3-氨基苯硼酸联合乙二胺四乙酸碳青霉烯酶抑制增强试验检测肠杆菌目细菌产碳青霉烯酶的研究

目的 了解3-氨基苯硼酸(PBA)联合乙二胺四乙酸(EDTA)碳青霉烯酶抑制剂增强试验(PBA-EDTA法)用于检测肠杆菌目细菌产碳青霉烯酶的检测结果.方法 使用PBA-EDTA法测定275株经金标准PCR及DNA测序已明确为产碳青霉烯酶肠杆菌目细菌产碳青霉烯酶结果的符合率,并与CLSI推荐的mCIM联合eCIM改良碳...     

肠杆菌科细菌碳青霉烯酶耐药基因分析

目的研究耐碳青霉烯类抗生素的肠杆菌科细菌所产碳青霉烯酶的型别及其流行情况。方法收集重庆医科大学附属第一医院2009年11月～2010年4月临床分离的肠杆菌科细菌,用Vitek 2 Compact进行细菌鉴定、药敏试验,从中筛选出11株对碳青霉烯类抗生素耐药或中介的菌株。PCR检测blaKPC、blaIMP、blaVIM基因,阳性结果用DNA测序和BLAST比对确定基因型。结果 11株对碳青霉烯类抗生素耐药或中介的菌株均为多重耐药,除1株来自眼科外均来自ICU。PCR结果3株肺炎克雷伯菌和3株阴沟肠杆菌携带blaIMP,DNA测序比对均为blaIMP-8,未扩出blaKPC、blaVIM基因条带。结论本次筛检的11株肠杆菌科细菌产碳青霉烯酶的主要型别IMP-8,且已在外科ICU中局部流行。     

佛山市中医院耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌的产酶型别及耐药性分析

目的 了解佛山市中医院耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌(CRE)的产酶类别、对头孢他啶/阿维巴坦(CZA)等常用抗菌药物的耐药性,以及CZA与美罗培南(MEM)、氨曲南(ATM)的联合作用,为临床合理用药提供依据。方法 收集佛山市中医院2020年1月1日至2022年3月1日临床分离的CRE 95株,对临床常用抗菌药物的耐药性进行回顾性分析,用改良碳青霉烯灭活试验(mCIM试验)联合乙二胺四乙酸改良碳青霉烯灭活试验(eCIM试验)与胶体金免疫层析技术2种方法检测碳青霉烯酶,采用纸片扩散法检测CZA同MEM、ATM的联合药敏试验。结果 95株CRE中,mCIM试验阳性菌株93株(97.9%),不产酶2株(2.1%);eCIM试验阳性菌株49株(51.6%)。93株产酶CRE菌株中产丝氨酸酶44株(47.3%),产金属β-内酰胺酶49株(52.7%)。胶体金免疫层析法检测6个基因型结果除了1株不是KPC基因型外,其他与mCIM和eCIM表型结果一致。44株产丝氨酸酶菌株的敏感率为97.7%,49株产金属β-内酰胺酶菌株的敏感率为0.0%。35株携带KPC基因型肺炎克雷伯菌中有33株CZA和MEM、C...     

碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌耐药性及耐药基因分析

目的 探讨医院碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌(CRE)的临床耐药性及耐药表型和基因型,为医院CRE菌株感染的临床治疗及医院感染暴发的预防和控制提供科学依据。方法 收集2020年7月至2023年1月日照市中医医院临床患者标本中分离的77株CRE菌株,采用全自动微生物分析仪进行细菌鉴定和药敏试验,采用改良碳青霉烯酶灭活试验(mCIM)和乙二胺四乙酸(EDTA)改良碳青霉烯酶灭活试验(eCIM)联合检测碳青霉烯酶表型,采用聚合酶链反应(PCR)扩增耐药基因并进行测序分型。结果 77株CRE菌株主要分离自痰液,其次是尿液、胸腔积液;科室来源主要是颅脑外科、重症医学科、脑卒中监护室。CRE菌株中肺炎克雷伯菌33株,大肠埃希菌15株,阴沟肠杆菌12株,其他细菌17株。CRE菌株对替加环素敏感性为97.4%,阿米卡星为44.2%,复方磺胺甲噁唑为39.0%,对其他抗菌药物的敏感性均低于20.0%。mCIM筛选碳青霉烯酶菌株的灵敏度为95.9%,特异度为100.0%。PCR扩增结果显示49株CRE菌株携带NDM基因,24株CRE菌株携带KPC基因,1株CRE菌株携带IMP基因,3株未检出碳青霉烯酶基因;基...     

耐碳青霉烯酶肠杆菌科细菌血流感染的基因分析

目的探讨血流感染中临床分离的耐碳青霉烯酶肠杆菌科细菌相关耐药基因及临床药物敏感性,为血流感染临床治疗和医院内感染控制提供依据。方法收集2016年1-12月南京医科大学第一附属医院血流感染分离的16株耐碳青霉烯酶肠杆菌科细菌,采用改良碳青霉烯酶检测试验(改良Hodge试验)检测碳青霉烯酶表型,采用PCR法检测碳青霉烯酶基因,采用微量肉汤稀释法测定最低抑菌浓度(MIC)。结果 16株临床分离菌株中,12株为肺炎克雷伯菌,4株为大肠埃希菌。改良Hodge试验阳性率为87.50%(14/16)。全部菌株均携带肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶(KPC-2)基因。全部菌株对亚胺培南、美罗培南、氨曲南耐药率为100.00%,对多黏菌素,替加环素灵敏度为100.00%。结论本次分离的肠杆菌科细菌所产碳青霉烯酶的基因型均为KPC-2,对于耐碳青霉烯酶的肠杆菌科细菌感染治疗可以应用替加环素和(或)多黏菌素联合其他药物联合治疗。临床医护人员应该加强耐碳青霉烯酶肠杆菌科细菌的感染控制监测,控制其在院内传播。     

碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌检测及鉴定现状

碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌(CRE)感染在国内迅速蔓延,临床实验室及时检测CRE对院感防控至关重要.产生碳青霉烯酶是CRE主要的耐药机制.目前CRE实验室检测包括表型和基因型方法.表型方法通过碳青霉烯酶对碳青霉烯类药物的水解作用或抑制剂对酶的抑制作用来检测其活性,或通过添加底物筛选出CRE有色菌落.基因型方法主要包括靶...     

可疑产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌的耐药基因研究

目的 分析临床分离的可疑产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌所携带的耐药基因.方法 采用全自动细菌鉴定仪进行药敏试验,用改良Hodge试验进行碳青霉烯酶筛选,用纸片扩散试验进行ESBLs表型检查,用头孢西丁三维试验进行AmpC β-内酰胺酶的表型检查,用聚合酶链反应检测β内酰胺酶基因、外膜蛋白（OmpK35和OmpK36）编码基因、转座子tpuA和tpuU基因,并进行产物测序.结果 ①62株可疑产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌对厄他培南和氨苄西林100％耐药,对氨苄西林/舒巴坦、头孢唑啉、头孢他啶、头孢曲松、氨曲南的耐药率达87％以上,对亚胺培南、美洛培南、丁胺卡那霉素耐药率为35％以下;②β内酰胺酶的总检出率为75.81％,主要由同时产ESBLs和AmpC引起,检出率为33.87％,其次为单产ESBLs引起,检出率为30.65％;③检出KPC,DHA,CIT,TEM,CTX M,SHV和NDM1β内酰胺酶基因的阳性率分别为8.06％,14.51％,24.19％,25.81％,27.42％,40.32％和6.45％; Ompk35,Ompk36基因缺失率为38.70％和62.90％;tnpA和tnpU检出率分别为11.29％和32.25％.结论 产碳青霉烯酶并非菌株耐碳青霉烯类药物的主要原因,可能由产ESBLs或AmpC酶引起,合并外膜蛋白缺失,尚存在其它降低碳青霉烯类敏感性的耐药机制.     

碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌的感染现状和防治策略

碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌(carbapenem-resistant Enterobacteriaceae, CRE)引发的感染,多发生在有严重基础疾病和(或)免疫功能缺陷患者,治疗可选药物有限,因而病死率高。CRE对碳青霉烯类抗菌药物产生耐药的主要机制是产碳青霉烯酶,通过水解包括碳青霉烯类在内的绝大部分β内酰胺类抗菌药物产生耐药性,导致多药耐药(multi-drug resistant, MDR)、泛耐药(X drug resistance, XDR),甚至全耐药(pan-drug resistant, PDR)菌株的产生。最常见的碳青霉烯酶包括肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶(Klebsiella pneumoniae carbapenemase, KPC)、金属β内酰胺酶(metalβlactamase, MBL)和苯唑西林酶(oxacillinase, OXA-48)等。近年来,CRE感染的发生率呈上升趋势,加上耐药机制的复杂化,给临床医生带来巨大挑战。本文就CRE感染的流行病学、耐药机制和防治策略进行综述。     

某院2017-2018年耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌检测及分析

目的 了解该院2017-2018年耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(CRE)的分布、耐药情况及常见耐药基因.方法 收集该院2017-2018年临床标本分离到的全部肠杆菌科细菌非重复菌株,采用全自动细菌鉴定药敏仪进行细菌鉴定和药敏试验,并进行药敏结果分析.使用PCR扩增检测菌株携带的常见碳青霉烯酶基因.结果 2017年和2018...     

肠杆菌科细菌产碳青霉烯酶的研究进展

<正>碳青霉烯类抗菌药物是抗菌谱广、抗菌活性强、杀菌作用快的β-内酰胺类药物,其良好的细胞通透性、高度的酶稳定性及较低的毒性等特点已成为目前临床治疗严重细菌感染最主要的抗菌药物之一,但是随着碳青霉烯类抗菌药物耐药的肠杆菌科细菌的出现及不断的增多,该类药物的临床应用受到了严峻的挑战。肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗菌药物耐药的主要机制是产碳青霉烯酶。因此,快速、准确地检测产碳青霉烯酶的肠杆菌科细菌,对于预防和控制产酶菌株的传播具有重要意     

耐碳青霉烯类抗生素不动杆菌的β内酰胺酶研究

目的了解不动杆菌属细菌对碳青霉烯类药物的耐药机制,耐药菌株的基因同源性和传播机制。方法采用改良Hodge试验和乙二胺四乙酸(EDTA)协同试验筛选耐亚胺培南不动杆菌碳青霉烯酶,等电聚焦电泳(IEF)测定产β内酰胺酶等电点,blaTEM,blaSHV,blaCTX-M-Ga-Gc,blaPER-1,blaOXA-23,blaMBL等,引物的PCR进行β内酰胺酶的基因分型,并对PCR产物进行测序;Southern印迹进行苯唑西林酶OXA-23的基因定位脉冲场电泳(PFGE)研究耐亚胺培南不动杆菌同源性。结果6株耐碳青霉烯类不动杆菌均产OXA-23型酶,其中5株同时产PER-1型ESBLs。6株菌blaOXA-23均定位于染色体。3株琼氏不动杆菌属于同一PFGE分型,3株鲍曼不动杆菌分别属于2种PFGE分型。结论产OXA-23型碳青霉烯酶是导致不动杆菌对碳青霉烯类药物耐药的重要原因,同时存在blaOXA-23的克隆传播。     

Apolipoprotein e genotyping methods for the clinical laboratory

To select the best method for detecting apolipoprotein E (apo E) genotypes determined by the three common alleles ?2, ?3 and ?4, we compared the radiolabeled allele-specific oligonucleotide (ASO) probe assay and the nonisotopic restriction isotyping assay. Leukocytic DNA was extracted from the blood of 93 patients after which the region containing two mutation points coding amino acid residues 112 and 158 was amplified by using the polymerase chain reaction (PCR). Amplified DNA fragments were spotted on nylon membranes, then hybridized for the ASO probe assay. The amplified DNA fragments were also digested with restriction endonuclease HhaI, followed by polyacrylamide gel electrophoresis for the restriction isotyping assay. The apo E genotypes determined by both methods for every specimen studied were in complete agreement. Although the radiolabeled ASO probe method was 10 times more sensitive than restriction isotyping on polyacrylamide gel, the two were comparable in accuracy. Additionally, because it is simpler to perform, is less time consuming, and is less expensive, we conclude that the restriction isotyping assay is the more suitable of these two methods for use in a clinical laboratory.©1995 wiley-Liss, inc.     

Clinical laboratory detection of carbapenem-resistant and carbapenemase-producing Enterobacteriaceae

Introduction: Carbapenemases, enzymes that hydrolyze carbapenem-class antimicrobials, pose serious clinical and diagnostic challenges, including their recent rapid spread among members of the Enterobacteriaceae, a family with no inherent carbapenem resistance. Currently there is no one-size-fits-all method for detecting carbapenem-resistant Enterobacteriaceae (CRE) in the laboratory, nor how to differentiate carbapenemase-producers (CP) from isolates that are carbapenem-resistant via other or combined mechanisms.

Areas covered: This article reviews definitions for CRE and CP-CRE, and discusses current phenotypic and molecular methods available to the clinical laboratory for the detection of both CP and non-CP CRE.

Expert commentary: Routine evaluation of carbapenem resistance mechanism by the routine clinical laboratory are not necessary for patient care, as clinical breakpoints best predict response. However, evaluation for carbapenemase is integral to infection control efforts, and laboratories should have the capacity to do such testing, either in house or by submitting isolates to a reference laboratory.     

一例碳青霉烯类抗菌药物耐药的肺炎克雷伯菌耐药机制研究

目的研究1株碳青霉烯类抗菌药物耐药的肺炎克雷伯菌A1500的耐药机制。方法采用浓度梯度法（E-test）测定细菌的抗菌药物最低抑菌浓度（MIC）,采用接合实验、聚合酶链反应（PCR）、质粒抽提、探针杂交印迹试验（Southern blot）、等电聚焦电泳及耐药基因克隆测序分析细菌的耐药机制。结果接合实验、质粒电泳和Southern blot结果显示耐药基因位于一个50 kb的可转移质粒上;等电聚焦电泳显示3条β-内酰胺酶条带,等电点（PI）分别为9.0、6.7（KPC-2）、5.4。PCR产物克隆分析比对为blaKPC-2型。结论碳青霉烯类抗菌药物耐药的肺炎克雷伯菌A1500携带由质粒介导的KPC-2酶。     

碳青霉烯类抗生素耐药鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶基因型研究

目的了解临床分离的耐碳青霉烯类抗生素鲍曼不动杆菌的耐药情况以及碳青霉烯酶的基因型。方法收集21株耐碳青霉烯类抗生素鲍曼不动杆菌,采用纸片扩散法（K—B法）进行药敏试验,PCR方法检测碳青霉烯酶基因型。结果21株碳青霉烯类抗生素耐药鲍曼不动杆菌对阿米卡星、左氧氟沙星和氨曲南的耐药率分别为35．7％、42．9％和78．6％,对其余抗菌药物耐药率均高达92．9％～100％。21株中检出OXA-23基因阳性17株（80．9％）,OXA-51基因阳性15株（71．4N）,OXA-58基因阳性2株（9．5％）。12株（57．1％）含OXA-23＋OXA-51基因,1株（4．8％）含OXA-23＋0XA-51＋OXA～58基因。上述菌株中均未检出OXA-24、IMP和VIM耐药基因。结论碳青霉烯类抗生素耐药鲍曼不动杆菌多重耐药情况严重,碳青霉烯酶基因型OXA-23和OXA-51携带率高,且以OXA-23＋OXA-512种基因型同时存在为主。     

一例碳青霉烯类抗菌药物耐药的肺炎克雷伯菌耐药机制研究

目的研究1株碳青霉烯类抗菌药物耐药的肺炎克雷伯菌A1500的耐药机制。方法采用浓度梯度法(E-test)测定细菌的抗菌药物最低抑菌浓度(MIC),采用接合实验、聚合酶链反应(PCR)、质粒抽提、探针杂交印迹试验(Southern blot)、等电聚焦电泳及耐药基因克隆测序分析细菌的耐药机制。结果接合实验、质粒电泳和Southern blot结果显示耐药基因位于一个50 kb的可转移质粒上;等电聚焦电泳显示3条β-内酰胺酶条带,等电点(PI)分别为9.0、6.7(KPC-2)、5.4。PCR产物克隆分析比对为blaKPC-2型。结论碳青霉烯类抗菌药物耐药的肺炎克雷伯菌A1500携带由质粒介导的KPC-2酶。     

两种检测阴沟肠杆菌AmpC酶方法的比较

目的 建立一种新的简便易行的AmpC酶的表型筛选方法并对其进行评价。方法 采用表型筛选和三维试验，对144株阴沟肠杆菌进行AmpC酶检测，对检测结果进行比较，并检测部分菌株的等电点和ampD基因。结果 144株阴沟肠杆菌表型筛选结果显示高产AmpC酶的菌株共有35株，占24.31%（35／144）。表型筛选与三维试验相比总符合率为89.58%(129/144)。2种方法检测结果相反的5株菌，其中4株 等电点条带均不能被氯唑西林抑制，另1株菌株等电点检测有5条带（其中2条被氯唑西林抑制)。3株ampD基因阳性菌株测序结果显示均存在71，72，75位氨基酸发生改变，其中有2株还存在101位氨基酸改变。结论 表型筛选法检测AmpC酶结果可靠、方法简易，易于在临床实验室中推广应用。     

Activity of JNJ-Q2, a novel fluoroquinolone, tested against Neisseria gonorrhoeae, including ciprofloxacin-resistant strains

Fifteen isolates with reduced susceptibility to meropenem were obtained from hospital sewage. They contained bla(KPC-2) and belonged to multiple clones of Citrobacter freundii or Enterobacter cloacae. bla(KPC-2) was commonly carried by self-transmissible plasmids with different EcoRI-restricted patterns. Tn2 was identified upstream of bla(KPC-2), while ISKpn6 lay downstream. Hospital sewage could be an important reservoir of bla(KPC-2) and warrants more studies.     

3种基因分型方法在鲍曼不动杆菌中的应用评价

目的比较3种基因分型方法在鲍曼不动杆菌中的应用。方法采用琼脂稀释法检测重症监护室(ICU)分离的30株鲍曼不动杆菌的最小抑菌浓度(MIC);分别以肠杆菌科基因间重复一致性序列(ERIC)、基因外回文重复序列(REP)及随机多态性核苷酸序列(RAPD)为引物进行PCR扩增,利用电泳指纹图谱进行基因分型,并进行聚类分析。结果 30株鲍曼不动杆菌仅对头孢哌酮/舒巴坦有较低的耐药率;ERIC-PCR基因分型法的扩增条带最为丰富,能扩增出4~7个条带,RAPD和REP-PCR扩增条带较少,分别扩增出1~5和1~4个条带;3种方法分别将30株鲍曼不动杆菌分为4、4、3个群。结论头孢哌酮/舒巴坦对于多重耐药鲍曼不动杆菌依然有较好的敏感性;本试验初步证实3种方法均可作为鲍曼不动杆菌基因分型的可选方法,ERIC-PCR较另外两种方法扩增条带更丰富,分辨率更好。