调强放射治疗对鼠骨包虫生发细胞周期及caspase-9的影响

目的探讨三维适形调强放疗(intensity-modulated radiation therapy, IMRT)的放射线对鼠骨包虫生发细胞的细胞周期及凋亡因子caspase-9的影响。方法骨包虫病子午沙鼠20只,将鼠骨包虫内囊中的生发细胞分离并进行体外培养,将体外培养成功的骨包虫生发细胞分为IMRT组和对照组。IMRT组给予总剂量为40 Gy的IMRT放疗,对照组给予假照射。放疗结束24 h后,采用流式细胞仪检测2组骨包虫生发细胞的细胞周期,采用ELISA法检测骨包虫生发细胞中凋亡相关蛋白caspase-9蛋白水平,采用实时荧光定量PCR法检测骨包虫生发细胞caspase-9 mRNA相对表达量。结果放疗结束24 h后,IMRT组骨包虫生发细胞S期细胞比率[(65.65±7.46)%]明显高于对照组[(32.49±4.23)%],G_0/G_1期[(32.37±4.94)%]和G_2/M期[(1.98±0.19)%]细胞比率明显低于对照组[(53.95±4.55)%、(13.55±2.48)%](P0.05)。IMRT组生发细胞caspase-9蛋白水平[(0.071±0.012)pmol/L]和caspase-9 mRNA相对表达量(30.21±6.99)明显高于对照组[(0.011±0.004)pmol/L、12.17±3.01](P0.05)。结论 IMRT可改变鼠骨包虫生发细胞的细胞周期,抑制生发细胞的增殖,可能是通过调节凋亡相关蛋白caspase-9水平而实现。     

三维适形调强放疗对鼠骨棘球蚴杀灭效果及Fas表达的影响

目的 探讨三维适形调强放疗(intensity modulated radiation therapy,IMRT)对子午沙鼠骨棘球蚴的杀灭效果及Fas表达影响。方法 股骨继发性棘球蚴病大鼠30只,对大鼠左侧股骨棘球蚴病区给予剂量40Gy的IMRT放疗,右侧股骨骨细粒棘球蚴病区仅给予假照射作为阴性对照。于放疗1周后取大鼠左、右股骨棘球蚴包囊行电镜观察,采用RT-PCR法定量检测骨棘球蚴包囊中凋亡相关基因Fas的表达情况。结果 放疗1周后,大鼠左侧股骨棘球蚴包囊可见大量变性坏死生发细胞,所有正常细胞形态消失,细胞核崩裂、固缩,可见凋亡小体;右侧股骨棘球蚴包囊细胞正常形态存在,胞质内细胞器形态完整,细胞核居中,无固缩;大鼠左侧股骨骨棘球蚴包囊细胞Fas表达水平(RQ值为12.44±3.74)明显高于右侧(RQ值为0.63±0.29),差异有统计学意义(P<0.05)。结论 IMRT可促进大鼠继发性骨棘球蚴包囊生发细胞凋亡,可能是通过调节凋亡相关蛋白Fas而实现。     

三维适形调强放疗对骨细粒棘球蚴原头节杀灭效果及葡萄糖-6-磷酸酶表达的影响

目的 探讨三维适形调强放疗(intensity modulated radiationtherapy,IMRT)对子午沙鼠骨细粒棘球蚴原头节的杀灭作用及其对葡萄糖-6-磷酸酶表达的抑制作用。方法 双股骨骨细粒棘球蚴病子午沙鼠40只,左侧股骨骨细粒棘球蚴病区给予总剂量为40Gy的IMRT放疗,右侧股骨骨细粒棘球蚴病区仅给予假照射作为阴性对照。于放疗结束1周后取鼠左、右侧股骨细粒棘球蚴原头节行伊红染色检测原头节坏死率,采用硝酸铅法检测葡萄糖-6-磷酸酶的活性变化。结果 IMRT作用1周后,可见子午沙鼠左侧股骨骨细粒棘球蚴原头节整体结构消失,出现深蓝着色;左侧股骨骨细粒棘球蚴原头节坏死率((71.26±21.85)%)高于右侧((5.93±5.77)%),差异有统计学意义(P<0.05);子午沙鼠左侧股骨骨细粒棘球蚴原头节的葡萄糖-6-磷酸酶活性较右侧明显减弱,葡萄糖-6-磷酸酶产物光密度值(0.271 2±0.104 2)明显低于右侧(0.642 9±0.398 5),差异有统计学意义(P<0.05)。结论 IMRT可促进鼠骨细粒棘球蚴原头节的死亡,其作用机制可能是通过改变葡萄糖-6-磷酸酶的活性而实现。     

高强度聚焦超声波对体外细粒棘球蚴生发细胞生长增殖的影响

目的了解高强度聚焦超声波(HIFU)体外抑制细粒棘球蚴生发细胞生长增殖的作用。方法观测不同辐照剂量的HIFU对生发细胞的急性杀伤作用,获得剂量-效应关系;选择致10%生发细胞即刻死亡的剂量辐照后将细胞继续培养,噻唑蓝法、电镜、流式细胞仪等检测HIFU对生发细胞的生长抑制作用以及对细胞周期的影响和诱导凋亡作用。结果 HIFU对生发细胞有明显的即刻杀伤作用,20W×20s和40W×10s是致10%生发细胞即刻死亡的超声剂量。用此超声剂量作用后存活率为90%的生发细胞继续体外培养6,12和24h,各时点的细胞死亡率与对照组相比均具有显著的统计学差异(P0.05);而照射后不同培养时点差异亦具有统计学意义(P0.05),24h抑制作用表现最为明显;HIFU辐照后继续培养的细胞透射电镜下观察到凋亡改变,流式检测出辐照组凋亡峰,细胞周期S期细胞百分比升高,而G期降低。结论 HIFU能够即刻杀灭棘球蚴生发细胞并能抑制其在体外的生长,辐照后的细胞周期受阻于G_2-M期,并能诱导生发细胞凋亡。     

NG-硝基-L-精氨酸对脂多糖诱导大鼠肺损伤时肺表面活性物质和细胞凋亡的影响

目的 探讨NG-硝基-L-精氨酸(L-NA)对内毒素性肺损伤大鼠肺表面活性物质(PS)和细胞凋亡的影响.方法 雄性SD大鼠24只,按随机数字表法均分为对照组、模型组、L-NA治疗组.模型组、L-NA治疗组舌下静脉注射脂多糖(LPS)复制内毒素性肺损伤模型;对照组给予等量生理盐水.L-NA治疗组于注射LPS 3 h后给予L-NA 20 mg/kg;对照组和模型组给予等量生理盐水.6 h后处死动物,取肺组织,用原位杂交法测定肺组织表面活性物质相关蛋白A(SP-A)mRNA表达;用流式细胞术检测肺组织细胞凋亡率;用蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)蛋白表达;用免疫组化法测定Bcl-2和Bax蛋白表达.结果 与对照组比较,模型组SP-A mRNA表达[吸光度(A)值]明显下降(0.071±0.017比0.113±0.021),细胞凋亡率[(25.04±4.57)%比(11.37±3.08)%]、caspase-3蛋白表达(A值:298.64±37.11比110.24±14.35)、Bax蛋白表达(A值:0.145±0.011比0.076±0.010)明显升高,Bcl-2蛋白表达(A值:0.064±0.011比0.073±0.009)和Bcl-2/Bax比值(0.447±0.086比0.976±0.157)明显下降(均P<0.01).与模型组比较,L-NA治疗组SP-A mRNA表达(A值:0.085±0.015)和Bcl-2蛋白表达(A值:0.070±0.087)明显增强(P<0.01和P<0.05),但细胞凋亡率[(20.67±1.35)%]、caspase-3蛋白表达(A值:268.75±42.56)、Bax蛋白表达(A值:0.142±0.012)和Bcl-2/Bax比值(0.498±0.069)均无明显变化(均P>0.05).结论 L-NA不通过抑制肺细胞凋亡来减轻内毒素性肺损伤的程度,对调节凋亡相关基因caspase-3和Bax也无明显影响;而是可通过增强PS表达减轻内毒素性肺损伤.     

低氧诱导因子抑制剂对白血病细胞株HIF-1α和VEGF表达及诱导细胞凋亡作用的研究

本研究探讨低氧诱导因子抑制剂3-(5′-hydroxymethyl-2′-furyl)-1-benzylindazole(YC-1)对人急性白血病病细胞低氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor1α,HIF-1α)和血管内皮因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的调节及诱导细胞凋亡作用。应用DAPI染色检查凋亡细胞的形态;流式细胞术检测细胞凋亡率;RT-PCR检测K562、U937、Jurkat白血病细胞株hif-1α和vegf mRNA表达以及YC-1对U937细胞hif-1α、vegf mRNA表达影响;Western blot检测YC-1对U937细胞HIF-1α和VEGF蛋白表达,以及BAX、BCL-2、caspase-3蛋白变化,分析YC-1诱导U937细胞凋亡的可能机制。结果表明:在3种白血病细胞株均可见hif-1α和vegf mRNA表达。4μmol/L YC-1处理U937细胞(0、8、16和24小时)后,可见凋亡细胞出现的典型凋亡形态特征;流式细胞术检测的细胞0、8、16和24小时凋亡率分别为(4.87±0.70)%、(27.27±2.00)%、(51.53±2.81)%及(60.5±3.20)%;vegf mRNA表达下调,而hif-1αmRNA表达无明显变化;HIF-1α蛋白、VEGF蛋白和BCL-2蛋白表达下调,而BAX和caspase-3蛋白表达上调,BAX/BCL-2比率升高并呈时间依赖性(r=0.973,p0.01)。结论:3种白血病细胞株均显示hif-1α和vegf mRNA表达,YC-1可以抑制白血病细胞HIF-1α蛋白表达,进而下调VEGF,并通过上调BAX/BCL-2比率、caspase-3蛋白表达诱导细胞凋亡。     

牛磺酸上调基因1对人绒毛膜癌JEG-3细胞增殖及迁移和凋亡的影响

目的探讨牛磺酸上调基因1(taurine-upregulated gene 1,TUG1)在人绒毛膜癌JEG-3细胞增殖、迁移和凋亡中的作用。方法采用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)技术构建TUG1慢病毒载体。将对数生长期人绒毛膜癌JEG-3细胞随机分为空白对照组(不作任何处理)、阴性对照组(转染阴性对照靶序列慢病毒载体)和转染组(转染siRNA-TUG1慢病毒载体)。采用实时荧光定量PCR法检测3组TUG1mRNA、caspase-3mRNA、caspase-9mRNA相对表达量,采用Western blot法检测3组TUG1、caspase-3、caspase-9蛋白相对表达量,采用Transwell小室试验检测3组培养24h细胞侵袭能力,采用CCK-8法检测3组细胞培养72h吸光度值,采用流式细胞术检测3组培养72h细胞凋亡率。结果构建siRNA-TUG1载体的慢病毒滴度为3×108 TU/mL;转染72 h,转染组TUG1 mRNA、caspase-3mRNA、caspase-9mRNA相对表达量(0.42±0.02、0.31±0.01、0.21±0.01)低于阴性对照组(1.09±0.03、1.29±0.03、1.02±0.01)和空白对照组(1.01±0.01、1.02±0.02、1.00±0.01)(P0.05),TUG1、caspase-3、caspase-9蛋白相对表达量(0.24±0.07、0.49±0.23、0.11±0.02)低于阴性对照组(7.32±0.05、10.12±1.47、9.98±2.78)和空白对照组(6.08±0.19、9.88±0.93、9.91±1.44)(P0.05);培养24h,转染组迁移细胞数[(52.11±4.09)个]较阴性对照组[(142.11±14.02)个]和空白对照组[(131.32±18.39)个]少(P0.05);培养72h,转染组细胞吸光度值(24.27±3.11)较阴性对照组(51.12±2.47)和空白对照组(60.34±1.24)低(P0.05),细胞凋亡率[(35.21±13.31)%]较阴性对照组[(3.09±1.13)%]和空白对照组[(4.21±1.24)%]高(P0.05);阴性对照组各观察指标与空白对照组比较差异均无统计学意义(P0.05)。结论 TUG1沉默表达慢病毒载体可明显抑制人绒毛膜癌JEG-3细胞增殖和侵袭,促进细胞凋亡。     

乏氧诱导因子预测肺鳞癌放疗敏感性研究

目的 探讨乏氧诱导因子(hypoxia-inducible factor-1α,H1F-1α)预测肺鳞癌放疗敏感性的价值.方法 对数期人肺鳞癌细胞,按放疗照射时间分为24 h组和48 h组,2组分别采用0、2、10 Gy照射剂量单次X线照射24 h和48 h.照射后采用Western blot检测肺鳞癌细胞HIF-1α蛋白表达情况,采用逆转录PCR检测肺鳞癌细胞HIF-1α基因表达情况,比较2组肺鳞癌细胞放疗前、后HIF-1α阳性表达率、微血管密度和细胞凋亡率.结果 48 h组肺鳞癌细胞在照射0、2、10 Gy剂量时HIF-1α mRNA((14±2)％、(37±2)％、(69±3)％)和蛋白表达量((16±1)％、(70±5)％、(97±13)％)均明显高于24h组((10±1)％、(29±5)％、(41±6)％,(13±2)％、(65±4)％、(89±10)％),且10 Gy剂量时高于0、2 Gy剂量,2 Gy剂量高于0 Gy剂量(P＜0.05);放疗前24h组肺鳞癌细胞HIF-1α阳性表达率(12.5％)、微血管密度(40.78±5.25)和细胞凋亡率((2.10±0.43)％)与48 h组(12.5％、42.90±7.54、(2.08±0.39)％)比较差异均无统计学意义(P＞0.05),放疗后48 h组肺鳞癌细胞HIF-1α阳性表达率(87.5％)、微血管密度(83.31±4.67)和细胞凋亡率((4.04±1.22)％)均高于24 h组(62.5％、61.22±9.48、(2.23±0.57)％)(P＜0.05),2组放疗后均较放疗前明显增高(P＜0.05).结论 放射剂量越大、放射时间越长,肺鳞癌中HIF-1α阳性表达量越高,对放疗越不敏感;HIF-1α与微血管密度、细胞凋亡密切相关.     

IL-24体外诱导儿童急性白血病骨髓单个核细胞凋亡研究

本研究探讨IL-24对儿童急性白血病骨髓单个核细胞(BMMNC)凋亡的影响,为临床应用提供理论依据。纳入本研究的确诊未治的儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)、儿童急性非淋巴细胞白血病(ANLL)患者各20例。取患者骨髓分离单个核细胞;用琼脂糖电泳方法检测BMMNC DNA;采用碘化丙锭染色流式细胞术和细胞核形态观察同时检测体外培养的急性白血病BMMNC增殖、分化过程中的凋亡状况;观察IL-24对它们的影响,并进行了定量分析。采用RT-PCR检测bcl-2及caspase-3 mRNA表达水平,观察IL-24对它们的影响。结果发现:IL-24可诱导体外培养的急性白血病BMMNC凋亡。在培养的48小时,可见到DNA出现梯形条带;IL-24 50 ng/ml用药组细胞凋亡程度较没加IL-24的对照组明显增加。IL-24可下调体外培养的急性白血病BMMNC bcl-2基因mRNA的表达,上调caspase-3 mRNA的表达。结论:IL-24可诱导白血病BMMNC凋亡,其机制之一可能是下调bcl-2 mRNA的表达,上调caspase-3 mRNA的表达。     

腺病毒介导的白细胞介素24基因对人肺腺癌细胞的放疗增敏作用

目的：研究腺病毒介导的白细胞介素24基因（Ad-IL-24）对人肺腺癌细胞 SPC-A1体外抑癌效应、放疗增敏作用。方法将 Ad-IL-24感染的 SPC-A1细胞,用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）及蛋白印迹（Western blot）法检测 IL-24目的基因在 SPC-A1细胞中的转录和表达;四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测磷酸盐缓冲液（PBS）组、腺病毒（Ad-GFP）组、Ad-IL-24组、放疗组、Ad-GFP 联合放疗组（Ad＋放疗组）及 Ad-IL-24联合放疗组（Ad-IL-24＋放疗组）对 SPC-A1细胞生长抑制作用,流式细胞术（FCM）检测各组 SPC-A1细胞生长周期和凋亡率。RT-PCR 法检测 SPC-A1细胞中生存素、半胱氨酸蛋白酶3（Caspase-3）、B 细胞淋巴瘤／白血病基因伴随蛋白 X（bax）、B 细胞淋巴瘤／白血病基因-2（bcl-2）凋亡相关因子的表达。结果 Ad-IL-24作用 SPC-A1细胞后,目的基因在 SPC-A1细胞中成功转录及表达;Ad-IL-24能显著抑制 SPC-A1细胞的生长且呈现时间依赖性,Ad-IL-24组（31．1±0．9）％、放疗组（44．4±2．3）％、Ad-IL-24＋放疗组（72．4±1．5）％的生长抑制率分别与 Ad-GFP 组（2．7±1．1）％比较,均差异有统计学意义（P ＜0．01）,且 Ad-IL-24＋放疗组优于 Ad-IL-24组、放疗组（F ＝314．613,P ＜0．01）,呈现放疗增敏的协同作用（Q ＝1．172）;Ad-IL-24可诱导 SPC-A1细胞 G2／M 期阻滞和细胞凋亡,Ad-IL-24＋放疗组（40．6±3．3）％的细胞凋亡率与Ad-IL-24组（15．4±1．1）％、放疗组（26．3±1．7）％比较,差异有统计学意义（F ＝87．194,P ＜0．01）,且具有放疗增敏协同作用（Q ＝1．162）。Ad-IL-24能明显上调促细胞凋亡相关因子 bax、Caspase-3,并下调细胞抗凋亡因子 bcl-2、生存素的表达,Ad-IL-24＋放疗组作用优于 Ad-IL-24组、放疗组。结论 Ad-IL-24有放疗增敏的作用,是理想的放疗增敏剂,该作用机制可能与诱导肿瘤细胞阻滞在 G2／M 期以及促进肿瘤细胞凋亡有关。     

辛伐他汀对急性单核细胞白血病SHI-1细胞增殖和凋亡的影响

本研究探讨辛伐他汀(simvastatin,SIM)对急性单核细胞白血病SHI-1细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。用MTT法检测不同浓度SIM作用不同时间对SHI-1细胞生长的抑制作用;实验分为阴性对照及辛伐他汀处理组(终浓度分别为5、10、20μmol/L),处理48小时后,用流式细胞仪检测细胞凋亡及周期分布;半定量RT-PCR法检测caspase-3、BCL-2mRNA的表达;Western blot法检测caspase-3、BCL-2蛋白表达。结果表明,辛伐他汀对SHI-1细胞的生长有明显抑制作用,且呈时间与剂量依赖性。与对照组相比,辛伐他汀处理SHI-1细胞48小时后,各浓度组S期细胞百分比明显增多,5μmol/L辛伐他汀处理SHI-1细胞能明显阻滞细胞周期进程,但不能诱导细胞凋亡。细胞中BCL-2mRNA表达随辛伐他汀浓度增加而下降,caspase-3mRNA表达随辛伐他汀浓度增加而增高(p<0.05)。SHI-1细胞中BCL-2蛋白表达随辛伐他汀浓度升高而降低,caspase-3蛋白表达随辛伐他汀浓度升高而增加(p<0.05)。结论 :辛伐他汀能抑制SHI-1细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与其下调BCL-2和上调caspase-3表达有关。     

金纳多注射液对脑缺血/再灌注后caspase-3和caspase-9表达的影响

目的：观察金纳多注射液对大鼠局灶性脑缺血/再灌注后天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）和caspase-9蛋白及mRNA表达的影响。方法：40只Wistar雄性大鼠被随机分为假手术组、缺血组、金纳多小剂量治疗组及金纳多大剂量治疗组,每组10只。采用线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）模型。应用原位末端缺刻标记法（TUNEL）检测神经元凋亡;应用免疫组化检测caspase-3和caspase-9的蛋白表达;应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测caspase-3和caspase-9的mRNA表达。结果：与假手术组比较,缺血组、金纳多小剂量治疗组和大剂量治疗组凋亡细胞数以及caspase-3和caspase-9的蛋白及mRNA表达均显著增高（P均〈0.01）;与缺血组比较,金纳多小剂量治疗组和大剂量治疗组凋亡细胞数、caspase-3和caspase-9的蛋白及mRNA表达均显著减少（P均〈0.01）;与金纳多小剂量治疗组比较,金纳多大剂量治疗组凋亡细胞数、caspase-3和caspase-9的蛋白及mRNA表达均明显减少（P均〈0.05）。结论：金纳多注射液能显著减少脑缺血/再灌注后神经元凋亡以及caspase-3、caspase-9的mRNA和蛋白表达,疗效表现为剂量依赖性。     

大鼠创伤性脑损伤后神经细胞凋亡的动态变化及其与caspase-3基因表达的关系

目的 探讨创伤性脑损伤(TBI)后神经细胞凋亡的变化规律及其与caspase-3基因表达的关系.方法 成年健康封闭群SD大鼠120只,随机分为对照组8只、损伤组和抑制物组各56只.Feeney法致伤,抑制物组伤后脑内注射5μg caspase-3抑制剂z-DEVD-fmk.分别在伤后1,6,24,48 h和3,7,14 d处死取材(每个分析时相点8只大鼠),采集伤灶中心皮质、皮层下白质、海马、齿状回,以及对侧相应部位脑组织,应用原位末端脱氧核糖核酸转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸(dUTP)标记法(TUNEL法)和流式细胞术检测神经细胞凋亡的变化;免疫组化法、蛋白印迹(western blot)和半定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR),检测caspase-3蛋白和mRNA的表达;并借助荧光分析试剂盒检测caspase-3活性的变化.所得数据采用SIDSS 10.1统计软件包进行Sprarman等级相关分析和方差分析(sNK-α检验).结果 伤后伤侧各脑区神经细胞凋亡指数(AI)和细胞凋亡百分率(AP)迅速增高,24～48 h达峰值,随后逐渐下降,但伤后14 d仍高于正常(P＜0.01).伤后caspase-3蛋白和mRNA的表达明显增加,caspase-3活性迅速上升,峰值在24～48 h.其中伤后24 h伤侧海马区caspase-3蛋白谱密度与对照组相比增加1484%,caspase-3 mRNA的表达量增加1043%,caspase-3活性增加148%;伤后48h伤灶皮层下白质caspase-3蛋白谱密度增加1690%,caspase-3 mRNA的表达量增加1181%,caspase-3活性增加183%.Western blot显示,伤后caspase-3原酶及p17活性亚单位的表达均增强.抑制物组caspase-3蛋白和mRNA的表达均明显下降,caspase-3活性明显降低;同时,AI值和AP值也明显降低.统计学相关分析发现.伤后神经细胞凋亡与caspase-3 mRNA和蛋白的表达间呈正相关(r=0.821和r:0.638,P＜0.01),伤后caspase-3在mRNA和蛋白水平的表达间呈正相关(r=0.945,P＜0.01).结论 急性TBI后神经细胞凋亡的发生与caspase-3的激活有关;神经细胞凋亡与其调节基因caspase-3的表达间具有一致性,TBI对caspase-3的调节发生在转录水平前的某一环节.caspase-3抑制剂能有效地阻断TBI后的神经细胞凋亡.     

siRNA沉默PTTG基因对人胰腺癌细胞PANC-1细胞凋亡的影响

目的研究PTTG基因沉默对胰腺癌细胞凋亡的影响,初步探讨其调控机制。方法利用阳离子脂质体进行基因沉默实验,将PANC-1细胞分为三组（①.未转染PANC-1细胞、②.转染阴性对照siRNA、③转染siRNA-PTTG）,TUNEL染色法检测细胞凋亡;RT-PCR和Western blot技术检测bcl-2,bax基因和蛋白表达;ELISA法检测caspase-3活性。结果组③细胞凋亡明显增多,凋亡率为18.4±2.4%;组①和组②凋亡率分别为7.5±2.0%和6.9±1.1%,差异具有显著性（P〈0.05）;组③bcl-2 mRNA和蛋白表达水平下降,与组①和组②比较差异具有统计学意义（P〈0.05）;组③、组①和组②间bax mRNA和蛋白表达没有具有统计学差异（P〈0.05）;组③caspase-3活性升高,与组①和组②比较差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论 siRNA-PTTG下调PTTG基因表达导致PANC-1细胞凋亡增加,可能与bcl-2表达下调,caspase-3活性升高有关。     

脉冲强磁场对膀胱肿瘤BIU-87细胞生长相关基因表达的影响

目的 研究脉冲强磁场对人膀胱肿瘤BIU-87细胞生长相关基因表达的影响.方法 将体外培养的人膀胱肿瘤BIU-87细胞分为磁场组及对照组.磁场组细胞给予脉冲强磁场干预(磁场强度为8 T,频率为15 Hz),每天持续干预2 h;对照组细胞亦置于相同环境中,但未给予曝磁处理.分别于实验进行24 h、48 h及72 h后采用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)技术检测各组细胞B细胞淋巴瘤/白血病基因-2(Bcl-2)、促凋亡基因(Bax)及凋亡促进因子-3(caspase-3)mRNA表达,采用流式细胞仪检测Bcl-2、Bax及caspase-3蛋白表达.结果 实验进行24 h、48 h及72 h后,发现磁场组Bcl-2 mRNA及蛋白表达在上述各时间点均较对照组明显降低,Bax mRNA及蛋白表达均较对照组显著增强(P＜0.05);caspase-3 mRNA及蛋白表达在上述各时间点组间差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 脉冲强磁场能抑制膀胱肿瘤BIU-87细胞生长,促其凋亡,其机制可能与脉冲强磁场促进Bax mRNA及蛋白表达、抑制Bcl-2 mRNA及蛋白表达有关.

Abstract：

Objective To estimate any influence of strong pulsed magnetic fields on the expression of growth-related genes in human bladder cancer BIU-87 cells. Methods Human BIU-87 cells were cultured in vitro and randomly divided into a magnetic field group and a control group. Each group was further divided into 24 h, 48 h and 72 h sub-groups. The magnetic field group cells were exposed to an 8 T magnetic field pulsed at 15 Hz for 2 h every day. The control group cells also placed on the same environment, but not exposed to any strong, pulsed magnetic field. The expression of B cell lymphoma/leukemia gene-2 (Bcl-2) mRNA, Bax mRNA and caspase-3 mRNA was measured with RT-PCR, and flow cytometry was used to evaluate the expression of the Bcl-2, Bax and caspase-3 genes of the tumor cells in vitro. Results The expression of Bax mRNA and protein was significantly higher in the cells exposed to the magnetic field than in the control groups. The expression of Bcl-2 mRNA and protein was significantly less. The expression of caspase-3 mRNA and protein in the two groups showed no significant differences.Conclusions A strong, pulsed magnetic field can inhibit the growth of bladder tumor BIU-87 cells and promote their apoptosis. The mechanism is probably related with the magnetic field promoting Bax mRNA and protein expression and inhibiting Bcl-2 mRNA and protein expression.     

沉默caspase-3基因影响骨髓间充质干细胞的增殖和凋亡

背景：缺血缺氧的心肌微环境导致植入的细胞存活率低。目的：观察沉默caspase-3基因对大鼠骨髓间充质干细胞增殖和体外缺血缺氧环境下凋亡的影响。方法：构建靶向caspase-3的shRNA重组慢病毒并转染骨髓间充质干细胞为转基因组,以正常细胞组和空载体组做对照,采用MTS法检测各组细胞增殖情况。建立缺血缺氧模型,real-timePCR和免疫组织化学分别检测缺血缺氧环境各组细胞的caspase-3mRNA和蛋白表达水平,应用流式细胞术检测不同缺血缺氧时间点（0,6,12,24,48h）各组细胞的凋亡率。结果与结论：重组慢病毒成功转染骨髓间充质干细胞,且细胞增殖活性升高（P〈0．05）。缺血缺氧环境下,转基因组细胞caspase-3在mRNA和蛋白表达水平相比对照组下降（P〈0．05）。沉默caspase-3能显著降低骨髓间充质干细胞的凋亡率（P〈0．05）,且随着缺血缺氧时间的延长凋亡率缓慢升高。结果提示,沉默caspase-3能加快骨髓间充质干细胞的生长速度和提高在体外缺血缺氧环境下的抗凋亡能力。     

鸦胆子油乳对戈舍瑞林去势抵抗性前列腺癌PC3细胞株化疗敏感性的影响

目的探讨质量分数10%鸦胆子油乳(Brucea javanica oil emulsion, BJOE)对戈舍瑞林去势抵抗性前列腺癌PC3细胞株化疗敏感性的影响及机制。方法对数生长期戈舍瑞林去势抵抗性前列腺癌PC3细胞株分为空白组、BJOE组、多西他赛组、多西他赛+BJOE组,细胞培养液中分别加入磷酸盐缓冲液、质量分数10%BJOE、0.6μg/L多西他赛、质量分数10%BJOE+0.6μg/L多西他赛进行干预。培养24、48、72 h时,采用MTT法检测4组细胞增殖抑制率;培养48 h时,采用流式细胞术检测4组细胞凋亡率,采用Hoechst 33258染色观察细胞形态学变化,采用实时荧光定量PCR法检测4组细胞B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2, Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein, Bax)、caspase-3 mRNA相对表达量,采用Western blot法检测4组细胞Bcl-2、Bax和caspase-3蛋白相对表达量。结果培养24、48、72 h时,多西他赛+BJOE组、多西他赛组、BJOE组细胞增殖抑制率依次降低(P0.05),3组细胞增殖抑制率均随时间延长而增高(P0.05);培养48 h时,空白组细胞核圆形或椭圆形,细胞质分布均匀;BJOE组、多西他赛组、多西他赛+BJOE组部分细胞呈不规则状态,染色质固缩、体积缩小,部分出现蓝色凋亡小体,其中多西他赛+BJOE组凋亡现象最明显;培养48 h时,多西他赛+BJOE组、多西他赛组、BJOE组、空白组细胞凋亡率[(28.71±3.15)%、(18.85±2.03)%、(14.62±1.57)%、(9.10±1.02)%]依次降低(P0.05),Bcl-2 mRNA和蛋白相对表达量依次增高(P0.05),Bax、caspase-3 mRNA和蛋白相对表达量依次降低(P0.05)。结论质量分数10%BJOE与多西他赛联用可抑制戈舍瑞林去势抵抗性前列腺癌细胞增殖,促进细胞凋亡,增强细胞对多西他赛化疗敏感性,可能与下调Bcl-2 mRNA和蛋白表达,上调Bax、caspase-3 mRNA和蛋白表达有关。     

高压氧联合阿霉素对白血病K562/A02细胞凋亡的影响

本研究探讨0.2MPa高压氧(HBO)联合阿霉素对白血病多药耐药细胞K562/A02细胞凋亡的影响。利用流式细胞术法和透射电子显微镜检测细胞凋亡和caspase-3表达,用定量qReal-time PCR法检测HIF-1α、BCL-2和BAXmRNA表达水平,运用caspase-8试剂盒检测caspase-8的活性,Western blot法检测P-gp活性。结果表明:0.2MPa HBO联合阿霉素组细胞凋亡率高于ADM组[(47.36±3.87)%vs(28.51±1.09)%],差异有统计学意义(p<0.05)。0.2MPa HBO联合阿霉素组细胞HIF-1αmRNA、P-gp及BCL-2的蛋白水平低于ADM组,差异有统计学意义(p<0.05)。0.2MPa HBO联合阿霉素组细胞的BAX、caspase-3及caspase-8蛋白活性均高于ADM组,差异有统计学意义(p<0.05)。结论 :0.2MPa HBO联合阿霉素可逆转耐药细胞株K562/A02对阿霉素的耐药,提高细胞凋亡率,其机制可能与HIF-1α下调P-gp和BCL-2的表达以及提高caspase活性有关。     

葡萄糖转运蛋白3在子痫前期胎盘中的表达及意义

目的探讨葡萄糖转运蛋白3(GLUT3)在子痫前期(PE)胎盘中的表达及意义。方法选取2014年9月至2018年1月海南医学院第二附属医院产科住院治疗的50例PE患者作为PE组,同期选取50例正常妊娠健康孕妇作为对照组进行前瞻性研究。比较两组孕妇的胎盘GLUT3、半胱天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3 mRNA、caspase-8 mRNA、caspase-9 mRNA、滋养细胞凋亡指数,并比较轻度和重度PE患者胎盘GLUT3、可溶性血管内皮生长因子受体1(sFlt-1)、血管内皮生长因子(VEGF)表达,采用Pearson相关性分析评价GLUT3与caspase-3、caspase-8、caspase-9、滋养细胞凋亡指数、sFlt-1、VEGF的相关性,以Logistic多元回归方程分析GLUT3、sFlt-1、VEGF与PE病情的相关性。结果PE组孕妇的免疫组化胎盘GLUT3阳性率(90.00%)及GLUT3 mRNA表达(1.16±0.15)均高于对照组(22.00%,0.74±0.10),差异具有统计学意义(P 0.05); PE组孕妇的caspase-3 mRNA(1.56±0.12)、caspase-8 mRNA(1.45±0.10)、caspase-9 mRNA(1.34±0.13)、滋养细胞凋亡指数(0.15±0.03)均高于对照组(0.92±0.06,0.94±0.05,0.91±0.04,0.08±0.02),差异具有统计学意义(P 0.05); GLUT3均与caspase-3(r=0.573)、caspase-8(r=0.529)、caspase-9(r=0.441)、滋养细胞凋亡指数(r=0.607)呈正相关(P 0.05);重度患者胎盘GLUT3 mRNA、sFlt-1 mRNA高于轻度患者,VEGF mRNA低于对照组,差异具有统计学意义(P 0.05); GLUT3与sFlt-1 (r=0.496)呈正相关,与VEGF(r=-0.416)呈负相关(P 0.05)。结论 GLUT3在PE患者胎盘中呈高表达,其水平与滋养细胞凋亡、内皮功能障碍显著相关,并能反映病情的严重程度。     

ERK1/2抑制剂AZD8330对Burkitt淋巴瘤细胞株Raji细胞的作用及其机制研究北大核心CSCD

目的 探讨细胞外信号调节激酶1/2（ERKU2）抑制剂AZD8330对Burkitt淋巴瘤细胞株Raji细胞的作用及其机制.方法 Raji细胞用不同浓度的AZD8330进行处理;采用CCK-8检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡情况;实时定量PCR法检测Bcl-2、Bcl-x1、caspase-3和血管内皮生长因子（VEGF） mRNA表达;Western blot法检测Bcl-2、Bcl-x1、caspase-3、磷酸化（p）-ERK1/2蛋白表达.结果 1.00 μmol/L的AZD8330处理24、48和72 h后细胞存活率分别为（62.09±0.86）％、（50.06±1.33）％和（39.13±2.34）％,差异有统计学意义（P值均＜0.05）;0.10、1.00、10.00 μmol/L的AZD8330分别处理Raji细胞24、48和72 h,Raji细胞发生凋亡,凋亡率呈时间和剂量依赖性,差异有统计学意义（P值均＜0.05）;随着浓度增加和时间延长,Bcl-2、Bcl-x1、VEGF mRNA表达降低,caspase-3mRNA表达升高,差异有统计学意义（P值均＜0.05）;同时,Bcl-2、Bcl-x1、p-ERK1/2蛋白表达明显受抑制,而caspase-3蛋白表达增强.结论 AZD8330可能通过抑制ERK1/2通路相关基因和蛋白的表达而诱导Burkitt淋巴瘤Raji细胞凋亡,抑制其增殖.