,10.64,21.28,29.26kPa压力组分别给予对应的压力,每日加压6h×3d;正常培养组细胞只接受正常大气压力学刺激,不予额外加压。主要观察指标：力学干预后,观察细胞形态及生长状况,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪测量细胞周期变化。收集细胞培养上清液,检测基质金属蛋白酶2的质量浓度。结果：6h/d压力干预骨髓间充质干细胞,3d后细胞形态无异常变化,呈集落样生长。随着周期性压力的增加,细胞吸光度值逐渐升高,以21.28kPa压力组为佳,但升高至29.26kPa压力时吸光度值明显降低（F=3.731,P=0.008）。与正常培养组比较,5.32,10.64,21.28kPa压力组细胞周期发生改变,增殖指数均明显升高（P〈0.05或0.01）,但29.26kPa压力组增殖指数则明显下降。细胞培养上清液基质金属蛋白酶2质量浓度21.28kPa压力组最低,29.26kPa压力组最高,组间比较差异有显著性意义（t=213.214,P〈0.001）。结论：5.32～21.28kPa周期性压力可以提高骨髓间充质干细胞的增殖能力,特别是21.28kPa压力刺激促增殖作用尤为明显,但压力过强则抑制细胞增殖。     

慢病毒高效感染皮肤人永生化表皮细胞株HaCaT细胞的分化状态

背景：研究证实YY1主要在小鼠基底层未分化表皮细胞中表达,且随着表皮细胞向基底上层分化其表达逐渐下降,这种差异性表达方式说明YY1可能是表皮细胞分化过程中重要的调节因子之一。目的：采用慢病毒-YY1感染HaCaT细胞观察YY1过表达对细胞分化的影响。方法：将慢病毒-YY1感染至HaCaT细胞,经puromycin筛选,建立单克隆稳定细胞株,设对照组为慢病毒感染的HaCaT细胞和未感染的HaCaT细胞,Western blot检测分析YY1蛋白的表达水平;将慢病毒-YY1-HaCaT组和HaCaT-YY1组细胞各分成2组,一组在低钙（0.12 mmol/L）培养基条件下培养48 h,另一组在低钙（0.12 mmol/L）培养基条件下培养24 h后在高钙（0.35 mmol/L）培养基条件下再培养24 h,用Western blot法检测YY1过表达对HaCaT细胞分化中的表皮细胞特异性分化角蛋白K1、K10、K14和晚期分化产物外皮蛋白、中间丝相关蛋白、兜甲蛋白的影响。结果与结论：慢病毒-YY1成功感染HaCaT细胞,高钙条件下获得的单克隆细胞株过表达YY1蛋白,可抑制K1、外皮蛋白和兜甲蛋白的合成,从而阻止表皮细胞角质化进程并使细胞处于未分化状态。结果说明慢病毒可高效感染皮肤人永生化表皮细胞株HaCaT细胞,YY1可能是抑制基底表皮细胞分化并维持其未分化增殖状态的重要因子之一。     

核转录因子κB信号通路在应力调控成肌细胞分化中的作用

背景:NF-κB信号通路在细胞生长分化、炎症反应、肿瘤生长等过程中发挥重要的调节作用,也参与成肌细胞分化的调控。目的:分析NF-κB信号通路在应力介导的C2C12成肌细胞分化中的作用及其作用机制。方法:成功构建大鼠C2C12成肌细胞体外培养-力学刺激模型,采用多通道细胞牵张应力加载系统,以0.5Hz的加载频率和10%的细胞拉伸变形幅度对细胞进行拉伸培养2,6,12,24h。结果与结论:①C2C12成肌细胞在周期性机械拉伸力作用下,NF-κB信号通路被激活。当细胞受到应力刺激6h后,胞核NF-κBp65亚基蛋白表达水平开始增强,24h内NF-κBp65亚基蛋白表达水平达到峰值。加力12,24h组与未加力对照组之间差异有显著性意义(P<0.05)。②IκBα蛋白表达水平在加力6h后表达显著下降,24h内IκBα蛋白表达水平减弱达到最低。加力12,24h组与未加力对照组之间差异有显著性意义(P<0.05)。③周期性张应力促进C2C12成肌细胞分化过程中Myogenin的表达,加入NF-κB信号通路特异性抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸(20μmol/L)后再加力,Myogenin的表达明显降低。以上结果提示:①NF-κB信号通路可能参与应力介导的C2C12成肌细胞分化的调控过程。②当细胞受到应力刺激时,胞质IκBα发生磷酸化并降解。③NF-κB信号通路在应力介导的C2C12成肌细胞分化过程中发挥重要作用,但不是这一调控过程的惟一通路。     

丝素蛋白/壳聚糖复合支架材料的细胞相容性

背景:大量研究表明丝素蛋白、壳聚糖为天然高分子材料,具有良好的细胞生物相容性.目的:探讨丝素蛋白/壳聚糖复合支架材料与诱导的兔骨髓间充质干细胞的生物相容性.方法:将兔骨髓间充质干细胞分离培养、诱导后,与丝素蛋白/壳聚糖三维支架材料体外共培养,以材料的细胞毒性、细胞增殖活力、材料细胞黏附率及扫描电镜等检测评价材料的细胞相容性.结果与结论:经诱导后的骨髓间充质干细胞在支架材料上黏附、生长良好,保持正常的分裂增殖速度;随时间的增加,细胞黏附率增加,材料组较对照组黏附率强,差异有显著性意义(P<0.05).扫描电镜观察发现细胞接种48 h 后细胞生长良好,与支架黏附紧密,增殖分裂活跃.说明丝素蛋白/壳聚糖三维支架材料具有良好的细胞相容性.     

六亚甲基二乙酰胺对急性白血病细胞株HL-60和U937分化、凋亡的影响及其机制

目的　研究六亚甲基二乙酰胺 (HMBA)体外诱导HL 6 0和U937细胞分化、凋亡的作用及其机制。方法　流式细胞仪检测细胞分化抗原CD1 1b、CD1 4,细胞凋亡标记Annexin Ⅴ以及进行细胞周期分布和细胞内cyclinD、cyclinE、p2 7抗原的分析 ,RT PCR检测c myc、Rb、Bcl 2基因mRNA的表达。结果　HL 6 0、U937细胞经HMBA处理 72h后CD1 1b表达显著增高 ,高剂量HMBA促使Annexin Ⅴ表达增加。HMBA阻滞HL 6 0、U937细胞于G0 G1 期 ,并使该两种细胞内cyclinE表达显著下降 ,cyclinD、p2 7表达显著增高 ,呈剂量依赖关系 ;HMBA可使HL 6 0、U937细胞c myc、Bcl 2mRNA表达下调 ,而RbmRNA在HL 6 0细胞表达上调 ,在U937细胞则无显著改变。结论　HMBA能诱导HL 6 0、U937细胞出现明显的分化 ,高剂量的HMBA有促使HL 6 0、U937细胞凋亡的倾向 ,其机制可能是通过影响细胞周期调控分子以及有关的增殖分化相关基因的表达 ,从而抑制细胞增殖 ,促进细胞分化。     

转染VEGF-C cDNA对NB4细胞增殖、分化与凋亡的影响

目的探讨转染血管内皮生长因子(VEGF)-C cDNA 对急性早幼粒细胞白血病细胞系NB4细胞增殖、全反式维甲酸(ATRA)诱导分化及化疗药物介导的细胞凋亡作用的影响。方法采用脂质体法将重组表达载体(pcDNA3.1-VEGF-C)和 pcDNA3.1转染 NB4细胞建立稳定细胞株;采用MTT 法及集落形成实验分析转染 VEGF-C cDNA 对 NB4细胞增殖的影响;NB4/VEGF-C 细胞经 ATRA诱导后涂片经瑞特-姬姆萨染色作形态学分析,实时荧光定量 PCR 检测调控粘细胞分化基因 C/EBPα相对表达水平,同时以流式细胞术检测细胞表面的 CD11b 表达量;Annexin V/PI 双染流式细胞术检测NB4/VEGF-C 细胞经鬼闩乙叉甙(Vp16)诱导的细胞凋亡;并以实时荧光定量 PCR 检测 bcl-2基因相对表达水平,均以 NB4/pcDNA3.1细胞为对照。结果成功转染获得稳定表达 VEGF-C 的细胞株 NB4/VEGF-C,其增殖能力显著高于 NB4/pcDNA3.1细胞;NB4/VEGF-C细胞对抗 ATRA 介导的早幼粒细胞分化成熟,CD11b 表达量低于对照组,C/EBPα基因含量仅为对照组的1/32;NB4/VEGF-C 细胞经Vp16介导后 bcl-2基因表达约为 NB4/pcDNA3.1细胞的2.28倍,而凋亡的 NB4/VEGF-C 细胞百分率(7.20±2.52)%明显低于凋亡的 NB4/pcDNA3.1细胞的(16.07±3.58)%(P=0.005)。结论 VEGF-C 通过 VEGF 受体3(VEGFR-3)信号途径促进白血病细胞增殖,抑制分化诱导剂介导的 NB4 细胞分化及化疗药物介导的细胞凋亡,推测 VEGF-C/VEGFR-3信号途径在白血病疾病进展中发挥重要作用并可望作为白血病治疗的靶点。     

缺氧对大鼠成骨细胞增殖、分化及矿化功能的影响

目的：探讨缺氧对体外培养成骨细胞的影响。方法：应用MTT法、对硝基苯磷酸盐法及茜素红染色方法观察缺氧对体外培养成骨细胞的增殖、碱性磷酸酶（ALP）表达及矿化结节形成的影响。结果：缺氧具有抑制成骨细胞增殖，降低ALP活性及矿化结节形成的数量的作用，并随缺氧时间的增加而更加明显。结论：缺氧具有抑制体外培养成骨细胞增殖、分化成熟及延缓矿化的作用。     

CIT基因在前列腺癌中的表达特点及其对PC-3细胞增殖、迁移和侵袭的调控作用研究

目的 研究CIT基因在前列腺癌中的表达特点及其对PC-3细胞生物学行为的调控作用。方法 采用回顾性研究,收集哈尔滨医科大学附属肿瘤医院收治的106例前列腺癌患者的临床资料,将前列腺癌旁正常组织作为对照,检测患者CIT基因表达量。根据前列腺癌患者CIT基因表达量中位数,分为低表达组(53例)与高表达组(53例),比较两组患者临床病理特征的差异以探讨CIT基因表达量与患者临床病理特征的关系。对人前列腺癌PC-3细胞进行培养,根据siRNA技术干扰CIT基因的表达,分为正常对照组(细胞未进行任何转染)、阴性对照组(转染非特异性对照序列siRNA)和CIT-siRNA组(转染CIT-siRNA)。通过CCK-8实验检测CIT基因对三组PC-3细胞增殖能力的影响,并采用划痕实验检测细胞迁移能力,通过Transwell小室实验检测细胞侵袭能力。结果 相比前列腺癌旁正常组织,CIT基因高表达于前列腺癌组织(P <0. 01)。低表达组与高表达组Gleason评分、N分期、M分期和前列腺特异抗原水平的比较,均存在显著差异(P <0. 05);而两组在年龄、T分期和精囊侵袭上的比较,均无显著差异(P> 0. 05)。在siRNAs细胞转染48 h后,阴性对照组和CIT-siRNA组PC-3细胞中CIT蛋白和mRNA表达量较正常对照组均明显下调(P <0. 01)。CCK-8实验结果显示,siRNAs转染PC-3细胞2、3 d后,阴性对照组和CIT-siRNA组细胞增殖能力较正常对照组均明显下降(P <0. 01)。划痕实验和Transwell实验结果发现,CIT特异性siRNAs转染细胞48 h后,阴性对照组和CIT-siRNA组PC-3细胞迁移距离较正常对照组均明显缩短,且侵袭细胞数量较正常对照组均明显减少(P<0. 01)。结论 CIT基因在前列腺癌组织中具有高表达的特点,通过沉默该基因表达,可有效干扰PC-3细胞生物学行为,提示CIT基因可能是前列腺癌的一种重要致病基因。     

细胞周期调控与肿瘤研究进展

近年来研究发现细胞周期调控异常与多种恶性肿瘤发生、发展和预后密切相关，细胞周期与肿瘤发病理论上的重大突破，形成对肿瘤治疗的新策略。本文对细胞周期网络调节系统与肿瘤发生、发展及治疗的关系作了综述。     

人胎脑皮质神经干细胞的分离培养及鉴定

目的探讨人脑皮质中分离培养神经干细胞并鉴定其增殖及分化潜能。方法采用包含碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和表皮细胞生长因子(EGF)的无血清培养和单细胞克隆技术，从30周自愿水囊引产人胎脑皮质中分离出神经干细胞，并进行培养、传代、分化观察，应用免疫组织化学染色对培养的细胞及其分化的细胞进行鉴定。结果从30周人胎脑皮质中成功分离出具有自我更新和多分化潜能的神经干细胞，在无血清培养时细胞呈悬浮状态生长，形成神经球，该细胞具有连续克隆能力，可传代培养，表达神经巢蛋白抗原(Nestin)；在含血清培养时诱导神经干细胞分化，分化后的细胞表达神经元细胞和胶质细胞的特异性抗原。结论神经干细胞的存活和分裂有赖于EGF和bFGF的共同作用；30周人胎脑皮质仍能培养出具有自我复制和分化潜能的神经干细胞。     

MYCT-1基因特异的siRNA对GES-1细胞凋亡，增殖及细胞周期的影响

目的探讨沉默MYCT-1基因对GES-1细胞凋亡、细胞周期及细胞增殖的影响。方法采用siRNA转染GES-1细胞后分别应用AnnexinV-FITC／PI双染流式细胞术检测其对细胞凋亡的影响，应用PI单染流式细胞术分析对细胞周期的改变，应用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测siRNA对细胞增殖的作用。结果siRNA转染GES-1细胞后，与对照细胞相比，细胞凋亡率明显增高（P〈0．05）；细胞增殖率降低（P〈0．05），细胞周期检测表明细胞停滞于S期（P〈0．05）。结论MYCT-1基因维持一定的表达水平对于正常细胞生长调控是必需的，MYCT-1基因对细胞周期的调控主要体现在S期向G1期的转变过程。     

非致死剂量超声对卵巢癌细胞超微结构的影响

目的⑶研究非致死剂量超声对体外培养的人卵巢癌细胞超微结构的影响⒚方法⑶卵巢癌细胞 ３ Ａ Ｏ 受非致死剂量超声辐照后⒙观察其超微结构的变化⒚结果⑶大部分受辐照细胞形态学变化不明显⒚部分细胞线粒体肿胀、嵴断裂、甚至膜破裂⒙胞浆内出现空泡⒚结论⑶非致死剂量超声可能通过空化效应而致卵巢癌细胞线粒体损伤⒚     

国际顶级杂志2010年6～10月发表干细胞基础研究文章对临床转化的意义

0 引言 基础科学的巨大进步使人们对疾病的发病机制有了更为深刻的认识,但并没有迅速的带来诊断、治疗和预防的新方法,主要是由于临床人员和基础科学家之间没有建立起真正的交流与合作.基础科学家与临床人员之间存在一个巨大的"死亡之谷",导致很多科研成果无法转化成临床应用.