荧光原位杂交法快速鉴定血培养阳性葡萄球菌的临床应用

目的 快速鉴定血培养中的金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌(CoNS)，结合临床快速判定是否为污染菌。方法 采用荧光原位杂交法鉴定血培养中的金黄色葡萄球菌和CoNS，杂交结果若为CoNS，根据临床资料进行判断，并与文献推荐的污染判断法进行结果比较。结果 探针的特异性经由标准菌株和临床分离菌株证实。金黄色葡萄球菌探针的特异性和敏感性均为100％，CoNS探针的特异性和敏感性分别为100％和95．5％。179株CoNS中117株判断为污染菌，污染率为68％，与文献推荐的污染判断方法一致。结论 荧光原位杂交法适用于血培养中的金黄色葡萄球菌和CoNS的快速鉴定，以排除CoNS污染。     

荧光原位杂交法快速鉴定血培养阳性葡萄球菌的临床应用

目的快速鉴定血培养中的金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌(CoNS),结合临床快速判定是否为污染菌。方法采用荧光原位杂交法鉴定血培养中的金黄色葡萄球菌和CoNS,杂交结果若为CoNS,根据临床资料进行判断,并与文献推荐的污染判断法进行结果比较。结果探针的特异性经由标准菌株和临床分离菌株证实。金黄色葡萄球菌探针的特异性和敏感性均为100%,GoNS探针的特异性和敏感性分别为100%和95.5%。179株CoNS中117株判断为污染菌,污染率为68%,与文献推荐的污染判断方法一致。结论荧光原位杂交法适用于血培养中的金黄色葡萄球菌和CoNS的快速鉴定,以排除CoNS污染。     

荧光原位杂交法快速鉴定血培养中白念珠菌的方法学评价

目的：评价荧光原位杂交法(FISH)快速鉴定血培养中阳性的白念珠菌的应用价值。方法：当BacT／ALERT报警后。涂片革兰染色，若发现念珠菌，与针对白念珠菌的特异性探针杂交，同时将分离菌转种沙保罗培养基，比较2种方法的鉴定结果。结果：探针的特异性经15株标准菌株证实，分离到的36株念珠菌中，杂交法在3h内可全部得到鉴定结果，与培养法比较，杂交法的特异性和敏感性均为100％．结论：使用FISH可直接快速鉴定报警阳性血培养中的白念珠菌，结果可靠。     

伤口感染常见病原菌的快速检测

目的建立一种新的荧光原位杂交法，快速检测鉴定伤口中的常见病原菌，指导临床早期合理使用抗生素。方法采用荧光同位素标记的，设计针对引起伤口感染的金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、铜绿假单胞菌、肠球菌和大肠埃希氏菌常见五种病原菌的核糖体16SrRNA序列的互补的DNA寡核苷酸探针，将探针置于玻片上于50℃杂交1h，用杂交缓冲液于50℃洗涤10min，干燥后置于荧光显微镜下观察，整个过程大约需要2h的时间。结果经438例临床标本测试，与培养法比较，荧光原位杂交法的敏感性和特异性分别为94．1％和81．1％。结论该方法适用于伤口感染常见病原菌的快速检测鉴定。     

荧光原位杂交法快速鉴定临床标本中的粪肠球菌和屎肠球菌

目的建立荧光原位杂交法，快速鉴定临床标本中的粪肠球菌和屎肠球菌。方法将荧光同位素标记的粪肠球菌或屎肠球菌的核糖体16S rRNA及23S rRNA序列互补的寡核苷酸探针，在同一张玻片上杂交30min至1h，用杂交缓冲液洗涤10min，干燥后置显微镜下观察。结果探针的特异性经标准菌株证实，对163例临床标本测试结果与培养法结果比较，2种探针的特异性和敏感性均为100％。结论荧光原位杂交法适宜于临床标本中粪肠球菌和屎肠球菌的快速鉴定。     

病原生物学检验与临床

060127快速检测细菌并革兰分型的半巢式聚合酶链反应及其初步应用；060128荧光原位杂交法快速鉴定血培养阳性葡萄球菌的临床应用；060129金黄色葡萄球菌对万古霉素耐药情况调查；060130泌尿系凝固酶阴性葡萄球菌快速两步一补法鉴定；060131葡萄球菌对红霉素和克林霉素的诱导耐药性研究。     

量子点标记荧光原位杂交法在快速检测金黄色葡萄球菌中的应用

目的:应用量子点标记的荧光原位杂交方法以快速检测金黄色葡萄球菌。方法:采用两种量子点-亲和素-生物素-DNA探针,即A型肠毒素(SEA)基因与FemB基因探针与金黄色葡萄球菌临床分离株或感染金黄色葡萄球菌的粪便标本进行荧光原位杂交,同时与SEA基因聚合酶链反应(PCR)的检测结果比较。结果:10株临床金黄色葡萄球菌分离株中,2株SEA基因探针杂交和SEA基因PCR检测结果均为阳性,其余8株SEA基因探针杂交和SEA基因PCR检测结果均为阴性,10株FemB基因探针杂交结果均为阳性。3例分离培养为金黄色葡萄球菌的临床粪便标本直接进行荧光原位杂交,FemB及SEA基因探针杂交结果均为阳性,SEA基因PCR检测结果均为阳性。SEA、FemB基因探针与其他相关菌种未见非特异性反应。结论:量子点标记荧光原位杂交法检测金黄色葡萄球菌具有快速、简便、特异的特点,且可用于临床粪便标本的直接检测。     

凝固酶阴性葡萄球菌耐药性分析

目的：了解和探讨凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）的耐药现状，为临床合理使用抗菌药物提供实验室依据。方法：运用血平板进行常规接种培养，用ATB细菌鉴定仪作菌株鉴定。药敏试验采用纸片扩散法（K—B法）进行，依据NCCLS／CLSI 2004年规则判断结果。结果：临床标本分离出CNS共275株，耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌（MRC—NS）分离率为59．3％。MRCNS耐药率明显高于甲氧西林敏感凝固酶阴性葡萄球菌（MSCNS）。所有CNS对万古霉素敏感，对利福平、复方新诺明有一定的敏感性。结论：CNS已成为临床感染的病原菌之一，MRCNS检出率高且呈多药耐药，提示万古霉素是治疗MRCNS感染的首选药物。     

应用葡萄球菌A蛋白快速检测金黄色葡萄球菌的诊断价值

目的评价应用葡萄球菌A蛋白(SPA)快速检测金葡菌的临床诊断价值。方法 200株鉴定明确的菌株(金葡菌和非金葡菌各100株)采用SPA法检测,统计检测方法的灵敏度和特异度;118份ICU患者的痰标本,采用双盲法分别对其进行传统痰培养鉴定和SPA镜下快速检测,计算该诊断试验的评价指标,并对痰培养和SPA方法的相关性进行分析。结果 SPA检测的灵敏度和特异度均为100%;双盲法痰标本SPA检测敏感度为100%,特异度97.7%,SPA检测和痰培养的结果呈高度相关性(P>0.05)。结论 SPA检测法可早期诊断金葡菌感染,是一项快速的、灵敏度和特异度较高的诊断试验。     

耐红霉素葡萄球菌诱导克林霉素耐药的检测

目的 了解该院葡萄球菌对红霉素及克林霉素的耐药性，测定葡萄球菌对克林霉素的诱导耐药率。方法 用双纸片扩散法检测葡萄球菌对红霉素和克林霉素的耐药性，用D试验检测红霉素对克林霉素的诱导耐药率。结果 D试验阳性葡萄球菌占所检测葡萄球菌的18．2％；在葡萄球菌、金葡菌、凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌（MRCNS）（葡萄球菌、金葡菌、CNS和MRCNS均为红霉素耐药而克林霉素敏感）中，诱导克林霉素耐药检出率分别为63．6％、100．0％、50．0％和53．3％。结论 临床微生物实验室应加强细菌诱导克林霉素耐药的检测，以指导临床合理使用抗生素。     

金黄色葡萄球菌感染现状分析

目的：了解金黄色葡萄球菌的临床分布情况及其对常用抗菌药物的耐药情况,指导临床合理选用抗菌药物提供依据,并分析MRSA感染的高危因素,预防其爆发流行,为临床防治提供依据。方法：对我院2009年1月-2013年1月期间临床各标本中分离的260株葡萄球菌进行鉴定,头孢西丁纸片扩散法进行MRSA检测,并用K—B法对常用的22种抗茵药物进行药敏鉴定。对MRSA暴露因素进行卡方检验,并对关联因素进行非条件logistic多元回归分析筛选出MRSA感染的高危因素。结果：金黄色葡萄球菌主要来源于痰液、浓汁、血液及其导管。感染部位主要集中于呼吸道、皮肤软组织、手术部位及其泌尿道等。科室主要分布于ICU科、神经外科、普外科、骨科及其烧伤科等。260株金黄色葡萄球菌中有184株为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）,其分离率为70．77％,MRSA对多种抗菌药物耐药率〉80．0％,甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌（MSSA）76株,除对青霉素、红霉素、克林霉素外的大多数抗菌药物敏感。患者年龄、住院时间、基础疾病、使用抗生素、侵袭性操作、接受手术六个因素与MRSA感染有关联,并且基础疾病、使用抗生素、侵袭性操为其危险因素。结论：金黄色葡萄球菌感染严重,尤其是MRSA,呈现逐年升高趋势,并且其耐药率严重。基础疾病、使用抗生素、侵袭性操为其危险因素。     

凝固酶阴性葡萄球菌的鉴定及分类

目的 探讨凝固酶阴性葡萄球菌简化生化反应检索表的鉴定分类技术.方法 采用凝固酶活性,溶血作用,硝酸盐还原以及有氧条件下分解,下记10种糖类(木糖、蔗糖、阿拉伯糖、海藻糖、木糖醇、果糖、麦芽糖、乳糖、核糖、甘露醇)等实验进行鉴定分类.结果 按简化生化反应检索表的程序对446株凝固酶阴性葡萄球菌鉴定分类,获得表皮葡萄球菌322株(72.2%),孔氏葡萄球菌36株(8.1%),木糖葡萄球菌26株(5.8%),华氏葡萄球菌24株(5.4%),腐生葡萄球菌20株(4.5%),头状葡萄球菌4株(0.9%),人型葡萄球菌及溶血葡萄球菌各2株,另有10株不能定种.结论 凝固酶阴性葡萄球菌按凝固酶实验和甘露醇实验的结果可初步分为表皮葡萄球菌和其他凝固酶阴性葡萄球菌两大类,在观察有氧条件下各种糖类分解实验过程中,注意到凝固酶阴性葡萄球菌对多种糖类能在培养48 h内分解产酸,但对木糖和麦芽糖的分解,有些菌种则需3～7 d,呈迟缓分解.建议糖类分解实验以连续观察7 d再确定阴性为好.     

74株溶血葡萄球菌重新鉴定的结果分析

目的 调查近年来临床标本中溶血葡萄球菌迅速增多，而金黄色葡萄球菌显著减少的原因。方法 使用生物化学和分子生物学的方法对临床分离的74株溶血葡萄球菌重新进行鉴定。结果 74株溶血葡萄球菌经传代培养后，有6株的血浆凝固酶、甘露糖和甘露醇等试验由阴性转变为阳性iPCR检测后，有15株细菌显示金黄色葡萄球菌种特异性基因（nuc和coa）阳性。结论 临床标本中葡萄球菌菌种构成比的变迁与部分细菌生化反应改变而导致的菌种鉴定错误有关，使用某些作用于细胞壁的抗生索可能是其原因之一。     

医院感染金黄色葡萄球菌的临床分布与药敏结果分析

目的探讨分析金黄色葡萄球菌(SAU)的临床分布特点及药敏情况,为临床合理使用抗菌药物提供科学依据。方法采用VITEK-2细菌鉴定及药敏系统,对2011年1月至2014年4月该院临床科室送检的分泌物、痰液、血液等各类标本中分离出的SAU进行鉴定和药敏试验。其结果采用WHONET5.5和SPSS17.0软件进行数据处理及统计分析。结果共分离出SAU 315株,其中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)64株,检出率为20.3%。315株SAU的临床标本类型分布中,以分泌物最多,占53.7%,其次为痰液占15.2%。临床科室分布中,以骨科、皮肤科最多,分别占26.0%,其次为肾病科占14.0%。除红霉素、万古霉素、替加环素及利奈唑胺外,MRSA对抗菌药物的耐药率均高于甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA),比较差异有统计学意义(P<0.05)。未发现耐万古霉素、替加环素和利奈唑胺的菌株,其敏感率均为100%。结论 SAU耐药现状严重,应及时了解SAU感染的分布特征,加强其耐药性监测,规范临床用药,有效控制其感染与扩散。     

147株金黄色葡萄球菌耐药现状分析

目的 研究金黄色葡萄球菌(SAU)临床分离株的耐药性,为合理使用抗菌药物提供依据.方法 采用VITEK 2 Compact型全自动微生物分析系统进行菌株鉴定和药敏试验,统计分析147株SAU的标本分布及耐药率.结果 分泌物标本SAU检出率最高;耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)分离率达40.1%(59/147).SAU对多种抗菌药物具有不同程度的耐药性,对呋喃妥因、利奈唑胺、奎努普汀/达福普汀、替加环素、万古霉素敏感率为100.0%.结论 SAU临床分离株耐药现状严重,MRSA的耐药情况更为严重,临床微生物实验室应加强MRSA监测工作.     

金黄色葡萄球菌耐消毒剂基因qacA的流行病学研究

目的 了解重庆医科大学附一院近年临床分离的金葡菌中,耐消毒剂基因qacA的流行情况,从而指导临床抗菌药物、消毒剂的合理使用.方法 选取有代表性的1价和2价化合物,检测126株金葡菌的MIC,阳性株用PCR法检测qacA基因型,采用CLSI推荐的30 μg头孢西丁纸片法进行MRSA鉴定.结果 临床分离的126株金葡菌中,12株qacA基因型呈阳性(阳性率为9.5%),52株为MRSA(其中qacA基因阳性率为17.3%).结论 临床分离的金葡菌中,qacA基因携带率较高.     

阳性报警时间预测血培养葡萄球菌评价

目的探讨阳性报警时间（1vrP）在预测血培养中金黄色葡萄球菌（SA）、凝固酶阴性葡萄球菌（CoNS）和甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌（MRSA）中的价值。方法收集北京大学第一医院2008至2012年血培养阳性标本中SA、CoNS的1TrP,根据SA对苯唑西林的敏感性判定为MRSA或甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌（MSSA）。对同一患者分离的重复菌株,仅留取第1株纳入本研究。分别比较SA和CoNS的TTP差异是否具有统计学意义,MRSA和MSSA的TTP差异是否有统计学意义。用受试者工作特征（ROC）曲线分析1TrP的诊断价值。结果收集到SA共101株（其中MRSA为51株,MSSA为50株）,CoNS共253株。SA和CoNS的TTP分别为（16．63±7．47）h和（24．61±11．09）h,二者差异有统计学意义（P〈0．05）。MRSA和MSSA的TTP分别为（18．22±8．15）h和（15．01±6．40）h,二者差异有统计学意义（P〈0．05）。ROC曲线表明TTP≤16．90h可作为区分SA和CoNS的切点,曲线下面积（AUC）为0．758。TTP〉12．58h可作为区分MRSA和MSSA的切点,AUC为0．630。结论TTP对预测SA和CoNS的准确度为中等,对预测MRSA和MSSA的准确度较低。     

1069株葡萄球菌耐药状况分析

[目的]了解我院医院感染葡萄球菌耐药状况。[方法]将分离到的葡萄球菌采用K—B法做药敏试验，按CLSI／NC—CLS 2000标准判断结果。[结果]2001年1月～2005年12月共检出葡萄球菌1069株，其中金黄色葡萄球菌594株，对苯唑西林耐药532株，耐药率为89．56％；表皮葡萄球菌308株，对苯唑西林耐药237株，耐药率为76．94％；溶血性葡萄球菌161株，对苯唑西林耐药132株，耐药率为81．99％。检出的葡萄球菌对青霉素、红霉素、克林霉素、复合磺胺均呈高度耐药，只有万古霉素100％敏感。[结论]了解医院感染葡萄球菌的耐药状况，对临床合理选择抗生素十分重要，万古霉素可作为葡萄球菌重症感染的首选药物。     

葡萄球菌生物膜的形成及影响因素

目的了解临床标本中葡萄球菌形成生物膜的状况，及葡萄糖、乙醇、氯化钠对生物膜形成的影响。方法采用刚果红、微量平板法检测生物膜形成及葡萄糖、乙醇、氯化钠对生物膜形成的影响。结果刚果红法检测金黄色葡萄球菌(金葡菌)、凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)生物膜阳性率分别为26．2％和12．7％；生物膜半定量法，金葡菌：普通肉汤、0．25％葡萄糖、2％、4％乙醇、2％、4％氯化钠阳性率分别为14．7％、29．6％、32．7％、19．6％、13．1％和14．6％；CNS分别为13．9％、27．8％、26．5％、18．5％和21．5％。结论临床标本葡萄球菌相当一部分能产生生物膜，葡萄糖、乙醇能促进生物膜形成。     

金黄色葡萄球菌性烫伤样皮肤综合征的护理

金黄色葡萄球菌性烫伤样皮肤综合征（Staphylo cocal Scalded Skin Syndrome，SSSS）又称新生儿剥脱性皮炎，主要是凝固酶阳性的噬菌体第Ⅱ组71型金黄色葡萄球菌所致的一种急性皮肤感染病。此菌分泌一种表皮松解毒素，造成表皮剥脱。可通过空气或接触传播，是一种以全身泛发性红斑，松弛性大疱及大片表皮剥脱为特征的疾病。