改构型和野生型酸性成纤维细胞生长因子对肠缺血-再灌注损伤的保护作用及剂量-效应关系研究

目的评价改构型和野生型酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)对肠缺血-再灌注损伤后肠道保护作用的机制及剂量-效应关系。方法以夹闭大鼠肠系膜上动脉(SMA)制备肠缺血-再灌注损伤模型，并将动物随机分为假手术组、生理盐水对照组、不同剂量(2、4和8μg)改构型aFGF治疗组和4μg野生型aFGF治疗组。除假手术组外，其余各组动物均于缺血45min后再灌注2、6、12和24h活杀，取血及小肠组织标本，检测血浆中D-乳酸含量及组织中增殖细胞核抗原(PCNA)的表达特性，并检测肝、肾功能指标，观察不同剂量aFGF对肠缺血-再灌注损伤的影响。结果血浆D-乳酸变化及病理组织学观察显示，再灌注后12h肠屏障功能及肝、肾组织损伤最严重，而改构型aFGF 4μg治疗组在伤后24h损伤较生理盐水对照组和野生型aFGF治疗组有所减轻。PCNA的表达趋势与D-乳酸类似。结论改构型aFGF对肠缺血-再灌注损伤具有一定保护与促修复作用，其抗损伤修复作用呈剂量依赖性。     

酸性成纤维细胞生长因子对大鼠肠缺血再灌注损伤影响的研究

目的　观察外源性酸性成纤维细胞生长因子 ( a FGF)对肠缺血再灌注损伤肠道保护效应及与组织损伤修复的关系。方法　采用肠系膜上动脉 ( SMA)夹闭 4 5 m in后松夹方法制备肠缺血再灌注损伤动物模型。将 Wistar大鼠随机分为假手术组、单纯肠缺血再灌注组及 a FGF治疗组。假手术组分离 SMA但不夹闭 ,4 5 min后取血并活杀动物 ;其余两组分别松夹形成血流再灌注 ,缺血再灌注组从尾静脉注射 0 .15 ml生理盐水 ,a FGF治疗组则从尾静脉给予 0 .15 m l( 4 g) a FGF。于再灌注后 0 .5、1、2、6、12和 2 4 h取血检测血浆D乳酸水平 ;活杀动物后取小肠组织行苏木素伊红 ( HE)染色 ,光镜下观察组织病理形态学改变 ;观察两组大鼠肠缺血再灌注损伤后不同时间点的存活率。结果　与肠缺血再灌注组各时间点比较 ,a FGF治疗组动物存活率均高于对照组 ,以 2 4 h最为显著 ,有统计学意义 ( P<0 .0 5 ) ;血浆 D 乳酸水平于再灌注后 1h则明显低于缺血再灌注组 ,至 2 4 h仍呈降低趋势 ( P均 <0 .0 5 ) ;小肠黏膜病理形态学改变较缺血再灌注组轻。结论　外源性 a FGF对肠缺血再灌注损伤有保护作用 ,其机制可能与体内诱导细胞促分裂效应与非促分裂激素样活性有关     

改构型和野生型酸性成纤维细胞生长因子对大鼠皮肤生长促进作用的比较

目的　比较改构型和野生型酸性成纤维细胞生长因子 ( a FGF)促进大鼠皮肤生长的作用。方法　将 2 mm× 2 mm的新生大鼠皮肤分别接种在含有 1、10和 10 0 μg/ L 3种不同浓度的改构型 a FGF和野生型 a FGF与体积分数为 10 %小牛血清的 Dulbecco改良 Eagle培养基中培养 4 d,然后测定生长后皮肤的面积。结果　空白对照组的皮肤面积为 ( 2 .96± 1.12 ) mm2 ,浓度为 1、10和 10 0 μg/ L 改构型 a FGF组的皮肤面积分别是空白对照组的 1.4、1.5和 1.3倍 ,而 3种不同浓度的野生型 a FGF组的皮肤面积分别是空白对照组的 1.5、3.2和 1.6倍。与其他组相比 ,只有浓度为 10μg/ L野生型 a FGF组的皮肤面积显著升高 ( P<0 .0 5 )。结论　改构型 a FGF对皮肤生长无显著刺激 ,其作用效果明显低于野生型 a FGF。     

miRNA－92a在缺血再灌注肾损伤中的表达变化

目的 观察miRNA-92a在缺血再灌注(I/R)损伤4h、24h后小鼠肾组织的表达变化,探讨肾脏缺血损伤后血管生成的可能机制.方法 采用双侧夹闭小鼠肾蒂的方法 制备急性缺血再灌注肾损伤模型,术后灌注24h后收集血清和肾脏标本,分别检测肾功能及观察肾组织病理学改变.实时定量逆转录聚合酶链反应(real-time RT-PCR)的方法 检测小鼠I/R损伤4h和24h组中miRNA-92a的表达水平.结果 (1)采用血清肌酐(Scr)和尿素氮(UN)评估肾功能,肾脏I/R 24h组与假手术组(sham)比较有显著性差异(P<0.05);HE染色观察肾组织病理改变明显,肾缺血再灌注模型成功.(2)而I/R4h和24h后,miRNA-92a的表达上调,其上调倍数分别为3.23±0.74,1.53±0.33 (P<0.05).结论 小鼠I/R损伤中miRNA-92a表达显著上调,miRNA-92a可能参与缺血再灌注肾组织损伤的血管再生的调控过程.     

改构型酸性成纤维细胞生长因子对肠缺血-再灌注的保护作用

目的 观察改构型酸性成纤维细胞生长因子(rhaFGF)对大鼠肠缺血-再灌注所致肠道损伤的 保护作用。方法 用夹闭肠系膜上动脉(SMA)造成肠缺血45 min、松夹形成缺血-再灌注的方法制备肠缺 血-再灌注损伤模型。生理盐水对照组和rhaFGF治疗组于再灌注即刻分别经静脉注射生理盐水0.1 ml和 rhaFGF 4 μg。缺血一再灌注后2、6、12和24 h取血及小肠组织,分别测定D一乳酸含量,观察小肠组织学改变; 用末端脱氧核糖转移酶介导的生物素化脱氧尿嘧啶缺刻标记技术(TUNEL)检测肠道细胞凋亡率,并与假手 术组比较。结果 缺血-再灌注6 h生理盐水对照组D-乳酸含量较假手术组明显升高,达到(0.34± 0.09)mg／L.rhaFGF治疗组为(0.23±0.07)mg／L(P均<0.05)。组织学检查显示,缺血-再灌注2~24 h生 理盐水对照组肠道损伤严重,rhaFGF治疗组肠道损伤有所减轻。细胞凋亡检测显示,假手术组肠道细胞凋亡 率很低;随着缺血-再灌注损伤时间的延长,生理盐水对照组和rhaFGF治疗组细胞凋亡率均明显升高,于缺 血-再灌注12 h达峰值[生理盐水对照组细胞凋亡率高达(62.8±1.7)％,而rhaFGF治疗组为(42.5± 2.6)％]后均呈下降趋势,两者各时间点均有统计学差异(P均<0.05)。结论rhaFGF能降低大鼠肠缺血-再 灌注所致的血浆D-乳酸含量和肠道细胞凋亡率,提     

米贝拉地尔对大鼠肠缺血再灌注损伤的影响

[目的]观察米贝拉地尔(Mibefradit)对大鼠肠缺血再灌注后肠组织损伤的影响.[方法]复制SD大鼠肠缺血再灌注损伤模型.实验分为3组(n=10):假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)、Mibefradil干预组(M组).比较各组大鼠肠黏膜丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)的活性变化;用Chiu氏评分法观察肠黏膜的损伤情况.[结果]与S、M组相比:I/R组MDA含量明显增高(P＜0.01和P＜0.05),SOD及CAT活性明显降低(P＜0.01和P＜ 0.05);与S组相比,I/R组和M组小肠损伤评分明显升高(P＜0.01和P＜0.05);但M组小肠损伤评分明显好于I/R组(P＜0.05).[结论]米贝拉地尔对大鼠肠缺血再灌注后的肠道有保护作用,该保护作用可能与减少活性氧物质及改善肠道微循环有关.     

表皮生长因子对大鼠肠缺血-再灌注所致肠黏膜通透性改变的影响

目的观察大鼠肠缺血再灌注后外源性表皮生长因子(EGF)对肠黏膜通透性和肠、肝、肾功能改变的影响 .方法80只3级雄性Wistar大鼠,随机分为假手术(C)组、肠缺血(I)组、肠缺血再灌注(IR)组和EGF治疗组.IR组和EGF治疗组均用微血管夹夹闭肠系膜上动脉根部45分钟,之后放松血管夹形成再灌注.在再灌注即刻经颈静脉分别注入EGF 100 μg/kg或生理盐水,分别于伤后2、6、12和24小时将动物活杀.C组仅分离肠系膜上动脉根部而不夹闭,I组在缺血45分钟后即刻活杀.取血检测肝、肾功能, 血浆二胺氧化酶(DAO)活性和D乳酸浓度;取小肠、肝和肾组织进行形态学观察 .结果①与C组相比,各组动物血浆丙氨酸转氨酶(ALT) 和尿素氮(BUN)均明显升高,但EGF治疗组升高的幅度显著低于IR组(P <0.05).②EGF治疗组的血浆D乳酸浓度和DAO活性在伤后升高的幅度均明显低于IR组(P<0.01).③EGF治疗组肝、肾和小肠黏膜充血、水肿、炎细胞浸润及局灶性坏死的程度较IR组显著减轻 .结论伤后给予外源性EGF显著减轻了缺血再灌注所致肠、肝、肾功能的损伤,其主要作用环节是促进了EGF与受体的结合及随之发生的信号传导.     

高氧液对缺血再灌注家兔多脏器细胞损伤的保护作用

目的观察高氧液向人体组织细胞直接供氧,改善肌体的缺血缺氧状态,探讨高氧液对缺血再灌注家兔多脏器细胞损伤的保护作用。方法家兔36只,采用失血性休克模型,随机分为3组,检测多脏器组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子(TNF)含量及血浆酸性磷酸酶(ACP)、镁离子(Mg2+)浓度等,小肠组织作电镜观察。结果再灌注90min后,高氧液治疗组肝、肾、肺、肠等组织器官中的MDA和TNF水平低于对照组,SOD水平则高于对照组,血ACP、Mg2+浓度高氧液治疗组低于对照组;电镜观察,肠黏膜上皮细胞损伤,高氧液组不明显。结论高氧液对家兔缺血再灌注多脏器细胞的损伤有保护作用。     

乌司他丁对大鼠缺血-再灌注肝脏Toll样受体表达的影响

目的 观察乌司他丁对大鼠肝脏缺血-再灌注损伤以及缺血肝叶Toll样受体2(TLR2)表达的影响.方法 SD大鼠36只,随机分为假手术组、缺血-再灌注组(I/R组)及乌司他丁组.于再灌注120 min后采集标本,测定血清ALT、AST,取缺血-再灌注肝叶组织,测定组织超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)活性,实时定量PCR法测定TLR2表达水平.结果 乌司他丁组大鼠血清ALT、AST和肝组织MDA水平低于I/R组(P ＜0.05);肝组织SOD水平高于I/R组(P＜0.05);再灌注后TLR2表达水平明显升高,而乌司他丁组TLR2表达低于I/R组(P＜0.05).结论 乌司他丁可以对部分肝叶缺血引起的再灌注损伤有保护作用,其机制可能为抑制TLR2的表达.     

高氧液对缺血再灌注家兔多脏器细胞损伤的保护作用

目的 观察高氧液向人体组织细胞直接供氧，改善肌体的缺血缺氧状态，探讨高氧液对缺血再灌注家兔多脏器细胞损伤的保护作用。方法 家兔36只，采用失血性休克模型，随机分为3组，检测多脏器组织中超氧化物歧化醇(SOD)、丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子(TNF)含量及血浆酸性磷酸酶(ACP)、镁离子(Mg^2 )浓度等，小肠组织作电镜观察。结果 再灌注90min后，高氧液治疗组肝、肾、肺、肠等组织器官中的MDA和TNF水平低于对照组，SOD水平则高于对照组，血ACP、Mg^2 浓度高氧液治疗组低于对照组；电镜观察，肠黏膜上皮细胞损伤，高氧液组不明显。结论 高氧液对家兔缺血再灌注多脏器细胞的损伤有保护作用。     

酸性成纤维细胞生长因子对大鼠缺血/再灌注损伤肠上皮细胞丝裂素活化蛋白激酶的影响

目的 观察外源性酸性成纤维细胞生长因子（aFGF）对大鼠缺血／再灌注（I／R）损伤后肠上皮细胞丝裂素活化蛋白激酶（MAPK）活性的影响，并探讨其与肠上皮细胞增殖能力变化的关系。方法 采用大鼠肠系膜上动脉夹闭法制备缺血45min后再灌注动物模型。132只Wistar大鼠随机分为假手术组、I／R组、aFGF处理组（再灌注即刻颈静脉注射aFGF 4μg）及细胞外信号调节蛋白激酶（ERK1／2）阻断剂PD98059预处理组（缺血前尾静脉注射PD98059 7．5μg，再灌注即刻静脉注射aFGF 4μg）。检测缺血前，I／R15、30min及1、2、6、12和24h时肠上皮细胞增殖能力和MAPK活性。结果 aFGF处理后肠上皮细胞增殖明显增加，同时MAPK活性显著增高。用p44／p42MAPK（ERK1／2）阻断剂PD98059可抑制ERK1／2的活性，使肠上皮细胞增殖减少。结论 aFGF可促进I／R损伤后肠上皮细胞增殖，并可能与其激活肠上皮MAPK有关。     

Protective effects of modified recombinant human acidic fibroblast growth factor on small intestine after ischemia/reperfusion injury in rats.]

OBJECTIVE: To explore the protective effect of modified recombinant human acidic fibroblast growth factor (rhaFGF) on small intestinal after ischemia/reperfusion (I/R) injury in rats. METHODS: The clamp on the superior mesenteric artery (SMA) was removed after clamping it for 45 minutes to replicate I/R injury of the intestine in the rat. Rats were then divided randomly into sham operation group, normal saline treatment group and rhaFGF treatment group, in which the rats of the normal saline treatment group were injected 0.1 ml of normal saline and that of the rhaFGF group were given 4 microg of rhaFGF immediately after reperfusion. The content of D-lactate in the plasma was determined and the changes in intestinal pathology were observed. At the same time, the rates of apoptosis of intestinal epithelial cells were assessed 2, 6, 12 and 24 hours after I/R, and compared to the sham operation group. RESULTS: The plasma content of D-lactate in the saline treatment group at 6 hours after I/R reached (0.34+/-0.09) mg/L and was significantly higher than that in the rhaFGF treatment group((0.23+/-0.07)mg/L, P<0.05). It was shown histologically that the intestinal structures were damaged more seriously in saline treatment group than in rhaFGF group. The apoptosis rates in the saline treatment group and rhaFGF group were elevated significantly, peaking at 12 hours after I/R injury((62.8+/-1.7)% in saline group and (42.5+/-2.6)% in rhaFGF treatment group), then the rate began to fall. There was statistically significant differone between the two groups at 12 hours after I/R injury. CONCLUSION: rhaFGF can reduce content of D-lactate in the plasma and rate of apoptosis of epithelial cells in the intestine after I/R injury, thus it seems to afford a protective effect on the small intestine after I/R injury in rats.     

细胞外热休克蛋白72作为Toll样受体内源性配体在大鼠缺血再灌注肝损伤中的表达及作用

目的探讨在大鼠缺血再灌注（I,R）肝损伤中,细胞外热休克蛋白72（Hsfr72）作为Toll样受体（TLR）内源性配体的表达及作用。方法将120只I／R组SD大鼠分为4组,每组30只,均予以I／R处理,其中A组于I／R处理前给予抗HSP72,B组给予重组HSP72,D组给予缺血预处理。同时假手术组（P组,30只）以及非手术组（N组,10只）为对照。之后于不同时间点采集标本,检测血浆丙氨酸转氨酶（AIJT）、肿瘤坏死因子仪（TNF—a）、HSP72及肝组织HSP72mRNA及其蛋白。结果P组术后血浆TNF．叭HSP72水平较术前均显著升高（P均〈0．01）。B组处理后相较I／R组其他分组,血浆ALT、TNF．d、HSP72均显著升高护均〈0．01）。P组及I／R各组的肝组织HSP72mRNA较术前均显著升高,且I／R各组升高较P组更为明显（P〈0．01）。结论大鼠肝组织I／R后释放的HSP72可能启动了TLR信号通路,从而导致肝细胞的炎性损伤。     

瑞芬太尼预处理对鼠肝缺血再灌注损伤时肾细胞凋亡及Bcl-2、caspase-3的影响

[目的]探讨瑞芬太尼预处理对大鼠肝脏缺血再灌注(IR)时远隔脏器肾脏细胞凋亡及 Bcl-2、半胱天冬酶家族3(caspase-3)的影响.[方法]健康雄性 SD 大鼠72只,随机分为假手术组(S组)、缺血再灌注组(IR组)、瑞芬太尼组(RPC 组),每组24只.采用Pringle''s maneuver法建立肝IR模型,检测各组缺血30 min(T1)、再灌注时间1 h(T2)、3 h(T3)、6 h(T4)时血清谷丙转氨酶(ALT)、肌酐(Cr)水平,再灌6 h取肾组织光镜观察肾脏病理损伤,同时TUNEL法检测肾脏细胞的凋亡,Western blot检测各组肾组织中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和caspase-3蛋白的表达水平.[结果]IR组、RPC组从缺血30 min开始各时点血清ALT、Cr依次升高,均显著高于S组,但RPC组又明显低于IR组,其差异均有统计学意义(P<0.05).S组大鼠肾组织结构正常;IR组可见肾脏组织不同程度的病理损伤:肾小管上皮细胞肿胀、结构欠清、核浓缩、肾小管内有上皮坏死脱落细胞的形成,间质炎性细胞浸润及充血;RPC组损伤明显改善.S组仅有极少量的凋亡阳性细胞,IR组、RPC组凋亡阳性细胞均显著高于S组(P<0.05),且IR组明显高于RPC组,其差异均有统计学意义(P<0.05).与S组比较,肾组织Bcl-2、caspase-3表达水平显著增高(P<0.05);与IR组比较,RPC组Bcl-2水平增高(P<0.05),caspase-3表达量明显下降(P<0.05).[结论]瑞芬太尼对肝IR时肾脏损伤有保护作用,而其保护机制可能与调控肾细胞凋亡和Bcl-2、Caspase-3蛋白的表达有关.     

高渗盐水对缺血/再灌注损伤肝脏血红素加氧酶-1表达的影响

目的 探讨高渗盐水预处理对肝脏缺血／再灌注损伤的保护作用及其机制。方法 25只SD大鼠随机分为假手术组、血红素加氧酶-1（HO-1）抑制剂锌原卟啉（ZnPP）组、缺血／ig灌注组、高渗盐水预处理组及ZnPP干预组，每组5只。建立大鼠局部肝脏缺血／再灌注损伤模型，于缺血／再灌注后6h测定血清丙氨酸转氨酶（ALT）活性、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量、肝组织髓过氧化物酶（MPO）活性及肝组织内皮素1（ET1）含量；采用逆转录-聚合酶链反应（RTPCR）和蛋白质免疫印迹法（Westernblot）检测肝组织HO-1mRNA和蛋白表达；光镜和电镜下观察肝脏病理学改变及肝窦情况。观察使用ZnPP后，高渗盐水预处理对肝脏缺血／再灌注损伤的保护作用。结果 肝脏缺血／再灌注后血清ALT活性、TNF-α含量及肝组织MPO活性、ET-1含量均明显升高（P均d0．01），HO-1mRNA和蛋白表达明显增强。高渗盐水预处理明显增强缺血／再灌注后肝脏HO-1mRNA及蛋白表达，降低血清ALT、TNF-α水平及肝组织MPO活性和ET-1含量，肝脏微循环明显改善；使用ZnPP以后，高渗盐水预处理的保护作用消失。结论 高渗盐水预处理通过增强HO-1表达，对肝脏缺血／再灌注损伤产生保护作用。     

膜攻击复合物C5b-9在大鼠肝脏缺血再灌注损伤中的表达

目的探讨膜攻击复合物C5b-9在大鼠肝脏缺血再灌注损伤中的表达。方法健康雄性SD大鼠60只,180²00 g,随机分为5组(n=12):假手术组(S组)、全肝再灌组1 h组(I/R1 h组)、3 h组(I/R 3 h组)、6 h组(I/R 6 h组)和24 h组(I/R 24 h组)。制备大鼠全肝缺血再灌注模型,再灌注1、3、6、24 h末,取血测定谷丙转氨酶(ALT)和总胆红素(TBIL)浓度。取肝脏组织,检测C5b-9 mRNA和C5b-9蛋白的表达。结果与对照组比较,I/R各组大鼠ALT和TBIL水平均明显升高,I/R 3 h组达到高峰(P<0.05);I/R各组C5b-9的mRNA表达和C5b-9蛋白含量均有显著升高,且随着缺血再灌注时间的延长而逐渐升高,其中I/R 24 h组最高(P<0.05)。结论补体C5b-9参与肝缺血再灌注的损伤,尤其是在再灌注24 h时达到高峰。     

Effect of ischaemic preconditioning on hepatic oxygenation, microcirculation and function in a rat model of moderate hepatic steatosis

IPC (ischaemic preconditioning) may protect the steatotic liver, which is particularly susceptible to I/R (ischaemia/reperfusion) injury. Hepatic steatosis was induced in Sprague-Dawley rats with a high-cholesterol (2%) diet for 12 weeks after which rats were subjected to I/R (ischaemia/reperfusion; 45 min of lobar ischaemia followed by 2 h of reperfusion). Rats were divided into three study groups (n=6 each) receiving: (i) sham laparotomy alone, (ii) I/R, and (iii) IPC (5 min of ischaemia, followed by 10 min of reperfusion) before I/R. Hepatic extra- and intra-cellular oxygenation and HM (hepatic microcirculation) were measured with near-infrared spectroscopy and laser Doppler flowmetry respectively. Plasma liver enzymes and hepatic tissue ATP were measured as markers of liver injury. Histology showed moderate-grade steatosis in the livers. At the end of 2 h of reperfusion, I/R significantly decreased extra- and intra-cellular oxygenation concomitant with a failure of recovery of HM (21.1+/-14.4% of baseline; P<0.001 compared with sham animals). IPC increased intracellular oxygenation (redox state of the copper centre of cytochrome oxidase; P<0.05 compared with rats receiving I/R alone) and flow in HM (70.9+/-17.1% of baseline; P<0.001 compared with rats receiving I/R alone). Hepatocellular injury was significantly reduced with IPC compared with I/R injury alone (alanine aminotransferase, 474.8+/-122.3 compared with 5436.3+/-984.7 units/l respectively; P<0.01; aspartate aminotransferase, 630.8+/-76.9 compared with 3166.3+/-379.6 units/l respectively; P<0.01]. In conclusion, IPC has a hepatoprotective effect against I/R injury in livers with moderate steatosis. These data may have important clinical implications in liver surgery and transplantation.     

Effects of propofol on cardiac function and miR-494 expression in rats with hepatic ischemia/reperfusion injury

ObjectiveThis study aimed to investigate the effects of propofol on cardiac function and miR-494 expression in rats with hepatic ischemia/reperfusion (I/R) injury.MethodsForty healthy adult male Sprague-Dawley rats were allocated to the sham operation group and three hepatic I/R injury groups. The I/R injury groups included I/R injury only (I/R group), treatment with propofol (propofol group), and treatment with propofol + overexpressed miR-494 (propofol+miR-494 group). Apoptosis of myocardial cells and changes in cardiac function indices, including left ventricular end-diastolic diameter, left ventricular end-systolic diameter, and left ventricular posterior wall thickness, as well as changes in miR-494, were monitored.ResultsThe apoptotic rate of myocardial cells in the I/R group was higher, cardiac function was deteriorated, and miR-494 levels were elevated compared with the sham group. The apoptotic rate was lower, cardiac function was improved, and miR-494 levels were suppressed in the propofol group compared with the I/R group. The apoptotic rate was higher, cardiac function was deteriorated, and miR-494 levels were elevated in the propofol+miR-494 group compared with the propofol group.ConclusionPropofol plays a vital role in preventing myocardial cell apoptosis and improvement of cardiac function by suppressing miR-494 in a hepatic I/R injury rat model.