高三尖杉酯碱对K562细胞NF-κB和BCL-2蛋白表达的影响

本研究旨在探讨高三尖杉酯碱（HHT）对K562细胞增殖、凋亡及BCL-2和NF-κB蛋白表达的影响。不同浓度HHT作用K562细胞后用MTT法、流式细胞仪、Western blot等方法分别检测细胞增殖、凋亡、BCL-2及NF-κB蛋白表达水平。结果表明,HHT作用48h,浓度依赖性抑制K562细胞增殖,Ic50为43．89rig／ml。HHT10ng／ml作用48h,K562细胞凋亡率明显增高;细胞周期阻滞于G0／G1期;BCL-2和NF-κB蛋白表达水平明显低于对照组（P〈0．05）。结论：HHT对K562细胞有显著的增殖抑制、细胞周期阻滞和凋亡诱导作用,抑制NF-κB和BCL-2表达可能是其抗CML的机制之一。     

高三尖杉酯碱联合伊马替尼对K562细胞诱导凋亡及BCL6表达的影响

目的:探讨高三尖杉酯碱(homoharringtonine,HHT)联合伊马替尼(Imatinib,IM)对K562细胞增殖、凋亡及BCL6蛋白和mRNA表达的影响。方法:应用CCK-8法检测HHT和IM单用及联用对K562细胞增殖抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot分析BCL6蛋白表达水平,RT-PCR检测BCL6 mRNA表达水平。结果:单用HHT对K562细胞增殖具有抑制作用,且呈浓度依赖性(r=0.820),诱导K562细胞凋亡;联合用药组细胞增殖抑制率及细胞凋亡率均明显升高(P0.05);单用HHT作用后BCL6蛋白表达下调,IM作用后BCL6蛋白表达明显上调,联合用药与IM单药相比,BCL6蛋白表达出现下调,差异均有统计学意义(P0.05);与对照组相比,HHT和IM单药处理后BCL6 mRNA表达均出现下调,联合用药组较单用组下调更显著(P0.05)。结论:HHT可抑制K562细胞增殖,促进细胞凋亡,且与IM有协同作用。HHT可能通过抑制BCL6表达增强K562细胞对IM的敏感性。     

Survivin抑制剂YM155对K562细胞凋亡和自噬的影响

目的:本研究旨在探讨survivin抑制剂YM155对人慢性髓系白血病细胞株K562凋亡和自噬的影响。方法:采用不同浓度YM155处理K562细胞,用CCK-8法检测细胞增殖抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡率,RTPCR检测survivin、BCL-2及beclin1的mRNA表达水平,Western blot检测survivin、BCL-2、caspase-3、PARP及LC-3的蛋白表达。结果:YM155抑制K562细胞的增殖,且呈时间及剂量依赖性。随着药物浓度的升高及作用时间的延长,survivin和BCL-2的mRNA及蛋白表达水平下降,而caspase-3、PARP、beclin1及LC-3的表达水平升高。YM155联合3-MA组的LC-3和caspase-3蛋白表达水平以及K562细胞凋亡率均显著低于YM155单用组。结论:YM155通过诱导凋亡和自噬而抑制K562细胞的增殖,其自噬诱导效应与凋亡诱导效应有协同抗CML的作用。     

冬凌草甲素对白血病细胞增殖抑制及机制的研究

目的:探讨伊马替尼耐药的K562细胞(K562-R)的可能耐药机制及冬凌草甲素(oridonin,OR)对伊马替尼敏感的K562细胞(K562-S)和K562-R细胞的生长抑制作用及其可能机制。方法:Western blot法检测K562-S和K562-R细胞内p-Lyn的表达;采用改良的四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测OR对K562-S和K562-R细胞的增殖抑制作用,光学显微镜观察OR作用24 h后K562-S和K562-R细胞的形态变化,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot法检测OR对K562-S和K562-R细胞内BCL-2的表达和蛋白激酶p-Lyn、Akt/mTOR信号通路的变化。结果:在K562-R细胞中,p-Lyn表达增高。OR对K562-S和K562-R细胞的生长具有抑制作用,且呈时间和浓度依赖性,OR作用72 h的半抑制浓度(IC50)值分别为4.23±1.30和4.97±2.23μmol/L。OR作用24 h后,K562-S和K562-R细胞破坏明显,部分细胞裂解成碎片。流式细胞仪检测发现,OR使K562-S和K562-R凋亡细胞明显增多。Western blot结果提示,OR使细胞内蛋白激酶p-Lyn表达下降,Akt/mTOR信号通路关键点蛋白磷酸化水平明显减低,凋亡抑制蛋白BCL-2表达下调。结论:p-Lyn高表达可能参与K562-R细胞的耐药。OR通过下调p-Lyn,抑制Akt/mTOR信号通路和下调BCL-2表达,促进细胞凋亡,抑制白血病细胞株K562-S和K562-R的生长。     

槲皮素对K562和K562R细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的:观察槲皮素(Qu)对伊马替尼(IM)敏感细胞K562及耐药细胞K562R的增殖、凋亡、细胞周期的影响,探讨凋亡及细胞周期调控因子、Wnt/β-catenin信号通路及BCR-ABL的表达变化,为Qu的临床应用提供实验室依据。方法:应用台盼蓝染色法检测K562和K562R细胞的增殖水平;流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期的分布;荧光定量PCR及Western blot法分别检测Wnt/β-catenin信号通路成员、细胞凋亡及细胞周期相关因子的mRNA及蛋白的表达。结果:经Qu 5、10、20、40、80、160、320μmol/L作用于K562细胞后,K562细胞抑制率分别为5.07%、5.98%、11.09%、31.88%、56.89%、70.44%、86.63%;K562R细胞抑制率分别为4.99%、9.75%、10.54%、8.93%、25.13%、46.89%、68.60%。K562、K562R的IC_(50)分别为76.4和230.2μmol/L。Qu 50、100和200μmol/L可诱导K562和K562R细胞凋亡(r=0.9914),使细胞周期阻滞于G_1期(r=0.9871),且呈剂量依赖趋势。与对照组比较,Qu作用于K562后,Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9及p21、p27 mRNA及蛋白(Caspase-9除外)表达均有升高(P 0.05),K562R细胞除p27外,其他mRNA和蛋白(Caspase-3除外)均表达增加。Wnt/β-catenin信号通路成员GSK-3β、β-catenin、Lef-1,下游靶向PPAR-δ、Cyclin D1 mRNA及蛋白表达水平均降低(P 0.05)。BCR-ABL mRNA表达降低,但BCR-ABL及p-BCR-ABL蛋白表达无明显变化。结论:Qu能够抑制K562及K562R细胞的增殖,降低其耐药性,增加敏感性,这与Qu抑制Wnt/β-catenin信号通路、激活凋亡途径及细胞周期因子相关。     

雷帕霉素对慢性髓性白血病细胞增殖的抑制作用及其机制

目的 探讨雷帕霉素对慢性髓性白血病(CML)细胞增殖的抑制作用及可能机制.方法 用不同浓度雷帕霉素处理CML细胞系K562细胞,用MTT法检测雷帕霉素对K562细胞的增殖抑制率;Western blot法及RT-PCR法检测不同浓度雷帕霉素作用后的K562细胞中mTOR、4E-BP1、p70S6K蛋白及mRNA表达水平,Western blot法检测CML慢性期患者骨髓原代细胞中mTOR、4E-BP1、p70S6K蛋白及磷酸化水平,并以健康人骨髓细胞为对照;数据采用x2检验、Fisher确切概率计算、单因素方差分析(ANOVA)方法进行分析.结果 CML慢性期患者骨髓中mTOR、4E-BP1、p70S6K蛋白磷酸化水平与正常对照相比明显增高(70.6％对30.0％,76.5％对40.0％,73.5％对20.0％,P值均＜0.05);20 nmol/L及更高浓度雷帕霉素对K562细胞增殖有明显抑制作用;雷帕霉素作用可降低K562细胞中mTOR磷酸化水平,及4E-BP1、p70S6K蛋白及mRNA表达水平(P值均＜0.05).结论 mTOR途径在CML的发病中发挥重要作用,其靶向抑制剂雷帕霉素可通过阻断mTOR途径抑制K562细胞增殖.     

高三尖杉酯碱联合伊马替尼对K562/G01细胞的作用及机制研究

目的:探索高三尖杉酯碱(Homoharringtonine,HHT)联合伊马替尼(Imatinib,IM)对K562/G01细胞增殖、凋亡的影响及其可能的作用机制。方法:应用CCK-8法检测HHT联合IM对K562/G01细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞的凋亡率及磷酸化酪氨酸水平,Western blot检测P210及PI3K/Akt信号通路相关蛋白的表达水平。结果:HHT联合IM与单药相比,对K562/G01细胞的增殖活性具有明显抑制作用(P0.05),细胞的凋亡率显著增加(P0.05);HHT与IM联合可显著抑制K562/G01细胞内的p-Tyr及p-Crkl的表达水平,并能使p210蛋白及其下游通路蛋白P13K和p-Akt的表达水平明显降低。结论:HHT联合IM可协同抑制K562/G01细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与抑制p210蛋白表达及其激酶活性有关。     

硼替佐米与高三尖杉酯碱在K562细胞中的联合作用及机制研究

目的:探讨硼替佐米(bortezomib,BTZ)与高三尖杉酯碱(homoharringonine,HHT)两药联合对K562细胞增殖和凋亡的影响及其联合作用机制与BCL-2、BAX、MCL-1蛋白的关系。方法:通过将K562细胞株按不同处理分为对照、BTZ 20 nmol/L、HHT 40 ng/ml、BTZ 20 nmol/L+HHT 40 ng/ml共4组。采用MTT方法检测各处理组细胞增殖抑制率。采用Annexin V-FITC/PI双染色法流式细胞术检测各处理组细胞早期凋亡率,采用Western blot法测定各处理组中BCL-2、BAX、MCL-1蛋白相对表达量。结果:BTZ+HHT联合组作用于K562细胞24、48和72h后的增殖抑制率(%)高于BTZ及HHT单药组(P0.01)。联合组K562细胞的早期凋亡率(%)高于BTZ及HHT 2个单药组(P0.05)。联合组K562细胞的BCL-2蛋白相对表达量明显低于BTZ及HHT单药组(P0.05)。联合组BAX蛋白相对表达量明显高于BTZ及HHT单药组(P0.05)。M CL-1蛋白相对表达量高低:BTZ组对照组BTZ+HHT联合组HHT组(组间比较P0.05)。结论:BTZ与HHT联合可起协同抑制细胞增殖、诱导凋亡效应,其机制与明显下调BCL-2蛋白、上调BAX蛋白有关。此外,HHT可通过下调MCL-1蛋白表达增加K562细胞对BTZ作用的敏感性。     

高三尖杉酯碱诱导K562细胞凋亡的时间节律性及其机制研究

本研究旨在观察高三尖杉酯碱（HHT）作用于K562细胞后不同时间点凋亡率的变化及其机制。HHT10ng／ml作用K562细胞后,用MTT法检测不同时间点的细胞增殖活力,Westernblot法检测caspase-3凋亡蛋白表达;流式细胞术检测BCL-2蛋白表达;应用透射电子显微镜观测细胞自噬。结果表明,HHT10ng／ml处理后的前5d,K562细胞增殖活性逐渐下降,但在第6天以后增殖活性又逐渐上升;同时激活型caspase-3蛋白从第1天至第7天逐渐增高,而在第8天明显降低（P〈0．05）;BCL-2蛋白表达水平则呈现先降低后升高（P〈0．05）的特点。细胞自噬体在HHT作用第8天明显增多。结论：HHT作用后,K562细胞凋亡水平变化呈现先升高后下降的特点,其机制与HHT作用后期K562细胞自噬水平升高有关。     

CPEB4对慢性髓系白血病细胞增殖与凋亡的影响

目的:探索CPEB4在K562细胞中的表达、生物学活性及其可能的分子机制。方法:采用Western blot检测正常白细胞和K562细胞中CPEB4的表达情况;再将过表达质粒pcDNA3.1(+)-His-CPEB4、沉默质粒pPLK+Puro-CPEB4 shRNA电穿孔转染K562细胞,改变CPEB4在K562细胞中的表达量,应用Western blot检测转染效率;最后应用CCK-8和流式细胞术检测不同处理的细胞增殖和凋亡情况,并用Western blot法检测增殖与凋亡标志蛋白(AKT、p-AKT、caspase-3、BCL-2)的表达变化。结果:与正常白细胞相比,K562细胞中CPEB4蛋白表达量较高(P0.01);CPEB4沉默的K562细胞与对照组相比,细胞增殖水平显著增高(P0.001),细胞凋亡数显著减少,AKT、p-AKT、BCL-2蛋白表达水平明显增高,而caspase-3蛋白表达显著降低;CPEB4过表达后的K562细胞增殖减慢(P0.05),细胞凋亡数明显增加,AKT、p-AKT和BCL-2蛋白表达显著降低,caspase-3蛋白表达增高。结论:CPEB4可抑制K562细胞增殖,促进K562细胞凋亡,而AKT、p-AKT、BCL-2和Caspase-3等分子参与调控机制。