法舒地尔对人肺动脉平滑肌细胞增殖抑制作用研究

目的:探讨法舒地尔对血小板源性生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF)诱导的人肺动脉平滑肌细胞(human pulmonary artery smooth muscle cell,HPASMC)增殖的抑制作用及机制。方法:以体外培养的HPASMC为研究对象,PDGF-BB诱导增殖,法舒地尔进行预处理,MTT法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞周期;Western blot检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)和p27kip1蛋白的表达。结果:细胞培养24 h后与空白组比较,PDGF组HPASMC细胞增殖比例,S期细胞比例和PCNA蛋白表达明显增加,p27kip1蛋白表达则明显降低;用法舒地尔预处理后,与PDGF组比较,细胞增殖比例,S期细胞比例和PCNA蛋白表达明显下降,p27kip1蛋白表达则明显增加。结论:法舒地尔可通过上调p27kip1蛋白表达来抑制PDGF诱导的HPASMC增殖和细胞周期进程。     

RhoA/Rho激酶信号通路在慢性疼痛中的作用

正RhoA是一种小分子G蛋白,RhoA的主要效应底物Rho激酶(Rho-associated coiled-coil-forming kinases,ROCK)是一种丝氨酸/苏氨酸激酶,主要在细胞迁移、分化和生存等方面起重要作用[1]。RhoA/ROCK的异常激活可在很多疾病中被观察到,如中枢神经系统疾病、心血管疾病、肿瘤等。目前大量研究表明,RhoA/ROCK通过其介导的细胞信号传导系统在慢性疼痛中也发挥着重要作用。本文通过阐述RhoA/ROCK信号通路在慢性疼痛中的作用机制,为临床治疗疼痛提供新的思路和策略。     

间质性膀胱炎膀胱平滑肌RhoA/Rho激酶表达与胶原分泌的关系

目的 探讨间质性膀胱炎患者膀胱平滑肌组织中RhoA/Rho激酶、I型胶原表达情况及相关性.方法 取临床确诊的间质性膀胱炎患者的膀胱平滑肌组织,盆腔疼痛和尿频、尿急患者症状调查表评分（PUF评分）≤1512例（低症状评分组）;PUF评分〉15分12例（高症状评分组）.并取12例正常膀胱平滑肌组织（对照组）.采用实时荧光定量RT-PCR和ELISA检测3组膀胱平滑肌组织中RhoA和Rho激酶亚型ROCK I mRNA及其蛋白、I型胶原的表达水平.对RhoA mRNA与ROCK I mRNA、RhoA蛋白与ROCK I蛋白、RhoA蛋白及ROCK I蛋白与I型胶原的表达水平行相关性分析.结果 膀胱平滑肌组织中RhoA mRNA和ROCK I mRNA的相对表达水平,高症状评分组分别为（1.00±0.18）分、（0.91±0.26）分;低症状评分组分别为（0.64±0.23）分、（0.57±0.25）分;对照组分别为（0.45±0.20）分、（0.45±0.11）分.RhoA蛋白和ROCK I蛋白的表达水平,高症状评分组分别为（52.25±7.71）ng/L、（46.63±7.97）ng/L;低症状评分组分别为（42.25±3.14）ng/L、（35.90±4.40）ng/L;对照组分别（26.89±3.08）ng/L、（24.68±3.10）ng/L.I型胶原的表达水平,高症状评分组为（551.98±74.37）μg/L;低症状评分组为（462.61±45.52）μg/L;对照组为（311.24±40.80）μg/L.3组膀胱平滑肌组织中RhoA mRNA表达与ROCK I mRNA的表达水平呈正相关关系（r=0.590,P〈0.01）;RhoA蛋白表达与ROCK I蛋白表达呈正相关关系（r=0.737,P〈0.01）;RhoA蛋白表达与I型胶原表达呈正相关关系（r=0.783,P〈0.01）;ROCK I蛋白表达与I型胶原表达呈正相关关系（r=0.736,P〈0.01）.结论 间质性膀胱炎患者膀胱平滑肌组织中RhoA/Rho激酶、I型胶原表达水平升高,两者间有正相关关系,且升高水平与疾病的症状水平有关.     

COPD患者血清Rho激酶水平测定的临床意义

目的:探讨慢性阻塞性肺疾病患者肺动脉高压与其血清Rho激酶的表达相关性.方法:收集符合标准的45人.所有人均经心脏超声测肺动脉收缩压.依肺高血压诊断标准,将入选者分为3组.A组为健康体检者,B组为单纯慢性阻塞性肺疾病者,C组为慢性阻塞性肺疾病并发肺动脉高压者.通过ELISA测定入组者血清ROCK1水平,并将ROCK1水平与肺动脉收缩压进行相关性进行分析.结果:C组血清ROCK1表达高于A组和B组,两者之间差异有统计学意义(P＜0.05).血清ROCK1的表达水平与肺动脉收缩压呈正相关(r=0.637,P＜0.05).结论:慢性阻塞性肺疾病并发肺动脉高压者血清ROCK1高表达,提示Rho激酶在预测慢性阻塞性肺疾病患者肺动脉高压中有一定临床意义.     

Rho蛋白激酶在脑血管痉挛中的作用

蛛网膜下腔出血（SAN）诱发脑血管痉挛（CVS）一直是神经外科领域的热门科题之一。脑血管痉挛的特征为血管平滑肌异常收缩。Rho激酶是一类丝氨酸P苏氨酸蛋白激酶，它主要通过磷酸化抑制肌球蛋白轻链磷酸酶（MLCP）的活性来增加肌球蛋白轻链（HLC）的磷酸化水平．从而增强平滑肌的收缩力，参与CVS发生。有效抑制Rho激酶活性有可能为CVS的预防开辟一条新途径.     

心血管疾病发病机制研究：细胞外信号调节激酶在缓激肽引起血管平滑肌细胞增殖反应中的调节作用

目的：从细胞外信号调节激酶(extracellula rsignal-regulated mitogen-activated protein kinase，ERKs)的角度，研究丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)信号途径在缓激肽介导的大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell，VSMC)促增殖等反应中的作用及其可能的调控机制。方法：实验选SD清洁级大鼠2只，分离颈动脉平滑肌组织培养VSMC。通过^3H-胸苷掺入率与VSMC^-H-亮氨酸掺入率分别反映VSMC的DNA代谢与蛋白质合成代谢速率；并通过给予缓激肽抑制剂N-乙酰半胱氨酸(N-aeetyl-L-cysteine，NAC)及ERKS抑制剂U0126预处理，观察它们对细胞蛋白合成和DNA代谢及细胞增殖的影响。结果：缓激肽(10～8mmol／L)处理30min VSMC^3H-胸苷掺入率和^3H-亮氨酸掺入率均明显增高(增加412．1％和137．9％，P&;lt;0．01)。缓激肽增高^3H-胸苷掺入的作用可部分被NAC所抑制及U0126所抑制(增加抑制率为27．70％和28．60％，P&;lt;0．05)，明显被NAC+U0126所抑制(增加抑制率65．50％，P&;lt;0．01)。缓激肽增高。H-亮氨酸掺入的作用可部分被NAC和U0126所抑制(增加抑制率为28．70％和20．80％，P&;lt;0．05)，完全被NAC+U0126所抑制(增加抑制率116．70％，P&;lt;0．01)。结论：ERKs激活在缓激肽导致VSMC增殖反应中具有重要作用，并可通过ERKs信号途径的特异性抑制剂的抑制效应，影响血管平滑肌细胞的增殖效应，从而影响心血管疾病的发生。     

Rho激酶与脑血管疾病

近年研究发现Rho激酶(Rho-associated kinases,ROCK)参与脑血管痉挛(cerebral vasospasm,CVS)、缺血性脑损害及神经轴突生长和神经网络形成等病理生理过程,在神经系统疾病中发挥重要作用.现就ROCK在脑血管疾病中的作用进行综述.     

Gax基因过表达对低氧性大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖及周期的作用

目的:探讨生长终止特异性同源盒(growth arrest-specific homeobox,Gax)基因转染在低氧性大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth muscle cells,PASMCs)中过表达及其对细胞增殖和周期的作用。方法:腺病毒介导Gax基因(adenovirus expressing Gax cDNA,Ad-Gax)转染体外培养的PASMCs。在常氧(21%O2)和低氧(2·5%O2)2、6、12、24和48h条件下,利用RT-PCR和免疫细胞化学法分别测定转染前后PASMCs中Gax mRNA和蛋白表达;用四唑盐(MTT)比色法和流式细胞术检测各组PASMCs增殖和周期。结果:RT-PCR和免疫细胞化学法证实Ad-Gax转染后PASMCs中Gax能稳定过表达;MTT比色试验结果显示,未转染组常氧和低氧2、6、12、24和48h时PASMCs吸光度值分别为0·38±0·02、0·44±0·11、0·48±0·05、0·59±0·07、0·67±0·03和0·75±0·18,低氧组比常氧组明显增加(P<0·05);而转染组各时相吸光度值分别为0·17±0·04、0·15±0·02、0·24±0·11、0·33±0·13、0·31±0·03和0·37±0·09,低氧组比未转染组同时相点组明显降低(P<0·05、0·01)。流式细胞仪检测结果表明,Ad-Gax转染对常氧条件下PASMCs的周期没有显著影响,但可使低氧处理后PASMCs的G0/G1比例较未转染组显著增高、S G2/M比例显著降低(P<0·01);结论:Gax基因过表达能够抑制低氧性PASMCs的增殖。     

槲皮素对肺动脉平滑肌细胞增殖及大鼠低氧性肺动脉高压的影响

目的研究酪氨酸蛋白激酶抑制剂槲皮素（ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ）对血小板衍生生长因子ＰＤＧＦ诱导的平滑肌细胞增殖及低氧性肺动脉高压的影响。方法①用原代培养的小牛肺动脉平滑肌细胞,采用ＭＴＴ比色法、流式细胞及ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ技术对ＰＤＧＦ诱导的肺动脉平滑肌细胞增殖的影响进行分析;②通过大鼠缺氧动物模型观察槲皮素对右心室收缩压（ＲＶＳＰ）,右心室／左心室＋室间隔比值（ＲＶ／ＬＶ＋Ｓ）及肺小动脉图像分析的影响。结果与对照组相比槲皮素处理组能显著地抑制ＰＤＧＦ诱导的肺动脉平滑肌细胞增殖,明显地抑制ＰＤＧＦ诱导的肺动脉平滑肌细胞酪氨酸磷酸化程度,且呈明显剂量依赖性,槲皮素对ＲＶＳＰ、ＲＶ／ＬＶ＋Ｓ及肺小动脉中膜肥厚也有明显的抑制作用。结论槲皮素可显著地抑制ＰＤＧＦ诱导的肺动脉平滑肌细胞增殖,对低氧性肺动脉高压有一定的防治作用。     

前列腺素受体在低氧诱导的肺动脉平滑肌细胞中的表达研究

目的:探讨前列腺素受体家族在低氧诱导的肺动脉高压平滑肌细胞中的表达变化。方法:体内实验,以低氧(10%O2)3周诱导建立小鼠肺动脉高压模型,分离肺动脉;体外实验,分别对小鼠源性和人源性的肺动脉平滑肌细胞进行低氧(1%O2)24 h的诱导。提取相应组织或细胞的RNA,以反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增不同前列腺素受体基因片段,并将产物进行琼脂糖凝胶电泳。结果:无论是小鼠源性还是人源性的肺动脉平滑肌细胞中,前列腺素受体基因基础表达值均以血栓素A2受体TP和前列腺素E受体1(E-prostanoid receptor 1,EP1)为最高,EP2、EP3、EP4和前列腺素I2受体(IP)居中,前列腺素D1受体、前列腺素D2受体和前列腺素F2α受体最少。在低氧诱导后,小鼠肺动脉平滑肌细胞血栓素A2受体基因和EP3受体基因表达上调显著,而前列腺素D1受体、EP1和前列腺素I2受体则明显下调。结论:在低氧诱导下,前列腺素受体基因表达发生不同变化,对筛选不同前列腺素用于肺动脉高压的疗效研究和新药开发及探究其病理机制有重要意义。     

Na+/H+交换器-1反义RNA对大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的 :探讨反义 RNA对大鼠肺动脉平滑肌细胞 Na / H 交换器 (NHE) 1表达和活性、细胞内 p H(p Hi)的影响 ,及其与细胞增殖的关系。方法 :构建含 NHE 1反义 RNA序列的 p L XSN反转录病毒重组载体 ,将其转染体外培养的大鼠肺动脉平滑肌细胞 ,G4 18筛选后获取含有重组载体的细胞克隆 ,检测细胞 NHE 1m RNA表达、2 2 Na摄取量、p Hi和 3H Td R掺入量。结果 :与转染 p L XSN空载体的细胞和正常对照组细胞比较 ,转染了重组载体的肺动脉平滑肌细胞中 NHE 1m RNA表达、2 2 Na摄取量明显减少 ,同时伴有 p Hi降低和 3H Td R掺入量减少 ,正常对照组和空载体组间无显著差异。结论 :NHE 1反义 RNA可以减少 NHE 1表达 ,从而诱导细胞酸化 ,抑制肺动脉平滑肌细胞增殖     

血管紧张素-(1-7)对肺动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的探讨血管紧张素-（1—7）[ANG-（1—7）]对体外培养兔肺动脉平滑肌细胞增殖的影响。方法体外培养兔肺动脉平滑肌细胞，鉴定后传代培养，取4～7代细胞，应用不同浓度ANG-（1—7）干预，并与血管紧张素-Ⅱ（ANG—Ⅱ，浓度10^-6mol／L）、空白组对照。通过台盼蓝染色法细胞计数、四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法，确定肺动脉平滑肌细胞的生长趋势变化。结果10^-12～10^-10mol/L浓度ANG-（1—7）与相应对照组比较，细胞数、光吸收值（A值）变化不明显，无统计学意义，10^-9～10^-5mol／L浓度组，ANG-（1—7）＋ANG—Ⅱ（浓度均为10^-6）组与空白对照组比较，细胞数和A值均下降，差异有统计学意义，与血管紧张素-Ⅱ组比较差异也有统计学意义；10^-6、10^-5浓度组与ANG-（1—7）＋ANG—Ⅱ（浓度均为10^-6mol／L）组引起的变化差异不明显，无统计学意义。结论ANG-（1—7）呈剂量依赖性抑制胎牛血清诱导的兔肺动脉平滑肌细胞增殖，在浓度为10^-6时效果最明显，再增加浓度效果无明显增强，这种抑制作用与ANG-Ⅱ的存在无明显关系。     

Spatial differences of cellular origins and in vivo hypoxia modify contractile properties of pulmonary artery smooth muscle cells: lessons for arterial tissue engineering

Tissue engineering of functional arteries is challenging. Within the pulmonary artery wall, smooth muscle cells (PASMCs) have site-specific developmental and functional phenotypes, reflecting differing contractile roles. The force generated by PASMCs isolated from the inner 25% and outer 50% of the media of intrapulmonary elastic arteries from five normal and eight chronically hypoxic (hypertensive) 14 day-old piglets was quantified in a three-dimensional (3D) collagen construct, using a culture force monitor. Outer medial PASMCs from normal piglets exerted more force (528 +/- 50 dynes) than those of hypoxic piglets (177 +/- 42 dynes; p < 0.01). Force generation by inner medial PASMCs from normal and hypoxic piglets was similar (349 +/- 35 and 239 +/- 60 dynes). In response to agonist (thromboxane) stimulation, all PASMCs from normal and hypoxic piglets contracted, but the increase in force generated by outer and inner hypoxic PASMCs (ranges 13-72 and 14-56 dynes) was less than by normal PASMCs (ranges 27-154 and 34-159 dynes, respectively; p < 0.05 for both). All hypoxic PASMCs were unresponsive to antagonist (sodium nitroprusside) stimulation, all normal PASMCs relaxed (range - 87 to - 494 dynes). Myosin heavy chain expression by both hypoxic PASMC phenotypes was less than normal (p < 0.05 for both), as was the activity of focal adhesion kinase, regulating contraction, in hypoxic inner PASMCs (p < 0.01). Chronic hypoxia resulted in the development of abnormal PASMC phenotypes, which in collagen constructs exhibited a reduction in contractile force and reactivity to agonists. Characterization of the mechanical response of spatially distinct cells and modification of their behaviour by hypoxia is critical for successful tissue engineering of major blood vessels.     

tMfn2基因抑制血管平滑肌细胞增殖的作用与机制

目的 比较线粒体融合素基因2(Mfn2)和去除穿膜区序列的大鼠线粒体融合素基因2(tMfn2)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的作用,探讨tMfn2基因对VSMCs增殖的影响及其相关的信号通路.方法 用携带tMfn2基因和Mfn2基因的重组腺病毒(Adv-tMfn2和Adv-Mfn2)感染VSMCs,检测tMfn2蛋白和Mfn2蛋白在细胞中的表达水平;细胞计数法、四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测VSMCs的增殖;流式细胞术检测tMfn2基因对VSMCs周期的影响;Western blot分析各组磷酸化ERK1/2和磷酸化Raf-1蛋白表达水平的变化;采用方差分析对数据进行统计学处理.结果 Adv-tMfn2和Adv-Mfn2感染VSMCs后能有效表达出相应蛋白;细胞计数和MTT结果显示,tMfn2和Mfn2均使VSMCs增殖受到明显抑制(P<0.01),且前者较后者抑制效果更明显(P<0.01);流式细胞术结果表明tMfn2和Mfn2使多数VSMCs停滞于G0/G1期,细胞比例为(88.01±4.38)%和(67.43±6.21)%,可见tMfn2基因对细胞剧期的影响更明显(P<0.01).进一步研究表明tMfn2比Mfn2更能降低磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)和磷酸化Raf-1(p-Raf-1)的表达水平(P<0.01).结论 与Mfn2基因相比,tMfn2基因更能显著抑制VSMCs增殖,使细胞周期停滞于G0/G1期.这一作用主要通过抑制Ras-Raf-ERK1/2信号通路,下调磷酸化Raf-1蛋白表达,进而抑制ERK1/2的磷酸化而实现.     

miRNA-146a调控血管平滑肌细胞增殖和凋亡的作用及机制

目的探究miRNA-146a调控血管平滑肌细胞增殖、凋亡的作用及相关机制。方法取SDP级健康雄性SD大鼠作为实验对象,取血管平滑肌细胞(VSMC)消化离心后,转染50nmol/L miRNA-146a反义寡核苷酸、错义链和同等剂量磷酸盐缓冲液(PBS),进行对照比较。结果实验组细胞在转染后48h内VSMC的数目和吸光度值均低于其他两组,细胞凋亡率明显高于其他两组,核因子κBp65、PCNA的表达水平低于其他两组,差异均具有统计学意义(P0.05)。结论miRNA-146a可促进VSMC的增殖,抑制细胞凋亡的进行,这一作用机制与核因子κBp65、PCNA表达水平增高有关。     

过氧化氢酶过度表达对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的:探讨腺病毒载体介导的过氧化氢酶基因转染对体外培养的人血管平滑肌细胞增殖的影响。方法:用含过氧化氢酶基因的重组腺病毒(AdCat)转染人血管平滑肌细胞,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)方法观察血管平滑肌细胞的增殖活性,同时用流式细胞术观察血管平滑肌细胞细胞周期的变化。结果:MTT比色法分析显示AdCat组明显抑制细胞增殖,与对照组相比差异有显著性(P<0.05);细胞周期分析发现AdCat组G0/G1期分布百分率显著高于对照组,而S、G2/M期分布百分率显著低于对照组,细胞增殖能力下降(P<0.05)。结论:腺病毒载体介导的过氧化氢酶基因转染能抑制人血管平滑肌细胞的增殖。     

低频超声干预兔颈动脉粥样斑块的实验研究

目的观察不同强度的体外低频低强度超声对颈动脉粥样硬化斑块中平滑肌细胞增殖和凋亡的影响。方法将新西兰大白兔按照高脂饮食加空气干燥法建立颈动脉粥样硬化模型，随后随机分成正常对照组（对照组，6只）和4个超声组（每组6只），4个超声组根据超声的强度和时间分别为A组（0．5W／cm^2，5min／d）、B组（0．5W／cm^2，10min／d）、C组（1W／cm^2，5min／d）和D组（1W／cm^2．10min／d），超声作用每日1次，20d之后取颈动脉手术部位做病理切片。分别用增殖细胞核抗原（PCNA）染色和末端脱氧核酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷（dUTP）-生物素平移末端标记法（TUNEL）染色分析血管平滑肌细胞（VSMC）增殖和凋亡情况，并计算细胞增殖率（PCNA％）和细胞凋亡率（TUNEL％）。结果各超声组颈动脉内膜内PCNA阳性细胞率较对照组有不同程度的减少，其中B、C、D组与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）；各超声组颈动脉内膜中TUNEL阳性细胞率较对照组有不同程度增加，其中B、C、D组与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。B、C、D组相互比较PCNA％和TUNEL％，差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论体外低频低强度（0．5W／cm^2，10min／d）超声具有明显诱导家兔颈动脉粥样硬化血管平滑肌细胞凋亡和抑制增殖的作用。