血清NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3炎症小体及呼出气一氧化氮评估三维适形放射治疗致放射性肺炎价值研究

目的 探讨血清NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症小体表达水平及呼出气一氧化氮(FeNO)在评估三维适形放射治疗致放射性肺炎中的应用价值.方法 选取自2018年12月至2021年1月江阴市人民医院收治的行三维适形放射治疗的胸部肿瘤患者103例,依照患者是否出现放射性肺炎分为非肺炎组(n=60)与肺炎组(n=43).三维适形放射治疗结束后3 d,检测两组患者血清中NLRP3炎症小体水平;测定流速分别为50 ml/s、200 ml/s的FeNO水平.采用Logistics多元回归分析三维适形放射治疗致放射性肺炎的危险因素.绘制受试者工作特征(ROC)曲线,分析NLRP3炎症小体表达水平及FeNO预测三维适形放射治疗致放射性肺炎的应用价值.结果 肺炎组患者血清NLRP3炎症小体及50 ml/s、200 ml/s时的FeNO水平均明显高于非肺炎组,差异有统计学意义(P<0.05).Logistics多元回归分析发现,NLRP3炎症小体、FeNO50 ml/s、FeNO200 ml/s是三维适形放射治疗导致放射性肺炎的危险因素(P<0.05).NLRP3炎症小体、FeNO50 ml/s、FeNO200 ml/s水平联合应用预测放射性肺炎的灵敏度、特异度及ROC曲线下面积均明显高于各指标单独应用,差异有统计学意义(P<0.05).结论 NLRP3炎症小体、FeNO水平联合应用预测放射性肺炎的灵敏度、特异度较高,优于单一指标预测.     

罗汉果醇对脂多糖诱导急性肺损伤的作用及机制研究北大核心CSCD

目的通过脂多糖刺激小鼠以及人单核细胞THP-1诱导的急性炎症模型, 探索罗汉果醇促进AMPK磷酸化后靶向调控炎症通路的作用以及相关机制, 为罗汉果醇(MO)能否对急性肺损伤的临床治疗中得到应用提供研究证据。方法动物实验:取用24只6~8周龄清洁级C57BL/6雄性小鼠, 采用随机(随机数字法)法将小鼠分为对照组、罗汉果醇(MO)组、脂多糖组、脂多糖+MO组, 每组各分配6只。对照组小鼠腹腔注射生理盐水(30 mL/kg),MO组小鼠腹腔注射MO(30 mg/kg),脂多糖组小鼠腹腔注射脂多糖(10 mg/kg), 脂多糖+MO组小鼠腹腔注射MO(30 mg/kg), 30 min后另一侧腹腔注射脂多糖(10 mg/kg)。经过12 h后, 处死小鼠取材, 并进行病理学、分子生物学检测。细胞实验:取用状态良好的THP-1细胞用含10%胎牛血清的RPMI1640培养基中培养24 h后, 用100 ng/mL PMA诱导分化成巨噬细胞, 设置对照组、罗汉果醇(MO)组、脂多糖组、脂多糖+MO组。药物刺激结束后收集各组细胞悬液, 所得细胞及培养基上清液用于后续检测。结果与对照组相比, 脂多糖组的损伤程度明显, 组织切片的H&E染色结果中可见肺泡腔结构破坏, 炎症细胞浸润增多, 且有出血以及肺泡腔间隔明显增厚;在加入MO干预下, 小鼠肺组织的损伤程度大幅度改善, MPO、肺湿/干重比等也有了显著的降低。肺组织中炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA水平也同样在MO的干预下显著下调[(2.96±0.10)vs. (5.53±0.14), (8.62±0.17)vs. (12.31±0.09), (3.01±0.09)vs.(4.85±0.36)]。在脂多糖组小鼠肺组织中炎性小体的主要成分蛋白NLRP3、caspase-1 p20、GSDMD-N、ASC表达量显著高于对照组,而脂多糖+MO组中AMPK磷酸化水平提高, 焦亡相关蛋白的表达均得到有效地抑制[(0.58±0.09)vs.(0.89±0.15)、(0.19±0.08)vs. (0.93±0.16)、(0.65±0.09)vs. (0.86±0.14)、(0.30±0.12)vs. (0.47±0.10), 均P<0.05];同时通过ELISA法测得在组织中焦亡的主要标志物炎症因子IL-1β、IL-18的分泌同样可以被MO缓解。而细胞实验中MO同样促进了AMPK的磷酸化, 抑制NLRP3炎症小体相关成分蛋白表达, 同时明显提高了细胞活力。结论 MO通过促进AMPK的磷酸化抑制NLRP3介导的细胞焦亡, 进而缓解脂多糖诱导的急性肺损伤。     

罗汉果醇对脂多糖诱导急性肺损伤的作用及机制研究

目的通过脂多糖刺激小鼠以及人单核细胞THP-1诱导的急性炎症模型, 探索罗汉果醇促进AMPK磷酸化后靶向调控炎症通路的作用以及相关机制, 为罗汉果醇(MO)能否对急性肺损伤的临床治疗中得到应用提供研究证据。方法动物实验:取用24只6～8周龄清洁级C57BL/6雄性小鼠, 采用随机(随机数字法)法将小鼠分为对照组、罗汉果醇(MO)组、脂多糖组、脂多糖+MO组, 每组各分配6只。对照组小鼠腹腔注射生理盐水(30 mL/kg),MO组小鼠腹腔注射MO(30 mg/kg),脂多糖组小鼠腹腔注射脂多糖(10 mg/kg), 脂多糖+MO组小鼠腹腔注射MO(30 mg/kg), 30 min后另一侧腹腔注射脂多糖(10 mg/kg)。经过12 h后, 处死小鼠取材, 并进行病理学、分子生物学检测。细胞实验:取用状态良好的THP-1细胞用含10%胎牛血清的RPMI1640培养基中培养24 h后, 用100 ng/mL PMA诱导分化成巨噬细胞, 设置对照组、罗汉果醇(MO)组、脂多糖组、脂多糖+MO组。药物刺激结束后收集各组细胞悬液, 所得细胞及培养基上清液用于后续检测。结果与对照组相比, 脂多糖组...     

慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠肺组织中NLRP3炎症小体表达水平的变化及意义

目的 探讨NOD样受体热蛋白结构相关蛋白3(NLRP3)炎症小体在慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型中的变化及意义。方法 将30只雄性大鼠随机分为2组,正常对照组(n=10只)给予自由饮水和摄食,喂养75天; 吸烟组(n=20只)采用单纯吸入香烟烟雾的方法制造大鼠COPD模型,连续75天后再根据大鼠最大呼气流速(PEF)及气道肺组织病理变化分为吸烟COPD组(n=9只)和吸烟非COPD组(n=11只)。收集支气管肺泡灌洗液(BALF)计算巨噬细胞(AMC)、中性粒细胞(NEU)和淋巴细胞(LYM)的绝对计数。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术分别测定BALF,肺组织中NLRP3炎症小体的浓度以及NLRP3 mRNA的相对表达量。结果与正常对照组比较,吸烟非COPD组、吸烟COPD组BALF中NEU(×10⁶/L)(524.2±73.1,916.9±84.8 vs 106.6±31.8),AMC(×10⁶/L)(1 570.9±273.5,2 307.8±410.4 vs 496.6±61.7)和LYM(×10⁶/L)(72.1±14.7,115.4±23.8 vs 21.6±4.2),计数明显升高,吸烟COPD组BALF中NEU,AMC和LYM计数亦较吸烟非COPD组明显升高(F=350.59,100.57,82.63,均P<0.05)。与正常对照组比较,吸烟非COPD组、吸烟COPD组BALF(pg/ml)(107.8±23.5,126.7±34.9 vs 76.7±15.1),肺组织(pg/ml)(118.8±33.3,147.4±40.2 vs 84.1±21.5)中NLRP3炎症小体的浓度明显升高,与吸烟非COPD组比较,吸烟COPD组BALF,肺组织中NLRP3炎症小体的浓度亦明显升高(F=9.53,9.17,均P<0.05)。吸烟非COPD组和吸烟COPD组肺组织NLRP3 mRNA相对表达量均显著高于正常对照组(P<0.05),吸烟COPD组肺组织NLRP3 mRNA相对表达量显著高于吸烟非COPD组(P<0.05)。BALF,肺组织中NLRP3炎症小体浓度、肺组织NLRP3 mRNA相对表达量与NEU,AMC,LYM计数均呈显著正相关(P<0.05)。结论 NLRP3炎症小体参与了COPD慢性炎症的发生、发展,与肺组织炎症细胞以及气道病理改变密切相关,阻断NLRP3炎性小体的活化,有望成为治疗COPD新的靶点和方向。     

NLRP3抑制剂CY-09对小鼠肾缺血再灌注损伤后远隔器官肝脏的保护作用

目的 探讨NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)特异性抑制剂(CY-09)的预处理对小鼠肾缺血再灌注(IR)损伤后远隔器官肝脏功能的保护作用。方法 将32只Bal/C小鼠随机平均分成四组,分别为假手术组(Sham组)、Sham+CY-09预处理组(Sham+CY-09组)、肾缺血再灌注组(IR组)、IR+CY-09组,每组8只。Sham+CY-09组和IR+CY-09组于术前30 min腹腔注射CY-09 50μg/kg, Sham组和IR组注射等体积生理盐水。所有组均切除小鼠右肾,Sham组和Sham+CY-09组充分暴露左肾但不夹闭,IR组和IR+CY-09组暴露左肾并夹闭45 min,建立左肾IR损伤模型并再灌注24 h。检测血肌酐(sCr)、谷丙转氨酶(ALT)浓度变化,采用苏木精-伊红(HE)染色观察肝、肾组织病理学改变,采用细胞凋亡(Tunel)染色检测肝脏组织凋亡,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)测定NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)蛋白,酶联免疫吸附法(ELISA)检测炎症因子白细胞介素-1β(IL...     

核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3炎症小体对冠状动脉支架植入术后支架内再狭窄的影响

目的 探讨核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体的表达水平与冠状动脉支架植入术后支架内再狭窄(ISR)的相关关系.方法 选取住院治疗并成功行初次经皮冠状动脉介入治疗(PCI)术的患者150例,术前、术后24 h应用免疫印迹法定量分析NLRP3.1年后复查冠状动脉造影,根据ISR诊断标准将患者分为ISR组(n=22)与对照组(n =128),分析NLRP3表达水平与ISR严重程度的相关关系.结果 1年后复查时,ISR组NLRP3表达水平较对照组升高,差异有统计学意义(P＜0.05),且在一定范围内随着ISR严重程度的升高,NLRP3表达水平可逐渐增高,二者存在简单线性正相关关系(r =0.862,P=0.001).结论 NLRP3表达水平与冠状动脉ISR严重程度呈正相关.     

内质网应激和NOD样受体蛋白3在重症中暑小鼠肠黏膜损伤中的作用

目的 研究内质网应激和NOD样受体蛋白3(NOD-like receptor protein 3,NLRP3)在重症中暑肠黏膜损伤中的作用及内质网应激抑制剂4-苯基丁酸(4-phenylbutyric acid,4-PBA)的保护效应.方法 30只雄性BALB/c小鼠随机(随机数字法)分成对照组(control)、重症...     

COPD患者血清PGRN、GDF-15和NLRP3炎性小体水平与病情严重程度的相关性及发病危险因素分析

目的 探讨血清中颗粒蛋白前体(PGRN)、生长分化因子-15(GDF-15)和NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎性小体水平与慢性阻塞性肺疾病(COPD)及病情严重程度的关系,并分析其发病危险因素.方法 选取该院2020年1-5月收治的216例COPD患者为COPD组,根据不同病情分为稳定期组121例,急...     

核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3炎性小体在脓毒症急性肾损伤大鼠肾脏组织的表达及其影响

目的探讨核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白（NLRP3）炎性小体在脓毒症急性肾损伤（AKI）大鼠中的作用及其机制。 方法采用随机数字表法将18只雄性Wistar大鼠分为脂多糖（LPS）组、LPS +抑制剂组及阴性对照组3组,每组6只。LPS组大鼠给予腹腔内注射LPS（3.5 mg/kg）,LPS +抑制剂组大鼠腹腔内注射LPS（3.5 mg/kg）及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1（Caspase-1）抑制剂Belnacasan（VX-765,100 mg/kg）,而阴性对照组大鼠则给予腹腔内注射0.3 mL等渗NaCl溶液。比较3组大鼠建模前及建模后24 h血清肌酐水平变化,采用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测3组大鼠建模24 h后血清白细胞介素1β（IL-1β）、IL-18及肿瘤坏死因子α（TNF-α）表达水平,采用Western-blotting检测3组大鼠建模24 h后NLRP3及Caspase-1蛋白表达水平。 结果3组大鼠建模前后血清肌酐水平比较,差异有统计学意义（F = 146.910,P < 0.001）。进一步两两比较发现,建模后,LPS +抑制剂组及阴性对照组大鼠血清肌酐水平均较LPS组显著降低[（1.57 ± 0.20）、（0.54 ± 0.39）、（2.31 ± 0.24）mg/L],且阴性对照组大鼠血清肌酐水平较LPS +抑制剂组更低（P均< 0.05）;而LPS组[（2.31 ± 0.24）mg/L vs.（0.53 ± 0.16）mg/L]及LPS +抑制剂组[（1.57 ± 0.20）mg/L vs.（0.56 ± 0.08）mg/L]大鼠建模后血清肌酐水平均较建模前显著升高（P均< 0.05）。LPS组、LPS +抑制剂组及阴性对照组大鼠血清IL-1β [（9.33 ± 1.16）、（1.93 ± 0.30）、（1.88 ± 0.30）ng/L]、IL-18 [（23.8 ± 2.8）、（19.6 ± 1.5）（16.6 ± 1.2）ng/L]、TNF-α [（42.3 ± 2.1）、（23.9 ± 2.5）、（23.5 ± 1.3）ng/L]及NLRP3蛋白[（2.04 ± 0.25）、（2.04 ± 0.27）、（1.49 ± 0.28）]和Caspase-1蛋白[（0.62 ± 0.07）、（0.51 ± 0.09）、（0.50 ± 0.09）]表达水平比较,差异均有统计学意义（F = 217.015、20.590、168.766、8.723、3.905,P均< 0.05）。进一步两两比较发现,LPS +抑制剂组及阴性对照组大鼠血清IL-1β、IL-18、TNF-α表达水平均较LPS组大鼠显著降低,且阴性对照组大鼠IL-18表达水平较LPS +抑制剂组更低（P均< 0.05）。阴性对照组大鼠NLRP3蛋白表达水平均较LPS组及LPS +抑制剂组显著降低,LPS +抑制剂组及阴性对照组大鼠Caspase-1蛋白表达水平均较LPS组显著降低（P均< 0.05）。 结论大鼠发生脓毒症时,通过激活炎性小体NLRP3,进而通过Caspase-1通路造成急性肾损伤。     

慢性肾脏病5期维持性血液透析患者外周血生长激素促分泌素、NOD样受体蛋白3水平与血管钙化的相关性

目的 探讨慢性肾脏病（chronic kidney disease,CKD）-5期维持性血液透析患者外周血生长激素促分泌素（ghrelin）、NOD样受体蛋白3(NOD-likereceptorprotein3,NLRP3)水平与血管钙化之间相关性。方法 选取中国人民解放军海军第九七一医院2018年8月至2021年2月收治的126例CKD-5期维持性血液透析患者为观察对象,根据是否合并血管钙化分为钙化组92例和未钙化组34例。采用酶联免疫吸附测定法检测外周血ghrelin水平,用实时PCR技术检测外周血中NLRP3 mRNA水平,比较不同血管钙化程度患者外周血ghrelin、NLRP3水平,并分析两者与血管钙化指标之间的相关性。结果 钙化组患者血磷（P）、钙磷乘积（Ca×P）、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）及骨保护素（osteoprotegerin,OPG）水平相较于未钙化组均明显升高,Ca水平明显下降（P<0.001）;与未钙化组比较,钙化组患者NLRP3 mRNA水平、超敏C反应蛋白（high-sensitivity C-reactivepro...     

TNF-α和CRT双信号对RA患者滑膜组织NLRP3炎症小体的活化作用

目的研究肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和钙网织蛋白(CRT)双信号对类风湿性关节炎(RA)患者成纤维样滑膜细胞(FLS)中核苷酸结合寡聚化结构域受体3(NLRP3)炎症小体活化的影响。方法采用间接免疫荧光染色法检测12例RA和10例骨性关节炎(OA)患者滑膜组织NLRP3、衔接蛋白凋亡相关斑点样蛋白(ASC)的表达,并与滑膜衬里层和衬里下层FLS标志物进行共定位研究。采用胶原酶消化法分离RA患者滑膜组织中FLS并进行体外培养。分别用不同浓度的TNF-α或脂多糖(LPS)(刺激剂)处理细胞,采用免疫印迹法和实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测细胞NLRP3、白细胞介素1β前体(pro-IL-1β)和白细胞介素18前体(pro-IL-18)的蛋白和mRNA表达。加入尼日利亚菌素(Nigericin)或CRT后采用免疫印迹法检测FLS中半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶1(Caspase-1)活化片段p20的表达;收集细胞培养上清液,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测分泌型白细胞介素(IL)-1β和IL-18水平。结果 RA患者滑膜组织中NLRP3炎症小体的主要成分NLRP3和ASC的平均荧光强度高于OA患者(P<0.01)。NLRP3、ASC和IL-1β裂解片段(cleaved IL-1β)与RA患者滑膜衬里层FLS表面标志物PDPN和衬里下层FLS表面标志物CD248均有共定位。体外细胞实验结果显示TNF-α可以促进FLS中NLRP3和pro-IL-1β的蛋白表达;与对照组(无刺激剂)相比,二者的mRNA表达显著增加(P<0.05、P<0.001),而LPS对RA患者FLS中NLRP3炎症小体的预活化无影响。TNF-α/Nigericin或TNF-α/CRT双信号能够促进FLS中Caspase-1的活化,导致Caspase-1活化片段p20呈浓度依赖性升高;与对照组相比,TNF-α/CRT组分泌型IL-1β显著升高(P<0.05)。结论 TNF-α/CRT双信号可促进RA患者FLS中NLRP3炎症小体的活化。     

早期脓毒症患者NOD样受体1表达与病情严重程度相关研究

目的 通过前瞻性研究探讨早期脓毒症患者外周血单个核细胞中NLRP1炎性体和NLRP3炎性体相关组分的表达和血浆中相关炎症因子的水平,以及各指标的临床价值.方法 脓毒症患者21例,年龄(67.71±17.17)岁;非感染性SIRS患者20例,年龄(61.35±11.82)岁;健康者20例,年龄(60.38 ±5.61)岁.Real-time PCR检测炎性体复合物各组分以及相关炎症因子mRNA表达水平,ELISA检测血浆IL-1β和IL-18质量浓度.统计方法使用单因素方差分析和Spearman相关性分析.结果 ①NLRP1在早期脓毒症患者和非感染性SIRS患者外周血单个核细胞(PBMC)中的mRNA表达均较健康对照组明显降低(P＜0.01),NLRP3在脓毒症患者PBMC中表达与健康对照组差异无统计学意义(P＞0.05),但其在非感染性SIRS组的表达较脓毒症组和健康对照组明显升高(P ＜0.01);IL-1β在3组人群PBMC中的mRNA表达差异无统计学意义(P＞0.05),IL-18在脓毒症组和非感染性SIRS组中的表达均较健康对照组增高(P＜0.01),其中非感染性SIRS组IL-18表达水平最高.②脓毒症患者血浆中IL-1β的蛋白水平较健康对照组低(P＜0.05),IL-18水平较健康对照组和非感染性SIRS组显著升高(P＜0.01);③NLRP1与SOFA评分呈负相关性(r=-0.44,P＜0.05);与APACHEⅡ评分也具有负相关性(r=-0.52,P＜0.05).结论 NLRP1在早期脓毒症患者PBMC中表达明显降低,且其水平与患者病情严重程度呈负相关,NLRP1水平越低病情越严重.     

核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3和caspase-1表达与非小细胞肺癌患者疾病进展的关系

目的 观察非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者外周血核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)及血清caspase-1 的表达情况,探...     

儿童慢性非萎缩性胃炎中核苷酸结合寡聚化结构域样受体含pyrin结构域蛋白6的表达研究

目的:探讨儿童慢性非萎缩性胃炎（chronic non-atrophic gastritis,CNG）患儿胃组织及胃液中核苷酸结合寡聚化结构域样受体含pyrin结构域蛋白6（NLR family,pyrin domain containing6,NLRP6）的表达,并分析幽门螺杆菌（Helicobacter pylor...     

Modulation of NLRP3 inflammasomes activation contributes to improved survival and function of mesenchymal stromal cell spheroids

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Ligustrazine disrupts lipopolysaccharide-activated NLRP3 inflammasome pathway associated with inhibition of Toll-like receptor 4 in hepatocytes

Intestine microbial products may translocate into the liver via portal vein and trigger or exacerbate hepatocyte inflammatory responses during liver injury. The NLRP3 inflammasome pathway plays a key role in regulation of inflammatory cytokines in response to bacterial products. The present study was aimed to investigate the effects of ligustrazine, a natural alkaloid compound, on the NLRP3 inflammasome pathway activation and interleukin-1β (IL-1β) generation in hepatocytes. We cultured human LO2 hepatocytes and treated them with lipopolysaccharide (LPS), a membrane component of Gram-negative bacteria, for mimicking hepatic exposure to microbial products in vitro. The results demonstrated that LPS upregulated NLRP3 and cleaved-caspase-1, and promoted the expression and secretion of IL-1β in LO2 cells. Ligustrazine was found to reduce NLRP3 and cleaved-caspase-1, prevented IL-1β cleavage, and decreased IL-1β secretion into extracellular environment. Further examinations showed that LPS upregulated the expression of Toll-like receptor 4 (TLR4), but ligustrazine repressed TLR4 expression in LPS-treated hepatocytes. Moreover, pharmacological inhibition of TLR4 by its specific inhibitor TAK-242 downregulated NLRP3 and cleaved-caspase-1, and combination treatment with TAK-242 and ligustrazine led to more significant inhibitory effects on the NLRP3 pathway. TAK-242 also reduced cleaved-IL-1β, and this reducing effect was enhanced by ligustrazine. Collectively, the current results revealed that ligustrazine interrupted LPS-activated NLRP3 inflammasome signaling and reduced generation of IL-1β in hepatocytes, which was associated with inhibition of TLR4. This study uncovered a novel mechanism for ligustrazine as a potential hepatoprotective agent.     

cGAS/STING通过NLRP3炎性小体调控人肺微血管内皮细胞炎症的作用机制

目的探讨鸟嘌呤核苷酸腺嘌呤核苷酸合成酶（cGAS）/干扰素激活蛋白（STING）通过NOD样受体蛋白3（NLRP3）炎性小体调控人肺微血管内皮细胞（HPMVECs）炎症的作用机制。 方法原代培养HPMVECs,进行脂多糖（LPS）量效实验及cGAS、STING和NLRP3抑制干预实验。（1）量效实验：以50、100、1000 ng/ml的LPS作用24 h后（分别为50 ng/ml LPS组、100 ng/ml LPS组、1000 ng/ml LPS组）,用实时荧光反转录-聚合酶链反应（qRT-PCR）和蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）分别检测cGAS、STING和NLRP3表达。（2）cGAS抑制干预实验：使用cGAS（siRNA）转染,再加入100 ng/ml的LPS处理24 h;同时设立空白对照组、LPS刺激组、siRNA单独处理组,采用Western Blot检测STING、NLRP3,及NLRP3下游因子白介素（IL）-1β和IL-18的表达。（3）STING抑制干预实验：使用STING（siRNA）转染,再加入100 ng/ml的LPS处理24 h;同时设立空白对照组,采用Western Blot检测cGAS、NLRP3,及NLRP3下游因子IL-1β和IL-18的蛋白表达。（4）NLRP3抑制干预实验：使用NLRP3炎性小体抑制剂MCC950预处理30 min,再加入100 ng/ml的LPS处理24 h;同时设立空白对照组,采用Western Blot检测cGAS、STING,及NLRP3下游因子IL-1β和IL-18的蛋白表达。 结果（1）量效实验：与空白对照组比较,HPMVECs中cGAS、STING、NLRP3的mRNA水平和蛋白表达均显著升高,差异有统计学意义（P＜0.05）。（2）cGAS抑制干预实验：与空白对照组比较,LPS刺激HPMVECs,cGAS表达水平显著升高,差异有统计学意义（P＜0.05）;与LPS刺激组比较,抑制cGAS时,siRNA＋LPS处理组STING、NLRP3及其下游因子IL-1β、IL-18的表达水平均显著降低,差异有统计学意义（P＜0.05）。（3）STING抑制干预实验：与空白对照组比较,LPS刺激HPMVECs,STING表达水平显著升高,差异有统计学意义（P＜0.05）;与LPS刺激组比较,抑制STING时,NLRP3及其下游因子IL-1β、IL-18的表达水平均显著降低,差异有统计学意义（P＜0.05）,而cGAS的表达水平无显著降低（P＞0.05）。（4）NLRP3抑制干预实验：与空白对照组比较,LPS刺激HPMVECs,siRNA＋LPS处理组NLRP3表达水平显著升高,差异有统计学意义（P＜0.05）;与LPS刺激组比较,抑制NLRP3显著降低了NLRP3下游因子白细胞IL-1β和IL-18的表达,差异有统计学意义（P＜0.05）,而cGAS和STING的表达水平无显著降低;差异无统计学意义（P＞0.05）。 结论（1）LPS刺激下,在HPMVECs中cGAS、STING、NLRP3、IL-1β和IL-18的表达水平均显著升高,参与调控炎症反应;（2）cGAS/STING/NLRP3信号通路顺序参与调控PMVECs炎症作用。     

血清NLRP3、ANGPTL4水平与2型糖尿病下肢动脉病变的关系

目的探讨血清核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（NLRP3）、血管生成素样蛋白4（ANGPTL4）与2型糖尿病（T2DM）下肢动脉病变（LEAD）的关系。 方法选择2019年1月至2021年1月安徽医科大学附属宿州医院内分泌科收治的89例T2DM合并LEAD患者（LEAD组）,55例单纯T2DM患者（T2DM组）和50例健康志愿者（健康对照组）。检测血清NLRP3和ANGPTL4水平,收集临床资料,Pearson相关性分析NLRP3、ANGPTL4与静息ABI指数之间相关性。Logistic逐步回归分析NLRP3、ANGPTL4与T2DM合并LEAD的关系。绘制受试者工作特征曲线（ROC）分析NLRP3、ANGPTL4诊断T2DM合并LEAD的价值。 结果LEAD组血清NLRP3水平高于T2DM组和健康对照组（P＜0.05）,血清ANGPTL4水平低于T2DM组和健康对照组（P＜0.05）。Fontaine's Ⅳ期患者静息踝肱指数（ABI）、ANGPTL4水平低于Ⅲ期和Ⅱa~Ⅱb期患者（P＜0.05）,NLRP3高于Ⅲ期和Ⅱa~Ⅱb期患者（P＜0.05）。NLRP3与静息ABI指数呈负相关（r=-0.893,P＜0.05）,ANGPTL4与静息ABI指数呈正相关（r=0.805,P＜0.05）。T2DM病程≥5年、高胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）和高NLRP3是T2DM合并LEAD的危险因素（P＜0.05）,高ANGPTL4是T2DM合并LEAD的保护因素（P＜0.05）。联合NLRP3、ANGPTL4检测诊断T2DM合并LEAD的曲线下面积为0.902,高于单独NLRP3、ANGPTL4的0.698、0.705（P＜0.05）。 结论T2DM合并LEAD患者血清NLRP3水平增高,ANGPTL4降低,且与T2DM合并LEAD的发生以及病情严重程度有关,联合NLRP3和ANGPTL4可为LEAD诊断提供有效信息。     

载脂蛋白E模拟肽ApoE23对细菌性脓毒血症小鼠血浆脂多糖浓度的影响及机制研究

目的 观察载脂蛋白E (ApoE)模拟肽ApoE23对细菌性脓毒血症小鼠血浆脂多糖(LPS)质量浓度变化的影响及其对肝脏低密度脂蛋白受体(LDLR)表达的调节作用.方法 设计ApoE模拟肽(ApoE23)并采用固相合成法进行合成,高效液相色谱(HPLC)技术对合成物进行纯化,电离子质谱对合成物进行鉴定并对合成物进行氨基酸组成分析;B组鼠伤寒沙门氏菌诱导C57BL细菌性脓毒血症模型并对感染小鼠尾静脉注射ApoE23进行治疗.小鼠血浆LPS质量浓度测定采用连续透射免疫比浊法.采用定量RT-PCR技术及Western blot技术检测小鼠肝脏中LDLRmRNA及蛋白质表达水平的变化.结果 细菌性脓毒血症小鼠血浆LPS浓度显著升高,肝脏LDLR表达明显降低.ApoE23治疗明显降低细菌性脓毒血症小鼠血浆LPS浓度,并使细菌感染导致的小鼠肝脏LDLR mRNA和蛋白质低表达得到明显纠正.结论 ApoE23可能是一种潜在的抗细菌性脓毒血症药物,其作用机制可能与其调解肝脏LDLR表达有关.     

磷肌酰脂醇特异性磷脂酶C对内毒素介导枯否细胞激活的抑制作用

目的 研究磷肌酰脂醇特异性磷脂酶C（PI-PLC）对内毒素介导的肝Kupffer细胞（枯否细胞，KCs）激活及其CDl4表达的抑制作用。方法 Wistar大鼠20只，分为PI-PLC组和LPS组，测定细胞培养液中TNF-α和IL-6含量变化，用免疫组化观察KCs膜CD14和核NF-κB的相对活性，测定KCs中CD14、TNF-α和IL-6的mRNA表达和KCs膜CD14蛋白含量变化。结果 不同浓度的LPS刺激60min后，PI-PLC组培养液中TNF-α与IL-6的含量随LPS浓度的增高而增加，但明显低于LPS组（P〈0．01）；CD14抗体染色显示，PI-PLC组部分KCs为弱阳性，而LPS组KCs为阳性细胞；NF-κB P65抗体染色显示，PI-PLC组部分KCs为弱阳性细胞，而LPS组KCs为强阳性细胞；PI-PLC组NF-κB活性在10μg／mL以上LPS刺激下才有升高，其相对光密度值显著低于LPS组（P〈0．01）；在相同浓度LPS刺激后，PI-PLC组CD14、TNF-α和IL-6的mRNA表达显著低于LPS组（P〈0．01）；PI-PLC组在相同浓度LPS刺激120min后CD14蛋白表达才明显，LPS组在100μg／mL LPS刺激后30min CD14蛋白开始升高，两者有显著性差异（P〈0．01）。结论 PI-PLC对LPS介导的KCs激活有明显的抑制作用，其机制可能与抑制KCs中CD14蛋白的表达有关。