大鼠局造脑缺血预处理后GFRα1的表达

目的观察对比胶质细胞源性神经营养因子受体GFRα1在大鼠局造脑缺血预处理后和脑缺血后的表达。方法实验采用GFRα1原位杂交技术,观察胶质细胞源性神经营养因子受体GFRα1在成年大鼠脑皮质的表达。结果缺血周边区可见GFRα1mRNA阳性表达的神经元,MCAO 3 h,缺血周边区阳性表达开始增多,与正常对照组相比差异具有显著性,P<0.05,PC MCAO组与MCAO组无差异,P>0.05,PC MCAO和MCAO组随时间延长,GFRα1mRNA在缺血周边区表达增强,并在1 d时出现高峰,随后表达减低。在6 h、12 h1、d时与MCAO组比较有显著性差异,P<0.05,在3 d和7 d IPC MCAO组无差异性。反应产物在细胞内呈棕褐色,清晰可辨,对照组只有极少量表达。结论GFRα1在脑缺血预处理后表达增高,可能对缺血引起的神经损伤起到重要的保护作用。     

脑缺血—再灌注后BDNF和bFGF表达与神经元凋亡的关系及脑脉康的干预作用

目的:观察脑缺血-再灌注损伤后脑源性神经营养因子(BDNF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)蛋白表达与神经元凋亡的关系,探讨脑脉康的干预作用及机制.方法:建立大鼠脑缺血-再灌注损伤模型,应用脑脉康进行干预.采用免疫组化方法和凋亡原位末端标记技术(TUNEL),观察脑缺血3 h及再灌注7、24、96和168 h的BDNF、bFGF蛋白分布、表达的动态变化与凋亡细胞分布与时相关系以及脑脉康的干预作用.结果:模型组大鼠缺血3 h、再灌注7 h半暗区皮质及新纹状体区BDNF、bFGF表达即明显升高,再灌注24 h达到高峰;缺血侧海马CA1～CA3区及丘脑则于再灌注96 h达到高峰.缺血侧半暗区神经元凋亡于24～96 h达到高峰;海马CA1～CA3区及丘脑、纹状体区于再灌注168 h仍有相当数量的凋亡细胞.与对照组比较,中药组于再灌注24～168 h BDNF、bFGF表达显著升高(P<0.05或P<0.01),凋亡细胞数则明显减少(P<0.05或P<0.01).结论:脑缺血-再灌注损伤后BDNF、bFGF的表达升高,在一定程度上可抑制神经元凋亡,促进神经功能状态的恢复,对脑缺血损伤有重要的保护作用.脑脉康可能通过促进脑缺血-再灌注损伤后BDNF、bFGF表达,激活内源性神经保护机制,发挥其抗凋亡作用.     

神经生长因子对大鼠缺血性脑损伤急性期的疗效研究

目的:观察神经生长因子(NGF)对脑缺血急性期大鼠脑组织超微结构及突触素(Syp)表达的影响。方法:健康雄性SD大鼠36只,随机分为假手术组、缺血组和NGF组各12只,后2组线栓法制备MCAO模型,NGF组给予NGF腹腔注射治疗14d,其余2组腹腔注射等量生理盐水治疗14d。术后14d,WesternBlot测定各组脑组织中Syp的表达;术后28d,透射电镜观察各组脑组织超微结构。结果:术后14d,缺血组和NGF组脑组织Syp蛋白含量均显著高于假手术组(P<0.01),NGF组脑组织Syp蛋白含量高于缺血组(P<0.05);术后28d,电镜显示NGF组脑组织超微结构损伤较轻,突触数目较多,突触形态基本正常。结论:急性期腹腔注射NGF可减轻大鼠脑缺血性损伤程度,可能通过增加脑组织Syp的表达来促进脑缺血性损伤后突触的形成。     

大鼠局造脑缺血预处理后c-Ret的表达

目的 观察对比胶质细胞源性神经营养因子受体c-Ret在大鼠局造脑缺血预处理后和脑缺血后的表达。方法 实验采用c—Ret原位杂交技术，观察胶质细胞源性神经营养因子受体c—Ret在成年大鼠脑皮质的表达。结果 缺血周边区可见c-RetmRNA阳性表达的神经元，MCAO 3h，缺血周边区阳性表达开始增多，与正常对照组相比差异具有显著性，P〈0．05，PC＋MCAO组与MCAO组无差异，P〉0．05，PC＋MCAO和MCAO组随时间延长，c—RetmRNA在缺血周边区表达增强，并在1d时出现高峰，随后表达减低。在6h、12h、1d时与MCAO组比较有显著性差异，P〈0．05，在3d和7d IPC＋MCAO组无差异性。反应产物在细胞内呈棕褐色，清晰可辨，对照组只有极少量表达。结论 c—Ret在脑缺血预处理后表达增高，可能对缺血引起的神经损伤起到重要的保护作用。     

碱性成纤维细胞生长因子在神经元死亡和损伤修复中的反应

目的研究碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfac-tor,bFGF)在大鼠短暂大脑中动脉阻塞(MCAO)再灌注后不同时点表达的变化,进一步探讨bFGF对局灶性脑缺血的脑保护作用,为治疗缺血性脑血管病提供实验基础和依据。方法采用栓线法MCAO动物模型,通过免疫组化方法观察bFGF的表达情况。结果免疫阳性细胞主要在神经元和神经胶质细胞中的表达,bFGF在缺血再灌注后6h开始表达,1d时达高峰,3d时开始下降,7d时有少量表达。结论短暂MCAO后bFGF表达上调,提示bFGF的表达增加对缺血脑组织有保护作用。     

氦氖激光对新生大鼠缺血缺氧性脑损伤的影响

目的:探讨氦氖激光穴位照射对新生鼠缺血缺氧性脑损伤的作用及其可能机制。方法:42只7d龄Wistar大鼠,单纯随机分为3组:假手术对照组、缺血缺氧组、氦氖激光穴位照射组,常规饲养22d后,取左侧脑组织进行常规石蜡包埋、切片、0-乙酰转移酶(cholineacetyltransferase,ChAT)和脑源性神经营养因子(brain-derivedneurotrophicfactor,BDNF)免疫组织化学染色。结果:氦氖激光穴位照射可明显改善缺血缺氧后脑神经元内尼氏体的脱失现象,增加缺血缺氧后脑神经元内胆碱ChAT和BDNF的表达。结论:氦氖激光穴位照射对缺血缺氧后脑组织具有神经保护效应,其作用机制推测与促进神经元对BDNF的表达有关。     

氦氖激光对新生大鼠缺血缺氧性脑损伤的影响

目的：探讨氦氖激光穴位照射对新生鼠缺血缺氧性脑损伤的作用及其可能机制。方法：42只7d龄Wistar大鼠，单纯随机分为3组：假手术对照组、缺血缺氧组、氦氖激光穴位照射组，常规饲养22d后，取左侧脑组织进行常规石蜡包埋、切片、0-乙酰转移酶(choline acetyltmnsferase，ChAT)和脑源性神经营养因子(brain-derived neurolmphic factor，BDNF)免疫组织化学染色。结果：氦氖激光穴位照射可明显改善缺血缺氧后脑神经元内尼氏体的脱失现象，增加缺血缺氧后脑神经元内胆碱ChAT和BDNF的表达。结论：氦氖激光穴位照射对缺血缺氧后脑组织具有神经保护效应，其作用机制推测与促进神经元对BDNF的表达有关。     

电针刺激神经干对脑缺血再灌注后不同时期皮层BDNF mRNA表达的影响

目的　观察脑缺血再灌注大鼠脑源性神经营养因子 (BDNF)的动态变化过程及电针刺激神经干对BDNF表达的影响。方法　共选取成年健康雌性Wistar大鼠 68只 ,采用线栓法建立脑缺血再灌注动物模型 ,并随机分为对照组 (4只 )、MCAO组 (3 2只 )及神经干电针刺激组 (3 2只 )。神经干电针刺激组大鼠于再灌注后 2h ,6h ,12h ,2 4h ,2d ,3d ,7d及 14d时各进行 1次神经干电针刺激。利用原位杂交法观察上述时间点各组大鼠脑皮层BDNFmRNA表达的时程变化过程。结果　脑缺血 1h再灌注 2h ,6h ,12h ,2 4h ,2d及 3d时 ,MCAO组与对照组比较 ,前者缺血侧脑皮层BDNFmRNA阳性细胞数量显著增多 (均P <0 .0 1) ,并且于再灌 2h及再灌 2 4h时分别出现峰值 ,如再灌 2h时的BDNFmRNA含量显著高于再灌 6h及再灌 12h时的BDNFmR NA含量 ,而再灌 2 4h时的BDNFmRNA含量则显著高于其它各时间点的BDNFmRNA含量 (均P <0 .0 5 )。经电针刺激神经干后 ,大鼠在缺血再灌 2h以后的各时间点里 ,其缺血侧脑皮层BDNFmRNA阳性细胞数量均显著多于MCAO组及对照组 (均P <0 .0 5 )。结论　电针刺激缺血再灌注大鼠神经干 ,可显著增强其缺血侧脑皮质BDNFmRNA的表达 ,可能是电针刺激发挥脑保护效应的重要机制之一。     

大鼠脑缺血再灌注后caspase-3表达及神经生长因子的保护作用

目的采用SD大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型，观察再灌注不同时间点大鼠神经功能缺损情况及caspase-3表达情况，并探讨caspase-3表达的变化规律及神经生长因子（NGF）的脑保护作用，为临床应用神经生长因子（NGF）治疗缺血性脑血管疾病及防治提供理论依据。方法采用线栓法制备大鼠局灶缺血再灌注模型，肌肉注射NGF，应用免疫组化方法和HE染色检测脑部神经元caspase-3表达，并观察大鼠脑部变化。结果缺血再灌注组大鼠脑内caspase-3的表达量增多，于再灌注后6h即有所增加，并于24h达高峰，之后下降。与缺血再灌注组相比，缺血早期给予神经生长因子（NGF）（干预），可使脑内caspase-3的表达减少（P〈0．05）。结论NGF对脑缺血再灌注损伤具有明显的保护作用，可减轻脑组织的损伤程度，抑制caspase-3的表达，减少细胞凋亡。     

姜黄素联合电针治疗对脑缺血大鼠BDNF、NGF表达的影响

目的观察姜黄素联合电针治疗对大鼠缺血脑组织中脑源性神经营养因子（BDNF）及神经生长因子（NGF）表达的影响。 方法选取健康雄性Wistar大鼠,采用线栓法将其制成大脑中动脉栓塞大鼠模型,采用随机数字表法将制模成功大鼠分成4组,分别是对照组、电针组、姜黄素组及电针+姜黄素组（简称观察组）,每组15只。姜黄素组及电针组大鼠于制模后分别给予姜黄素腹腔注射或电针治疗,观察组大鼠于制模后则联合给予姜黄素腹腔注射及电针治疗,对照组大鼠制模后未给予特殊处理。于制模后14d时对各组大鼠进行神经功能评分,然后处死各组大鼠分别取脑梗死区脑组织制成标本,采用免疫组化染色技术检测各组大鼠脑梗死区BDNF及NGF阳性细胞表达情况。 结果制模后14d时发现观察组大鼠神经功能缺损评分［（1.37±0.59）分］明显低于电针组、姜黄素组及对照组评分［分别为（1.59±0.38）分、（1.68±1.06）分和（1.98±0.26）分］,组间差异均具有统计学意义（P<0.05）;另外观察组大鼠脑梗死区BDNF及NGF阳性细胞表达均较其他三组明显增强,组间差异均具有统计学意义（P<0.05）。 结论姜黄素联合电针治疗可促进大脑中动脉栓塞大鼠脑缺血组织BDNF及NGF表达,并可能通过该机制发挥神经保护作用。     

脑缺血上调大鼠神经元和星形胶质细胞CDK4的表达

目的:研究大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后CDK4在神经元和星形胶质细胞的表达。方法:SD大鼠25只,随机分为假手术组和再灌注1d、3d、7d、14d组,建立大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)再灌注模型,假手术组仅进行手术不造成缺血状态,应用流式细胞术检测各组神经元和星形胶质细胞中CDK4的表达。结果:缺血侧皮质星形胶质细胞和神经元中的CDK4的表达在再灌注7d、14d后表达上调,与假手术组比较有差异(P<0.05);大脑皮质神经元和星形胶质细胞的比较发现,神经元中的CDK4在假手术组、再灌注7d组的表达水平高于星形胶质细胞(P<0.05)。结论:脑缺血后,缺血侧皮质区星形胶质细胞和神经元的CDK4表达上调。     

脐血间充质干细胞移植对脑梗死大鼠脑内NGF、BDNF表达的影响

目的观察脐血间充质干细胞（UCBMSCs）对脑梗死大鼠脑内NGF、BDNF表达及神经功能的影响。方法实验分假手术组、对照组、移植组,采用颈内动脉线栓法制作脑梗死大鼠模型,移植组于成模后1d、4d经尾静脉移植2×10^6UCBMSCs,假手术组和对照组尾静脉注射等量PBS,移植后7d、14d进行神经功能评分,3d、7d、14d免疫组织化学法分别计数梗死灶周边区域NGF、BDNF表达阳性细胞数。结果移植后3d对照组、移植组脑内NGF、BDNF表达阳性细胞数明显高于假手术组,移植组明显高于对照组,7d、14d逐渐下降,14d时两组比较元明显差别,大鼠神经功能较对照组改善不明显。结论脑梗死后早期移植UcBMSCs促进脑内神经营养因子的表达,但神经功能修复作用有限。     

“形神共养”对MCAO大鼠学习记忆能力及BDNF表达的影响

目的:探讨"形神共养"的丰富生存环境对大脑中动脉阻塞(MCAO)大鼠学习记忆能力以及抗大鼠脑源性神经营养因子(BDNF)表达的影响。方法:将50只SD雄性大鼠随机分为缺血"形养"组(IE1)、缺血"神养"组(IE2)、缺血"形神共养"组(IE3)、缺血标准环境组(IS)、假手术标准环境组(SS),每组10只。缺血组进行右侧大脑中动脉阻断及再灌注手术。术后进行为期4周的"形神共养"干预,干预后进行水迷宫实验,实验结束后用免疫组织化学染色观察脑梗死周边皮质及海马齿状回区BDNF的表达。结果:在水迷宫空间探索实验中,大鼠的逃避潜伏期逐渐缩短,训练第5天时,IE1、IE3组逃避潜伏期均比IS组短(均P0.05),且IE1、IE3组与SS组之间无显著性差异;IE1、IE2、IE3组大鼠对原平台的记忆均比IS好。IE1、IE3组梗死灶周围皮质BDNF蛋白的表达比IS组高;在缺血侧海马DG部位,IE1、IE2、IE3组BDNF蛋白的表达均比IS、SS组高(均P0.05)。结论:"形神共养"的丰富生存环境有利于促进局灶性脑缺血再灌注大鼠学习记忆能力的恢复;有利于促进局灶性脑缺血再灌注大鼠梗死周边皮质和海马齿状回区BDNF的表达,从而促进脑缺血大鼠功能的恢复。     

依达拉奉对脑缺血大鼠内源性神经干细胞的影响

背景：依达拉奉（MCI-186）是一种新型自由基清除剂,已证实其能减轻急性脑梗死后的脑组织水肿、具有神经保护作用。目的：探讨自由基清除剂MCI-186对大鼠缺血脑组织内源性神经干细胞的作用。方法：Longa法构建SD大鼠大脑中动脉缺血2h再灌注模型,分两组在动脉阻塞后立即开始予MCI-186或磷酸盐缓冲液治疗,在术后1,3d和7d,动态测定缺血周边脑组织丙二醛的含量以及脑源性神经生长因子蛋白和mRNA的表达,以及缺血脑区域Nestin阳性细胞Caspase-3阳性细胞表达,同时进行神经功能测定。结果与结论：与假手术组相比,磷酸盐缓冲液组脑组织丙二醛水平明显升高,MCI-186治疗后明显降低（P均〈0.01）;磷酸盐缓冲液组缺血后1d,MCI-186组缺血后1,3d脑源性神经生长因子mRNA和蛋白的表达明显升高（P〈0.01）。缺血后3d和7dMCI-186组Nestin阳性细胞明显高于磷酸盐缓冲液组（P〈0.05）,Caspase-3阳性细胞显著低于磷酸盐缓冲液组（P〈0.05）。缺血后7dMCI-186组神经功能明显优于磷酸盐缓冲液组。结果提示,MCI-186能抑制脂质过氧化,增加缺血脑组织的脑源性神经生长因子分泌,保护神经干细胞,减少细胞凋亡。     

牛磺酸对局灶性脑缺血大鼠神经干细胞巢蛋白表达的影响

【目的】研究牛磺酸治疗对成年大鼠脑缺血后缺血侧神经干细胞巢蛋白(nestin)表达的影响,探讨牛磺酸治疗缺血性脑损伤的作用机制。【方法】采用开颅热凝闭法制作大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,随机分为正常组、假手术组、模型组与牛磺酸组,采用腹腔注射每天给予牛磺酸,采用巢蛋白免疫组化法观察脑缺血后3d,7d,14d与21d四个不同时相巢蛋白表达阳性细胞的数量。【结果】脑缺血后不同时相缺血侧皮质、海马齿状回和纹状体均有巢蛋白表达阳性细胞,其中7d时各区的阳性细胞数量明显增加(均P<0.05);而牛磺酸组在不同时相的巢蛋白阳性细胞数量均较同时相模型组有明显的增加(P<0.05)。【结论】牛磺酸可促进缺血后相关脑区巢蛋白阳性细胞数量的增加,提示这种作用可能是牛磺酸治疗脑缺血的重要作用机制之一。     

促红细胞生成素对心肺复苏后大鼠海马神经元NGF、BDNF表达的影响

目的观察促红细胞生成素（EPO）对心肺复苏后大鼠海马神经生长因子（NGF）、脑源性神经营养因子（BDNF）表达的影响。方法采用窒息法制作大鼠呼吸心跳骤停模型,然后行心肺复苏术（CPR）。雄性Wistar大鼠60只,随机分3组：手术对照组（A组）、心肺复苏组（B组）、心肺复苏＋EPO（C组）。应用免疫组化法观察各组大鼠复苏后12 h海马神经元凋亡细胞、NGF及BDNF表达情况。结果与对照组（A组）相比心肺复苏组（B组）大鼠海马神经元NGF、BDNF表达明显降低（P〈0.05）,凋亡细胞明显增加（P〈0.01）;心肺复苏＋EPO（C组）NGF、BDNF表达明显增加,高于B组和A组（P〈0.01）,凋亡细胞明显降低（P〈0.05）,低于B组。结论 EPO能促进神经元NGF、BDNF的表达,减少神经细胞凋亡,对缺血、缺氧性神经元损伤有保护作用。     

电针对局灶性脑缺血大鼠神经干细胞巢蛋白表达的影响

目的研究电针治疗对成年大鼠脑缺血后缺血侧神经干细胞巢蛋白（nestin）表达的影响,探讨电针治疗缺血性脑损伤的作用机制。方法采用开颅热凝闭法制作大脑中动脉阻塞（MCAO）模型,随机分为模型组与电针组,针刺“大椎”、“百会”,并行电针干预,采用巢蛋白免疫组化法观察脑缺血后3,7,14与21d四个不同时相巢蛋白表达阳性细胞的数量。结果脑缺血后不同时相缺血侧皮质、海马齿状回和纹状体均有巢蛋白表达阳性细胞,其中7d时的阳性细胞数量明显增加（皮质：P〈0．05,海马：P〈0．01。纹状体：P〈0．01）;而电针组在不同时相的巢蛋白阳性细胞数量均较同时相模型组有明显的增加（P〈0．05或P〈0．01）。结论电针可促进缺血后相关脑区巢蛋白阳性细胞数量的增加,提示这种作用可能是电针治疗脑缺血的重要作用机制之一。     

神经生长因子预处理对沙土鼠全脑缺血/再灌注损伤脑神经细胞凋亡及Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的探讨神经生长因子(NGF)预处理对沙土鼠全脑缺血/再灌注(I/R)损伤的脑保护作用的可能机制及最佳给药时间窗。方法采用夹闭沙土鼠双侧颈总动脉造成全脑I/R损伤模型。采用NGF侧脑室注射法进行预处理。沙土鼠30只随机分为5组,每组6只:假手术组(A组)、I/R损伤组(B组)、NGF预处理12、24和48h组(C、D、E组),除A组外各组分别于脑缺血20min、再灌注72h后处死取标本。用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)检测沙土鼠全脑I/R损伤后脑皮质及海马CA1区凋亡神经细胞,用免疫组化法检测凋亡相关调控基因Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果与B组比较,NGF预处理各组可显著减少沙土鼠全脑I/R损伤后脑皮质及海马CA1区神经细胞凋亡数目(P均<0.05),诱导Bcl-2蛋白及抑制Bax蛋白的表达(P均<0.05),其中以NGF预处理48h时脑皮质及海马CA1区细胞凋亡指数和Bax蛋白表达的阳性细胞指数最低,Bcl-2蛋白表达的阳性细胞指数最高。结论NGF预处理能明显减轻沙土鼠全脑I/R损伤引起的神经细胞凋亡,而以NGF预处理48h对脑保护效果最好;其抑制神经细胞凋亡的机制可能是通过调节凋亡相关调控基因Bcl-2及Bax的不同表达来发挥作用。