荧光定量RT—PCR检测肺癌外周血CK19、CK20mRNA表达

目的 应用荧光定量RT-PCR（Fluorogenic quantitative reverse trailsctiptase po1ymerase chain reaction，RT-PCR）检测肺癌外周血中微转移情况。方法 用荧光定量RT-PGR方法检测103例肺癌患者外周血CK19mRNA和CK20mRNA表达。结果 103例肺癌患者外周血中CK19mRNA检测阳性35例，阳性率33．98％；CK20mRNA检测阳性17例，阳性率16．50％，其中6例患者CK19、CK20mRNA均阳性。统计结果显示外周血CK19、CK20mRNA的表达与临床分期、分化程度和淋巴结转移相关，与性别、年龄、病理类别无关。结论 用荧光定量RT-PCR法检测肺癌患者外周血CK19mRNA和CK20mRNA具有较高的灵敏度和特异性，有助于早期筛选亚临床转移。     

LunX mRNA联合CEA、SCCA、CYFRA21—1三项肿瘤标志物诊断非小细胞肺癌的临床应用价值

目的 探讨外周血LunX mRNA联合CEA、SCCA、 CYFRA21-1三项肿瘤标志物检测在非小细胞肺癌(NSCLC)患者临床诊断中的价值.方法 应用实时荧光定量RT-PCR技术和化学发光免疫分析法,分别对NSCLC、乳腺癌、胃癌、肺炎患者及健康体检人群外周血中LunX mRNA和三项肿瘤标志物水平进行检测.结果 NSCLC患者外周血中检测到LunX mRNA,阳性表达率为78.6%(44/56),在乳腺癌、胃癌、肺炎患者健康体检人群外周血中LunX mRNA检测为阴性,但是其他三项肿瘤标志物在NSCLC、乳腺癌、胃癌外周血中检测为阳性,在肺炎患者和健康体检者中检测为阴性.外周血中LunX mRNA表达水平及其阳性表达率与NSCLC患者TNM病理分期密切相关(P＜0.05).结论 NSCLC患者外周血中LunX mRNA表达特异性高, LunX mRNA联合三项肿瘤标志物检测对NSCLC临床诊断提供重要参考依据.     

乳腺癌中基因BCSG1和C-erbB2的表达及意义

目的了解乳腺癌中乳腺癌特异性基因1（BCSG1）和C-erbB2表达概况,探讨BCSG1和C-erbB2在乳腺癌中表达水平及意义。方法用免疫组化方法检测40例乳腺癌患者中BCSG1和C-erbB2的表达。结果40例乳腺癌组织中阳性表达26例,占65%,40例正常乳腺组织均呈阴性表达,两者比较差异有统计学意义（P〈0.05）。乳腺癌组织中BCSG1阳性表达与腋窝淋巴结转移、TNM分期、复发和转移有关（P〈0.05）。40例乳腺癌组织中C-erbB2蛋白阳性表达率为37.5%（15/40）,正常乳腺组织中均为阴性表达;两者比较差异有统计学意义（P〈0.05）。乳腺癌组织中C-erbB2阳性表达与腋窝淋巴结转移、TNM分期、复发和转移有关（P〉0.05）。结论基因BCSG1和C-erbB2表达异常是乳腺癌产生的机制之一,与乳腺癌的发生及发展有关。BCSG1可能是乳腺癌的一个重要预后指标。     

CK-19 mRNA表达水平在乳腺癌微转移检测及治疗监测中的应用

目的探讨细胞角蛋白19(CK19)mRNA表达水平在乳腺癌微转移检测及治疗监测中的应用。方法采用荧光定量PCR(FQ-PCR)和RT-PCR检测45例健康女性、40例良性乳腺肿瘤和86例乳腺癌患者外周血中CK19mRNA水平并进行对比分析。结果CK19mRNA在乳腺癌组表达高于良性乳腺疾病组(P<0.01),乳腺癌淋巴结转移组高于无淋巴结转移组(P<0.01)。FQ-PCR对乳腺癌诊断的灵敏度和特异性均显著高于RT-PCR法。结论FQ-PCR检测CK19对乳腺癌诊断灵敏度和特异性较高,可有效监测乳腺癌微转移和疗效。     

Bim和BCSG1蛋白表达与乳腺癌及预后的相关性分析

目的 探讨Bcl-2相互作用细胞凋亡调节因子(Bim)、乳腺癌特异基因1(BCSG1)蛋白与乳腺癌及预后的相关性。方法 回顾性收集2013年3月至2018年12月青海省中医院收治的95例乳腺癌患者的乳腺组织。采用免疫组化法检测Bim及BCSG1蛋白表达水平。分析乳腺癌患者Bim及BCSG1蛋白表达与临床病理指标及预后的关系。结果 Bim及BCSG1蛋白在乳腺癌组织中呈高表达状态;肿瘤直径≥4 cm、浸润性乳腺癌、远处转移的患者,Bim及BCSG1阳性率显著高于肿瘤直径4 cm、非浸润性乳腺癌、无远处转移患者,差异具有统计学意义(P 0. 05)。乳腺癌患者Bim表达阳性组治疗有效率显著高于阴性组,复发率及转移率显著低于阴性组; BCSG1蛋白表达阳性组治疗有效率显著低于阴性组,复发率及转移率显著高于阴性组,差异具有统计学意义(P 0. 05)。结论 Bim、BCSG1蛋白与乳腺癌肿瘤直径、病理分期、是否转移、病理分型关系密切,Bim表达阳性、BCSG1表达阴性患者预后更佳。     

荧光定量PCR检测细胞周期蛋白D1对乳腺癌的诊断价值

目的 探讨细胞周期蛋白D1(ccnd1)基因表达在乳腺癌诊断中的价值.方法 采用荧光定量PCR(FQ-PCR)检测139例乳腺癌等肿瘤患者及40例健康志愿者外周血中ccnd1 mRNA水平,同时采用逆转录RT-PCR进行对比.结果 ccnd1 mRNA在乳腺癌组表达高于良性乳腺疾病组和其它肿瘤组(P<0.05);FQ-PCR对乳腺癌诊断的灵敏度、特异性和准确度均显著高于RT-PCR法(P<0.05).结论 FQ-PCR检测ccndl对乳腺癌诊断灵敏度、特异性和准确度较高,可有效辅助诊断乳腺癌.     

外周血中检测乳腺癌细胞株hMAM表达的方法探讨

目的建立逆转录结合荧光定量PCR(FQ-PCR)检测外周血乳腺癌细胞hMAM基因表达方法,了解其监测乳腺癌细胞微转移的应用价值。方法克隆目的片段,制备标准品并作测序验证。培养乳腺癌MDA-MB453、MCF7细胞株,制成血液标本模型,GAPDH基因为内对照,逆转录结合FQ-PCR检测乳腺癌细胞株血标本模型和10例乳腺癌患者外周血的hMAM表达。结果电泳和测序证实,克隆产物系预期的目的片段。FQ-PCR标准曲线的相关系数为-1.0;用103copies/μl标准品重复检测5次,x±s:718.9±120.5,CV16.7%;MDA-MB453细胞的血标本作灵敏度试验,相当于104个血细胞中含1个乳腺癌细胞可检出阳性。未检测到MCF7细胞的hMAM表达。10例乳腺癌患者,淋巴结转移的5例中,3例hMAM表达阳性、2例阴性;无淋巴结转移的5例中,1例hMAM表达阳性、4例阴性。结论本方法可有效监测外周血中微转移的乳腺癌细胞,发现不同乳腺癌细胞系hMAM表达程度差异大。     

实时荧光定量逆转录聚合酶链反应检测结肠癌患者血CK19 mRNA水平及其意义

目的:了解结肠癌患者外周血CK19mRNA的水平,探讨其临床意义。方法:采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应,检测结肠癌患者75例、炎症性肠病(IBD)患者30例、健康志愿者41例外周血CK19mRNA的水平。结果:75例结肠癌患者外周血CK19mRNA的水平为(12600±73100)copies/mL,其中39例阳性,阳性率为52%。健康志愿者未检测到CK19mRNA。CK19mRNA水平与肿瘤病理分期和分化程度相关;CK19mRNA阳性组中CK19蛋白阳性者显著多于CK19mRNA阴性组(P<0.05)。结论:外周血CK19mRNA可作为结肠癌辅助诊断指标,定量检测外周血CK19mRNA有助于结肠癌微转移的监测。     

肺癌患者外周血微转移检测的意义

目的研究肺癌患者外周血中CEAmRNA、CK19mRNA和CK20mRNA的表达及联合检测的临床意义。方法采用荧光定量PCR技术,检测48例肺癌患者、8例肺良性病变和30名健康志愿者外周血CEAmRNA、CK19mRNA和CK20mRNA水平。结果48例肺癌患者外周血CEAmRNA的水平为(16264±28765)copies/ml,其中26例阳性,阳性率为54.2%;CK19mRNA的水平为(14891±27244)copies/ml,其中27例阳性,阳性率为56.3%;CK20mRNA的水平为(10924±21678)copies/ml,其中20例阳性,阳性率为41.7%。8例肺良性病变中CK20mRNA阳性1例(12.5%),CEAmRNA和CK19mRNA均为阴性,健康志愿者30例未见表达。单项检测敏感度和准确性较低,联合其中二项检测敏感度和准确性较高,联合三项敏感度达77.1%、准确性可达87.2%。CEAmRNA、CK19mRNA和CK20mRNA水平和阳性率与肺癌类型和不同临床分期有关。结论CEAmRNA、CK19mRNA和CK20mRNA可作为标志物检测肺癌患者外周血微转移,联合二至三项指标有较高的检出率,定量检测有助于肺癌微转移的监测。     

RT-PCR检测结直肠癌患者外周血中细胞角蛋白20 mRNA的表达

目的：检测结直肠癌患者外周血中细胞角蛋白20（CK20）mRNA的表达．并探讨其临床价值。方法：应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应，检测59例结直肠癌患者、12例原发性肝癌患者和26例对照者外周血中CK20mRNA的表达。结果：对照者及原发性肝癌患者外周血中CK20mRNA均为阴性表达。结直肠癌患者外周血中CK20mRNA阳性表达率为5913％。结直肠癌患者外周血中CK20mRNA的阳性表达率在不同肿瘤病理分化程度中差异无显著性，而在不同Dukes分期和有无淋巴结转移及远处转移患者间差异有显著性（P〈0.05）。结论：检测结直肠癌患者外周血中CK20mRNA的表达可作为预测肿瘤微转移的评估指标，可监测患者病情变化，识别高危人群，并有助于结直肠癌微转移的判断及鉴别原发性肝细胞肝癌和结直肠癌肝转移。[著者文摘]     

大肠癌患者外周血细胞CD133的表达

背景：近期有报道称在肿瘤患者外周血中检测出了高于正常值的CD133阳性细胞.目的：观察CD133 mRNA和蛋白在大肠癌患者外周血中的表达并探讨其临床意义.方法：应用流式细胞技术与RT-PCR反应检测29例大肠癌患者和20例正常对照外周血中CD133 抗原与mRNA的表达.结果与结论：发生转移的大肠癌患者外周血中CD133阳性细胞比例显著高于正常对照及无转移的大肠癌患者（P 〈 0.01）.正常健康人群和无转移大肠癌患者外周血中CD133mRNA表达为阴性,发生转移的部分大肠癌患者外周血中CD133mRNA表达阳性,阳性率为35.7%（5/14）,在超过38个以上循环时表达为弱阳性.结果表明,无转移大肠癌患者外周血中CD133 mRNA和蛋白表达与正常对照无区别,发生转移的大肠癌患者外周血中CD133 mRNA和蛋白高于正常对照和未发生转移者.     

C-erbB2、c-myc和CCND1 mRNA联合检测在乳腺癌诊断中的应用

目的建立荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）法检测C-erbB2、核内原癌基因（c-myc）和细胞周期蛋白D1（CC-ND1）mRNA水平,探讨其联合检测在乳腺癌诊断和治疗监测中的应用。方法建立FQ-PCR法,并以β2-微球蛋白为内对照测定15名健康女性体检者（正常对照组）、30例良性乳腺疾病患者（良性乳腺疾病组）和121例乳腺癌患者（乳腺癌组）外周血中C-erbB2、c-myc和CCND1的mRNA水平。结果 C-erbB2、c-myc和CCND1的mRNA水平在正常对照组和良性乳腺疾病组间差异无统计学意义（P〉0.05）,乳腺癌组均高于前两组（P〈0.05）,β2-微球蛋白三组间差异无统计学意义（P〉0.05）;三种mRNA联合检测的阳性率高于单个mRNA的检测。结论 FQ-PCR技术可快速定量检测C-erbB2、c-myc和CCND1的mR-NA,三者联合检测可有效提高对乳腺癌诊断的阳性率。     

外周血STC-1mRNA测定及其在结直肠癌诊断中的价值

目的比较斯钙素（STC-1）mRNA在结直肠癌患者和健康人外周血中表达水平的差异,初步探讨STC-1mRNA作为循环肿瘤标志物的临床意义。方法采用荧光定量逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测37例结直肠癌患者、18名健康人外周血STC-1mRNA的表达水平,并对其中30例患者的癌胚抗原（CEA）和糖链抗原199（CA199）等血清肿瘤标志物进行比较分析。结果结直肠癌患者与健康人的外周血STC-1mRNA表达水平差异有统计学意义,患者组高于健康组;以受试者工作特征（ROC）曲线分析,发现STC-1mRNA作为结直肠癌诊断指标具有较高的敏感性和特异性,其曲线下面积为0．730;以0．5为表达阳性界值,STC-1mRNA检出结直肠癌的效能优于血清肿瘤标志物CEA和CA199的联合应用。结论应用荧光定量RT—PCR检测结直肠癌患者外周血STC-1mRNA表达水平具有较高的诊断价值,其可能成为新的用于结直肠癌诊断的循环肿瘤标志物。     

NSCLC术后病人外周血MUC1 mRNA和CK19 mRNA表达及其意义

目的探讨非小细胞肺癌（NSCLC）术后外周血微转移的基因诊断方法，并分析黏蛋白1（MUC1）mRNA、角蛋白19（CK19）mRNA作为肺癌微转移检测分子标志物的可行性。方法应用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR），对60例NSCLC病人（肺癌组）的外周血MUC1 mRNA、CK19 mRNA表达情况进行检测；以10例肺良性病变病人及15例健康人的外周血标本作对照。结果肺癌组外周血MUC1 mRNA阳性表达21例（35%），CK19 mRNA阳性表达18例（30％）；对照组MUC1 mRNA和CK19 mRNA表达均为阴性，两组比较差异均有显著性（x^2=7．292、5．921，P〈0．01、0．05）。结论MUC1、CK19基因均可作为RT—PCR法检测NSCLC病人淋巴结微转移的分子标志物，两者联合检测可能有助于肺癌转移早期诊断。