静脉应用骨髓基质细胞改善脑梗死后神经功能

目的:探索应用骨髓基质细胞治疗缺血性脑梗死的可行性和骨髓基质细胞在修复中枢神经损伤方面的作用。方法:从健康人肋骨取原代骨髓基质细胞后扩增。线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血模型(n=56),2h后再灌注。24h后治疗组(n=28)尾静脉注射3×106骨髓基质细胞,对照组(n=28)和正常组(n=16)尾静脉注射1mL生理盐水。采用神经损伤评分(NSS)检测大鼠神经系统功能,ELISA检测脑源性神经生长因子(BDNF)、神经生长因子(NGF),流式细胞仪检测细胞凋亡,免疫组化方法检测脑内骨髓基质细胞或骨髓基质细胞来源的细胞。结果:在模型制作后7,14,21,28d,治疗组的NSS较对照组明显低(t=9.9～2.9,P<0.05),治疗组的BDNF和NGF较对照组明显高(F=708.9,846.2,P<0.05),治疗组的凋亡和坏死细胞占细胞总数的(13.6±7.8)%,(11.2±4.5)%,较对照组犤(22.3±7.8)%,(16.8±5.6)%犦明显减少(F=125.9,95.7,P<0.05)。在缺血侧半球可以发现骨髓基质细胞,并且一部分骨髓基质细胞表达了神经细胞表面标志物。结论:骨髓基质细胞移植后缺血脑组织中生长因子的增加和细胞替代对神经功能的恢复起到了重要作用。     

骨髓基质细胞移植对大鼠局灶性脑损伤VEGF表达的影响

目的观察骨髓基质细胞(BMSCs)移植对局灶性脑损伤大鼠损伤局部脑组织血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达的影响。方法制备大鼠局灶性脑损伤动物模型,进行BMSCs移植,通过免疫组织化学、荧光定量PCR、ELISA等方法观察移植局部脑组织VEGF以及VEGF mRNA的变化。结果BMSCs移植后,局部VEGF染色阳性细胞数增加;VEGF mRNA含量增高。结论BMSCs移植可促进内源性VEGF的表达,提高损伤局部VEGF的含量。     

评估血管内皮细胞生长因子及其受体在大鼠大脑中动脉短暂闭塞再灌注后对缺血脑组织的保护作用

目的研究血管内皮细胞生长因子(VEGF)及其受体Flt-1在大鼠短暂大脑中动脉闭塞(MCAO)再灌注后不同时点表达的变化,探讨VEGF对缺血脑组织的保护作用。方法采用栓线法MCAO动物模型,通过免疫组化方法观察VEGF及Flt-1的表达情况。结果VEGF及FIt-1免疫阳性细胞主要在神经元、神经胶质细胞及内皮细胞中表达。结论这些发现表明短暂MCAO后VEGF及Flt-1的表达上调,提示可能VEGF及Flt-1表达的增加对促进缺血周边区血供的恢复有重要作用。     

骨髓基质细胞移植缺血性脑梗死大鼠后神经营养因子的表达

背景:骨髓基质细胞在适宜条件下可分化为神经元和星形胶质细胞,分泌可溶性分子促进神经元存活。目的:观察骨髓基质细胞移植后缺血性脑梗死大鼠脑组织神经营养因子表达情况及其对神经功能的影响。方法:改良的Longa栓线法制作大鼠大脑中动脉缺血模型,1h后再灌注,24h后治疗组尾静脉注射3×106骨髓基质细胞,盐水对照组尾静脉注射1mL生理盐水,空白对照组不进行注射。结果与结论:在梗死后第7,14天治疗组的神经损伤评分明显低于对照组(P<0.05);治疗组神经生长因子和脑源性神经营养因子表达在各时间点均高于对照组(P<0.05)。结果显示静脉移植骨髓基质细胞可改善缺血性脑梗死大鼠神经功能,移植骨髓基质细胞后缺血脑组织中神经生长因子及脑源性神经营养因子表达促进了神经功能的恢复。     

脑室移植骨髓基质细胞对脑缺血损伤后神经功能恢复的影响

目的:采用脑室系统注入体外培养的骨髓基质细胞,观察其对神经功能损伤修复的影响及其在脑内的存活、迁移、分化情况。方法:实验于2004-03/12在中国医科大学神经内科实验室完成。①将28只Wistar大鼠随机分为假手术组(n=6),模型组(n=8),梗死半球移植组(n=7),健侧半球移植组(n=7)。②除假手术组外,其他3组大鼠采取longa法制备大脑中动脉梗死模型,梗死后次日将培养的骨髓基质细胞悬液(10μL,约1×105个细胞)注入梗死半球移植组和健侧半球移植组大鼠侧脑室,模型组注入等量的磷酸盐缓冲液。③通过神经功能评分观察大鼠脑神经功能恢复情况,采用免疫组织化学方法观察移植入脑的骨髓基质细胞的存活、迁移及分化情况。结果:28只大鼠全部进入结果分析。①神经功能缺损评价:假手术组动物无神经功能缺损。移植前各组梗死后大鼠神经功能损害评分差异无显著性(P>0.05),移植2周后梗死大鼠神经功能均有不同程度恢复,但梗死半球移植组、健侧半球移植组评分明显低于模型组(6.71±0.49,6.86±0.38,8.63±0.52,P<0.05)。②大鼠脑病理改变:苏木精-伊红染色显示大脑中动脉梗死大鼠的缺血区脑组织稀疏,细胞数量明显减少且间隙增大。假手术组则无此表现,表明大鼠脑梗死模型制作成功。③脑组织切片免疫组织化学染色结果:可见来源于骨髓基质细胞的细胞(5-溴脱氧尿嘧啶核苷阳性细胞经免疫组织化学染色呈暗棕色)在脑组织内存活,并且聚集于缺血梗死区域。在梗死半球移植组对侧半球脑组织内未发现5-溴脱氧尿嘧啶核苷阳性细胞;在健侧半球移植组仅在移植损伤道周围发现少量5-溴脱氧尿嘧啶核苷阳性细胞。应用免疫双标染色随机选取10个5-溴脱氧尿嘧啶核苷阳性细胞区域计数发现大鼠脑梗死后14d约1.2%的5-溴脱氧尿嘧啶核苷阳性细胞同时表达神经元标志蛋白特异性烯醇化酶,约6%的5-溴脱氧尿嘧啶核苷阳性细胞同时表达神经胶质细胞标志蛋白神经胶质纤维酸性蛋白。结论:经脑室移植的骨髓基质细胞对梗死后大鼠神经功能的恢复有明显促进作用。不同脑脊液途径移植的骨髓基质细胞对神经功能缺损的修复无明显差异。经脑室系统途径移植的骨髓基质细胞可在脑组织内存活,血管下间隙为骨髓基质细胞在脑组织内迁移提供途径。脑损伤是骨髓基质细胞迁移、分化的主要原因。     

银杏叶提取物(EGB)对局灶性脑缺血大鼠脑片HIF-1 VEGF表达及新生血管的影响

目的 探讨银杏叶提取物(EGB)对大鼠局灶性脑缺血/再灌注中脑组织内血管内皮细胞生长因子(VEGF)及血管通透因子(HIF-1)表达的影响.方法 采用Zea Longa线栓法制备大鼠局灶性脑缺血/再灌注模型(即MCAO模型),54只大鼠随机分为三组,即对照组(n=6)、EGB组(n=24)及缺血/再灌注组(n=24),分别在缺血/再灌注4、6、24、72 h取材.应用免疫组化法(SABC法),利用计算机图像分析系统软件,计数脑梗死后不同时间点阳性细胞的数量.检测VEGF及HIF-1蛋白的表达变化情况.结果 对照组:脑组织VEGF和HIF表达均较低;EGB组:VEGF及HIF阳性细胞密度均相对较高;缺血/再灌注组:VEGF在4 h开始升高,24 h达到高峰,72 h下降到接近正常水平,HIF-1在缺血后4 h开始降低,8 h开始升高,24 h达到高峰,72 h下降到接近正常水平.结论 EGB对于缺血性脑损伤有保护作用.     

评估血管内皮细胞生长因子及其受体在大鼠大脑中动脉短暂闭塞再灌注后对缺血脑组织的保护作用

目的：研究血管内皮细胞生长因子（VEGF）及其受体Flt-l在大鼠短暂大脑中动脉闭塞（MCAO）再灌注后不同时点表达的变化，探讨VEGF对缺血脑组织的保护作用。方法：采用栓线法MCAO动物模型，通过免疫组化方法观察VEGF及Flt-l的表达情况。结果：VEGF及FIt-l免疫阳性细胞主要在神经元、神经胶质细胞及内皮细胞中表达。结论：这些发现表明短暂MCAO后VEGF及Flt-l的表达上调，提示可能VEGF及Flt-l表达的增加对促进缺血周边区血供的恢复有重要作用。     

脑室移植骨髓基质细胞对脑缺血损伤后神经功能恢复的影响

目的：采用脑室系统注入体外培养的骨髓基质细胞，观察其对神经功能损伤修复的影响及其在脑内的存活、迁移、分化情况。 方法：实验于2004-03／12在中国医科大学神经内科实验室完成。①将28只Wistar大鼠随机分为假手术组（n=6），模型组（n=8），梗死半球移植组（n=7），健侧半球移植组（n=7）。②除假手术组外，其他3组大鼠采取longa法制备大脑中动脉梗死模型，梗死后次日将培养的骨髓基质细胞悬液（10μL，约1&;#215;10^5个细胞）注入梗死半球移植组和健侧半球移植组大鼠侧脑室，模型组注入等量的磷酸盐缓冲液。③通过神经功能评分观察大鼠脑神经功能恢复情况，采用免疫组织化学方法观察移植入脑的骨髓基质细胞的存活、迁移及分化情况。 结果：28只大鼠全部进入结果分析。①神经功能缺损评价：假手术组动物无神经功能缺损。移植前各组梗死后大鼠神经功能损害评分差异无显著性（P〉0．05），移植2周后梗死大鼠神经功能均有不同程度恢复，但梗死半球移植组、健侧半球移植组评分明显低于模型组（6．7l&;#177;0．49，6．86&;#177;0．38，8．63&;#177;0．52，P〈0．05）。②大鼠脑病理改变：苏木精-伊红染色显示大脑中动脉梗死大鼠的缺血区脑组织稀疏，细胞数量明显减少且间隙增大。假手术组则无此表现，表明大鼠脑梗死模型制作成功。③脑组织切片免疫组织化学染色结果：可见来源于骨髓基质细胞的细胞（5-溴脱氧尿嘧啶核苷阳性细胞经免疫组织化学染色呈暗棕色）在脑组织内存活，并且聚集于缺血梗死区域。在梗死半球移植组对侧半球脑组织内未发现5-溴脱氧尿嘧啶核苷阳性细胞；在健侧半球移植组仅在移植损伤道周围发现少量5-溴脱氧尿嘧啶核苷阳性细胞。应用免疫双标染色随机选取10个5-溴脱氧尿嘧啶核苷阳性细胞区域计数发现大鼠脑梗死后14d约1．2％的5-溴脱氧尿嘧啶核苷阳性细胞同时表达神经元标志蛋白特异性烯醇化酶，约6％的5-溴脱氧尿嘧啶核苷阳性细胞同时表达神经胶质细胞标志蛋白神经胶质纤维酸性蛋白。 结论：经脑室移植的骨髓基质细胞对梗死后大鼠神经功能的恢复有明显促进作用。不同脑脊液途径移植的骨髓基质细胞对神经功能缺损的修复无明显差异。经脑室系统途径移植的骨髓基质细胞可在脑组织内存活，血管下间隙为骨髓基质细胞在脑组织内迁移提供途径。脑损伤是骨髓基质细胞迁移、分化的主要原因。     

静脉注射途径移植骨髓基质细胞的特点

目的:探讨在大鼠脑缺血的情况下经尾静脉注射移植骨髓基质细胞的可行性,为骨髓基质细胞脑移植治疗提供一种简捷、安全、有效的途径。方法:实验于2005-10/2006-08在北华大学医学院实验中心完成。取1～2个月龄SD大鼠双侧股骨和胫骨,体外分离培养大鼠骨髓基质细胞。取体质量为280～320g的SD大鼠25只,采用颈内动脉线栓法制作大脑中动脉梗死模型,造模成功后在25只大鼠中随机盲抓分为2组:骨髓基质细胞移植组(n=15)、对照组(n=10)。骨髓基质细胞移植组经静脉缓慢推入含Hoeschst33342标记的骨髓基质细胞细胞悬液1mL(2.0×107个细胞),对照组用同样方法经尾静脉注入等量不含骨髓基质细胞的DMEM培养液作为对照。分别于移植后1d、7d、14d时间点对两组大鼠进行神经功能损害严重程度评分及大脑组织切片观察比较。结果:25只大鼠均进入结果分析。①各代细胞90%以上表达巢蛋白阳性。②与对照组相比,骨髓基质细胞移植组大鼠运动、神经功能恢复明显[骨髓基质细胞移植组:(6.10±2.96),(3.30±1.83),(2.10±1.20)分;对照组:(7.43±1.51),(6.14±1.35),(4.43±1.40)分,P<0.05]。③骨髓基质细胞移植组大鼠脑组织结构较清晰、完整;对照组大鼠脑组织破坏溶解,组织结构松散,细胞结构不完整,胞浆疏松,染色变浅,间质水肿。结论:通过静脉注射进行骨髓基质细胞移植,方法简便、安全,对神经损伤动物组织重建及神经功能有确切的修复效果。     

静脉应用骨髓基质细胞改善脑梗死后神经功能

目的：探索应用骨髓基质细胞治疗缺血性脑梗死的可行性和骨髓基质细胞在修复中枢神经损伤方面的作用。方法：从健康人肋骨取原代骨髓基质细胞后扩增。线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血模型(n=56)，2h后再灌注。24h后治疗组(n=28)尾静脉注射3&;#215;106骨髓基质细胞，对照组(n=28)和正常组(n=16)尾静脉注射1mL生理盐水。采用神经损伤评分(NSS)检测大鼠神经系统功能，EusA检测脑源性神经生长因子(BDNF)、神经生长因子(NGF)。流式细胞仪检测细胞凋亡，免疫组化方法检测脑内骨髓基质细胞或骨髓基质细胞来源的细胞。结果：在模型制作后7，14，21，28d，治疗组的NSS较对照组明显低(t=9．9—2．9，P&;lt;0．05)，治疗组的BDNF和NGF较对照组明显高(F=708．9，846．2，P&;lt;0．05)，治疗组的凋亡和坏死细胞占细胞总数的(13．6&;#177;7．8)％，(11．2&;#177;4．5)％，较对照组[(22．3&;#177;7．8)％，(16．8&;#177;5．6)％]明显减少(F=125．9，95．7，P&;lt;0．05)。在缺血侧半球可以发现骨髓基质细胞，并且一部分骨髓基质细胞表达了神经细胞表面标志物。结论：骨髓基质细胞移植后缺血脑组织中生长因子的增加和细胞替代对神经功能的恢复起到了重要作用。     

小鼠骨髓内皮细胞系的建立(英文)

对来源于正常小鼠的骨髓内皮细胞经连续传代培养18个月以上。这一培养是在加入经短期培养而获得的内皮细胞条件培养液及GM-CSF,在纤连蛋白覆盖的培养皿上种入低浓度的骨髓基质细胞完成的。在内皮细胞条件培养液和GM-CSF存在的条件下,细胞平均倍增时间为49小时。快速增殖时,细胞先为圆形,以后可变为立方形或梭形。所有培养的细胞与vWF,VCAM-1抗体染色阳性,UEA-1反应阳性,并产生细胞因子。这一骨髓内皮细胞系的建立可用于研究骨髓内皮细胞在造血过程中的作用。     

Isolation and characterization of dermal lymphatic and blood endothelial cells reveal stable and functionally specialized cell lineages

A plexus of lymphatic vessels guides interstitial fluid, passenger leukocytes, and tumor cells toward regional lymph nodes. Microvascular endothelial cells (ECs) of lymph channels (LECs) are difficult to distinguish from those of blood vessels (BECs) because both express a similar set of markers, such as CD31, CD34, podocalyxin, von Willebrand factor (vWF), etc. Analysis of the specific properties of LECs was hampered so far by lack of tools to isolate LECs. Recently, the 38-kD mucoprotein podoplanin was found to be expressed by microvascular LECs but not BECs in vivo. Here we isolated for the first time podoplanin(+) LECs and podoplanin(-) BECs from dermal cell suspensions by multicolor flow cytometry. Both EC types were propagated and stably expressed VE-cadherin, CD31, and vWF. Molecules selectively displayed by LECs in vivo, i.e., podoplanin, the hyaluronate receptor LYVE-1, and the vascular endothelial cell growth factor (VEGF)-C receptor, fms-like tyrosine kinase 4 (Flt-4)/VEGFR-3, were strongly expressed by expanded LECs, but not BECs. Conversely, BECs but not LECs expressed VEGF-C. LECs as well as BECs formed junctional contacts with similar molecular composition and ultrastructural features. Nevertheless, the two EC types assembled in vitro in vascular tubes in a strictly homotypic fashion. This EC specialization extends to the secretion of biologically relevant chemotactic factors: LECs, but not BECs, constitutively secrete the CC chemokine receptor (CCR)7 ligand secondary lymphoid tissue chemokine (SLC)/CCL21 at their basal side, while both subsets, upon activation, release macrophage inflammatory protein (MIP)-3alpha/CCL20 apically. These results demonstrate that LECs and BECs constitute stable and specialized EC lineages equipped with the potential to navigate leukocytes and, perhaps also, tumor cells into and out of the tissues.     

血管内皮生长因子对人骨髓和脐带间充质干细胞中内皮细胞组分的影响

本研究旨在比较人骨髓间充质干细胞(BM-MSC)和脐带间充质干细胞(UC-MSC)中的内皮细胞(EC)比例,并探讨血管内皮生长因子(VEGF)对MSC中EC比例的影响。利用流式细胞术检测EC标志CD34+CD133+和vWF+CD31+双阳性细胞的比例,用瑞氏染色观察经VEGF作用的MSC细胞形态变化,免疫荧光技术观察CD34、CD133、CD31、VWF的表达,最后采用实时荧光定量PCR检测VEGF对EC标志性基因表达的影响。结果表明:BM-MSC和UC-MSC中存在少量EC及内皮祖细胞(EPC),经VEGF 10 ng/ml作用24 h后,MSC的长宽比变大,EC比例上升而EPC比例下降,EC相关标志基因Tie-2和ecNOS等的表达均上调,其中UC-MSC对VEGF的反应更明显。结论:BM-MSC和UC-MSC中存在少量的EC及EPC,VEGF可以提高EC的比例和细胞功能。     

低氧诱导因子过表达对人外周血内皮祖细胞分化影响的体外研究

为了研究低氧诱导因子（hypoxia inducible factor-1alpha,HIF-1α）在体外对人外周血内皮祖细胞（endothelial progenitor cells,EPC）向血管内皮细胞（endothelial cells,EC）分化的影响,用密度梯度离心法分离人外周血EPC,电穿孔技术转染HIF-1α质粒至EPC,计算转染效率,RT-PCR方法测定HIF-1α、HIF-1β及HIF-1α下游靶基因血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）mRNA在质粒转染前后含量变化,免疫细胞化学方法检测在常氧下HIF-1α蛋白在HIF-1α质粒转染前后不同时点蛋白表达情况,细胞膜表面抗原决定簇流式细胞术测定FITC-CD31^＋EPCs/EC在未转染组、pEGFP空质粒或HIF-1α质粒转染组转染3-10天后的组间差异,光镜下观察转染前后细胞形态及分化程度.结果表明：EPC获得后经电穿孔转染,质粒转染效率约20%;RT-PCR示HIF-1α mRNA在常氧中有表达,并在HIF-1α过表达组合量增加（P＜0.05）;其下游靶基因VEGF在HIF-1α过表达组表达上调（P＜0.05）;HIF-1β表达在各组中无明显差异（P＞0.05）.免疫组织化学显示常氧下HIF-1α蛋白无表达,转染HIF-1α质粒12小时后HIF-1α蛋白表达阳性,转染24小时后蛋白表达阴性.流式细胞仪检测显示电穿孔转染HIF-1α质粒使CD31＋细胞的百分比增加（P＜0.05）.细胞形态学观察显示：未转染及pEGFP空质粒转染组细胞在培养6天后呈集落样散在分布,培养14天后贴壁细胞部分呈梭样;穿孔转染的HIF-1α质粒组细胞于培养6天后集落周边分化出梭样贴壁细胞,培养14天后呈梭样,或铺路石样牢固贴壁.结论：HIF-1α质粒能有效地用于基因干扰治疗,有助于EPC向EC分化,为体内研究奠定了基础,也为进一步体内诱导血管新生、治疗缺血性心脏病提供了更广阔的治疗选择.     

脓毒症患者血管内皮功能的细胞标记物检测

目的 探讨脓毒症病程中循环内皮细胞(CEC)和内皮细胞微粒(EMP)数量的变化特点及其与炎症因子的关系.方法 选择脓毒症患者,按确诊当日急性生理学与慢性健康状况评分系统II(APACHE II)评分分为轻度(＜9分)、中度(9～15分)和重度(＞15分)组,各组再按病情转归分为存活组及死亡组.于患者入院后1、2、3、7、14 d采血,共采集127份血标本,用流式细胞仪检测血中CEC和EMP数量,用酶联免疫吸附试验(ELISA)双抗体夹心法测定血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-4和IL-10的含量.结果 ①随着脓毒症病情的加重,EMP、TNF-α及IL-1β均显著增高(P＜0.05或P＜0.01).中度组CEC及IL-10均较轻度组增高,重度组CEC显著低于轻、中度组(P＜0.05或P＜0.01),轻、中、重度组间IL-4及IL-10比较差异均无统计学意义.②死亡组及存活组CEC及EMP均随病情程度加重而升高;其中死亡组EMP及促炎因子均显著高于相同病情存活组(P＜0.05或P＜0.01),而CEC及抗炎因子均显著低于相同病情存活组(P＜0.05或P＜0.01).结论 脓毒症患者随病情加重CEC及EMP水平明显增加,可作为反映病情严重程度的指标,且可用于判断预后.     

Transplantation of healthy but not diabetic outgrowth endothelial cells could rescue ischemic myocardium in diabetic rabbits

Abstract

Objective. There are two types of endothelial progenitor cell (EPC) in circulation, early EPC and outgrowth endothelial cell (OEC). Diabetes impairs the function of EPC, but it is not clear whether transplantation of OECs can rescue ischemic myocardium in diabetes. In this study, we compared the function of diabetic and healthy OECs in vitro. Then we administered diabetic and healthy OECs intramyocardially and compared their contribution to vasculogenesis in diabetic rabbits. Methods. Outgrowth endothelial cells from diabetic and healthy rabbits were isolated and subjected to in vitro proliferation, tube-forming, angiogenic cytokine assays. Exogenous diabetic and healthy OECs were analyzed for therapeutic efficacy in an acute ischemia model of diabetic rabbits. LV function was assessed using echocardiography. The capillary density and fibrosis area were evaluated. MRNA expression of VEGF and bFGF was analyzed using relative realtime quantitive PCR. Results. Proliferation, tube-forming, secretion of VEGF and bFGF of diabetic OECs were significantly reduced compared with healthy OECs. In diabetic rabbits, healthy OECs transplantation could increase capillary density and improve cardiac function, decrease fibrosis area compared with diabetic OEC and the control group. Real time PCR indicated that mRNA expression of VEGF and bFGF were augmented more in the healthy OEC group than those in the control and diabetic OEC groups. Conclusions. These findings suggest that diabetes impairs the function of OECs. Transplantation of healthy OECs may rescue the ischemic myocardium by neovasculogenesis and paracrine effect in diabetic rabbits. However, autologous transplantation of diabetic OEC could not enhance cardiac function.     

脐血来源的两种内皮祖细胞的分离、培养和鉴定

为了建立从人脐血分离培养两种内皮祖细胞的方法和培养体系，从脐血分离单个核细胞，在含有内皮细胞条件培养液的体系中培养得到两种细胞，利用摄取乙酰化低密度脂蛋白（acetylated low-density lipoprotein，DiI-Ac—LDL）和结合欧洲荆豆凝集素（Ulex European Agglutinin 1，UEA—1）进行鉴定，并进一步用免疫细胞化学、RT-PCR、流式细胞术对它们进行内皮细胞相关的表型检测。结果表明，这两种细胞均能摄取DiI-Ac-LDL和结合UEA—1，表达内皮细胞的标志如CD31、CD144和血管假性血友病因子（von Willebrand Factor，vWF），有CD31、酪氨酸激酶受体（kinase tyrosine insert domain receptor，KDR）、CD144和内皮一氧化氮合成酶（endothelial NO synthase。ENOS）的基因转录。但是，它们的增殖能力明显不同，分别称为循环成血管细胞和高增殖潜能内皮祖细胞。流式细胞计数结果显示，这两种细胞在一些表面标志表达方面也存在明显的差异。结论：利用含内皮细胞条件培养液的培养体系，成功地从脐血分离的单个核细胞中培养得到了两种内皮祖细胞。     

间充质干细胞分化的内皮细胞有免疫调控作用

为了探讨间充质干细胞（mesenchymal stem cell，MSC）诱导而来的内皮细胞的免疫调控能力，将人骨髓MSC在体外经VEGF诱导分化为内皮细胞，并用倒置相差显微镜和流式细胞术分别观察和检测细胞的形态和免疫表型，用淋巴细胞转化实验观察其免疫调控能力。结果表明：MSC在向内皮细胞分化的体系中生长迅速，诱导后的细胞经von Willebrand factor（vWF）免疫荧光染色呈阳性，能在Matrigel上形成毛细血管样网状结构。细胞表面标记无明显改变，即CD73、CD105、HLA—ABC仍阳性，CD34、CD80、CD86、HLA—DR、CD31仍为阴性。由MSC诱导分化而来的内皮细胞能抑制T淋巴细胞的增殖，其抑制作用随内皮细胞加入量的增多而增强。结论：由骨髓MSC来源的内皮细胞对T淋巴细胞具有调控作用。     

人脐静脉内皮细胞抑制单核细胞源树突状细胞的产生

本研究旨在探讨人脐静脉内皮细胞(HUVEC)对树突状细胞(DC)发育的影响.首先,利用酶消化法从人脐带分离获得HUVEC,从细胞形态、表型和功能进行鉴定;进一步将获得的HUVEC结合细胞因子配伍与CD14+单核细胞共培养,检测HUVEC对CD14+细胞向DC分化的影响;流式细胞术检测分化细胞的表型,混合淋巴细胞反应检测分化细胞的免疫学功能;采用中和抗体实验和Western blot检测对细胞增殖和分化起重要调控作用的IL-6和VEGF以及ERK和p38MAPK通路的改变.结果表明,从脐静脉分离获得的细胞呈长梭形形态,细胞表型为vWF+ CD31+ CD73+CD45-HLA-DR-CD86-CD34low,Dil-Ac-LDL吸收实验为阳性,且细胞可诱导形成血管样结构,提示分离获得了HUVEC;进一步将HUVEC与CD14+单核细胞共培养,流式细胞仪检测结果表明HUVEC可抑制CD14+单核细胞向DC的分化,诱导获得的细胞CD1a表达显著降低,混合淋巴细胞检测结果显示,与HUVEC共培养获得的DC刺激T细胞增殖作用显著降低,且具有剂量依赖性;中和抗体实验分析其可能的作用机制表明,IL-6和VEGF在CD14+单核细胞向DC分化过程中具有重要调控作用,Western blot检测结果说明其主要通过ERK和p38通路完成调控作用.结论:人内皮细胞参与DC的发育,且起到抑制作用.

Abstract：

This study was aimed to investigate the effect of human umbilical vein endothelial cells(HUVEC)on dendritic cell(DC)development.First,HUVEC were isolated from human umbilical cord by collagenase digestion,and then the morphology,immunophenotypes and functions were identified.Furthermore,the HUVEC were cocultured with CD14+ monocytes under the cytokine condition for detecting the influence of HUVEC on differentiation of CD14+ cells to DC.The phenotype of dendritic cells derived from CD14+ cells was analyzed by flow cytometry,the immunoregulatory function of DC was tested by mixed lymphocyte reaction(MLR).The change of IL-6 and VEGF as well as EPK and p38 signal pathway were analyzed by neutral antibody experiment and Western blot.The results showed that HUVEC isolated from human umbilical cord were characterized by spindle-shaped morphology,homogenous immunophenotypes (vWF+ CD31+ CD73+ CD45-HLA-DR-CD86-CD34(low),Dil-Ac-LDL incorporation ability and forming capillary-like structures.Following stimulation with granulocyte-macrophage colony-stimulating factor(GM-CSF)plus interleukin-4 (IL-4),HUVEC cocultures could inhibit the initial differentiation of CD14+ monocyte to DC.Interestingly,IL-6 and VEGF enhanced the suppression effect of HUVEC on generation of DC via activation of the ERK or p38 mitogen activated protein kinase pathway.It is concluded that HUVEC are involved in DC development and can suppress the differentiation of monocyte to DC.     

血小板第4因子的研究进展

血小板第4因子是一种激活的血小板分泌的趋化因子,与多种细胞的生物功能有关。该因子对造血干细胞、肿瘤细胞及其他细胞有广泛的调节作用,能支持造血干细胞生长,降低细胞的化学敏感性、抑制细胞凋亡,对红系、巨核细胞系均有作用;可通过对内皮细胞周期、成纤维细胞生长因子2及其相应受体的作用抑制内皮细胞生长;还能通过多种机制抑制肿瘤的生长。在该因子的作用过程中,肝素等糖胺聚糖起到了介导、贮存等多种重要作用。本文即对此因子的结构和功能作一简述,介绍其在造血调节和抑制肿瘤生长等方面的研究进展。