两种乙型肝炎病毒DNA定量检测方法的比较与评价

目的：评价两种定量检测乙型肝炎病毒（HBV）DNA方法的特点，方法：用美国DIGENE公司生产的Hybrid Capture-II HBV DNA试剂（HC－Ⅱ）和深圳匹基生物工程股份有限公司生产HBV DNA定量荧光PCR检测试剂（PG），定量检测HBsAg阳性的慢性乙肝患者血清中的HBV DNA，结果：HC－Ⅱ试剂的HBV DNA检测阳性率高达98．6％，PG试剂达到94．6％，两者的符合率为93．2％。用系列稀释的患者血清，测定两种定量检测方法的灵敏度，PG试剂略高于HC－Ⅱ试剂，HCⅡ在HBVDNA浓度较高时的关系精度较好，而在HBV DNA低滴度时，两者的定量误差均加大。用两种HBV，DNA定量检测方法监测抗病毒药物治疗慢性乙型肝炎的疗效，所测定的HBV DNA滴度呈相同变化趋势。结论：两种HBV DNA定量检测方法均有较高的灵敏度，在抗病毒药物疗效观察方面有较高的应用价值。     

PCR检测HBV-DNA不同试剂和方法的比较

本文对目前部分市售的ＨＢＶＰＣＲ试剂进行了灵敏度和检测率的测定，并在检测ＨＢＶ低水平感染中，用ＰＣＲ和斑点杂交作了比较。结果不同公司试剂盒的ＨＢＶ－ＤＮＡ最低检测浓度从０．１ｆｇ到１ｐｇ不等，同一公司不同批号的ＨＢＶ－ＤＮＡ最低检测浓度也从１００ｆｇ到１００ａｇ不同，差达１０３～１０４倍。ＰＣＲ和斑点杂交在三组不同乙肝标志组中的阳性检测率为ＨＢｓＡｇ（＋）ＨＢｅＡｇ（－）抗ＨＢｅ（－）组：ＰＣＲ７０％，斑点杂交４６．４％；ＨＢｓＡｇ（＋）ＨＢｅＡｇ（－）抗ＨＢｓ（＋）组：ＰＣＲ３５．７％，斑点杂交２．９％；ＨＢｓＡｇ（－）抗ＨＢｅ（＋）抗ＨＢｓ（＋）／ＨＢｃ（＋）组：ＰＣＲ１６．６％，斑点杂交３．３％。三组检测率均Ｐ＜０．０１。因此，目前市售的ＨＢＶＰＣＲ试剂必须标化，ＰＣＲ更适合于检测ＨＢＶ低水平的感染     

乙型肝炎血清标志物与HBV-DNA定量结果对比分析

目的 探讨乙型肝炎(下称乙肝)病毒血清标志物(HBV-M)与HBV-DNA定量检测的关系及临床意义.方法 用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定HBV-M,用实时荧光定量聚合酶链反应测定法(PCR)检测HBV-DNA.结果 在HBsAg( )、HBeAg( )、抗-HBc( )血清中HBV-DNA的阳性率及含量最高,HBeAg与HBV-DNA含量关系密切,并呈正相关,但部分HBeAg阴性或抗-HBe( )及抗-HBc( )患者,也有较高的HBV-DNA阳性率及含量.结论 单从HBV-M模式很难准确判断HBV病毒的复制程度及传染性强弱,而定量PCR的准确度高、特异性强,更能真实反映HBV病毒的复制情况,是评价传染性的可靠指标,对乙肝患者的诊断、治疗及疗效观察有重要指导意义.     

1 031例乙肝病毒携带者HBV-DNA含量与血清标志物的关系

目的：探讨乙型肝炎病毒携带者血清中HBV－DNA定量结果与乙肝血清标志物的关系。方法：采用定量聚合酶链反应（PCR）法检测1031例乙型肝炎病毒携带者血清中DNA含量，与HBV标志物作对比研究。结果：血清HBeAg阳性组HBV－DNA含量明显高于抗HBe或抗HBc阳性组。结论：定量PCR法检测HBV－DNA具有较强的特异性和灵敏度，为临床了解病毒复制情况，督促乙肝携带者治疗及制定治疗方案、疗效观察提供了确切依据。     

乙型肝炎病毒血清标记物与HBV-DNA定量联合检测的意义

目的探讨乙型肝炎病毒DNA(HBV-DNA)与血清免疫标记物的关系。方法采用荧光定量聚合酶链反应检测血清样本中HBV-DNA含量。结果 A组[乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)(+)、乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)(+)、乙型肝炎病毒核心抗体(抗-HBc)(+)]、B组[HBsAg(+)、乙型肝炎e抗原(抗-HBe)(+)、抗-HBc(+)]、C组[HBsAg(+)、HBeAg(+)]、D组[HBsAg(+)、抗-HBc(+)],4组阳性率分别为94.4%、89.0%、100.0%、58.0%。结论 HBV-DNA与乙型肝炎病毒血清标记物联合检测,对临床HBV感染的诊断、治疗、疗效观察、传染性和复制情况的判断及预后具有重要意义。     

竞争性聚合酶链反应定量检测血清HBV-DNA

定量检测ＨＢＶ－ＤＮＡ的现有方法主要是分子杂交法，敏感性为０．１～１ｐｇ，不能达到病毒最低感染水平。聚合酶链反应技术有极高的特异性，灵敏度可达１ｆｇ，相当于３×１０２个病毒颗粒。定量ＰＣＲ技术为研究病毒与疾病关系提供了强有力的手段。本文应用竞争性ＰＣ...     

荧光探针定量PCR检测HBV-DNA

本文采用荧光探针定量(FQ-PCR)法准确定量检测HBV-M阳性标本中的HBV-DNA数量.结果显示:HBeAg(+)组(32份)的阳性率为100%,HBV-DNA拷贝数范围在105～109/ml之间.HBeAb(+)组(47份)的阳性率为23.4%,HBV-DNA拷贝数范围在103～105.7/ml之间;HBsAb(+)组(37份)的阳性率为2.7%,HBV-DNA拷贝数为105/ml.以上44例HBV-DNA阳性拷贝数范围在103～109/ml之间.HBeAg(+)组血清中HBV-DNA含量(107.09±1显著高于HBeAb(+)组(104.7±1)和HBsAb(+)组(105).结果表明:HBV-DNA的FQ-PCR检测较常规PCR更具有较高的灵敏度和特异性,且定量准确,结果可靠,能避免PCR后处理污染导致的假阳性,可反映HBV真实感染和低复制状态.结合HBV-DNA含量测定判断HBV病毒复制状态,对临床诊断、治疗及判断预后具有重要的指导意义.     

实时荧光定量聚合酶链反应检测唾液HBV-DNA结果分析

目的：探讨乙型肝炎患者血清中HBV-DNA与唾液中HBV-DNA之间的相关性。方法：用时间分辨荧光免疫分析法检测乙型肝炎病毒血清标志物,用实时荧光定量聚合酶链式反应（实时荧光定量PCR）检测HBV-DNA。结果：在300例乙型肝炎患者中血清HBV-DNA〉103 copies/mL者268例,阳性率为89.33%。唾液HBV-DNA〉103copies/mL者219例,阳性率为73.00%。血清、唾液HBV-DNA阳性比较差异有统计学意义（χ2=26.586,P〈0.01）。结论：血清中HBV-DAN与唾液中HBV-DNA的含量有很好的相关性,当唾液中HBV-DNA〉105 copies/mL时同样导致HBV的水平传播,这在流行病学上有重要意义。     

荧光定量PCR检测358例乙型肝炎病毒DNA结果分析

目的用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)定量检测血清中乙型肝炎病毒的数量以研究其临床价值。方法采用一种完全闭管式的PCR和荧光探针杂交技术相结合的实时检测定量PCR方法来检测358份临床血清标本。结果123份HBsAg,HBeAg,HBcAb阳性的标本,阳性率为96.7%(120例),平均拷贝数为1.8×108/ml;108份HBsAg,HBeAg,HBcAb阳性的标本其阳性率为39.8%(43例),平均拷贝数为6.6×105/ml;11份HBsAg,HBcAb阳性的标本,其阳性率为36.4%(4例),平均拷贝数为5.7×105/ml。结论FQ-PCR能够准确定量及有效避免假阳性。FQ-PCR可以真实反应HBV的感染和复制情况,对乙型肝炎的诊断,治疗方案的选择和疗效观察有较大的指导意义。     

乙型肝炎病毒感染者HBeAg模式与病毒DNA水平相关性研究

目的 探讨乙型肝炎病毒(HBV)感染者HBeAg模式与HBV DNA水平之间的关系.方法 运用荧光定量PCR(FQ-PCR)检测120例乙型肝炎患者血清中的HBV DNA,同时运用ELISA方法进行HBV血清标志物的检测,并对结果进行相关性探讨.结果 HBeAg阳性组血清HBV DNA检出率为87.9%(58/66),...     

高发区肝癌患者血清乙型肝炎病毒HBV标志物和HBV DNA水平比较分析

目的 探讨高发区原发性肝癌血清中乙型肝炎病毒(HBV)的感染标志(HBVM)状态和核酸(HBVDNA)水平及相互关系.方法 采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法和荧光定量聚合酶链反应(PCR)法对江苏省启东地区211例原发性肝癌(肝癌组)和229例HBV感染者(对照组)进行HBVM和HBV DNA含量检测.结果 肝癌组HBV感染率高达99.5%,两组HBV DNA阳性率分别为70.0%和66.4%(P>0.05).肝癌组HBsAg阳性率显著低于对照组,85.2% vs 93.9%(P<0.05),这类患者HBV DNA检出率显著高于对照组,79.9% vs 69.3%(P<0.05),但其中栽量≥106 copies/ml检出率显著低于对照组,28.0%vs 40.3%(P<0.05).HBVM模式主要有HBsAg/HBeAg/抗-HBc阳性、HBsAg/抗-HBe/抗-HBc阳性和HBsAg/抗-HBc阳性3种,它们在两组中的分布差异有统计学意义(P<0.01),对照组中HBsAg、抗-HBe、抗-HBc阳性模式最常见(41.5%),而肝癌组中HBsAg/抗-HBc阳性者最多(35.7%),且其HBV DNA阳性率和平均水平都显著高于对照组(P<0.05).结论 启东地区原发性肝癌患者HBV感染率很高,多数处于中低水平的HBV复制活跃期,这可能增加了HBV DNA的肝内整合机会,最终导致癌变的发生;启东肝癌患者HBVM以HBsAg/抗-HBc阳性最多见,HBVe系统的缺失是否暗示有特定变异的存在值得作进一步的研究.     

荧光定量PCR法检测HBV DNA同血清标志物关系的探讨

目的　探讨荧光定量PCR法 (FQ PCR)检测HBVDNA同血清标志物的关系。方法　将FQ PCR法检测HBVDNA的标本用ELISA法重新测定HBV血清标志物前S1抗原 (PreS1 )及乙型肝炎病毒标志物。结果 1 86份HBVDNA阳性标本中 ,HBsAg阳性率 98.92 % ,抗 HBc阳性率 94 .0 9 % ,有 2例HBsAg阴性 ,其中 1例为抗 HBc单独阳性。PreS1阳性率为 6 1 .83% ,HBeAg阳性率为6 6 .6 7% ,后二者同时检出率 4 2 .4 7% ,联合检出率 86 .0 2 % ,PreS1和HBeAg阳性率无显著性差异 (P>0 .0 5 ) ;HBVDNA阴性而HBsAg阳性标本 1 1 4例 ,抗 HBc阳性率为 96 .4 9% ,PreS1阳性率为 2 2 .81 % ,HBeAg阳性率为 5 .2 6 % ,后二者同时检出率 3.5 1 % ,PreS1和HBeAg阳性率差异非常显著 (P<0 .0 0 1 ) ;HBV低水平和高水平复制标本PreS1和HBeAg检出率无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ;HBVDNA阳性标本中 ,对于PreS1和HBeAg而言 ,PreS1单独阳性者HBVDNA对数值为 6 .6 5 4± 2 .2 0 3(x±s) ,HBeAg单独阳性者为 6 .892± 1 .5 79,同时阳性者 6 .70 6± 1 .6 4 3,均阴者为6 .32 1± 1 .76 3,四组间无显著性差异。结论　血清PreS1和HBeAg与HBVDNA关系密切 ,可作为HBV复制的标志物 ,尤其二者联合检测效果更好 ,但以HBeAg特异性较高。二者存在状态与HBV复制程度关系不     

乙型肝炎病毒载量与血清学标志及preS1抗原的关系

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)载量与血清学标志及preS1抗原的关系,为乙型肝炎的诊断、疗效评估提供科学依据。方法采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA),检测患者血清HBVDNA载量、血清学标志及preS1抗原。结果155例HBVDNA载量大于103拷贝/ml的标本中,preS1阳性136例,HBeAg阳性100例,两种检测指标间存在显著性差异(P<0·01)。preS1/HBeAg组合分析检测HBV复制的灵敏度100%、特异性78·1%。preS1或HBeAg阳性患者HBVDNA拷贝数显著高于preS1或HBeAg阴性患者(P<0·01)。结论血清preS1、HBeAg与HBV复制密切相关。作为反映HBV复制的指标,preS1优于HBeAg,preS1/HBeAg组合分析优于preS1,preS1/HBeAg在HBV的诊断和疗效评估方面有重要的临床应用价值。     

乙型肝炎病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立

目的建立一种采用Lightcycler系统进行HBVDNA实时荧光定量PCR的方法,并探讨其临床应用价值。方法针对HBV基因组S区设计一对扩增引物,并通过预实验严格优化反应体系的组成和条件;将T载体与HBVRT区扩增后纯化的产物进行连接反应,然后转染大肠杆菌（DH5a）,经蓝、白斑筛选后挑取阳性菌落,提取质粒,制备外标准品。结果用于制成外标准品的质粒经1：10的缓冲液倍比稀释,制作标准曲线,线性方程为：Y=-3．344X＋37（r2=0．9999）;通过检测已知浓度并经倍比稀释的HBVDNA,表明其最低检测限为5×10^2 IU／mL;拷贝数介于5×10^2～5×10^8 IU／mI。之间的HBVDNA浓度与ct值具有良好的线性关系。结论外标法实时荧光定量PCR是一种定量相对准确、灵敏度高、特异性强、操作相对简便的方法;该方法可用于乙型肝炎患者病情监测,有效指导临床用药;联合该法与血清标志物检测,可更准确评价HBV感染者病情。     

荧光定量 PCR 法检测乙肝病毒 DNA 和乙肝病毒标志物检测的临床价值分析

目的：探讨荧光定量 PCR 法（FQ-PCR）检测乙肝病毒 DNA（HBV-DNA）和乙肝病毒标志物（HBV-M）ELISA 法检测的临床价值。方法选取2013年4～12月在该院检测的653例乙肝患者,先采用 ELISA 法对其血液标本进行 HBV-M 模式定性检测,检测顺序为乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）、乙肝表面抗体（HbsAb）、乙型肝炎 e 抗原（HbeAg）、乙型肝炎 E 抗体（Hbe-Ab）、乙肝表面核心抗体（HbcAb）;再采用 FQ-PCR 法进行 HBV-DNA 定量检测,观察不同 HBV-M 模式检测结果。结果 HB-sAg、HbeAg、HbcAb 检测同时阳性简称“大三阳”。大三阳[1（＋）、3（＋）、5（＋）模式]和[1（＋）、3（＋）模式]的 HBV-DNA 阳性率分别为97．97％、94．74％,显著高于其他模式的 HBV-DNA 阳性率（P ＜0．05）。大三阳的 HBV-DNA 表达水平（5．59×10^6±2．42×10^5）copies/mL,明显高于其他模式（P ＜0．05）。结论联合 HBV-M 定性及 HBV-DNA 定量检测,对临床早期诊断及用药具有重要指导价值。     

固相载体法提取病毒性乙型肝炎患者血清DNA的研究

【目的】寻找简单快速地提取血清乙型肝炎病毒（HBV）DNA的方法.【方法】分别用盐酸胍-硅胶法、酚氯仿法和煮沸裂解法同时提取血清HBV DNA并应用于荧光定量PCR.【结果】盐酸胍-硅胶法所得HBV DNA量高于酚氯仿法和煮沸裂解法（P〈0.05）,并且盐酸胍-硅胶法所得结果的重复性优于酚氯仿法和煮沸裂解法（CV分别为0.28,0.31和0.37）.【结论】盐酸胍-硅胶法提取HBV DNA简单、快速且可靠,适用于HBV DNA定量测定.     

实时荧光聚合酶链反应技术检测乙型肝炎病毒YMDD变异的研究

目的采用实时荧光聚合酶链反应(PCR)技术检测慢性乙型肝炎(CHB)患者在使用拉米夫定过程中,乙型肝炎病毒(HBV)YMDD变异的发生情况,并研究影响变异发生的相关因素,为临床预测和判断HBV YMDD变异提供一定的依据。方法选择50例CHB患者作为拉米夫定治疗组,30例CHB患者作为对照组。采用实时荧光PCR方法分别检测两组在用药期间HBV YMDD变异的发生情况,同时采用荧光定量PCR方法检测治疗组在用药前后HBV DNA水平。结果治疗组在用药52周时的变异率24.0%,明显高于对照组52周时的变异率3.3%(P<0.05);治疗组在用药52周时的变异率24.0%,明显高于用药26周时的变异率4.0%(P<0.05);治疗前HBV DNA水平较高组(28例)患者在用药52周时的变异率(35.7%)明显高于HBV DNA水平较低组(22例)患者的变异率(9.1%)(P<0.05);治疗组中未变异的38例患者在用药52周时的HBV DNA阴转率(65.8%)明显高于变异的12例患者的HBV DNA阴转率(16.7%)(P<0.05)。结论拉米夫定可导致HBV YMDD变异的产生,并且该变异的发生率随着拉米夫定的用药时间的延长而增加;HBV YMDD变异的发生同血清HBV DNA水平相关。     

标本扩增效率的计算及其对HBV DNA定量结果的影响

目的建立分析标本扩增效率的方法，分析其对HBV DNA定量结果的影响。方法应用分析软件提供的样点拟合法及对数荧光一循环数坐标图，计算得到Ct，HBV DNA拷贝数以及每一标本的扩增效率。分析40个HBV DNA拷贝数在10^4-10^8／ml的标本的扩增效率，井用得到的标本实际扩增效率加以校正。结果4个标准的扩增效率分别为0．80，0．80，0．84和0．85。标本的扩增效率在0．59—0．85之问，其中30份（75％）在0．7—0．85之间，8份（20％）在0．65，0．70之问，其余2份在0．65以下。部分校正后的HBV DNA定量结果比校正前高一个数量级。结论标本与标准的扩增效率不一定相同，标本扩增效率的降低导致标准曲线定量结果偏低，有必要用标本的实际扩增效率对结果进行校正。     

乙型肝炎病毒DNA含量与血清标志物的关系

目的 探讨乙型肝炎患者血清乙型肝炎病毒（HBV）DNA定量与乙肝血清标志物关系。方法 采用定量聚合酶链反应（PCR）法检测354例乙型肝炎患者血清中DNA含量,与HBV标志物作对比研究。结果 血清HBeAg阳性组HBVDNA含理明显高于抗-HBe或抗-HBc阳性组,而后两组HBVDNA检出率仍较高,乙型肝炎肝硬化组阳性率明显低于慢性乙型肝炎组,且含量较低。结论 定量PCR法检测HBVDNA检出率仍较高,乙型肝炎肝硬化组阳性率明显低于慢性乙型肝炎组,且含量较低。结论 定量PCR法检测HBV DNA具有较强的特异性和灵敏度,为临床了解病毒复制情况,制定治疗方案及疗效观察提供了确切依据。