丙型肝炎病毒抗体（双抗原夹心）与HCV-IgM检测试剂性能对比研究

[目的]对研制的丙型肝炎病毒抗体（双抗原夹心）与HCV—IgM检测试剂进行对比，探门丙型肝炎病毒感染早期诊断意义。[方法]收集早期丙型肝炎病毒感染的样品43份，慢性丙肝患者27份，应用建立的丙型肝炎病毒抗体（双抗原夹心）及HCV—IgM检测试剂同时对比检测。[结果]建立的丙型肝炎病毒抗体（双抗原夹心）检测试剂与HCV—IgM对早期丙型肝炎病毒感染样品及慢性患者检出符合率均为100％，而间接抗HCV检测试剂在早期感染样品有1份检测阴性。[结论]建立的丙型肝炎病毒抗体（双抗原夹心）可同时检测抗HCV-IgG和IgM，抗HCVIgM在早期检测的抗体滴度高于慢性感染者。     

双抗原夹心酶联免疫技术检测丙型肝炎病毒抗体

1993年3月，国家卫生部下发文件要求对献血员进行抗HCV抗体的检测，随后有10几家检测HCV抗体的ELISA试剂上市，并进行批批检定，但全是间接ELISA法。由于间接法技术自身的缺陷及各生产厂家的产品存在一定的质量问题，导致了一些误诊和漏检。为此，应从根本上解决试剂本身的质量问题，建立双抗原夹心ELISA技术检测抗HCV抗体可大大提高检测试剂的特异性和敏感性。目前双抗原夹心法大多用于检测抗HIV和Tp抗体。此类试剂的敏感性和特异性均优于标记抗人免疫球蛋白的间接法。而丙型肝炎病毒抗体的检测仍采用间接ELISA技术，目前已有快速金标试剂采用双抗原夹心法原理，通过免疫层析检测抗HCV抗体。但灵敏度较低，不能用于献血员的筛选。我们通过对基因工程抗原进行改造，以适应标记辣根过氧化物酶，建立双抗原夹心ELISA法检测抗HCV抗体。     

双抗原夹心酶联免疫吸附试验对丙型肝炎病毒抗体检测灵敏度及特异性的影响

目的:探究双抗原夹心酶联免疫吸附试验对丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)检测灵敏度及特异性的影响。方法:选取2016年5月~2017年4月我院进行手术和血液透析前抗-HCV检测的患者270例,经血液筛查(荧光定量PCR法)抗-HCV阳性12例,抗-HCV阴性258例,采用双抗原夹心酶联免疫吸附法(ELISA)和间接ELISA分别对270例患者血清进行抗-HCV检测,比较两种检测方法的特异性、灵敏度。结果:双抗原夹心ELISA法灵敏度、特异性均高于间接ELISA法(P<0.05)。结论:双抗原夹心酶联免疫吸附试验可提高丙型肝炎病毒抗体检测灵敏度及特异性,可作为临床血液标本筛查首选方法。     

双抗原夹心ELISA检测抗HCV总抗体

目的建立检测抗HCV抗体的双抗原夹心ELISA法,评价其可行性。方法将与His或GST融合表达的HCV基因工程抗原,分别用作ELISA的包被和酶标记抗原,建立用于抗HCV总抗体检测的双抗原夹心ELISA。用此方法检测1 968份临床血清标本,并以间接ELISA(北京万泰试剂)与之对照;此外,用套式RT-PCR检测部分血清的HCV RNA。结果有1 761份血清2种ELISA检测均为阴性,有190份血清均为阳性,两种方法符合率为99.1%;有17份血清的检测结果不相符,间接法阳性而本法阴性的14份,其中HCV RT-PCR阳性1份;本法阳性而间接ELISA阴性的3份,其中RT-PCR阳性2份。双抗原夹心ELISA与间接ELISA的敏感性分别为99.48%、98.96%,特异性分别为99.94%、99.27%。结论新研制的检测抗HCV总抗体的双抗原夹心ELISA具有较高的敏感性和特异性,值得作进一步的深入研究。     

丙型肝炎病毒抗体检测试剂在高危人群中的应用评价

目的 对研制的丙型肝炎病毒（HCV）抗体检测试剂（双抗原夹心法）在高危人群中的应用进行评价，并与间接法进行比较。方法 收集河北省固安县丙型肝炎高发地区A村38份、B村47份，共85份样品，采用研制的抗-HCV检测试剂（双抗原夹心法）及间接法同时测定样品抗-HCV，对检测结果不符的样品用HCV-RIBA补充试剂进行确认。结果 85份样品中，间接法检测阳性76份（89．41％），阴性9份；双抗原夹心法检出阳性73份（85．88％），阴性12份。有3份间接法检测弱阳性，而双抗原夹心法检测为阴性，经HCV-RIBA补充试剂确认2份为阴性，1份仅1条带阳性，再经病毒核酸定量检测为（1．2～4．8）×10^2copies／ml，HCVRNA测定为阴性。结论 研制的双抗原夹心法抗-HCV检测试剂的灵敏度与间接法相同，特异性优于间接法。     

3种酶联免疫吸附试验试剂检测丙型肝炎抗体结果分析

目的：通过对国产3种丙型肝炎病毒（HCV）抗体检测试剂盒间接法和夹心法检测的结果比较,分析评价双抗原夹心法试剂的性能。方法设计不同的试验方法,用3种试剂对收集的阳性和阴性标本进行丙型肝炎病毒抗体检测,对单试剂和双试剂呈阳性反应的标本同时进行第三组重组免疫印迹试验（RIBA）和核酸检测;另外,用已知浓度的质控物倍比稀释后,用3种试剂平行检测。对得到的所有检测结果进行比对,综合分析。结果与确证试剂相比,2种间接法试剂和1种夹心法试剂的假阳率分别为42.2％、57.8％和1.6％,阳性检出率均为100％,但夹心法的分析灵敏度比间接法高1～4倍。结论夹心法 ELISA 检测试剂在灵敏度、特异性方面优于间接法 ELISA 检测试剂。     

人可溶性补体受体1型双抗体夹心ELISA法的建立及初步应用

摘要：目的：建立定量检测人血清可溶性补体受体1型（sCR1）双抗体ELISA夹心法。 方法：用鼠抗人CD35单克隆抗体(mAb)包被反应板,以兔抗人sCR1抗体（PcAb）为夹心抗体,辣根过氧化物酶（HRP）标记的山羊抗兔IgG为检测抗体,纯化后的人sCR1蛋白为标准品,建立定量检测人血清sCR1双抗体夹心ELISA法,并检测50例体检健康者和32例肝硬化患者血清样本中sCR1水平。 结果：建立的双抗体夹心ELISA法检测人血清sCR1的线性范围为15.6～250 ng/mL。低、高浓度批内变异系数（CV）分别为9.3％、7.1％;批间CV分别为11.2％和9.82％;回收率分别为89.5％和92.5％。50例健康人和32例肝硬化患者血清sCR1水平分别为（33.82±5.88） ng/mL和（152.99±9.51） ng/mL,两者比较有统计学差异（t=70.18, P＜0.001）。 结论：成功建立了检测人血清sCR1的双抗体夹心ELISA法,重复性和准确性较好。初步发现肝硬化患者血清sCR1水平显著升高。     

丙型肝炎病毒抗体快速诊断试剂盒的研制

[目的]研制一种丙型肝炎病毒（HCV）抗体快速诊断试剂盒，并达到临床诊断要求。[方法]采用免疫胶体金技术双抗原夹心法研制试剂盒，并进行性能分析。[结果]该试剂盒通过HCV抗体国家参考品检测。对比检测达到或超过ELISA试剂的质量，预期稳定性为18个月以上。经1180例临床样本试验相对于ELISA试剂灵敏度为100％，特异性为99．1％。[结论]研制出了高质量的丙型肝炎病毒抗体快速诊断试剂盒，达到临床诊断要求。关     

人血清微量sCR1蛋白双抗体夹心ELISA试剂盒的评价与应用

目的对研制的人血清微量sCR1蛋白双抗体夹心ELISA试剂盒的重复性、稳定性进行评价,并了解其实际应用效果。方法选取中、晚期肝硬化患者50例和健康体检者50例分别作为肝病组和正常对照组,以鼠抗人CD35单克隆抗体、兔抗人sCR1多克隆抗体和辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔IgG为包被抗体、夹心抗体和检测抗体,以纯化后的重组人sCR1蛋白为标准品,建立人血清微量sCR1蛋白双抗体夹心ELISA试剂盒,进行试剂盒重复性和稳定性检验,并应用该试剂盒检测两组血清sCR1蛋白水平。结果双抗体夹心ELISA法检测人血清微量sCR1蛋白的线性范围是15.60~250.00ng/mL;血清sCR1蛋白水平对吸光度值的回归方程为Y=112.10 X2+18.21 X+1.694(r2=0.998);重复性检测中,高、低水平标准品检测值的批内相对标准偏差(RSD)分别为6.20%、7.40%,批间RSD分别为6.70%和7.90%;试剂盒稳定性检测中,RSD均不大于0.01;肝病组血清sCR1表达水平显著高于正常对照组(P0.01)。结论人血清微量sCR1蛋白双抗体夹心ELISA试剂盒线性范围广、重复性好、易于保存,适合于临床和科研检测工作。     

双抗原夹心ELISA法检测抗念珠菌烯醇化酶抗体

目的建立检测抗念珠菌烯醇化酶(Eno)特异性抗体的双抗原夹心ELISA法,并进行临床应用评价。方法用基因工程制备的重组Eno作为包被抗原和酶标抗原,通过棋盘滴定法对双抗原夹心ELISA法的反应条件进行优化,对方法的敏感性、特异性和精密度进行考察。用双抗原夹心ELISA法测定291例住院患者(侵袭性念珠菌病114例,念珠菌定植82例,细菌感染患者95例)以及200名健康人血清,并与本实验室前期自建的间接ELISA法检测抗Eno抗体的结果进行比较。结果双抗原夹心ELISA法工作条件为:Eno抗原包被浓度为0.5μg/m L,酶标抗原1∶4 000稀释;封闭液为含50 g/L脱脂奶粉的PBS-T,待测血清稀释度为1∶100。患者血清检测结果显示,批内变异系数(CV)分别为6.8%、7.4%和5.9%;不同批次重复测定15次,其批间CV分别为10.1%、9.6%和12.4%。重组抗原对血清中相应抗体的阻断率为92.2%。通过ROC曲线确定cut off值吸光度(A)为0.209。检测侵袭性念珠菌病(invasive candidiasis,IC)的敏感性和特异性分别为81.6%(93/114)和94.4%(356/377),敏感性高于检测抗Eno抗体的间接ELISA法(81.6%vs 76.1%)。结论建立了双抗原夹心ELISA法检测抗念珠菌Eno特异性抗体,可提高IC的诊断率,具有临床应用价值。