非小细胞肺癌患者血浆lncRNA TUG1与lncRNA UCA1 的表达及诊断价值

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)牛磺酸上调基因1(TUG1)与尿路上皮癌相关抗原1(UCA1)在非小细胞肺癌(NSCLC)患者血浆中的表达及诊断价值.方法 采集2018年7月至2019年10月在江苏大学附属医院呼吸内科及胸外科收治的60例NSCLC及60例良性肺病患者血浆标本,采用实时荧光定量聚合酶链反应(q...     

联合抑制Notch2和MEK/ERK通路对胃癌细胞增殖的影响

目的探讨Notch2和MEK/ERK信号通路在胃癌细胞SGC-7901中是否存在交叉作用。方法采用体外化学合成的特异性针对Notch2的siRNA(Notch2siRNA)和丝裂原激活蛋白激酶(MEK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路的抑制剂PD98059,分别单独和联合处理体外培养的胃癌SGC-7901细胞,以转染阴性对照siRNA(control siRNA)细胞作为siRNA对照组,并设不给予任何转染的空白对照组。免疫印迹(Western Blotting)法检测磷酸化ERK1/2(p-ERK)1/2和Notch2蛋白的表达水平。比色法(MTT)检测癌细胞增殖抑制率。结果Notch2siRNA能降低蛋白Notch2的表达水平,并抑制癌细胞增殖[(38.26±1.82)%],而p-ERK的表达水平则较对照组增加。PD98059能降低p-ERK的表达水平,并抑制癌细胞的增殖[(30.05±3.16)%],Notch2水平则无明显变化,联合应用Notch2siRNA和PD98059能明显降低p-ERK和Notch2蛋白的表达水平,与Notch2siRNA或PD98059单独应用比较,显著抑制癌细胞增殖率,差异有统计学意义[(72.55±5.30)%,P0.01]。结论特异性抑制Notch2信号通路,且抑制MEK/ERK通路可进一步增强抑制Notch2通路的抗肿瘤增殖效果,提示MEK/ERK和Notch2 2条信号通路在胃癌SGC-7901细胞中存在交叉作用。     

非小细胞肺癌患者血浆LncRNA UCA1与吉西他滨耐药相关性研究

目的 研究非小细胞肺癌患者血浆长链非编码RNA(LncRNA)上皮癌胚抗原1(UCA1)表达水平与吉西他滨耐药的相关性.方法 选取2017年4月至2020年10月本院收治的非小细胞肺癌患者84例,随机分为吉西他滨组(n=43,予以吉西他滨/顺铂治疗)、紫杉醇组(n=41,予以紫杉醇/顺铂治疗),治疗结束评估疗效,并分为...     

LncRNA在乳腺癌发生、发展中的相关作用机制研究进展

乳腺癌作为一种高度异质性的恶性肿瘤,已成为女性健康的最大威胁之一.肿瘤的远处转移和治疗的耐药性是导致肿瘤死亡和复发的主要原因.长链非编码RNA(LncRNA)参与细胞内多种过程的调控,与多种肿瘤的发生、发展密切相关.LncRNA被认为是治疗乳腺癌远处转移的新靶点,其在乳腺癌预后中的作用具有较好的研究前景,但目前研究仍处...     

长链非编码RNA MALAT1通过PI3K/Akt信号传导通路调控肝细胞癌生物学行为的研究

目的 通过检测肝癌细胞系中长链非编码RNA MALAT1(lncRNA MALAT1)的表达情况,以及其对肝癌细胞增殖,迁移与体外成瘤能力的影响,探讨其机制.方法 采用荧光定量PCR技术(qRT-PCR)分析肝癌细胞系Huh-7,HepG2和正常肝细胞系L-O2中的lncRNA MALAT1的表达情况.将Huh-7细胞...     

LncRNA DCST1-AS1结合ALDOA促进三阴性乳腺癌细胞的侵袭

摘要：目的?探索长链非编码RNA(LncRNA) DCST1-AS1结合果糖二磷酸醛缩酶A(fructose-bisphosphate aldolase A, ALDOA)对三阴性乳腺癌细胞(MDA-MB-231)侵袭的影响。方法?采用RNA pulldown试验、质谱分析和RNA免疫共沉淀试验检测并分析DCST1-AS1与ALDOA之间的相互作用；采用癌症基因组图集(The Cancer Genome Atlas，TCGA)中的侵袭性乳腺癌阵列分析DCST1-AS1与ALDOA表达的相关性；RT-PCR和western blot分析三阴性乳腺癌细胞中DCST1-AS1失调对ALDOA表达的影响；Transwell试验分析DCST1-AS1结合ALDOA对乳腺癌侵袭能力的影响。结果?DCST1-AS1在乳腺癌细胞内与ALDOA直接结合。ALDOA在TCGA乳腺癌阵列中高表达(P<0.01)，并与DCST1-AS1的表达呈正相关(r=0.19，P<0.01)。与阴性对照组相比，干扰ALDOA能抑制DCST1-AS1对MDA-MB-231细胞的促侵袭功能。结论?DCST1-AS1通过与ALDOA直接结合促进三阴性乳腺癌细胞的侵袭。     

LncRNA FTH1P3通过调控PI3K/AKT信号通路促进胃癌细胞增殖和迁移能力

目的 研究长链非编码RNA铁蛋白重链1伪基因3(LncRNA FTH1P3)在胃癌组织中的表达及临床意义,并探讨LncRNA FTH1P3通过调控磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/苏氨酸蛋白激酶(AKT)信号通路促进胃癌细胞增殖和迁移的作用机制。方法 收集胃癌和癌旁组织标本,采用qRT-PCR检测LncRNA FTH1P3在胃癌组织中的表达,分析LncRNA FTH1P3的表达与胃癌患者病理参数和预后的关系。常规培养胃癌细胞,分为si-NC组和si-LncRNA FTH1P3-1组、si-LncRNA FTH1P3-2组,采用LncRNA FTH1P3 siRNA转染胃癌细胞,qRT-PCR检测各组细胞中LncRNA FTH1P3的表达;CCK8实验检测各组细胞增殖能力;Transwell实验检测各组细胞迁移能力;体内成瘤实验检测各组细胞体内成瘤能力;Western blot检测各组细胞PI3K/AKT信号通路相关蛋白PI3K、AKT、磷酸化PI3K(pPI3K)、磷酸化AKT(pAKT)的表达。结果 LncRNA FTH1P3在胃癌组织中表达上调(P<0.05)。LncRNA F...     

乳腺癌细胞放疗后LncRNA RP3-340B19.3的表达以及干预对其生物学特性的影响

目的 检测乳腺癌细胞放疗后LncRNA RP3-340B19.3的表达水平变化，探讨干预RP3-340B19.3后对乳腺癌细胞生物学特性的影响。方法 采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测经辐照后乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231中RP3-340B19.3的表达水平；利用小干扰RNA技术抑制两株细胞系中RP3-340B19.3的表达，qRT-PCR检测其转染效率；克隆形成试验检测RP3-340B19.3对乳腺癌细胞存活率的改变，并计算细胞放疗增敏比(SER);流式细胞术检测RP3-340B19.3对乳腺癌细胞的细胞凋亡与细胞周期的影响。结果 qRT-PCR结果显示，经辐照后MCF-7和MDA-MB-231细胞中RP3-340B19.3的表达水平明显上调。转染siRNA后，MCF-7和MDA-MB-231细胞中RP3-340B19.3的相对表达量分别为0.236 3±0.153 8和0.363 3±0.037 1,均显著低于si-NC组(P<0.01)。经辐照后，RP3-340B19.3敲减组细胞克隆形成率和细胞存活分数明显下降(P<0.05),MCF-7和M...     

MAPKAPK5-AS1在肝癌中的临床意义及通过AKT/mTOR通路调控增殖和转移的机制研究

目的探究长链非编码RNA(lncRNA)MAPKAPK5-AS1在肝癌中的临床意义及通过AKT/mTOR通路调控增殖和转移的机制。方法通过生物信息学方法分析癌症基因组图谱(TCGA)数据库中MAPKAPK5-AS1在肝癌中的表达水平及其与预后的关系。临床收集90例肝癌组织和癌旁组织,分析MAPKAPK5-AS1的表达水平及其与预后的关系。通过RT-qPCR检测人正常肝细胞MIHA和4株肝癌细胞系中MAPKAPK5-AS1的水平。LM3细胞分为shNC组和shMAPKAPK5-AS1组,HepG2细胞分为vector-NC组和MAPKAPK5-AS1组,检测沉默和过表达MAPKAPK5-AS1对肝癌细胞生物学行为的影响,并分析AKT/mTOR通路的水平。结果生物信息学分析结果显示,MAPKAPK5-AS1水平与高的TNM分期、更低的生存率和低的无进展生存期有关(P0.05)。临床检测结果显示,MAPKAPK5-AS1高表达与较高的TNM分期、血管侵犯和更低的生存率有关(P0.05)。shMAPKAPK5-AS1组的增殖、迁移、侵袭能力及AKT/mTOR通路中蛋白水平明显低于shNC组,而凋亡率明显高于shNC组(P0.05)。MAPKAPK5-AS1组的增殖、迁移、侵袭能力及AKT/mTOR通路中蛋白水平明显高于vector-NC组,而凋亡率明显低于vector-NC组(P0.05)。结论 MAPKAPK5-AS1高表达与肝癌患者较高的TNM分期、血管侵犯和不良预后有关,并且MAPKAPK5-AS1可能通过促进AKT/mTOR通路促进肝癌增殖、转移和抑制凋亡。     

LncRNA NPSR1-AS1在胃癌中的表达及作用机制

目的探讨LncRNA NPSR1-AS1在胃癌(gastric cancer, GC)中的表达及临床意义,分析其对胃癌细胞生物学行为的影响和作用机制。方法收集86例胃癌患者癌组织及癌旁组织,另收集21例胃癌患者及体检健康者血浆标本,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测各组LncRNA NPSR1-AS1的表达水平,并与患者临床病理资料进行相关性分析。siRNA敲减NPSR1-AS1后,采用细胞增殖试验、Transwell试验、流式细胞术检测癌细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡能力,并用RT-qPCR检测肿瘤相关基因表达量的变化。结果 LncRNA NPSR1-AS1在胃癌组织中的表达水平显著升高,且与肿瘤大小(t=11.02,P0.01)、淋巴结转移(t=2.30,P0.05)、TNM分期(t=3.55,P0.01)、肿瘤血管或神经侵袭(t=3.10,P0.05)显著相关;血浆LncRNA NPSR1-AS1筛查胃癌的ROC曲线下面积(AUC~(ROC))为0.696。LncRNA NPSR1-AS1敲减后可使GSK-3β(t=16.15,P0.01)和E-cadherin(t=10.17,P0.01)表达上调,β-catenin(t=4.869,P0.05)、N-cadherin(t=3.77,P0.05)、Snail(t=9.372,P0.01)和MMP2(t=15.57,P0.01)表达下调。结论 LncRNA NPSR1-AS1敲减可抑制胃癌细胞增殖、迁移及侵袭并诱导其凋亡,其作用机制与上皮-间质转化(EMT)有关。     

LncRNA NEAT1/miR-23b-3p/KLF3 轴调控结直肠癌细胞的生物学功能研究

目的 探究长链非编码核糖核酸（long non-coding RNAs,LncRNAs）NEAT1/miR-23b-3p/KLF3 调控轴对结直肠癌细胞生物学功能的影响。方法 利用癌症基因组图谱（the cancer genome atlas,TCGA）数据库分析结直肠癌组织和癌旁组织NEAT1,miR-23b-3p 和KLF3 表达水平,并计算三者之间的相关性。以结直肠癌细胞系（HT29 细胞）作为实验对象,实验被分为Control 组（空白对照组）、NC 组（空载体组）和si-NEAT1 组（NEAT1 干扰组）。CCK8 检测各组细胞的增殖情况,流式细胞术检测各组细胞的凋亡、周期情况,Transwell 检测各组细胞的侵袭情况,划痕实验检测各组细胞的迁移情况。在线工具starbase 等预测能与miR-23b-3p 靶向结合的基因,采用人胚胎肾细胞293（humanembryonic kidney cells 293,HEK293）进行双荧光素酶报告基因实验验证。qRT-PCR 检测NC 组、si-NEAT1 组、si-NEAT1+miR-23b-3p inhibitor 组（共转染si-NEAT1 和miR-23b-3p inhibitor）的miR-23b-3p 和KLF3 转录水平,免疫印记法检测以上三组KLF3 蛋白质表达水平。结果 结直肠癌组织NEAT1[5.29（4.55,5.95）], KLF3[4.94（4.62,5.24）] 表达高于癌旁组织[4.79（4.26,5.19）, 4.49（4.24,4.80）],差异有统计学意义（U=6 677, P=0.001;U=28 257.5, P ＜ 0.001),miR-23b-3p 表达低于癌旁组织[9.99（9.49,10.6） vs 10.80（10.62,10.88）],差异有统计学意义（U=2 906, P=0.004）。结直肠癌组织中,NEAT1 和KLF3 表达呈正相关（r =0.26, P ＜ 0.01）,miR-23b-3p 和NEAT1, KLF3 表达量均呈负相关（r=-0.14, P=0.008; r =-0.17, P=0.001）。与对照组相比,si-NEAT1 组使结直肠癌细胞增殖、迁移、侵袭的能力降低,凋亡增加,细胞被阻滞在S 期,结果差异均有统计学意义（均P ＜ 0.05）。starbase 预测miR-23b-3p 靶基因为NEAT1 和KLF3。双荧光素酶报告基因实验也证实miR-23b-3p 分子能互补结合NEAT1 和KLF3 3’UTR。与NC 组相比,si-NEAT1组miR-23b-3p 表达上调,KLF3 转录和蛋白水平下调;与si-NEAT1 组相比,si-NEAT1+miR-23b-3p inhibitor 组miR-23b-3p 表达下调,KLF3 转录和蛋白水平上调。结论 NEAT1 可通过直接靶向HT29 细胞中的miR-23b-3p 上调KLF3 表达,增强结直肠癌细胞的增值、侵袭和迁移等。     

BRMS1对乳腺癌细胞生物学特性影响的体外研究

为探讨乳腺癌转移抑制基因1（BRMS1）对乳腺癌细胞生物学特性影响,利用已建立的高表达BRMS1基因的乳腺癌细胞MDA-MB-231,研究了BRMS1基因对MDA-MB-231细胞的增殖活性、浸润迁移能力、侵袭能力、细胞周期和凋亡的影响.结果 表明：BRMS1基因通过乳腺癌MDA-MB-231细胞的侵袭能力而抑制肿瘤细胞的转移能力;而对MDA-MB-231细胞增殖活性、浸润迁移能力以及细胞周期和凋亡无影响.     

The RAS/Raf1/MEK/ERK signaling pathway facilitates VSV-mediated oncolysis: implication for the defective interferon response in cancer cells.

Vesicular stomatitis virus (VSV) can replicate in malignant cells more efficiently than in normal cells. Although the selective replication appears to be caused by defects in the interferon (IFN) system in malignant cells, the mechanisms which render these cells less responsive to IFN remain poorly understood. Here we present evidence that an activated RAS/Raf1/MEK/ERK pathway plays a critical role in the defects. NIH 3T3 or human primary cells stably expressing active RAS or Raf1 were rapidly killed by VSV. Although IFNalpha treatment no longer protected the RAS- or Raf1-overexpressing cells from VSV infection, responsiveness to IFNalpha was restored following treatment with the mitogen-activated protein kinase kinase (MEK) inhibitor U0126. Similarly, human cancer-derived cell lines became more responsive to IFNalpha in conjunction with U0126 treatment. Intriguingly, dual treatment with both IFNalpha and U0126 severely reduced the levels of viral RNAs in the infected cells. Moreover, cancer cells showed defects in inducing an IFNalpha-responsive factor, MxA, which is known to block VSV RNA synthesis, and U0126 restored the MxA expression. Our observations suggest that activation of the extracellular signal-regulated protein kinase (ERK) signaling leads to the defect in IFNalpha-mediated upregulation of MxA protein, which facilitates VSV oncolysis. In view of the fact that 30% of all cancers have constitutive activation of the RAS/Raf1/MEK/ERK pathway, VSV would be an ideal oncolytic virus for targeting such cancers.     

基于IRAK4/ERK/p38信号通路雷公藤红素对多发性骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨雷公藤红素对人多发性骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响,并揭示IRAK4/ERK/p38信号通路与雷公藤红素调控H929、ARP-1细胞增殖和凋亡的关系,探究雷公藤红素联合硼替佐米是否具有协同作用。方法:采用CCK-8法检测多发性骨髓瘤细胞株H929、ARP-1细胞经不同浓度雷公藤红素、硼替佐米以及二者联用后的细胞活力,并利用金氏公式判定协同药效。Annexin V/PI法检测H929细胞凋亡率和ARP-1细胞坏死率。蛋白免疫印迹法检测雷公藤红素对IRAK4/ERK/p38信号通路中关键蛋白和凋亡蛋白表达的影响。结果:雷公藤红素能够呈时间-浓度依赖性地显著抑制H929、ARP-1细胞的增殖(r=0.9018,0.9244),并诱导细胞的凋亡;与对照组比较,雷公藤红素能够明显上调H929、ARP-1细胞内PARP、cleaved caspase-3表达,下调p-IRAK4、p-ERK、p-p38表达。雷公藤红素、硼替佐米单用对H929、ARP-1细胞均有增殖抑制作用,而联合用药与单药相比,前者细胞存活率更低,凋亡率更高(P<0.05)。结论:雷公藤红素能抑制H929和ARP-1细...     

VEGF通过细胞外信号调节激酶途径促进骨髓源间充质干细胞的增殖

本研究旨在探索血管内皮生长因子(VEGF)对间充质干细胞(MSC)增殖的影响及其可能的机制。采用经典的全骨髓贴壁法培养MSC,通过成骨、成脂肪等多向诱导分化以及流式细胞术分析其表面标记(CD45、CD34、CD90、CD29)等鉴定MSC特征;以培养的第3代MSC(P3MSC)为实验材料,采用MTT法分析20ng/ml的VEGF作用12、36、72小时对MSC增殖的影响;随后以细胞外信号调节激酶(ERK1/2)阻断剂50μmol/L PD98059或丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)阻断剂30μmol/L SB203580等分别处理P3MSC,观察VEGF是否通过p38MAPK或ERK1/2途径影响MSC的增殖。结果表明:培养的P3MSC表达PDGFR-α、PDGFR-β和NRP1,不表达VEGF-R(Flk1和Flt1)。P3MSC呈现CD90(96.7%)和CD29(94.6%)强阳性以及CD34(0.79%)和CD45(0.84%)阴性特征,具有成骨、成脂肪等多向分化能力;20ng/ml VEGF作用于MSC后,随着时间的延长,MSC增殖也逐渐增强,在72小时达峰值。在50μmol/L PD98059或30μmol/L SB203580处理后,VEGF所介导的MSC增殖效应被阻断,且在对照水平以下。PD98059阻断效应明显强于SB203580的阻断效应。结论:VEGF可能主要通过细胞外信号调节激酶途径调节MSC的增殖。     

Rat parathyroid hormone 1-34 signals through the MEK/ERK pathway to induce cardiac hypertrophy

This study aimed to characterize the role of the mitogen-activated protein kinase (MAPK) kinase (MEK)/extracellular signal-regulated kinase (ERK) pathway in cardiac hypertrophy induced by parathyroid hormone (PTH). Various concentrations of rat PTH1-34 were used to induce hypertrophy in neonatal rat ventricular cardiomyocytes, and the effects were compared with control cells and those treated with PD98059, a selective inhibitor of MEK1. Hypertrophy was assessed in terms of cell diameter, atrial natriuretic peptide (ANP) mRNA expression and protein synthesis; the MEK/ERK pathway was assessed by measuring levels of phosphorylated ERK1/2. Treatment with PTH1-34 at 100 nM for 24 h effectively induced cardiac hypertrophy (increased cell diameter, protein synthesis and ANP mRNA expression) and also increased levels of phosphorylated ERK1/2 compared with normal control cells. Treatment with PTH1-34 plus PD98059 significantly attenuated these changes. These results demonstrate that inhibition of the MEK/ERK pathway blocks PTH1-34-induced cardiac hypertrophy, suggesting that PTH1-34 might signal through the MAPK pathway to induce hypertrophy in cardiomyocytes.     

Downregulation of the Arg/N-degron Pathway Sensitizes Cancer Cells to Chemotherapy In Vivo

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益气养阴活血法对胃癌前病变大鼠MEK/ERK的影响

目的:研究益气养阴活血法对胃癌前病变大鼠MEK/ERK的影响。方法:75只Wistar大鼠被随机分成模型组、空白组、中药低剂量组、中药高剂量组和维霉素组,每组15只。采用以MNNG为主的四因素联合造模法建立胃癌前病变的大鼠模型,维霉素组给予维霉素混悬液1.0g/kg每日1次灌胃;中药低剂量组、中药高剂量组大鼠分别给予生药浓度为1.0g/mL、2.0g/mL的益气养阴活血方中药煎剂(10mL/kg)每日1次灌胃。16周后观察大鼠胃黏膜病理变化,以及对MEK1和ERK1水平的影响。结果:模型组大鼠胃黏膜MEK1、ERK1水平与空白组比较升高(P<0.05),中药高剂量组大鼠胃黏膜MEK1、ERK1水平与模型组比较降低(P<0.05),中药高剂量组大鼠胃黏膜病理改变得到改善。结论:益气养阴活血法可改善胃癌前病变大鼠胃黏膜病理状况,下调胃黏膜MEK1及ERK1水平。