GFP+小鼠胚胎干细胞移植入脑出血大鼠脑内后存活与分化的研究

目的:研究小鼠胚胎干细胞(mESCs)移植入脑出血大鼠脑内后的存活与分化.方法:将小鼠胚胎干细胞用绿色荧光蛋白(GFP)标记,经G418筛选1个月使其稳定表达,制作大鼠脑出血模型(脑出血组),3 d后移植GFP 小鼠胚胎干细胞至出血灶对侧侧脑室内及健康大鼠(对照组)侧脑室内;4周后处死大鼠,免疫荧光染色后显微镜观察小鼠胚胎干细胞的生长分化情况.结果:小鼠胚胎干细胞脑内移植至大鼠侧脑室后能有效穿透脑室壁进入脑组织,向病灶方向迁徙,脑出血组移植入侧脑室的小鼠胚胎干细胞进入脑实质的数量明显多于对照组(P＜0.05),移植细胞向神经元与胶质细胞分化.结论:小鼠胚胎干细胞无论在健康大鼠或脑出血大鼠脑内都能存活,且能穿越脑室壁,进入脑实质内;同时细胞有能力向神经细胞(包括神经元与胶质细胞)分化,具有治疗脑卒中乃至脑变性疾病的巨大前景.     

神经干细胞联合神经生长因子纳米粒海马移植对阿尔茨海默病转基因鼠的影响

目的:观察神经生长因子(NGF)纳米粒对神经干细胞(NSC)在APP/PS1转基因鼠脑内存活、迁移、分化的影响,以及NSC联合NGF纳米粒移植对基底前脑胆碱能神经元及海马、皮层β-淀粉样蛋白(Aβ)的影响。方法:36只12月龄雄性APP/PS1转基因小鼠采用随机数字表法分为AD对照组、NSC移植组、联合移植组,每组12只。另外选取12只12月龄野生型(WT)小鼠作为WT对照组。体外分离培养表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)转基因小鼠胎脑来源的NSC。WT对照组和AD对照组于双侧海马分别注射5μL磷酸盐缓冲液(PBS),NSC移植组和联合移植组于双侧海马分别注射等量NSC悬液和NSC联合NGF纳米粒悬液。移植4周后,采用免疫荧光法检测移植NSC的存活、迁移、分化以及基底前脑胆碱能神经元(ChAT)的变化;采用实时荧光定量PCR法(Q-PCR)检测基底前脑ChAT和Lhx8 mRNA表达;采用Western blotting检测各组基底前脑ChAT蛋白表达情况;采用硫磺素T染色检测各组小鼠海马及皮层Aβ斑块的数量。结果:(1)移植4周后,EGFP阳性NSC在脑内存活,广泛迁移至胼胝体远端、皮层及海马深部,并能分化为神经元及星形胶质细胞,联合移植组细胞存活数量更多,并且NSC显示更多复杂的突起形态。(2) NSC移植组和联合移植组基底前脑ChAT神经元数量增加(P0.05),联合移植组ChAT及Lhx8基因表达明显高于NSC移植组(P0.05)。(3) NSC移植组和联合移植组海马及皮层Aβ斑块的数量均未明显减少(P0.05)。结论:NSC联合NGF纳米粒移植可以间接保护基底前脑胆碱能神经元和NSC的存活与成熟,并促进基底前脑ChAT和Lhx8的基因表达,但不能减少海马和皮层中Aβ斑块数量。     

绿色荧光蛋白标记的大鼠神经干细胞移植于损伤脊髓后的迁移和存活

目的 观察神经干细胞在体内的迁移和存活.方法 体外培养胎鼠脊髓神经干细胞,用表达绿色荧光蛋白(GFP)的慢病毒载体进行转染,以乙交酯-丙交酯共聚物(PLGA)为支架移植入大鼠T9半横断脊髓损伤处.移植后1个月在荧光显微镜下观察神经干细胞在脊髓内的迁移,并计算其存活率.结果 神经干细胞表达强烈的绿色荧光.细胞移植后1个月,在损伤脊髓的头端和尾端都可见GFP阳性细胞,计算出的存活率为(1.4911±0.0313)%.结论 GFP标记的神经干细胞移植入大鼠损伤脊髓后向脊髓组织内迁移并有少数存活.     

施万细胞长期植入中枢神经系统后存活及迁移的实验研究

目的 观察施万细胞长期移植人中枢神经系统后是否存活。方法 取大鼠施万细胞体外培养，一部分经弘溴脱氧尿嘧啶（BrdU）标记后移植至电针损伤的大鼠中脑网状结构，另一部分经Hoechst33342标记后置于PLGA支架内再移植至大鼠全横断脊髓损伤处，分别于移植后的8个月和11个月处死动物，行BrdU免疫组织化学染色及荧光显微镜观察。结果 施万细胞移植人脑内8个月后仍可见较多BrdU阳性细胞，褐色椭圆形，并向大脑皮层迁移；移植于脊髓11个月后荧光湿微镜下可见许多Hoechst33342阳性细胞，发蓝色荧光，形态不规则，在PLGA支架内及其头、尾端脊髓实质内都可见到。结论 施万细胞移植人中枢神经系统后可长期存活，并向远端迁移。     

干细胞脑内移植有效标记研究：绿色荧光蛋白质粒标记的应用价值

观察绿色荧光蛋白(green fluorescent protein，GFP)质粒转化小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cell，ESC)的效果，以及将转化的胚胎干细胞移植入正常大鼠纹状体后，GFP质粒作为细胞存活情况示踪剂的效果。方法：首先利用感受态大肠杆菌提取大量高纯度GFP质粒DNA，然后将GFP质粒与脂质体孵育形成的转化复合物和小鼠胚胎干细胞共同孵育，使GFP质粒转入胚胎干细胞；筛选表达GFP的胚胎干细胞。将筛选后表达GFP的ESC移植入活体大鼠纹状体内，移植21d后，观察表达绿色荧光蛋白的移植细胞的存活情况。结果：GFP质粒转化以后的ES细胞团和单细胞都表达亮绿色的GFP，细胞打散计数证实大约60％的细胞携带GFP，移植21d后，大鼠脑内可见大量表达GFP的移植细胞。结论：脂质体可以将GFP质粒转入鼠的胚胎干细胞，携带有GFP的ES移植后21d，GFP可以作为示踪剂观察移植细胞的存活状况。脂质体辅助的GFP质粒转化胚胎干细胞是移植示踪的较好方法。     

人脐血单个核细胞移植在缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑内的迁移及分化

背景:研究发现脐血单个核细胞脑内移植后可以存活,并减轻缺氧缺血性脑损伤程度,显著改善脑损伤大鼠的远期行为学,但作用机制仍未阐明.目的:将人脐血单个核细胞绎侧脑室移植入缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑内,观察植入细胞在脑内的迁移与分化.设计、时间及地点:细胞学体内观察,于2007-12/2008-08在潍坊医学院分子影像学研究中心完成.材料:脐血来源于健康、足月妊娠产妇,由潍坊医学院附属医院产科提供.清洁级健康7 d龄SD新生大鼠50只,由山东省中医药大学动物中心提供.方法:Ficoll法体外分离培养人脐血单个核细胞,移植前3 d行BrdU标记.50只大鼠均采用Rice-Vannucci法复制缺氧缺血性脑损伤模型,造模后24 h,在左侧侧脑室(AP:-0.5 mm,ML:-2 mm,DV:-2 mm)注入脐血单个核细胞悬液,2 μL点,共1×105个活细胞.分别干细胞移植后24 h,3 d,7 d,14 d,28 d取材制备脑组织切片,10只,时间点.主要观察指标:采用免疫荧光双标法检测移植脐血单个核细胞的脑内迁移、神经干细胞的表达、分化情况.结果:50只大鼠均进入结果分析.①移植后24 h侧脑室内可见BrdU+细胞;移植后3,7 d移植细胞迁移到室管膜下区;移植后14,28 d移植细胞迁移到大脑皮质及海马.②移植后24 h侧脑室内可见BrdU+nestin+细胞:移植后3 d室管膜下区出现BrdU+nestin+细胞;移植后7 d BrdU+nestin+细胞数增加;移植后14 d BrdU+nestin+细胞数下降.③移植后14 d大脑皮质、海马开始出现BrdU+NSE+细胞与BrdU+GFAP+细胞,移植后28 d双阳性细胞数进一步增加,BrdU+NSE+细胞及BrdU+GFAP+细胞占BrdU+的比例也增加.结论:脐血单个核细胞侧脑室移植入脑内后可以继续存活,并迁移到大脑皮质与海马部位,分化为成熟的神经元与神经胶质细胞.     

干细胞脑内移植有效标记研究:绿色荧光蛋白质粒标记的应用价值

目的:观察绿色荧光蛋白(greenfluorescentprotein,GFP)质粒转化小鼠胚胎干细胞(embryonicstemcell,ESC)的效果,以及将转化的胚胎干细胞移植入正常大鼠纹状体后,GFP质粒作为细胞存活情况示踪剂的效果。方法:首先利用感受态大肠杆菌提取大量高纯度GFP质粒DNA,然后将GFP质粒与脂质体孵育形成的转化复合物和小鼠胚胎干细胞共同孵育,使GFP质粒转入胚胎干细胞;筛选表达GFP的胚胎干细胞。将筛选后表达GFP的ESC移植入活体大鼠纹状体内,移植21d后,观察表达绿色荧光蛋白的移植细胞的存活情况。结果:GFP质粒转化以后的ES细胞团和单细胞都表达亮绿色的GFP,细胞打散计数证实大约60%的细胞携带GFP,移植21d后,大鼠脑内可见大量表达GFP的移植细胞。结论:脂质体可以将GFP质粒转入鼠的胚胎干细胞,携带有GFP的ES移植后21d,GFP可以作为示踪剂观察移植细胞的存活状况。脂质体辅助的GFP质粒转化胚胎干细胞是移植示踪的较好方法。     

绿色荧光蛋白转基因干细胞在癫痫大鼠脑内的存活及对脑电的影响

目的:观察神经干细胞和骨髓基质干细胞移植至癫痫大鼠海马后的存活、迁移与周围组织的整合、修复和对癫痫大鼠脑电的影响。方法:实验于2005-03/2006-02在昆明医学院神经科学研究所完成。①实验材料:6～8周龄绿色荧光蛋白转基因小鼠,雌雄不限,体质量40～60g,由新加坡国立大学提供。健康雄性SD大鼠88只,体质量(300±20)g,由昆明医学院动物科提供。将88只SD大鼠随机分为对照组(n=8)、癫痫未移植组(n=8)、生理盐水组(n=24)、神经干细胞移植组(n=24)、骨髓基质干细胞移植组(n=24)。②实验方法:剖取绿色荧光蛋白小鼠孕鼠脑,分离获得整个海马进行神经干细胞的分离,并采用免疫化学方法鉴定。取绿色荧光蛋白转基因小鼠股骨,进行骨髓基质干细胞的分离,并采用免疫组织化学方法鉴定。癫痫未移植组、生理盐水组、神经干细胞移植组、骨髓基质干细胞移植组大鼠注射300×105U/kg,浓度80万U/mL青霉素制作癫痫大鼠模型,连续注射7d,每次癫痫发作按Racine评分标准评分,对照组大鼠腹腔注射相同剂量的生理盐水作为对照。将分离、培养绿色荧光蛋白转基因小鼠神经干细胞和骨髓基质干细胞,移植至青霉素致癫痫大鼠的右侧海马内。③实验评估:移植后1,2,4周观察移植干细胞在大鼠脑内存活和迁移情况,并检测大鼠脑电改变。结果:88只大鼠全部进入结果分析,中途无脱落。①大鼠行为学改变:癫痫未移植组、生理盐水组、神经干细胞移植组、骨髓基质干细胞移植组大鼠均达到Racine分级Ⅳ～Ⅴ级,癫痫模型制备成功。②各组大鼠的脑电改变:移植干细胞可减少癫痫大鼠脑电的痫性发放,降低癫痫波的波幅,具有明显的抗痫效应。③干细胞移植后在海马内的存活和迁移:移植神经干细胞可在青霉素致痫鼠脑内存活和迁移,但随时间的延长,存活细胞数目减少。结论:干细胞移植于青霉素诱发的癫痫大鼠脑内能够存活、迁移,能够改善癫痫鼠的脑电生理功能,提示干细胞移植可能成为一种有效的癫痫治疗手段。     

胚胎干细胞移植在中枢神经系统损伤小鼠中的应用

目的:观察经诱导的胚胎干细胞(ES)移植在小鼠脊髓损伤和小鼠缺氧缺血性脑病中的存活和迁移.方法:利用小鼠脊髓损伤(SCI)和缺氧缺血性脑病的模型(HIE),将小鼠胚胎干细胞体外诱导分化为ES细胞的衍生细胞后,注射到脊髓损伤和缺氧缺血性脑病的小鼠体内.移植后观察12周,应用酶学的方法检测Lac-Z标记的经诱导的ES细胞在脊髓和脑内的存活和迁移情况.结果:ES细胞在中枢神经系统损伤区能存活,并进行长距离的迁移,并与周围组织整合.结论:经诱导的胚胎干细胞能在宿主损伤脑和脊髓中存活、迁移,且脑内迁移较脊髓内迁移明显.     

人胚神经干细胞植入大鼠脑梗死区后的存活和分化

背景:神经干细胞移植可明显改善受损的神经功能,但在体内外多种因素的影响下,移植的神经干细胞其分化数量和分化方向受到限制.目的:观察人胚神经干细胞植入大鼠脑梗死区后的存活、迁移和分化情况.设计、时间及地点:细胞学体内观察,于2007-04/2008-04在泸州医学院附属医院分子生物实验室完成.材料:SD雌性大鼠30只,由中国医学科学院实验动物研究提供.流产胎儿由泸州医学院附属医院妇产科提供.方法:取流产胎儿大脑皮质,剪碎后消化离心,过滤后取沉淀细胞重新悬浮,加入含成纤维细胞生长因子、表皮细胞生长因子、白血病抑制冈子的DMEM/F12培养基,体外培养获得人胚神经干细胞.30只大鼠通过结扎颈外动脉建立脑梗死模型,行走时向右侧转圈者为成功模型,剔除5只无上述明显症状的失败模型鼠.于造模后24 h,以前囟尾侧0.8 mm,中线右外侧1.2 mm为注射点,每只大鼠移植行BrdU标记的1×109 L-1人胚神经干细胞悬液10 μL,深度为硬脑膜下3.0～3.2 mm.主要观察指标:免疫组织化学及免疫荧光染色观察植入的人胚神经干细胞在脑梗死区的存活、迁移和分化状态.结果:人胚神经干细胞体外培养48 h后聚集成球悬浮生长,传三四代后加入血清诱导可见巢蛋白免疫荧光染色呈阳性,发出绿色荧光并聚集成球.BrdU阳性细胞为椭圆形棕褐色,移植后第2,4 周均可见其在脑梗化区存活片向周围迁移,且第4周时迁移的范围更广.移植后2周,皮质颗粒层和皮质下均见较多的BrdU阳性细胞,目BrdU/微管相关蛋白2双阳性细胞多于BrdU/胶质纤维酸件蛋白双阳性细胞;移植后4周脑梗死区BrdU阳性细胞数明显减少,主要存在于脉络丛和微血管中,且BrdU/胶质纤维酸性蛋白双阳性细胞多于BrdU/微管相关蛋白2双阳性细胞.结论:人胚神经干细胞能存活于脑梗死的环境中,并逐渐分化成神经元或星形胶质细胞.移植后期脑实质内存活的神经干细胞明显减少,大量迁移到侧脑室脉络丛和脑表面微血管内,被内皮吞噬系统消化.     

胎鼠侧脑室神经干细胞的培养及鉴定

目的：从胎鼠侧脑室中分离神经干细胞,并对其进行培养及鉴定。方法采用无血清培养基分离培养来自胎鼠侧脑室的神经干细胞,并诱导其分化,用免疫荧光细胞化学的方法检测BrdU、Nestin和SOX2以及神经元标记物TuJ1的表达。结果胎鼠的侧脑室能够分离培养出具有增殖能力的神经球,呈Nestin和SOX2阳性,分化诱导后产生TuJ1阳性的神经元。结论胎鼠的侧脑室能够分离培养出神经干细胞,并能够在体外增殖、诱导分化为神经元。     

人羊膜上皮细胞移植急性肝损伤小鼠的定量效果分析

背景：目前已有较多关于人羊膜上皮细胞移植入动物体内的存活、迁徙及相关特性的初步研究,但其对移植效果的定量分析尚未见报道。目的：对脾内移植传代的人羊膜上皮细胞小鼠血清肝生化功能及人血白蛋白的定量分析。方法：40只裸小鼠随机分为4组,每组各10只。肝叶切除＋细胞移植2周组、肝叶切除＋细胞移植4周组、肝叶切除＋盐水组,行半肝叶切除,肝叶切除＋细胞移植组自脾下极移植密度为5×106传代的人羊膜上皮细胞约0.2mL,分别于移植后2周和4周采血;肝叶切除＋盐水组自脾下极注射生理盐水0.2mL;单纯细胞移植组：不行肝叶切除,自脾下极移植密度为5×106传代的人羊膜上皮细胞约0.2mL。检测其各组肝脾组织学、形态学的改变及各组血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶、人血白蛋白的变化和人血白蛋白表达定量分析。结果与结论：人羊膜上皮细胞移植急性肝损伤小鼠4周后肝脾形态未见明显改变,组织学可检测到特异性细胞,血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶、人血白蛋白有明显改善,血清中能检测到人血白蛋白且移植后4周较移植后2周有明显升高。因此,人羊膜上皮细胞移植入肝受损小鼠体内能存活超过4周且仍表达肝细胞样细胞的部分特性及功能,改善小鼠的肝功能,治疗小鼠急性肝损伤。     

胶质细胞源性神经营养因子基因修饰神经干细胞移植短暂性脑缺血再灌注损伤大鼠半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的表达

背景:以往对脑缺血再灌注后半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cysteinyl aspartate specific protease 3,Caspase-3)的表达均缺乏长时间的动态观察.目的:探讨胶质细胞源性神经营养因子基因修饰的神经干细胞移植对暂时性脑缺血大鼠脑组织Caspase-3表达的影响.设计:随机对照动物实验.材料:清洁级成年SD大鼠60只,随机分为4组:正常对照组5只、缺血再灌注组5只、单纯细胞移植组25只、基因修饰细胞移植组25只.另取清洁级新生SD大鼠数只,用于分离培养神经干细胞.方法:除正常对照组外,其余3组大鼠按改良性线栓法制备暂时性脑缺血模型.再灌注3 d,单纯细胞移植组从右侧侧脑室每只注入20 μL神经干细胞悬液,含(4.0-5.0)×10~5个神经干细胞;基因修饰细胞移植组每只注入等量胶质细胞源性神经营养因子基因修饰的神经干细胞悬液;缺血再灌注组每只注入20μL生理盐水.正常对照组、缺血再灌注组在缺血再灌注1周麻醉处死动物,单纯细胞移植组、基因修饰细胞移植组分别在缺血再灌注1,2,3,5,7周麻醉处死动物,5只/时间点.主要观察指标:采用免疫组织化学SP法观察Caspase-3在海马和额顶皮质表达及分布特点.结果:免疫组织化学染色显示,Caspase-3免疫阳性产物位于细胞核、细胞质和部分突起.在海马:单纯细胞移植组、基因修饰细胞移植组Caspase-3阳性细胞数均随再灌注时间的延长而逐渐减少;除缺血再灌注第1周外,其余各时间点基因修饰细胞移植组Caspase-3阳性细胞数均明显少于单纯细胞移植组(P<0.05).在额顶皮质:单纯细胞移植组、基因修饰细胞移植组Caspase-3阳性细胞数亦均随再灌注时间的延长而逐渐减少;除缺血再灌注第1,2周外,其余各时间点基因修饰细胞移植组Caspase-3阳性细胞数均明显少于单纯细胞移植组(P<0.05).结论:胶质细胞源性神经营养因子基因修饰的神经干细胞移植通过降低Caspase-3的表达,减少神经元凋亡,从而抑制缺血性脑损伤的进行性恶化,其移植效果优于单纯神经干细胞移植.     

Brain transplantation of genetically modified bone marrow stromal cells corrects CNS pathology and cognitive function in MPS VII mice

Current therapies for lysosomal storage diseases (LSDs), enzyme replacement therapy and bone marrow transplantation are effective for visceral organ pathology of LSD, but their effectiveness for brain involvement in LSDs is still a subject of controversy. As an alternative approach, we transplanted genetically modified bone marrow stromal (BMS) cells to lateral ventricle of newborn mucopolysaccharidosis VII (MPS VII) mice. MPS VII is one of LSDs and caused by deficiency of beta-glucuronidase (GUSB), resulting in accumulation of glycosaminoglycans (GAGs) in brain. At 2 weeks after transplantation, the GUSB enzyme-positive cells were identified in olfactory bulb, striatum and cerebral cortex, and the enzymatic activities in various brain areas increased. The GAGs contents in brain were reduced to near normal level at 4 weeks after transplantation. Although GUSB activity declined to homozygous level after 8 weeks, the reduction of GAGs persisted for 16 weeks. Microscopic examination indicated that the lysosomal distention was not found in treated animal brain. Cognitive function in MPS VII animals as evaluated by Morris Water Maze test in treated mice showed a marked improvement over nontreated animals. Brain transplantation of genetically modified BMS cells appears to be a promising approach to treat diffuse CNS involvement of LSDs.     

神经干细胞移植在脑损伤治疗中的应用

背景：成年鼠脑纹状体中已分离出具有分化成神经元及各种胶质细胞潜能的神经干细胞后,医学工作者试图从中寻找新思路用于脑损伤的治疗。目的：总结神经干细胞移植对治疗脑损伤中的作用及其前景。方法：电子检索EMbase（1980-01/2011-04）,MEDLINE（1966-01/2011-04）,中国生物医学文献数据库（CBM,1978/2011-04）和中国期刊全文数据库（CNKI）,筛查相关文章的参考文献。中文检索词＂神经干细胞,脑损伤,脑卒中,脑梗死＂,英文检索词＂neural stem cells,brain injury,stroke,cerebral infarction＂,最终纳入符合标准的文献12篇。结果与结论：动物研究结果显示神经干细胞移植可以改善神经功能并且明显降低脑组织炎症反应,沉默NgR基因、GDNF基因修饰和联合移植BDNF可更大程度上恢复神经功能。临床试验发现神经干细胞移植能在一定程度上改善脑卒中患者的后遗症。提示神经干细胞移植在动物实验中获取明显效果,可进一步应用于临床并研究其疗效。     

侧脑室移植骨髓基质细胞对脑缺血再灌注大鼠运动及认知功能的影响

背景：将骨髓基质细胞经侧脑室移植治疗大脑中动脉阻断缺血所致脑梗死模型鼠已取得一定效果,但尚未见对其认知功能的影响。目的：观察骨髓基质细胞侧脑室移植对大脑中动脉阻断缺血模型大鼠行为认知功能的影响,并观察脑梗死灶大小的变化和植入骨髓基质细胞的迁移路径。方法：制作SD大鼠大脑中动脉阻断缺血2h再灌注模型后随机分为3组,骨髓基质细胞组及磷酸缓冲液组分别于梗死侧侧脑室注射骨髓基质细胞悬液5μL（含约1.0×106个细胞）或等量的磷酸缓冲液,模型组和不造模的正常组不作任何处理。应用平衡木实验观察大鼠运动协调能力,水迷宫实验观察其游泳速度及空间学习记忆能力;苏木精-伊红染色观察梗死灶大小的变化,免疫组化观察BrdU阳性细胞的迁移路径。结果与结论：骨髓基质细胞组在移植后第3,7,14天平衡木评分均有显著改善（P〈0.05）。移植后第7~10天,骨髓基质细胞组大鼠的游泳速度均快于磷酸缓冲液组（P〈0.05）。骨髓基质细胞组大鼠寻找平台潜伏期的时间明显缩短（P〈0.05）,在原平台象限所占时间百分比和路程百分比及穿越平台次数明显增加（P〈0.05）。移植后7,14d,各模型组大鼠苏木精伊红染色均可见典型的脑缺血梗死病灶,梗死面积百分比无明显差异。BrdU染色显示,移植后第1天,阳性细胞都聚集在移植侧侧脑室,以紧密排列的细胞团形式存在于脑室壁;第3天大部分细胞穿越脑室壁以单个细胞形式向周围缺血区迁移;第14天移植细胞在梗死的纹状体、皮质可见。提示大脑中动脉阻断缺血后24h侧脑室移植骨髓基质细胞可明显改善运动协调能力及空间学习记忆能力;移植骨髓基质细胞未能减小梗死灶大小,但侧脑室移植的骨髓基质细胞可存活并定向性地迁移至缺血的纹状体和皮质。     

侧脑室移植骨髓基质细胞对脑缺血再灌注大鼠运动及认知功能的影响

背景:将骨髓基质细胞经侧脑室移植治疗大脑中动脉阻断缺血所致脑梗死模型鼠已取得一定效果,但尚未见对其认知功能的影响。目的:观察骨髓基质细胞侧脑室移植对大脑中动脉阻断缺血模型大鼠行为认知功能的影响,并观察脑梗死灶大小的变化和植入骨髓基质细胞的迁移路径。方法:制作SD大鼠大脑中动脉阻断缺血2h再灌注模型后随机分为3组,骨髓基质细胞组及磷酸缓冲液组分别于梗死侧侧脑室注射骨髓基质细胞悬液5μL(含约1.0×106个细胞)或等量的磷酸缓冲液,模型组和不造模的正常组不作任何处理。应用平衡木实验观察大鼠运动协调能力,水迷宫实验观察其游泳速度及空间学习记忆能力;苏木精-伊红染色观察梗死灶大小的变化,免疫组化观察BrdU阳性细胞的迁移路径。结果与结论:骨髓基质细胞组在移植后第3,7,14天平衡木评分均有显著改善(P<0.05)。移植后第7~10天,骨髓基质细胞组大鼠的游泳速度均快于磷酸缓冲液组(P<0.05)。骨髓基质细胞组大鼠寻找平台潜伏期的时间明显缩短(P<0.05),在原平台象限所占时间百分比和路程百分比及穿越平台次数明显增加(P<0.05)。移植后7,14d,各模型组大鼠苏木精伊红染色均可见典型的脑缺血梗死病灶,梗死面积百分比无明显差异。BrdU染色显示,移植后第1天,阳性细胞都聚集在移植侧侧脑室,以紧密排列的细胞团形式存在于脑室壁;第3天大部分细胞穿越脑室壁以单个细胞形式向周围缺血区迁移;第14天移植细胞在梗死的纹状体、皮质可见。提示大脑中动脉阻断缺血后24h侧脑室移植骨髓基质细胞可明显改善运动协调能力及空间学习记忆能力;移植骨髓基质细胞未能减小梗死灶大小,但侧脑室移植的骨髓基质细胞可存活并定向性地迁移至缺血的纹状体和皮质。     

同种异体胚胎干细胞移植治疗小鼠缺氧缺血性脑损伤

目的研究ESc来源的神经前体细胞移植入HIBD脑内后的迁移、分化,以探讨细胞移植治疗的机制。方法取7 d龄C57小鼠,制作HIBD动物模型。术后第2～3天,将ESc来源神经前体细胞植入小鼠损伤侧脑室,同时设对照组(只注射PBS)和正常组。然后对小鼠脑组织进行病理学、PCR、X-gal染色及免疫荧光组织化学检测。结果ESc来源神经前体细胞移植入HIBD脑内后,长期存在于脑内,并迁移、分布于受损的海马,构成海马结构,经进一步免疫荧光检测可分化为NF阳性的神经元。结论ESc来源神经前体细胞移植入HIBD脑内后,能迁移至损伤的海马,分化为神经元,替代损伤或坏死的神经细胞,这可能是其发挥治疗作用的机制之一。     

神经营养因子3联合神经干细胞移植治疗缺氧缺血性脑损伤的实验研究

目的观察神经营养因子3(NT-3)与神经干细胞(NSCs)联合移植对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)大鼠的治疗效果。方法 Wistar大鼠按随机数字表法分为正常组、单纯脑瘫组、神经干细胞移植组、NT-3联合NSCs移植组。取新生24 h的Wistnr大鼠脑皮质NSCs进行培养、鉴定。选出生7 d的Wistar大鼠制备HIBD动物模型。3 d后行损伤侧侧脑室移植。移植3周后进行神经电生理检测,后取脑组织进行HE染色。结果新生大鼠脑皮层可成功培养出NSCs,并表达NSCs的标志物神经巢蛋白(Nestin),NSCs可分化为神经元及星形胶质细胞。神经电生理:复合肌肉动作电位波幅脑瘫组3.844±1.217 mV,移植组5.218±1.976 mV,NT-3联合NSC组7.512±2.152 mV,差异有统计学意义(P<0.01)。潜伏期:脑瘫组5.729±0.755 ms,移植组5.197±0.709 ms,NT-3联合NSC组4.638±0.720 ms,差异有统计学意义(P<0.01)。HE:脑瘫组脑室旁正常组织结构破坏,可见多个不规则囊腔,神经干细胞移植组脑室旁正常组织结构有所恢复,囊变少见,NT-3移植组组织结构恢复更好。结论 NT-3联合神经干细胞移植是治疗脑瘫的有效办法。     

心肌梗死单个核细胞移植心肌运动的组织多普勒观察

目的：观察新生犬外周血单个核细胞心肌内移植对急性心肌梗死左室心肌运动的影响。方法：新生犬外周血单个核细胞经分离纯化后直接注射进入成年犬前壁心梗区域，对照组注射无血清培养基，分别应用组织多普勒技术（2．5MHz）分别检查术前，术后2d，术后30d心脏左室各部位心运动速度的变化。常规超声心动图检测射血分数，心输出量的变化。结果：术后2d两组均出现左室缺血区心肌运动速度下降，前壁增厚度率下降，左室其余各壁（室间隔除外）代偿性运动增强，二尖瓣侧壁运动显示左室收缩舒张功能降低无明显差别，心输出量，射血分数降低，术后30d，细胞移植组左室收缩舒张功能得以较好保持，左室运动改善，两组相比差别显著。结论：单个核细胞移植可以有效改善心肌梗死后左室心肌运动，有效维持心脏收缩及舒张功能。