内质网应激在大鼠重症急性胰腺炎肝损伤的临床意义

目的探讨内质网应激相关分子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)及CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP),是否参与大鼠重症急性胰腺炎(SAP)并发肝损伤的发生和发展。方法采用5%牛磺胆酸钠建立大鼠SAP肝损伤模型,将80只成年雄性SD大鼠随机分为2组,假手术组(sham组)及模型组,各40只,每组又按时间点随机分为3、6、12、24、36h5个组。采用全自动生化仪检测血清淀粉酶(AMY)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的含量变化,HE染色观察大鼠肝脏组织的形态学变化,免疫印迹(Western Blot)法检测大鼠肝脏组织GRP78及CHOP的表达水平。结果 (1)模型组血清AMY、ALT及AST水平逐渐升高,且12h达到峰值(P0.05);模型组比对应的Sham组血清酶水平明显升高,差异有统计学意义(P0.05)。(2)HE染色结果显示,肝脏在24h时损伤最严重。(3)模型组GRP78及CHOP表达水平逐渐增加,且以24h表达水平最高(P0.05);模型组比对应的sham组GRP78及CHOP表达显著增多,差异有统计学意义(P0.05)。结论 SAP肝损伤发病中24h最严重,GRP78及CHOP表达明显增加,其可能参与SAP肝损伤的发生和发展。     

CHOP在内质网应激介导凋亡中的作用

细胞凋亡(apoptosis)又称为程序性细胞死亡(programmed cell death,PCD),是机体细胞在正常生理或病理状态下及在相关基因调控下发生的一种细胞主动性死亡方式。它是机体用来去除老化细胞及具有潜在性异常生长细胞的一种     

内质网应激相关蛋白1对衣霉素诱导HepG2细胞内质网应激的影响

目的研究过表达内质网应激相关蛋白1(SERP1)对衣霉素诱导肝癌HepG2细胞内质网应激的影响。 方法以衣霉素诱导HepG2细胞发生内质网应激,将细胞分为以下5组：正常对照组、衣霉素组、衣霉素＋0.25μg SERP1转染组、衣霉素＋0. 5μg SERP1转染组和衣霉素＋1.0μg SERP1转染组,每组实验重复3次;采用MTT法检测不同浓度与作用时间的衣霉素对HepG2细胞存活率的影响,以吸光度(A)值表示。Western blot法检测各组细胞内内质网应激标志蛋白葡萄糖调节蛋白(GRP78)、C/EBP同源蛋白(CHOP)以及钙联蛋白的表达水平。采用SPSS 15.0统计软件进行统计学分析,比较蛋白表达水平。 结果与对照组相比,衣霉素处理组HepG2细胞中内质网应激标志性蛋白GRP78、CHOP及Calnexin蛋白表达量显著升高,分别为对照处理组的3.8倍(t＝11.5,P<0.05)、1.3倍(t＝3.498,P<0.05)和1.4倍(t＝4.1,P<0.05),差异均有统计学意义;随着SERP1过表达量的逐渐升高,变化呈现剂量依赖性。随着SERP1转染剂量的增加,各组GRP78蛋白的表达较单独衣霉素处理组分别下降了12%[(1.83±0.29)A值,(1.61±0.13)A值,t＝2.36,P>0.05]、24%和30%[(1.83±0.29)A值,(1.40±0.11)A值,(1.27±0.21)A值;F＝50.56,P<0.05],CHOP蛋白的表达水平分别下降了23%, 29%和34%[(1.0±0.15)A值,(0.79±0.07)A值,(0.72±0.55)A值,(0.67±0.14)A值;F＝9.532,P<0.05],Calnexin蛋白的表达水平分别下降了5%[(1.20±0.18)A值,(1.15±0.13)A值;P>0.05]、24%和28%[(1.20±0.18)A值,(0.92±0.07)A值,(0.87±0.18)A值;F＝8.116,P<0.05]。 结论外源性过表达SERP1蛋白通过下调内质网应激蛋白的表达,降低HepG2细胞内质网应激水平,缓解内质网应激介导的细胞损伤。     

缬沙坦对内质网应激介导的高血压大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的探讨缬沙坦对内质网应激介导的高血压大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法选用10只WKY大鼠和20只自发性高血压大鼠为研究对象,并随机将后者分为两组:其中一组行缬沙坦药物干预,余所有大鼠给予等量生理盐水。16周后全部处死并留取标本行TUNEL法检测心肌细胞凋亡情况,免疫组织化学法检测GRP78蛋白的表达水平。结果高血压组大鼠心肌可见大量凋亡细胞且GRP78蛋白表达水平显著升高,缬沙坦干预组两组指标均明显降低。结论缬沙坦可有效抑制内质网应激介导的心肌细胞凋亡。     

下肢缺血预处理对未成熟心肌细胞凋亡和内质网应激的影响

背景：近几年来研究发现内质网应激导致细胞凋亡在细胞缺血性损害中起重要作用,成为缺血心肌的研究热点。下肢缺血预处理对未成熟心肌具有明显保护作用,但下肢缺血预处理对未成熟心肌内质网应激细胞凋亡是否存在影响至今未知。目的：探讨下肢缺血预处理对未成熟心肌内质网应激和细胞凋亡的影响。方法：采用兔离体心脏Langendorff灌注模型,24只幼兔随机分为3组：对照组仅灌注KH液180 min;缺血再灌注组心脏灌注20 min后,停灌60 min,复灌100 min;下肢缺血预处理组,反复3次阻断双下肢血流5 min/放5 min,建立Langendorff模型,然后重复缺血再灌注组方法。TUNEL法检测心肌细胞凋亡率、Western blot检测GRP78、Bcl-2、Bax和Fas蛋白表达。结果与结论：下肢缺血预处理组与缺血再灌注组比较,心肌细胞凋亡率明显减少;Bcl-2表达明显增多,GRP78、Bax、Fas表达明显减少。结果表明下肢缺血预处理可能通过调控内质网过度应激GRP78表达以及Bcl-2、Bax、Fas蛋白的表达调控心肌细胞凋亡。     

滋补脾阴方药对大鼠脊髓损伤后IL-1β、caspase-3表达及细胞凋亡的影响

目的:研究大鼠脊髓损伤后白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)半胱氨酸天冬特异性蛋白酶(cysteingl aspartate specific protease,caspase)表达和细胞凋亡的规律及三者之间的关系、滋补脾阴方药对它们的影响.方法:将成年SD大鼠随机分为假手术组、损伤组和滋补脾阴方药组,于伤后不同时间点(1h、8h、24h、72h)处死,用免疫组化染色检测IL-1β、caspase-3阳性细胞,TUNEL法标记凋亡细胞.结果:免疫组化结果显示假手术组仅有少量IL-1β和caspase-3阳性细胞表达;损伤组的两者均在8h表达最多,24h减少,72h减少至略多于假手术组.TUNET标记阳性细胞的时间分布特点与IL-1β和caspase-3相似,8h最多,72h减少至较低水平.IL-1β、caspase-3表达阳性细胞率和细胞凋亡指数三者间呈正相关;滋补脾阴方药使IL-1β、caspase-3表达阳性细胞率和细胞凋亡指数降低.结论:大鼠脊髓损伤后,IL-1β和caspase-3表达增强,凋亡细胞大量出现,三者间存在正相关;滋补脾阴方药能够抑制脊髓损伤后的炎症反应,减少细胞凋亡,减轻脊髓继发性损伤.     

心力衰竭患者血清中内质网应激标志物GRP78的水平变化及其在评估近期预后中的价值

目的:探讨心力衰竭患者血清中内质网应激标志物葡萄糖调节蛋白-78(GRP78)的水平变化及其在评估近期预后中的价值。方法:本研究采用ELISA法测定80例心力衰竭患者(HF)血清中的GRP78水平,并收集40例健康体检者作为对照,对心力衰竭患者随访1年,记录预后情况。应用SPSS 23.0软件处理临床资料。结果:HF组较对照组血清中的GRP78(ng/mL)水平高(414.0±89.8 vs. 377.1±64.8,P0.05);GRP78水平在不同的心功能临床分级间比较差异无统计学意义(心衰Ⅱ级vs.心衰Ⅲ级:422.7±85.4 vs. 418.6±68.8,P=0.522;心衰Ⅱ级vs.心衰Ⅳ级:422.7±85.4 vs. 442.1±151.3,P=0.285;心衰Ⅲ级vs.心衰Ⅳ级:418.6±68.8 vs. 442.1±151.3,P=0.223);不良事件组的血清GRP78水平明显高于非不良事件组(436.7±96.4 vs. 389.8±80.1,P0.001);经独立危险因素非条件Logistic二元回归模型分析,GRP78、NT-ProBNP 2个变量均对HF预后有独立预测意义,OR值分别为1.017、1.001;以GRP78取430 ng/mL为cutoff值评估不良预后,其敏感度为56.5%、特异度为94.1%、阳性预测值为92.9%、阴性预测值为61.5%、准确率为72.5%;若联合NT-ProBNP评估预后,结果更优,ROC曲线下面积为0.883。结论:内质网应激在心力衰竭的发生发展过程中起着重要的作用;GRP78对HF患者的诊断有一定的提示性作用,可以作为独立评估HF患者预后的预测因子,若结合生物标记物NT-ProBNP,则评估效能更佳。     

土贝母含药血清对人肺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察土贝母含药血清对人肺癌细胞增殖、凋亡的影响,初步探讨其作用机制.方法 采用灌胃SD大鼠土贝母水提物的方法制备其含药血清.应用不同浓度(0.0％、2.5％、5.0％、10.0％、20.0％、40.0％)含药血清处理人肺癌A549和H1299细胞.采用MTT、免疫荧光法观察含药血清对人肺癌细胞增殖的影响,采用流式...     

高糖、高同型半胱氨酸致足细胞内质网应激时白藜芦醇对CHOP通路的影响

目的观察体外高糖、高同型半胱氨酸(high homocysteine,hHcy)以及高糖和hHcy共同环境下,小鼠肾小球足细胞内质网应激相关蛋白:葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein78,GRP78)、转录因子CHOP/GADD153(growth arrest and DNA damage-inducible gene 153)的表达,探讨高糖、hHcy及hHcy和高糖共同诱导足细胞凋亡的内质网应激相关机制,观察抗氧化剂白藜芦醇(Resveratrol,RES)对足细胞的保护作用。方法分化后的条件永生化小鼠足细胞分组:正常对照组、高渗组(glucose 5 mmol/L+甘露醇15 mmol/L)、高糖组(glucose 20 mmol/L)、hHcy组(hHcy 200μmol/L)、hHcy+高糖组(hHcy 200μmol/L+glucose 20 mmol/L)、混合+RES组(RES20μmol/L预干预半小时+hHcy 200μmol/L+glucose 20 mmol/L),作用24 h。流式细胞术AnnexinV-FITC/PI测定各组细胞凋亡率。real-time PCR、Western blot分析各组细胞GRP78、CHOP的表达。结果高糖组与hHcy组的凋亡率、GRP78、CHOP的mRNA及蛋白表达均高于正常组(P<0.05);hHcy+高糖组的上述指标分别与高糖组、hHcy组比较均显著升高(P<0.05);混合+RES组较hHcy+高糖组上述指标显著下降(P<0.05),差异均有统计学意义。结论高糖、hHcy体外能诱导足细胞凋亡,hHcy和高糖共同环境下对足细胞损伤及致凋亡作用更明显,提示两者有协同作用,内质网应激参与其凋亡机制之中,抗氧化剂白藜芦醇能抵抗高糖和hHcy诱导的足细胞凋亡,阻断内质网应激CHOP通路为其机制之一。     

复方苦参含药血清对人结肠癌细胞SW480的凋亡诱导作用

目的探讨复方苦参含药血清对人结肠癌细胞SW480的凋亡诱导作用,为今后的研究工作提供有价值的参考信息。方法采取血清药理学方法,研究分析复方苦参对结肠癌细胞SW480体外效应,观察含药血清对SW480细胞克隆形成率的影响。结果含药血清会对SW480细胞形成产生一定程度的抑制,48 h后能够观察到荧光染色明显增强,细胞核固缩,胞核碎裂,经流式细胞仪可检测到亚G1峰。结论复方苦参含药血清在体外可以对SW480细胞增殖产生抑制作用,并且可诱导细胞凋亡,在今后的临床研究工作中,应对其给予足够的重视。