多奈哌齐对β淀粉样蛋白诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的:研究多奈哌齐对Aβ25-35蛋白诱导的PC12细胞损伤的保护作用。方法:采用细胞培养、MTT法和流式细胞仪技术,以β淀粉样蛋白(amyloidbetaprotein,Aβ)诱导PC12细胞损伤作为细胞模型,观察不同剂量Aβ25-35蛋白对PC12细胞的影响以及多奈哌齐对PC12损伤的保护作用。结果:PC12细胞对于Aβ25-35造成的损伤和凋亡呈剂量依赖型,凋亡百分率增加(71.3%,90.1%),细胞增殖活性降低(t=13.89,P<0.001);提前给予多奈哌齐保护的PC12细胞凋亡百分率明显降低(52.0%),细胞增殖活性较前提高(t=12.77,P<0.001)。结论:多奈哌齐明显减少Aβ诱导的PC12细胞的损伤,提高细胞的存活率,减少细胞凋亡。     

淀粉样β蛋白25～35诱导的PC12细胞凋亡与奥氮平的保护作用

背景：在阿尔茨海默病中起着重要作用的淀粉样β蛋白能够诱导细胞凋亡。目的：探讨奥氮平对淀粉样β蛋白25～35诱导的PC12细胞凋亡的机制及其保护作用。单位：解放军总医院南楼神经科。设计：随机设计。材料：实验于2002-05／2003-03在加拿大萨斯卡彻温大学医学院神经精神研究所完成。方法：P12细胞在RPMI1640培养液中培养。在96孔板每孔中接种100μL细胞悬液，在胶原被覆的25cm^2培养瓶中接种5mL细胞悬液，培养24h后，分别加50μmol／L、100μmol／L奥氮平培养24h，再加不同浓度的淀粉样β蛋白25～35（0．01μmol／L．2μmol／L、20μmol／L）培养24h。将收获好的96孔板以淀粉样β蛋白25～35诱导PC12细胞凋亡，采用MTT比色分析测定细胞存活率。收获25cm^2培养瓶中的PC12细胞，应用Western blot检测奥氮平对PC12细胞Bax、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达的影响。主要观察指标：细胞存活率的测定，PC12细胞中Bax、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的表达水平。结果：①细胞存活率比较：淀粉样β蛋白25～35诱导的PC12细胞的细胞活性从75％降低到35％；50μmol／L、100μmol／L奥氮平预处理组PC12细胞的活性明显提高。②奥氮平对淀粉样β蛋白25～35诱导的PC12细胞凋亡中Bax表达的影响：0．01μmol／L，2μmol／L,20μmol／L淀粉样β蛋白25～35处理的PC12细胞Bax的表达增加，50μmol／L奥氮平预处理使淀粉样β蛋白25～35诱导的PC12细胞Bax的表达减低。③奥氮平对Aβ25～35诱导的PC12细胞凋亡中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达的影响：0．001μmol／L、0．01μmol／L淀粉样β蛋白处理的PC12无变化，50μmol／L奥氮平预处理对PC12细胞表达亦无影响；2μmol／L、20μmol／L淀粉样β蛋白25～35处理的PC12细胞表达增高，50μmol／L奥氮平预处理能抑制其表达升高。结论：①淀粉样β蛋白25～35能够诱发与细胞凋亡密切相关的Bax、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3在培养的PC12细胞中高表达。②奥氮平具有降低其表达，提高PC12细胞存活的保护作用。     

Aβ25-35致PC12细胞核酸、蛋白质氧化损伤及依达拉奉的保护作用

目的 研究依达拉奉对淀粉样β蛋白25-35（Aβ25-35）诱导的PC12细胞核酸、蛋白质氧化损伤的保护作用。方法 实验对象分为三组：依达拉奉保护组（依达拉奉20μmol／L,Aβ25-35 30 μmol／L）、Aβ25-35干预组（Aβ25-35 30 μmol／L）和正常对照组。采用MTT法测定细胞生存率；慧星法测定DNA单链损伤；ELISA法测定羰基蛋白含量；比色法测定羟自由基（．OH）并计算，OH清除率。结果 与正常对照组相比，Aβ25-35干预组细胞生存率降低。DNA单链损伤明显加重，细胞内羰基蛋白含量升高（P均〈0．001）。依达拉奉保护组与Aβ25-35干预组相比，细胞生存率明显升高，DNA单链损伤明显减轻，细胞内羰基蛋白含量减低（P〈0．001或P〈0．01），但都未达到正常水平。依达拉奉对．OH的有效清除率可高达79．98％。结论 依达拉奉能够通过清除．OH来减轻DNA损伤。并能减少细胞内蛋白质氧化产物的生成，具有神经保护作用。     

银杏提取物对淀粉样β蛋白致PC12细胞凋亡的保护作用

目的：探讨银杏提取物对淀粉样β蛋白(Aβ)致PC12细胞凋亡的保护作用。方法：应用二甲基噻唑二苯基四唑溴盐(MTT)分析法研究细胞活性的改变，应用激光共聚焦显微镜进行线粒体膜电位测定。TUNEL法测定细胞凋亡率。结果：随着Aβ浓度的加大，PC12细胞的存活率逐渐降低。同时给予Aβ及不同剂量的银杏提取物，可明显提高PC12细胞的存活率。银杏提取物可减少Aβ所致的细胞凋亡，Aβ组细胞凋亡率为63％，高于银杏组21％(x^2=36．2069，P=0．0000)。结论：银杏提取物可抑制Aβ诱导的PC12细胞凋亡。     

淀粉样β蛋白25～35诱导的PC12细胞凋亡与奥氮平的保护作用

背景:在阿尔茨海默病中起着重要作用的淀粉样β蛋白能够诱导细胞凋亡。目的:探讨奥氮平对淀粉样β蛋白25～35诱导的PC12细胞凋亡的机制及其保护作用。单位:解放军总医院南楼神经科。设计:随机设计。材料:实验于2002-05/2003-03在加拿大萨斯卡彻温大学医学院神经精神研究所完成。方法:P12细胞在RPMI1640培养液中培养。在96孔板每孔中接种100μL细胞悬液,在胶原被覆的25cm2培养瓶中接种5mL细胞悬液,培养24h后,分别加50μmol/L、100μmol/L奥氮平培养24h,再加不同浓度的淀粉样β蛋白25～35(0.01μmol/L、2μmol/L、20μmol/L)培养24h。将收获好的96孔板以淀粉样β蛋白25～35诱导PC12细胞凋亡,采用MTT比色分析测定细胞存活率。收获25cm2培养瓶中的PC12细胞,应用Westernblot检测奥氮平对PC12细胞Bax、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达的影响。主要观察指标:细胞存活率的测定,PC12细胞中Bax、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的表达水平。结果:①细胞存活率比较:淀粉样β蛋白25～35诱导的PC12细胞的细胞活性从75%降低到35%;50μmol/L、100μmol/L奥氮平预处理组PC12细胞的活性明显提高。②奥氮平对淀粉样β蛋白25～35诱导的PC12细胞凋亡中Bax表达的影响:0.01μmol/L,2μmol/L,20μmol/L淀粉样β蛋白25～35处理的PC12细胞Bax的表达增加,50μmol/L奥氮平预处理使淀粉样β蛋白25～35诱导的PC12细胞Bax的表达减低。③奥氮平对Aβ25～35诱导的PC12细胞凋亡中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达的影响:0.001μmol/L、0.01μmol/L淀粉样β蛋白处理的PC12无变化,50μmol/L奥氮平预处理对PC12细胞表达亦无影响;2μmol/L、20μmol/L淀粉样β蛋白25～35处理的PC12细胞表达增高,50μmol/L奥氮平预处理能抑制其表达升高。结论:①淀粉样β蛋白25～35能够诱发与细胞凋亡密切相关的Bax、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3在培养的PC12细胞中高表达。②奥氮平具有降低其表达,提高PC12细胞存活的保护作用。     

三七总皂甙对大鼠海马神经细胞凋亡的影响

目的：以原代培养的大鼠海马神经细胞缺氧／缺糖再给氧为模型，观察三七总皂甙对神经细胞凋亡的抑制作用。方法：流式细胞术检测凋亡细胞百分率，激光共聚焦扫描显微镜检测细胞内Ca^2+浓度，荧光显微镜观察细胞形态学变化和坏死细胞百分率，同时，测定细胞LDH的释放。结果：神经细胞缺氧／缺糖5h后再给氧3h时，细胞凋亡百分率明显增高，为19．06％(P&;lt;0．01)，细胞坏死百分率为6．83％(P&;lt;0．01)，细胞内Ca^2+浓度为169．32nmol／L Ca^2+浓度(P&;lt;0．01)，LDH的释放率为27．63％(P&;lt;0．01)；神经细胞缺氧／缺糖5h后再给氧24h时．细胞凋亡百分率为49．85％(P&;lt;0．01)，细胞坏死百分率为11．49％(P&;lt;0．01)，细胞内Ca^2+浓度为298．11nmol／L(P&;lt;0．01)，LDH的释放率为60．35％(P&;lt;0．01)。三七总皂甙(25，50mg／L)能降低神经细胞凋亡及坏死的百分率，降低细胞内Ca^2+浓度，减少LDH的释放，三七总皂甙的作用随剂量增加而作用增加。结论：三七总皂甙对缺血再灌注损伤后海马神经元的凋亡过程具有抑制作用，这种作用可能与其能降低细胞内Ca^2+浓度有关。     

雌二醇对海马神经元和隔区胆碱能神经元损伤的保护作用比较

目的：研究雌二醇在体外原代培养条件下对淀粉样β25-35肽(amvloid-β25-35，Aβ25-35)诱导的海马神经元和胆碱能神经元损伤的保护作用，探讨其可能的机制。方法：实验于2002-03／2003-03在中山大学医学院解剖教研室完成。采用SD大鼠海马神经元原代培养，用终浓度为10βmol／L的AB25-35诱导体外海马和隔胆碱能神经元损伤，MTT法比色微量分析较雌二醇对这两种神经元的存活率的影响，并检测超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)活性的变化。将两种培养细胞分为3组，分别为AB处理组、雌二醇组、空白对照组。结果：雌二醇可提高海马和胆碱能神经元存活率(与AB处理组比较，P&;lt;0．05)，经雌激素作用后，两种神经元的存活率分别为103．52%，和85．90%，它对海马神经元的保护作用优于胆碱能神经元(两者存活率比较，P&;lt;0．05)，并可诱导两种神经元Mn-SOD的活性增加(与AB处理组比较，P&;lt;0．05)，分别比AB处理组提高了63．76％和131．38%，对隔胆碱能神经元的诱导作用较强(两者活性比较，P&;lt;0．05)，对CuZn-SOD的活性无明显影响(P&;gt;O．05)。结论：雌二醇对Aβ25-35诱导毒性损伤的海马和隔胆碱能神经元有相似程度的保护作用，其机制可能与提高Mn-SOD活性，促进聚集型的Aβ溶解有关。     

白细胞介素-1对β淀粉样蛋白胞毒及基因表达的调节作用

目的：研究B淀粉样蛋白(β-amyloid protein，Aβ)的神经元毒性作用及白细胞介素1(interleukin-1β，IL-1β)对神经细胞β淀粉样蛋白前体(β-amyloid precursor protein，APP)基因表达以及对Aβ细胞毒性的调节作用。方法：以PC12细胞作为体外神经细胞模型，应用四唑盐(MTY)法检测Aβ，IL-1β对细胞活性的影响，应用RT-PCR法半定量分析IL-1β对APP基因表达的影响。结果：Aβ具有直接的神经细胞毒作用，与浓度以及聚集状态相关，以20μmol／L孵育3h毒性最大(q=5．62，P&;lt;0．01)，而孵育7d者几乎没有毒性。IL-1β(浓度为20μg／L)与Aβ25-35(浓度为20μmol／L孵育3h)共同作用于细胞时，Aβ25—35的细胞毒作用被扩大，细胞活性从36.7％降到了13．2％(q=3．8，P&;lt;0．05)；当IL-1β(浓度为20μg／L)与Aβ25-35(20μmol／L孵育7d)共同作用时，细胞活性迅速下降，从93％降到了7．7％(q=4．83，P&;lt;0．01)。IL-1β可以刺激PC12细胞APP751、770mRNA表达增加，与对照组相比，20μg／L组APP mRNA表达增加约为2倍(q=4．76，P&;lt;0．01)，此后增加不明显；APP mRNA的表达在IL-1β(20μg／L)刺激6h达高峰，约为对照组的2倍(q=4．92，P&;lt;0.01)。结论：Aβ具有直接细胞毒作用，与浓度以及聚集状态相关。IL-1β可以扩大Aβ的细胞毒性作用。IL-1β可以刺激PC12细胞APP mRNA表达增加，具有剂量及时间依赖性。     

胰岛素对谷氨酸诱导PC12细胞损伤的保护作用及其机制

背景：目前越来越多的研究表明谷氨酸可以诱导细胞凋亡，对胰岛素的间接和直接的神经保护作用也有较多的研究，然而对谷氨酸损伤模型的胰岛素保护作用及机制尚缺乏有意义的探讨。目的：明确胰岛素对于谷氨酸诱导PC12细胞损伤模型有无保护作用及初步探讨保护作用的分子机制。设计：以细胞为研究对象，前瞻性对照实验研究。单位：浙江医院神经科和中山大学医院神经科。材料：实验于2002—03／2003—03在中山附属第三医院实验室及中山大学实验动物中心完成。PC12细胞来自中山大学医学院实验动物中心。方法：用0．5mmol／L谷氨酸作用PC12细胞20min制成谷氨酸损伤模型，用不同浓度胰岛素保护，24h后分别进行MTT实验、Hoechst33258荧光染色、DNA琼脂糖凝胶电泳及检测PKB／Akt蛋白表达。主要观察指标：①各组细胞的活力。②DNA的提取和琼脂糖凝胶电泳结果。③各实验组PKB／Akt蛋白表达结果。结果：胰岛素50mu／L，100mu／L，200mu／L，400mU／L的A值分别是0．214&;#177;0．062，0．234&;#177;0．067，0．260&;#177;0．076，0．265&;#177;0．069，而单纯谷氨酸组的A值为0．201&;#177;0．079，进行统计学分析表明50mU／L，100mU／L胰岛素组与谷氨酸组比较无差异(P&;gt;0．05)，200mU／L，400mU／L胰岛素组与单纯谷氨酸组比较统计学有差异(t=-2398，-2．716，P&;lt;0．05)；400mU／L胰岛素组DNA电泳中未见“DNA Ladder”；发现胰岛素可以促进PKB／Akt蛋白表达。结论：胰岛素对谷氨酸诱导的PC12细胞损伤模型有保护作用，且胰岛素有抗凋亡作用，此作用可能与胰岛素促进PKB／Akt蛋白表达有关。     

碱性纤维母细胞生长因子对AD细胞模型PKCγ活性影响

目的 研究碱性纤维母细胞生长因子(bFGF)对β-淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞存活率、蛋白激酶Cγ(PKCγ)蛋白表达的影响.方法 经体外培养的PC12细胞分正常对照组(常规培养液)、Aβ损伤组(加入培养液及老化Aβ25-35)、bFGF组(加入培养液、bFGF及老化Aβ25-35).MTT法检测不同处理组PC12细胞存活率,Western Blot 免疫印迹法分析PKCγ蛋白表达变化.结果 Aβ损伤组PC12细胞存活率低于正常对照组(P ＜0.05),bFGF组细胞存活率高于Aβ损伤组(P＜0.05).Western Blot 结果 显示,Aβ损伤组PKCγ(0.68±0.07)较对照组PKCγ(0.8±0.08)表达显著下降;Aβ损伤组在加入不同浓度的bFGF后PKCγ的值分别为:1.04±0.10,1.20±0.12,1.39±0.03,1.69±0.16,较 Aβ损伤组 PKCγ(0.65±0.06)蛋白表达显著增强,并与 bFGF浓度呈正相关.结论 bFGF对Aβ诱导的PC12细胞损伤具有一定保护作用,可能是通过增强PC12细胞PKCγ蛋白表达而实现.