单纯性肥胖者血清胆汁酸谱研究

目的探讨单纯性肥胖者血清胆汁酸谱的特征,为阐明胆汁酸引发的能量代谢相关机制和探寻新的肥胖生物治疗靶点提供研究依据。方法利用超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)联用方法检测体检人群中10名表观正常对照者、10例超重者和10例单纯性肥胖者血清胆汁酸谱的特征。结果表观正常对照组、超重组和单纯性肥胖组血清中14种胆汁酸亚组分均有表达,其中的石胆酸(LCA)、牛磺胆酸(TCA)、牛磺石胆酸(TLCA)和牛磺熊脱氧胆酸(TUDCA)的表达水平最低;14种胆汁酸亚组分在各组间的差异均无统计学意义(P>0.05);单纯性肥胖组的胆汁酸谱中以甘氨鹅脱氧胆酸(GCDCA)和牛磺鹅脱氧胆酸(TCDCA)增高为主;超重组及单纯性肥胖组血清游离型胆汁酸(FBA)和结合胆汁酸(CBA)水平稍低于表观正常对照组,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论单纯性肥胖者血清胆汁酸谱中以GCDCA和TCDCA增高为主,但各种胆汁酸亚组分的表达水平与表观正常者相同。     

HPLC测定血清中七种结合胆汁酸

ＳＥＰ－ＰＡＫＣ１８小柱预处理血清后，采用反相ＨＰＬＣ结合紫外检测，定量测定脂肪肝患者与对照组血清中七种结合胆汁酸，结果显示，血清结合胆汁酸为一种敏感的实验检测指标，为临床检验提供了简便、快速的方法。     

LC-MS/MS检测血清25-羟基维生素D替代校准品基质的选择与评价

目的 探讨如何选择和评价液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)检测血清25-羟基维生素D[25(OH)D]替代校准品基质.方法 分别用4％牛血清白蛋白(BSA)溶液和30％乙醇水溶液2种替代基质,配制25(OH)D的标准溶液并绘制标准曲线.通过比较内标在不同基质中的响应值差异及基质效应混合实验、准确度验证,对替代基质进...     

HPLC-MS/MS法在白血病患者血浆维生素C水平测定中的临床应用

目的建立测定白血病患者血浆维生素C水平的高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS/MS)法,并应用于临床。方法采用HPLC-MS/MS法,L-Ascorbic Acid-1-13 C为内标,XBridge?C18(4.6 mm×50.0mm,5μm)色谱柱,流动相为(0.1%甲酸)甲醇-(2mmol/L乙酸铵-0.1%甲酸)水,梯度洗脱,流速为0.8mL/min,柱温60℃,进样量10μL。采用电喷雾电离源,以多反应监测(MRM)方式进行负离子检测。并对123份白血病患者标本及407份健康志愿者标本进行了检测,测定结果用t检验进行比较分析。结果维生素C的水平在0.5～50.0μg/mL范围内线性关系良好(r0.990 0),日内及日间精密度(RSD)均小于5%,回收率在90%～110%;与健康人相比,患者体内维生素C水平明显偏低[(8.8±3.0)vs.(2.4±3.9)μg/mL,P0.01]。结论该方法快速、准确、灵敏度高、操作简单,适用于临床中患者血浆中维生素C水平的检测。建议白血病患者应适当补充维生素C。     

胆石病患者胆汁酸代谢轮廓分析

目的探讨胆石病患者与健康人群血清胆汁酸谱差异,分析其对胆石病的辅助诊断价值及可能的成石机制。方法选取2018年1月至2019年1月到重庆医科大学附属第一医院就诊的胆石病患者(n=33)及健康志愿者(对照组,n=51)共84例为研究对象。采用超高效液相色谱-串联质谱分析法同时检测胆石病患者和健康志愿者血清中15种胆汁酸的水平,并对检测所得到的数据进行多个变量的分析,从而建立胆石病的临床诊断模型,筛选出合适的胆汁酸生物标志物,并对血清中的生物标志物的统计学意义及诊断价值进行分析。结果成功构建出胆石病的正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)模型。2组甘氨鹅脱氧胆酸、鹅脱氧胆酸、牛磺熊脱氧胆酸、甘氨胆酸、牛磺脱氧胆酸、牛磺石胆酸、牛磺鹅脱氧胆酸、牛磺胆酸水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论胆汁酸代谢轮廓对临床诊断胆石病有较大的应用价值,有望用于胆石病的早期诊断及鉴别诊断。     

血清总胆汁酸测定在肝胆疾病中的应用

胆汁酸是胆汁中的主要成分,是在肝细胞有关酶的作用下,经一系列反应由胆固醇转化而来。肝胆系统与肠道处于正常状态时,胆汁酸的合成、分泌及肠肝循环处于动态平衡。当肝胆功能受损,这种动态平衡被打破,血中胆汁酸浓度随之变化。本文通过对151例肝胆病患者血中胆汁酸测定,并与常规检测谷丙转氨酶(alanine aminotrans terase,ALT)进行比较,以探讨其在肝胆疾病中的意义。     

LC-MS/MS检测万古霉素血清药物浓度方法的建立及评估

摘要：目的：建立液相色谱–串联质谱（HPLC–MS/MS）法检测人血清中万古霉素的浓度,并与化学发光微粒子免疫法（CMIA）进行比较。方法：血清样品经过甲醇沉淀蛋白,采用安捷伦Poroshell 120EC C18色谱柱（2.1mm*50mm,2.7μm）梯度洗脱分离,流动相为甲醇（0.1%甲酸）–水（0.1%甲酸）,流速为0.5 mL/min, 内标采用去甲万古霉素,质谱采用ESI正离子多反应监测扫描模式。本方法成功应用于112例临床服用万古霉素患者的血清样本万古霉素的定量,并与传统临床常用的CMIA方法所得结果进行比较研究。结果：万古霉素在1–100μg?mL-1内线性关系良好（r2 = 0.9964）;方法日内日间精密度、准确度均满足药物定量检测要求,且无基质效应和残留效应。Wilcoxon符号秩和检验结果显示HPLC–MS/MS测定结果与CMIA结果进行比较,具有显著的差异（P<0.05）;相关性检验结果显示,两者线性相关性良好,Y = 1.06X – 0.37（r = 0.986）。结论：LC–MS/MS与CMIA两种方法检测万古霉素血清药物浓度所得结果存在明显差异,而两者相关性良好;且LC–MS/MS法与CMIA法有较好的可比性,可用于临床检测万古霉素的血清药物浓度。     

血清总胆汁酸检测在慢性肝炎中的应用

血清总胆汁酸（TBA）的测定有利于慢性肝炎的监测，且可代替重复进行的活组织检查。近期对肝胆科36例患者的检测分析报告如下：     

血清总胆汁酸检测在肾移植患者中的应用

血清总胆汁酸检测在肾移植患者中的应用徐根云周学张娟文金胜航指导赵允文浙江医科大学附属第一医院３１０００３血清中胆汁酸含量是反应肝实质损伤的重要指征。肾移植患者的肝功能异常发生率较普遍。主要原因是移植后使用了以环孢霉素Ａ（ＣｓＡ）为代表的免疫抑制剂。因...     

串联质谱和高效液相色谱-串联质谱二次筛查联合应用于新生儿MMA筛查

目的探讨串联质谱和高效液相色谱-串联质谱二次筛查联合应用在甲基丙二酸血症(MMA)中的筛查价值。方法收集新生儿串联质谱初筛结果中C3、C3/C2、C3/C0单一或多个指标异常的新生儿干血滤纸片标本,用高效液相色谱-串联质谱的方法定量检测原始血片中甲基丙二酸、甲基枸橼酸和高半胱氨酸,对二次筛查后疑似阳性的新生儿进行召回复查,并进行尿气相色谱/质谱检测。临床诊断患儿进一步予以基因检测进行确诊。结果共收集423例C3、C3/C2、C3/C0单一或多个指标异常的新生儿筛查标本,初筛阳性率约为1%,行联合筛查检测结果发现8例标本中甲基丙二酸和同型半胱氨酸表达水平明显升高,召回复查尿气相色谱质谱提示甲基丙二酸轻度升高。结论串联质谱和高效液相色谱-串联质谱联合应用可以提高新生儿MMA筛查的阳性预测值、降低假阳性率,在新生儿遗传代谢病筛查中具有重要价值。     

串联质谱法测定血清中20种游离氨基酸含量

目的建立串联质谱法(LC-MS/MS)测定血清中20种游离氨基酸含量,为临床血清氨基酸检测提供可靠方法。方法血清样本未经衍生化处理,采用LC-MS/MS法,于电喷雾源(ESI)正离子模式下使用选择反应性离子扫描(SRM)进行定量。结果 20种氨基酸线性相关系数为0.9957～0.9999,日内、日间变异系数分别为0.5%～9.0%和0.6%～12.3%,加样回收率为87.6%～115.5%。样本在常温放置24h,8次冻融循环及-20℃冻存20d等条件下稳定性良好。结论该方法简便、稳定、定量准确,适用于血清氨基酸的临床检测,为氨基酸代谢疾病的临床诊断提供了重要的生化依据。     

Simultaneous quantification of vitamin D3, 25-hydroxyvitamin D3 and 24,25-dihydroxyvitamin D3 in human serum by LC-MS/MS

Abstract

Introduction. Serum 25-hydroxy-vitamin D is the established biomarker of vitamin D status although serum concentrations of vitamin D and 24,25-dihydroxyvitamin D may also be of interest to understand the in vivo kinetics of serum 25-hydroxyvitamin D. Method. An LC-MS/MS method was developed and validated to quantify vitamin D₃, 25-hydroxyvitamin D₃ and 24,25-dihydroxyvitamin D₃ in serum. After protein precipitation of the serum it was loaded on a HybridSPE column to separate vitamin D metabolites from phospholipids. Vitamin D₃, 25-hydroxyvitamin D₃ and 24,25-dihydroxyvitamin D₃ in the eluate were derivatized by 4-phenyl-1,2,4-triazoline-3,5-dione to improve sensitivity in the following LC-MS/MS analysis. Results. Using only 100 μL serum the limit of quantification was < 0.2 ng/mL for vitamin D₃, 25-hydroxyvitamin D₃ and 24,25-dihydroxyvitamin D₃. The method was validated up to 100 ng/mL (260 nmol/L) for vitamin D₃, up to 100 ng/mL (240 nmol/L) for 24,25-dihydroxyvitamin D₃ and up to 200 ng/mL (499 nmol/L) for 25-hydroxyvitamin D₃. Precision was < 6.5% for vitamin D₃ and 25-hydroxyvitamin D₃ and < 10.2% for 24,25-dihydroxyvitamin D₃. Conclusion. We demonstrate that a method including not only serum 25-hydroxyvitamin D₃ but also vitamin D₃ and 24,25-dihydroxyvitamin D₃ could easily be implemented in most modern biochemical laboratories. The method could be used to study the metabolism of endogenous synthesized vitamin D₃ as well as vitamin D₃ in intervention studies.     

同位素稀释液相色谱串联质谱法测定血清可替宁

目的 建立一种同位素稀释液相色谱串联质谱(ID-LC/MS/MS)测定血清可替宁的方法,以评价不同吸烟状况健康人的吸烟暴露水平分布状况.方法 以[D3]-可替宁作内标,乙腈沉淀蛋白、离心后吸取上清液、氮气挥干、流动相重组,液相分离后进人串联质谱分析;然后,采用多离子反应监测模式,以标准品制作标准曲线,结合同位素内标法定量建立同位素稀释液相色谱串联质谱法.用以对0 68、48.42、94.34、250.95、287.04 μg/L 5个水平血清样本进行5次重复分析,每次每种血清重复分析3份,以考察方法的精密度;同时测定与评价血清样本添加不同浓度标准品的加样回收率和样本在常温、4℃、-80℃保存的稳定性,以及2010年10月至12月期间94名健康志愿者在不同吸烟状况下的血清可替宁分布情况.并用Mann-Whitney U检验分析60名非吸烟、14名戒烟与20名吸烟健康志愿者血清可替宁含量的差异.结果 用ID-LC/MS/MS检测血清可替宁在本试验条件下分离良好,无内源性物质的干扰,具有较好的特异性;血清可替宁、内标峰面积比与可替宁浓度的线性相关系数≥0.9993;测定5个水平血清样本的总变异系数(CV)分别为4.71％、1.40％、1.98％、1.10％和1.03％;批内CV分别为2.19％、0.78％、0.75％、0.65％和0.67％,ID-LC/MS/MS的检测限(LOD)和定量限(LOQ)分别为0.013和0.050 μg/L,具有较高的灵敏度;3次试验的加样回收率范围为99.22％ ～ 102.67％;样本在常温条件下放置2d、4 ℃放置7d以及-80℃冻存保存3个月测定结果的准确度为99.28％～ 100.87％,批间CV均＜5％.检测94名健康人血清可替宁水平呈偏态和尖态分布(偏度2.71,峰度6.65),其中,20名吸烟者的可替宁浓度为116.40 (63.17 ～241.12) μg/L,14名已成烟者为0.67 (0.15～0.95) μg/L,60名非吸烟者为0.22 (0.15 ～0.42) μg/L;已戒烟者(Z=-2.12,P＜0.05)和吸烟者(Z=-6.67,P＜0.001)血清可替宁浓度分别显著高于非吸烟者.结论 建立的ID-LC/MS/MS测定血清可替宁方法操作简便、特异、灵敏,可望在吸烟暴露水平评价及暴露与疾病发生危险的研究中提供有效技术平台.     

血清总胆汁酸检测在脑血管疾病中的临床意义

目的　探讨血清总胆汁酸 (TBA)测定在脑血管疾病诊断中的临床意义。方法　采用酶法检测脑梗塞患者2 9例 ,脑出血患者 2 6例及非心脑血管疾病患者 30例中血清 TBA及血脂水平。结果　脑梗塞组 TBA水平显著高于对照组和脑出血组 (t=6 .78,3.4 0 ,P<0 .0 1) ,脑出血组 TBA水平也显著高于对照组 (t=3.87,P<0 .0 1)。结论　脑梗塞和脑出血与血清 TBA水平呈正相关 ,TBA测定有助于脑梗塞和脑出血的鉴别诊断。     

Measurement of glycated albumin in serum and plasma by LC-MS/MS

Background Diagnosis of diabetes and monitoring of long-term blood sugar are preferably done by measurement of glycated hemoglobin (HbA1c). Diabetic patients with end stage renal disease (ESRD) may have short-lived red blood cells due to hemodialysis (HD), and thus higher turnover of hemoglobin. The level of glycated hemoglobin (HbA1c) may be lower than expected for these patients, even at increased blood glucose, possibly making glycated albumin (GA) measurement a better alternative. Methods The percentage of GA was measured by liquid chromatography coupled with tandem mass spectrometry (LC-MS/MS). Fast and efficient trypsin digestion of proteins in diluted serum or plasma resulted in a high number of proteotypic peptides from albumin, including KQTALVELVK which was detected both glycated and non-glycated by multiple reaction monitoring (MRM). The percentage of GA was estimated by neat peak area response of glycated peptide divided by the sum of glycated and non-glycated peptide. Results Acceptable method reproducibility (6% CV), repeatability (2–6% CV), limit of quantification (0.75% GA), linearity (R²?=?0.999) and recovery (79?±?9%) was achieved without using calibration or isotope-labeled internal standard. GA was strongly correlated with HbA1c (r?=?0.84) for patients without ESRD. The average ratio of GA/HbA1c was significantly higher (p?=?0.0021) for ESRD patients (1.84?±?0.38, n?=?62) compared to other patients (1.67?±?0.28, n?=?225). Conclusion GA measurement by detecting glycation in KQTALVELVK with LC-MS/MS seems to be a useful supplement to HbA1c for detecting increased blood glucose in diabetic patients with ESRD.     

人血浆中双氢可待因浓度HPLC-MS／MS测定方法的建立

目的建立测定人血浆中双氢可待因浓度的高效液相色谱一串联质谱分析方法。方法血浆样品用甲醇沉淀蛋白后,选用安捷伦色谱柱XDB．C18,2．1×50mm,5μm梯度洗脱。流动相A为0．1％甲酸10mM甲酸铵水溶液,流动相B为0．1％甲酸甲醇。流动性梯度为0min（B5％）→1min（B5％）→1．3（B65％）→2．4min（B65％）→2．5min（B5％）→3．5min（B5％）。流速0．6mL／min,柱温30℃,自动进样器温度4cC,进样量10止。选用岛津LC-20A高效液相色谱系统和串联APl4000Qtrap型三重四极杆质谱仪,ESI源正离子MRM扫描,Is电压5500V,CAD气Medium,CUR气40psi,Gasl：35psi,Gas2：40psi,源温度550℃,EP电压10V,CXP电压9V。双氢可待因：m／z302．1—199．1,DP电压：105V,CE电压：47V。右美沙芬（内标）：m／z271．3→170．1,DP电压100V,CE电压54V。结果该方法测定血浆中二氢可待因的线性范围为2～1000ng／mL（r〉0．99）,定量下限为2ng／mL,准确度均在85％～115％,批内和批间精密度也均〈15％。稳定性试验中,血浆样品及血浆经处理后样品中的双氢可待因在方法学要求的各种贮存条件下均比较稳定。结论该方法简单、快速、灵敏、专属性强、重现性好,适用于检测人血浆中双氢可待因浓度的研究。     

LC-MS/MS法测定人血浆中丙戊酸的浓度

目的建立快速、灵敏的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法测定人血浆中丙戊酸的浓度。方法采用乙腈沉淀蛋白法处理人血浆样本,选用Shimpack VP-ODS色谱柱(150mm×2.0mm I.D,5μm),以甲醇:5mmol/L乙酸铵(55∶45,v/v)为流动相,流速为0.4mL/min,采用API3200型三重四极杆串联质谱仪的多重反应监测(MRM)扫描方式进行监测,电喷雾离子化源,负离子方式,选择监测离子反应分别为m/z 142.9→m/z 142.9(丙戊酸)和m/z 179.0→m/z 179.0(1-庚烷磺酸)。结果丙戊酸和内标1-庚烷磺酸的保留时间分别为3.03、2.38min;血浆中丙戊酸的线性范围为0.800~80.0μg/mL(r0.99),定量下限为0.800μg/mL;批内、批间精密度(RSD)均小于15%;准确度(RE)均在±15%的范围以内;平均提取回收率为(84.1±2.4)%;平均基质效应因子为(104.3±2.0)%。稳定性试验中,在各种贮存条件下的血浆中,丙戊酸均较稳定。结论该方法适用于人血浆中丙戊酸浓度的测定及丙戊酸半钠缓释片的人体药代动力学研究。