影响亚甲基四氢叶酸还原酶和甲硫氨酸合成酶还原酶基因多态性的因素分析

目的了解影响女性亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)C677T、A1298C位点和甲硫氨酸合成酶还原酶(MTRR)A66G位点基因多态性的因素。方法采用横断面调查研究方法,以湖北省内1 902例女性为对象,采集口腔黏膜上皮细胞,提取DNA,用实时荧光定量PCR技术检测MTHFR和MTRR基因,统计分析不同民族MTHFR和MTRR基因多态性的差异,与其他地区人群的MTHFR和MTRR基因多态性进行比较,并分析不同位点基因多态性之间的关联关系。结果 (1)湖北省汉族女性和少数民族女性在MTHFR C677T和MTRR基因多态性构成差异无统计学意义(P>0.05),而MTHFR A1298C位点基因多态性构成差异有统计学意义(P<0.05)。(2)MTHFR C677T位点的纯合突变基因型TT的频率从南到北呈上升趋势,MTHFR A1298C位点的纯合突变基因型CC的频率从南到北呈下降趋势,而MTRR A66G位点基因多态性在不同地区差异不大。(3)MTHFR C677T位点的纯合突变基因型TT的频率在A1298C位点的正常型、杂合型、纯合突变型中分别为15.9%、0.1%、0.0%,差异有统计学意义(P<0.01);MTHFR C677T位点的纯合突变基因型TT的频率在MTRR A66G位点的正常型、杂合型、纯合突变型中分别为9.4%、5.9%、0.7%,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 MTHFR A1298C位点基因多态分布存在民族差异;而MTRR C677T、A1298C位点基因多态分布存在地区差异;同一基因不同位点的基因多态性有关联。     

叶酸代谢相关酶MTHFR、MTRR基因多态性与不良孕产史的关系

目的探讨育龄期女性亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)C677T、A1298C及甲硫氨酸合成酶还原酶(MTRR)A66G基因多态性与不良孕产史的关系。方法选取201例有不良孕产史的女性纳入不良孕产史组,321例无不良孕产史女性纳入对照组,采集所有研究对象外周静脉血标本,提取DNA,采用测序技术对MTHFR基因C677T、A1298C位点和MTRR基因A66G位点的多态性进行检测。结果不良孕产史组MTHFR基因C677T位点的TT突变纯合型、A1298C位点的CC突变纯合型基因频率均高于对照组,差异有统计学意义(χ~2=13.00、5.09,P0.05);不良孕产史组MTHFR基因C677T位点、A1298C位点和MTRR基因A66G位点的野生纯合型基因频率均低于对照组(χ~2=4.42、5.83、4.15,P0.05)。结论叶酸代谢相关酶MTHFR基因C677T位点、A1298C位点的突变纯合型可能会增加不良孕产发生的风险。     

四川德阳地区汉族女性人群MTHFR和MTRR基因多态性研究

目的探讨四川德阳地区汉族女性人群编码叶酸代谢通路中关键酶的基因5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)C677T、A1298C和甲硫氨酸合成酶还原酶(MTRR)A66G位点的基因型及等位基因的频率分布,以指导孕妇的叶酸补充。方法采用Taqman-MGB方法对中国四川德阳地区2 573例妇女的MTHFR基因C677T、A1298C和MTRR基因A66G位点进行基因检测,然后根据检测结果进行大规模基因型频率分布统计,并参考山东、河南、海南三省相关数据进行统计学比较。结果 MTHFR基因C677T的等位基因频率分别为63.45和36.55,MTHFR基因A1298C的等位基因频率分别为78.20和21.80,MTRR基因A66G的等位基因频率分别为72.81和27.19。四川地区人群与其他地区人群基因多态性分布频率比较发现,MTHFR基因C677T、A1298C多态性分布地区差异有统计学意义(P值均<0.01)。结论本研究结果表明,MTHFR基因C677T、A1298C多态性分布具有地区差异,MTHFR多态性是孕妇生育神经管缺陷(neural tube defects,NTDs)后代的危险因素,因此基于MTHFR多态性检测的孕期叶酸补充指导和监测将是进一步降低新生儿出生缺陷的重要方法。     

甘肃地区叶酸代谢相关酶MTHFR、MTRR基因多态性研究

目的 探讨甘肃地区育龄女性叶酸代谢关键酶亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)C677T、A1298C位点,甲硫氨酸合成酶还原酶(MTRR)A66 G位点的基因多态性与年龄及地理位置是否有关,为指导孕期叶酸补充提供参考.方法 使用PCR-金磁微粒层析法检测受检者MTHFR C677T、A1298C位点,MTRR A66G位点的基因多态性,采用Hardy-Weinberg平衡分析MTHFR C677T、A1298C和MTRR A66G位点的基因多态性是否符合遗传平衡.使用SPSS23.0统计软件对甘肃省内不同区域、不同年龄育龄女性的上述基因多态性位点的基因型分布进行比较,并将该研究的等位基因频率数据与其他省份的相应数据进行比较.结果 甘肃地区4935例育龄女性中,MTHFR C677T位点CC、CT及TT基因型频率分别为29.6％、49.3％、21.1％;MTHFR A1298C位点AA、AC及CC基因型频率分别为68.9％、28.1％、3.0％;MTRR A66G位点AA、AG及GG基因型频率分别为49.5％、43.5％、7.0％.省内不同地区、不同年龄育龄女性的上述位点基因型分布比较,差异均无统计学意义(P>0.05).甘肃地区育龄女性MTHFR C677T位点等位基因频率与长春、廊坊、淄博、郑州、眉山、湖北、湘潭、云南、南宁、阳江、海南等地区比较,差异均有统计学意义(P<0.05).MTRR A1298C位点等位基因频率与长春、廊坊、淄博、郑州、湖北、湘潭、南宁、阳江、海南等地区比较,差异有统计学意义(P<0.05).MTRR A66G位点的等位基因频率与长春、廊坊、银川、淄博、郑州、眉山、湖北、湘潭、云南、南宁等地区比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论 甘肃地区育龄女性MTHFR和MTRR的上述基因多态性与年龄及省内地理位置无关,但与非西北地区的外省部分区域存在差异.     

育龄女性MTHFR、MTRR基因多态性分布以及与血清叶酸和同型半胱氨酸水平的相关性研究

目的探讨叶酸代谢关键酶基因5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)C677T、A1298C和甲硫氨酸合成酶还原酶(MTRR)A66G多态性在育龄女性中的分布特征,并分析不同遗传特征对外周血叶酸和同型半胱氨酸(Hcy)水平的影响。方法选取2018年3月至2020年1月在上海计生所医院妇科就诊的汉族育龄女性2 651例,根据知情同意原则,采集口腔黏膜上皮脱落细胞,抽提基因组DNA,使用荧光定量PCR方法检测MTHFR C677T、A1298C和MTRR A66G基因多态性,采用化学发光法检测外周血叶酸水平,循环酶法检测血清Hcy水平。结果 (1)MTHFR C677TCC、CT、TT的基因型频率分别为33.2%、47.9%、18.9%,C、T等位基因频率分别为57.1%、42.9%;MTHFR A1298C AA、AC、CC的基因型频率分别为66.6%、30.5%、2.9%,A、C等位基因频率分别为81.8%、18.2%;MTRR A66G AA、AG、GG的基因型频率分别为56.4%、36.9%、6.8%,A、G等位基因频率分别为74.8%、25.2%。(2)MTHFR C677T和A1298C两位点连锁有7种组合,频率最高的是CT/AA(31.9%),没有CT/CC和TT/CC组合。两位点间存在完全连锁不平衡(D′=0.984,R2=0.161)。(3)MTHFR C677T不同基因型的叶酸和Hcy水平差异有统计学意义(P<0.05)。TT基因型的叶酸水平低于CC基因型,TT基因型的Hcy水平高于CC基因型。经单因素Logistic回归分析发现,MTHFR C677T TT基因型发生高Hcy血症的危险性是CC基因型的9.97倍(95%CI:3.81~26.05)。MTHFR A1298C和MTRR A66G不同基因型与血清叶酸及Hcy水平差异无统计学意义(P>0.05)。(4)经单因素回归分析,Hcy水平与叶酸水平呈负相关(R2=0.061,P<0.05),叶酸水平可解释Hcy水平个体差异的6.1%。结论获取了上海市汉族育龄女性MTHFR和MTRR基因多态性的群体遗传学特征,血清Hcy水平与MTHFR C677T基因多态性以及血清叶酸水平有关。筛查MTHFR和MTRR基因多态性并监测Hcy水平对围生期保健有重要的指导意义。     

河南省育龄女陛叶酸利用能力现状研究

目的了解河南省育龄女性叶酸利用现状,从而指导其在孕前及孕早期合理补充叶酸,避免由于叶酸代谢障碍导致的各种出生缺陷、自发性流产、妊娠期高血压疾病以及早产的发生,提高出生人口素质。方法采集1093例育龄女性口腔黏膜上皮细胞,进行荧光定量PCR-DNA测序,测定其5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶（methylenetetrahydrofolatereductase,MTHFR）C677T、A1298C和甲硫氨酸合成酶还原酶（methioninesynthasereductase,MTRR）A66G位点的基因序列,根据该基因型对叶酸利用能力的影响,得出携带该基因型的女性是否有叶酸利用风险以及风险的等级。结果MTHFRC677T位点野生型CC占18．11％,纯合突变型r丌占36．78％,突变基因T的基因频率为59-33％;MTHFRA1298C位点野生型AA占73．01％,纯合突变型CC占2-38％,突变基因C的基因频率为14．68％;MTRRA66G位点野生型AA占57．09％,纯合突变型GG占6．31％,突变基因G的基因频率24．6l％;双杂合子677CT、1298AC占15-37％;MTHFR两位点与中国人群基因型和等位基因分布差异均有统计学意义（P均〈0．05）,MTRR位点与中国人群基因型和等位基因分布差异均无有统计学意义（P均〉0．05）;叶酸利用能力遗传检测未发现风险的只占26．72％,而中、高度风险各占24．70％、38．97％。结论河南省育龄女性叶酸利用能力现状不容乐观,携带中高度风险基因的人群超过一半。     

中老年高同型半胱氨酸血症基因多态性与叶酸治疗效果的关联性研究

目的 探讨中老年高同型半胱氨酸血症(HHcy)相关基因多态性与叶酸补充效果的关联性。方法 2020年1~12月于宜宾市第一人民医院确诊的中老年HHcy患者334例,采用问卷收集一般资料,抽取清晨空腹血测定同型半胱氨酸(Hcy)浓度,采用PCR荧光探针法和实时定量荧光PCR(RT-PCR)法检测外周血基因组DNA中MTHFR基因C677T(rs1801133)、A1298C(rs1801131)和MTRR基因A66G (rs1801394)多态性位点,比较不同情况HHcy患者MTHFR基因C677T、A1298C和MTRR基因A66G基因型构成比和等位基因频率。结果 MTHFR基因C677T位点TT型、A1298C位点CC型和MTRR基因A66G位点GG型占比分别为46.7%、16.2和13.5%,rs1801133 T等位基因、rs1801131 C等位基因和rs1801394 G等位基因占比分别为63.3%、29.0%和29.0%。不同居住地、民族和吸烟饮酒史的rs1801131基因型分布比较,差异有统计学意义(P<0.05),不同居住地、BMI及吸烟饮酒史的rs1801394基因型分布比较,差异有统计学意义(P<0.05)。叶酸治疗无效组MTHFR基因T677T和C1298C频率及rs1801133 T等位基因和rs1801131 C等位基因频率高于有效组(P<0.05)。结论 MTHFR的T677T和C1298C患者叶酸治疗效果差。     

叶酸代谢相关酶基因多态性与不良孕产的关系研究

目的分析探讨叶酸代谢相关酶基因多态性与不良孕产间的关系。方法选择2018年1月～2018年8月本院接收的不良孕产妇56例为研究组,另选同一时期正常生育产妇56例为对照组,两组均采用PCR法进行基因多态性检测,对比两组的基因型分布特点,并分析与不良孕产之间的关联性。结果研究组的MTHFR基因A1298C位点CC突变纯合型、C677T位点TT突变纯合型与MTRR基因A66G位点GG突变纯合型的基因频率均较对照组更高(P0.05);而研究组的MTHFR基因A1298C位点AA野生纯合型、C677T位点CC野生纯合型及MTRR基因A66G位点AA野生纯合型基因频率则较对照组更低(P0.05)。结论不良孕产与叶酸代谢相关酶基因多态性之间关系密切。     

烟台市牟平区汉族女性亚甲基四氢叶酸还原酶和甲硫氨酸合成酶还原酶基因多态性分布研究

目的分析山东省烟台市牟平区女性亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）C677T、A1298C及甲硫氨酸合成酶还原酶（MTRR）A66G基因多态性的分布特征。方法以烟台市牟平区529例汉族女性为研究对象,采集口腔黏膜上皮细胞,提取基因组DNA,通过荧光PCR方法进行MTHFR和MTRR基因多态性检测。统计分析本地区基因多态性的分布特征,并与已报道地区数据进行比较。结果烟台市牟平区汉族女性的MTHFR677TT纯合突变基因型频率为33．1％,与山东省淄博市、江苏省镇江市、湖北省武汉市、四川省德阳市、云南省昆明市、广东省广州市和海南省琼海市的分布差异有统计学意义（P〈0．05）。MTHFR1298CC纯合突变基因型频率为2．7％,与江苏省镇江市、湖北省武汉市、四川省德阳市、云南省昆明市、广东省广州市和海南省琼海市的分布差异存在统计学意义（P〈0．05）。MTRR66GG纯合突变基因型频率为8．2％,仅与淄博市和琼海市存在统计学差异（P〈0．05）。结论烟台市牟平区汉族女性MTHFR和MTRR基因多态性分布情况不同于其他地区,具有地域特异性。     

叶酸代谢基因MTHFR及MTRR多态性与河南地区复发性流产的相关性分析

目的研究叶酸代谢基因多态性在河南地区育龄妇女的分布情况,探索其与不明原因复发性流产的相关性。方法选取无合并症的423名孕妇(对照组)和不明原因复发性流产就诊的378名妇女(观察组),采用PCR荧光探针法检测亚甲基四氢叶酸还原酶基因(MTHFR)C677T、A1298C位点及甲硫氨酸合成还原酶基因(MTRR)A566G位点的多态性分布。结果观察组MTHFR 677位点携带突变T基因、MTHFR 1298位点携带突变C基因与对照组比较差异有统计学意义,观察组MTR 566位点携带G基因与对照组比较差异未见统计学意义。当有两个基因位点同时发生突变时,增加了复发性流产的概率。结论 MTHFR C677T和A1298C与育龄妇女发生不明原因复发性流产有一定的关联。     

Genetic determinants of folate and vitamin B12 metabolism: a common pathway in neural tube defect and Down syndrome?

One-carbon metabolism is under the influence of folate, vitamin B12 and genetic polymorphisms of methylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR 677 C --> T and 1298 A --> C), of methionine synthase (MTR 2756 C --> G), methionine synthase reductase (MTRR 66 A --> G) and transcobalamin (TCN 776 C --> G). The pathogenesis of neural tube defect (NTD) may be related to this metabolism. The influence of the MTHFR 677 C --> T polymorphism reported in The Netherlands and Ireland can be questioned in southern Italy, France and Great Britain. MTRR, combined with a low level of vitamin B12, increases the risk of NTD and of having a child with NTD in Canada, while TCN 776 GG and MTRR 66 GG mutated genotypes associated with the MTHFR 677 CC wild-type are predictors of NTD cases in Sicily. Down syndrome (DS) is due to a failure of normal chromosomal segregation during meiosis, possibly related to one-carbon metabolism. MTHFR 677 C --> T and MTRR 66 A --> G polymorphisms are associated with a greater risk of having a child with DS in North America, Ireland and The Netherlands. In contrast, MTHFR 677 C --> T has no influence on DS risk in France and Sicily, while homocysteine and MTR 2756 AG/GG genotypes are predictors of DS risk in Sicily. In conclusion, NTD and DS are influenced by the same genetic determinants of one-carbon metabolism. The distinct data produced in different geographical areas may be explained by differences in the nutritional environment and genetic characteristics of the populations.     

潍坊市汉族女性叶酸代谢关键酶基因多态性分布研究

目的:针对潍坊市汉族女性开展分子流行病学调查,研究叶酸代谢关键酶MTHFR和MTRR的基因多态性分布。方法:以孕期保健的670例汉族健康女性为研究对象,采集口腔黏膜上皮脱落细胞,抽提基因组DNA,使用荧光定量PCR方法检测MTHFR C677T、A1298C和MTRR A66G基因多态性,进行统计分析。结果:1)入组对象的基因多态性分布符合遗传平衡。2)汉族女性MTHFR 677CC、CT、TT的基因型频率分别为13.73%、47.91%、38.36%,C、T等位基因频率分别为37.7%、62.3%;MTHFR 1298AA、AC、CC的基因型频率分别为75.52%、23.28%、1.19%,A、C等位基因频率分别为87.2%、12.8%;MTRR 66AA、AG、GG的基因型频率分别为54.63%、40.44%、4.93%,A、G等位基因频率分别为74.9%、25.1%。3)汉族女性MTHFR C677T和A1298C两位点连锁有7种组合,频率最高的是TT/AA(38.21%),没有CT/CC和TT/CC组合。两位点间存在完全连锁不平衡(D'=0.987,r2=0.237)。结论:获取潍坊市汉族女性MTHFR和MTRR基因多态性的群体遗传学特征。     

贵州省14个民族育龄女性叶酸代谢关键酶基因位点多态性调查

目的调查贵州省多民族育龄女性叶酸代谢关键酶MTHFR(C677T,A1298C),MTRR A66G基因多态性,获取本地区多民族育龄女性叶酸利用能力情况,同时为叶酸营养增补方案提供分子医学理论依据,更好地指导孕期保健。方法选取2018年2月至2019年10月在本院产科进行备孕及孕期检查的女性作为研究对象,共计7761例(其中汉族6317例、苗族349例、布依族292例、土家族265例、侗族158例、彝族81例、仡佬族71例、穿青族64例、回族38例、白族35例、壮族35例、满族23例、黎族20例、仫佬族13例)。采集并提取研究对象口腔黏膜上皮脱落细胞,抽提DNA,利用荧光定量PCR方法检测并分析受检者MTHFR(C677T,A1298C)和MTRR(A66G)基因分型情况。结果贵州省汉族育龄女性MTHFR C677T位点基因型和等位基因频率与当地苗族、布依族、侗族育龄女性相比差异有统计学意义(P<0.05),与其他少数民族(土家族、彝族、仡佬族、穿青族、回族、白族、壮族、满族、黎族、仫佬族)相比无显著性差异(P>0.05);贵州省汉族与苗族、布依族育龄女性MTHFR A1298C位点基因型和等位基因频率相比有显著性差异,与其他少数民族(土家族、侗族、彝族、仡佬族、穿青族、回族、白族、壮族、满族、黎族、仫佬族)相比无显著性差异;贵州省汉族育龄女性MTRR A66G位点基因型与当地土家族、穿青族、白族育龄女性比较有统计学意义,汉族育龄女性MTRR A66G位点等位基因频率与当地布依族、土家族相比有显著性差异,与其他民族比较无统计学意义。结论贵州省多民族育龄女性叶酸代谢关键酶基因位点多态性有其自身特点,部分与当地汉族育龄女性有区别,具有民族特性,可以有针对性地制定符合当地民族特征的个性化叶酸补服方案。     

无锡女性MTHFR和MTRR基因多态性研究

目的：分析无锡女性叶酸代谢相关基因MTHFR与MTRR的基因多态性分布特征。方法对无锡市524名育龄妇女,采集口腔黏膜上皮细胞,提取基因组DNA,用荧光定量PCR方法对MTHFR与MTRR基因多态性位点进行检测分析,了解无锡市妇女MTHFR与MTRR基因单核苷酸位点多态性（SNP）的分布频度,并与山东、河南、广东、海南等地区进行比较。结果无锡地区妇女MTHFR C677T位点多态性分布与山东、河南、广东、海南地区数据比较差异均有统计学意义（P均＜0.05）;MTHFR A1298C位点等位基因C出现频率低于等位基因A,与广东、海南地区数据比较差异均有统计学意义（P＜0.01）。MTRR A66G位点多态性的分布与山东、河南、广东等地区数据比较差异无统计学意义（P均＞0.05）。结论无锡地区女性MTHFR基因多态性分布具有地区特异性。     

Relationship between methionine synthase, methionine synthase reductase genetic polymorphisms and deep vein thrombosis among South Indians.

BACKGROUND: The rationale behind this study was to examine the relationship between polymorphisms in genes that regulate remethylation of homocysteine to methionine, i.e., methionine synthase (MTR A2756G) and methionine synthase reductase (MTRR A66G), and risk of deep vein thrombosis (DVT) in a South Indian cohort (163 DVT cases and 163 controls), as elevated homocysteine has been documented as an independent risk factor for DVT in the same cohort. METHODS: Plasma homocysteine analysis was carried out by reverse phase HPLC. The MTR A2756G and MTRR A66G genetic polymorphisms were detected using PCR-restriction fragment length polymorphism method. For statistical analyses, Fisher's exact test was used for categorical variables and Student's t-test and analysis of variance were used for continuous variables. RESULTS: The MTRR 66GG genotype was associated with a 2.74-fold [95% confidence interval (CI): 1.73, 4.34] risk of DVT. The MTR A2756G polymorphism was not a risk factor. MTRR GG/MTR AG and MTRR GG/MTR GG genotypes cumulatively were found to increase the risk of DVT by 2.38-fold (95% CI: 1.43, 3.96). A positive association was observed between plasma homocysteine and the MTRR G allele, and the MTR G allele was shown to have an additive effect. The risk associated with the MTRR 66GG genotype was further increased in subjects compound heterozygous for methylene tetrahydrofolate reductase (MTHFR) [odds ratio (OR): 3.46, 95% CI: 1.38, 8.63]. CONCLUSIONS: The MTRR 66GG genotype is a risk factor for DVT among South Indians. This risk is increased further in the presence of the MTHFR 677CT/1298AC genotype.     

Triplex tetra-primer ARMS-PCR method for the simultaneous detection of MTHFR c.677C>T and c.1298A>C, and MTRR c.66A>G polymorphisms of the folate-homocysteine metabolic pathway

The folate-homocysteine metabolic pathway was shown to play an important role in several diseases such as cancers, cardiovascular diseases, and neurodegenerative diseases. The c.677C>T and c.1298A>C polymorphisms of the Methylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR) gene, and c.66A>G of the Methionine synthase reductase (MTRR) gene are the most commonly investigated polymorphisms in the folate-homocysteine metabolic pathway. The currently used methods for the detection of the three polymorphisms are either slow and laborious or extremely expensive. In this paper, a new highly optimized method for the simultaneous detection of the three single nucleotide polymorphisms is described. The proposed method utilizes 12 primers in a single PCR reaction to detect the three polymorphisms simultaneously based on the principle of tetra-primer ARMS-PCR (also known as PCR-CTPP). The proposed method offers extremely fast, economical, and simple detection. Validation by PCR-RFLP showed 100% concordance in genotype assignment. The proposed method was successfully applied to a sample of the Syrian population (n=126), which was not previously genotyped for any of the three SNPs. The variant allele frequencies were found to be 31, 29, and 43% for the c.677C>T, c.1298A>C, and c.66A>G polymorphisms, respectively. The proposed method is the first to detect three SNPs in a single PCR reaction based on tetra-primer ARMS-PCR or PCR-CTPP. We suggest that the use of Betaine may play an important role in multiplex tetra-primer ARMS-PCR or PCR-CTPP based on its potential capacity to close the gap in melting temperature between different primers.