大黄对重症急性胰腺炎大鼠丝裂原激活蛋白激酶活性的影响

目的 研究大黄对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠胰腺组织中丝裂原激活蛋白激酶(NAPK)家族中的细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)、c-J un氨基末端激酶(,JINK)和p38mAPK活性的影响,探讨大黄治疗SAP的机制. 方法 由南京大学动物中心提供100只SD大鼠,采用胆胰管逆行注射5%牛磺胆酸钠法建立大鼠SAP模型.将大鼠随机分为假手术组(n=33)、SAP组(n=33)、大黄治疗组(n=34),大黄治疗组在制成SAP模型后予10%大黄汤剂灌胃,剂量为2 ml/100g;制模后1、3 6 12 h时点分别处死相应大鼠,取血及胰腺组织.用Western blot检测各组大鼠胰腺组织中MAPK活性,RT-PCR方法检测胰腺组织中TNF-αa、IL-6的mRNA的变化.所有数据用SPSS 13.0统计软件进行统计,组间比较用q检验,以P<0.05为差异具有统计学意义. 结果 与假手术组相比,SAP组胰腺组织中MAPK活性明显增强(1 h,3 h,6 h,12 h两组p-ERK,p-p38和p-JNK比较,P值均<0.01).大黄治疗后各时间点胰腺组织中MAPK活性与SAP组相比均明显下降(1 h,3 h,6 h,12 h两组p-ERK,p-p38和p-JNK比较,P<0.01).与假手术组相比,SAP组胰腺组织中TNF-α、IL-6 mRNA水平明显增加(两组1h,3 h,6 h,12 h TNF-αmRNA和IL-6 mRNA比较,P<0.01);大黄治疗组与SAP组相比,TNF-α、IL-6 mR-NA水平均明显降低(P均<0.01). 结论 大黄治疗SAP的机制可能是通过抑制MAPK激活而减轻SAP的炎症反应.     

柴芍承气汤加味银杏叶对重症急性胰腺炎大鼠血PAF、TNF-α、IL-8的影响

目的通过动物实验方法探讨柴芍承气汤加味银杏叶对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠模型胰腺损伤及血中PAF、TNF-α、IL-8水平的影响。方法将72只成年雄性Wistar大鼠随机分为4组:假手术组(J组)、SAP模型组(M组)、柴芍承气汤组(C组)、加味柴芍承气汤组(Z组),各组又按制模后规定时间分为6、12、24h3个亚组,每组6只。采用牛黄胆酸钠胰胆管注射法制备SAP大鼠模型,J组大鼠仅于剖腹手术后轻轻翻动胃与十二指肠。制模后,C组给予柴芍承气汤灌胃,Z组给予柴芍承气汤加味银杏叶鼻饲,J组与M组给予生理盐水灌胃。大鼠处死后取胰腺组织,标本用10%福尔马林固定,石蜡包埋,切片,HE染色,光镜观察各组胰腺组织损伤情况。制模后,按规定时间点取大鼠动脉血,分别测定各组血中PAF、TNF-α、IL-8水平变化。结果 M组胰腺组织损伤随着时间延长逐渐加重,血中PAF、TNF-α、IL-8水平逐渐增高;C组较M组胰腺组织损伤减轻,血中PAF、TNF-α、IL-8水平均降低;Z组较C组血PAF水平下降。结论柴芍承气汤加味银杏叶可通过降低SAP大鼠血TNF-α、IL-8和PAF水平,对胰腺组织起到保护作用,其较柴芍承气汤具有更好的治疗作用。     

吗替麦考酚酯对重症急性胰腺炎大鼠免疫损伤的影响

目的 探讨NF-κB对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠炎症因子TNF-α、IL-1β和sICAM-1的调控作用及其早期的动态变化及意义,并观察吗替麦考酚酯(mycophenolate mofetil,MMF)的干预性作用.方法 将104只雄性Wistar大鼠随机(随机数字法)分成健康组、假手术组、SAP组、MMF组.(1)健康组仅开腹后缝合即可(n=8)；(2)假手术组开腹后仅翻动胰腺并以钝器轻划胰腺组织5次(n=32)；(3) SAP组采用逆行胰胆管注射牛黄胆酸钠法建立SAP模型(n=32)；(4) MMF组大鼠在完成SAP模型后1h经尾静脉注射MMF 250 mg/kg(n=32).于造模后3、6、12、24 h时点分批处死大鼠,常规HE染色进行胰腺组织病理评分；采用全自动生化分析仪检测血清淀粉酶AMS、血清C反应蛋白(CRP)；ELISA法检测血清TNF-α、IL-1β和sICAM-1的含量；荧光定量PCR法检测胰腺组织NF-κB mRNA表达.结果 SAP组与健康组、假手术组比较,胰腺组织病理评分与血清AMS、CRP、TNF-α、IL-1β及sICAM-1的含量、胰腺组织NF-κB mRNA表达在各时间点均显著升高(P＜0.05),干预组使用MMF后,胰腺组织病理评分、血清AMS、CRP、TNF-α、IL-1β和sICAM-1水平、胰腺组织NF-κB mRNA同SAP组相比均有明显降低(P＜0.05).结论 SAP早期阶段细胞因子的变化与SAP病情进展密切相关,MMF可通过抑制细胞免疫及炎性细胞因子的产生,减轻炎症损伤反应.     

罗格列酮对大鼠重症急性胰腺炎的作用

目的 探讨罗格列酮(ROSI)静脉给药对大鼠重症急性咦腺炎(SAP)的作用及其机制. 方法 雄性Wistar大鼠54只,随机分为假手术组(SO组)、重症急性胰腺炎组(SAP组)、罗格列酮预处理组(ROSI组),每组18只大鼠.胆胰管逆行注射5%牛磺胆酸钠制备SAP模型.SO组、SAP组造模前30 min股静脉注射10%二甲基亚砜(DMSO)(0.2 ml/100g);ROSI组则注射等量的10%DMSO溶解的罗格列酮(6 mg/kg).术后3、6、12 h分批剖杀大鼠,每个时间点6只.检测血清淀粉酶(AMY)和胰腺组织髓过氧化物酶(MPO)水平,取胰头部胰腺组织行病理学检查;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测胰腺组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)mRNA的表达水平. 结果 SAP组各时间点AMY、MPO及病理评分较SO组升高(P<0.05);ROSI组上述指标较SAP组下降,AMY在6 h、12h时点差异具有统计学意义(P<0.05)、MPO在12 h差异具有统计学意义(P<0.05).SAP组各时间点TNF-α和ICAM-1 mRNA的表达水平均较SO组升高(P<0.05),其中TNF-α在6 h时点达高峰、ICAM-1在12 h时点达高峰.ROSI组各时间点TNF-α mRNA的表达水平较SAP组下降(P<0.05);6h、12 h时点ICAM-1 mRNA的表达水平较SAP组降低(P<0.05). 结论 罗格列酮对大鼠重症急性胰腺炎具有保护作用,其机制与抑制胰腺组织TNF-α和ICM-1 mRNA的表达有关.     

胰岛素样生长因子-Ⅰ对重症急性胰腺炎大鼠小肠黏膜上皮细胞凋亡的影响

目的 研究外源性胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肠黏膜上皮细胞凋亡及凋亡相关基因bax,bcl-2,caspase-3 mRNA表达的影响.方法 72只雄性Wistar大鼠按照随机数字表法分为假手术组(SO组)、重症急性胰腺炎组(SAP组)、IGF-Ⅰ治疗组(IGF-Ⅰ组)共三组.通过胰胆管逆行注射5%牛磺胆酸钠制作大鼠SAP模型,SO组用同样方法经胰胆管逆行注射生理盐水;IGF-Ⅰ组分别于术后30 min和术后3 h经后肢内侧皮下注射ICF-Ⅰ.各组动物分别于术后6,12,24 h处死8只,检测血浆淀粉酶,TUNEL法检测小肠黏膜上皮细胞凋亡,观察小肠组织病理学变化并进行病理评分,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测小肠黏膜上皮细胞中bax,bcl-2和caspase-3mRNA的表达.数据采用SPSS 11.0统计软件分析,多组间比较采用单因素方差分析.结果 IGF-Ⅰ治疗组与SAP组各时相点相比,血浆淀粉酶和小肠病理评分均低于各相应时相点,于12 h和24 h差异有统计学意义,均P<0.05;小肠黏膜上皮细胞凋亡指数IGF-Ⅰ组与SAP组各相应时相点相比均显著降低[6 h:(13.88±1.73)vs.(19.00±2.78);12 h:(10.13±1.55)vs.(17.63±1.60);24 h:(9.50±1.07)vs.(17.25±2.76)],P<0.05;电镜示小肠组织病理变化较SAP组明显改善.bax mRNA表达在SAP组各时点较SO组相应时相点明显增高[6 h:(1.35±0.18)vs.(0.85±0.12);12 h:(1.21±0.21)vs.(0.86±0.24);24 h:(1.14±0.24)vs.(0.95±0.22)],6 h即达高峰,而在IGF-Ⅰ组的表达与SAP组相应时相点比较则明显减弱,在12 h和24 h差异具有统计学意义(P<0.05),于24 h即接近SO组;caspase-3 mRNA表达在SAP组各时相点较SO组相应时相点明显增高[6 h:(0.78±0.01)vs.(0.55±0.04);12 h:(0.79±0.04)vs.(0.57±0.05);24 h:(0.81±0.06)vs.(0.55±0.01)(P<0.01)],而在IGF-Ⅰ组的表达与SAP组相应时相点比较则明显减弱,在12 h和24 h差异具有统计学意义(P<0.05):bcl-2 mRNA的表达在SO组和SAP组均较弱且差异无统计学意义,P>0.05,而在IGF-Ⅰ组各时相点的表达则明显增强[6 h:(0.65±0.07)vs.(0.54±0.04)vs.(0.57±0.06);12 h:(0.69±0.04)vs.(0.56±0.05)vs.(0.53±0.05);24 h:(0.72±0.05)vs.(0.54±0.07)vs.(0.58±0.08),P<0.05].结论 外源性IGF-Ⅰ通过拮抗SAP大鼠小肠黏膜上皮细胞的凋亡从而可以减轻SAP大鼠肠黏膜损害,其机制可能与其上调bcl-2 mRNA表达及下调bax,caspase-3 mRNA表达有关.     

血小板活化因子受体拮抗剂对内毒素血症幼年大鼠肠黏膜上皮细胞间连接蛋白的影响

目的观察血小板活化因子（PAF）对内毒素血症大鼠肠黏膜上皮细胞间连接蛋白β-连环蛋白（β-catenin）的影响，探讨PAF受体拮抗剂对肠上皮屏障完整性的保护作用机制。方法采用腹腔注射脂多糖（LPS）制备内毒素血症大鼠模型。于注射LPS前和注射后30min腹腔注射PAF受体拮抗剂BN52021 5mg／kg作为预防组和治疗组；腹腔注射等量生理盐水作为对照组。分别于注射LPS后1．5、3、6、24、48和72h取各组大鼠回肠，用免疫组化及逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测肠上皮细胞β-catenin蛋白及mRNA表达。结果对照组β-catenin均匀分布于上皮细胞间细胞膜的表面；内毒素组细胞膜表面β-catenin蛋白明显减少，分布不均。免疫组化和RT—PCR检测均可见内毒素组β-catenin蛋白及mRNA水平明显低于对照组，3～24h内降低非常明显（P均〈0．01）；预防组及治疗组变化趋势同内毒素组，各时间点β-catenin蛋白及mRNA水平均较内毒素组高，但差异无显著性。结论PAF在内毒素血症肠黏膜的机械屏障功能损伤中发挥一定作用，预防和治疗性应用PAF受体拮抗剂BN52021可减轻肠损伤。     

Gαi2对脑缺血-再灌注后神经细胞凋亡的影响

目的 探讨分析抑制性G蛋白α2亚单位(Gαi2)在大鼠脑缺血-再灌注损伤模型海马中的表达及其对神经细胞内钙离子浓度和凋亡的影响.方法 将90只SD大鼠随机(随机数字法)分为假手术组(SS组,n=30)、脑缺血-再灌注损伤组(IR组,n=30).脑缺血-再灌注且脑室内微量灌注Gαi2活性抑制剂百日咳毒素(PT)组(PT组,n=30);用免疫组化、Western blotting分别测定大鼠脑缺血-再灌注后6h、12 h、24 h各组中海马神经内Gαi2的表达,采用流式细胞术测定各组中海马细胞内游离Ca2+浓度的平均荧光值,TUNEL法检测神经元细胞的凋亡.结果 不同时间点,IR组Gαi2含量和Ca2+浓度较SS组明显增高(P＜0.01),PT组Ca2+浓度较IR组升高(P＜0.01),PT组神经细胞凋亡率较IR组升高(P＜0.05).结论 Gαi2在大鼠脑缺血-再灌注损伤中表达明显增高,并可降低缺血神经细胞内的钙离子浓度,减少神经细胞的凋亡,对缺血神经细胞具有保护作用.     

血小板活化因子在新生儿缺氧缺血性脑病中作用

目的探讨血小板活化因子(PAF)与新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)之间的关系。方法应用改良的Henson法测定实验鼠和HIE血清PAF水平,应用拮抗剂银杏提取物(BN52021)治疗实验鼠。结果实验鼠和患儿血清PAF明显高于对照组(P<0.001),对PAF增高的实验鼠,应用BN52021治疗,可以明显降低PAF的水平。结论PAF可做为判断HIE病情轻重程度和预后的重要指标,BN52021能明显抑制HIE小鼠体内PAF的产生,降低PAF在血清中的含量(P<0.001)。     

大黄素对重症急性胰腺炎大鼠小肠水通道蛋白3表达的调节作用

目的探讨重症急性胰腺炎（SAP）大鼠小肠水通道蛋白3（AQP3）的表达及大黄素的调节作用。方法将80只SD雄性大鼠随机分成假手术组（n=20）、模型组（n=30）、大黄素治疗组（n=30）。采用胰胆管逆行匀速注入牛磺胆酸钠（1ml／kg）方法制作SAP模型;假手术组给予等量生理盐水,大黄素组于制模后予大黄素灌胃（20mg&#183;kg-1&#183;d,分两次给予）,模型组及假手术组给予等量生理盐水。各组分别于制模后24、72、120h处死大鼠,留取标本,采用苏木素-伊红（HE）染色、麦芽糖苷法、免疫组化法、蛋白质免疫印迹法（Western blotting）、实时定量聚合酶链反应（PCR）技术测定胰腺病理评分、血淀粉酶、AQP3蛋白及mRNA表达。结果模型组大鼠胰腺病理评分及血淀粉酶水平均较假手术组明显升高,差异均有统计学意义（均P〈0．05）;大黄素能明显降低SAP大鼠胰腺病理评分及血淀粉酶水平（均P〈0．05）。SAP大鼠回肠黏膜AQP3蛋白及mRNA表达均较假手术组明显上调,差异均有统计学意义（均P〈0．05）,且以24h时更为显著;大黄素治疗可明显下调AQP3的蛋白及mRNA表达,蛋白表达于24、72、120h,mRNA表达于24h、72h与模型组比较差异均有统计学意义（均P〈0．05）。结论AQP3可能参与了SAP的病理生理改变;大黄素治疗可通过下调AQP3的蛋白及mRNA表达,明显改善SAP病情。     

实时荧光定量PCR分析海水浸泡伤大鼠小肠组织NF-κB及IκB mRNA表达水平

目的 建立检测大鼠小肠组织NF-κB及IκB-α mRNA表达水平的SYBR Green 实时定量(real time)PCR实验技术,观察海水浸泡伤大鼠小肠组织NF-κB及IκB-α mRNA表达水平的动态变化.方法 Wistar大鼠63只,随机分为三组:空白对照组(C组,n=7),创伤组(W组,分为12、24、48、72 h四组,每组n=7),创伤+海水浸泡组(W+S组,分为12、24、48、72 h四组,每组n=7).W组采用腹部开放伤模型,W+S组在腹部开放伤的基础上海水浸泡1 h.采用real-time PCR方法测定三组实验动物小肠组织NF-κB及IκB-α mRNA表达量并进行统计分析和组间比较.结果 与W组相比,W+S组大鼠小肠组织NF-κB mRNA在72 h后出现显著表达水平上调(P<0.01),W组和W+S组大鼠小肠组织IκB-α mRNA在48 h后都出现显著表达水平上调,但W+S组在72 h IκB-α mRNA表达上调更为显著(P<0.01).结论 在海水浸泡伤的后期(＞72 h),NF-κB mRNA表达明显上调,促进NF-κB蛋白水平的合成,从而进一步放大NF-κB信号转导途径,诱导炎症反应.同时, IκB-α mRNA表达水平的也明显上调,促使IκB-α蛋白表达增加,以尽量下调细胞核中NF-κB的活性.     

异丙酚对早期脓毒症大鼠肺AQP1基因表达及血清TNF-α浓度的影响

目的:研究异丙酚治疗早期脓毒症时肺水通道蛋白1(aquaporin 1,AQP1)基因表达的差异和对TNF-α的影响。方法:按完全随机设计,分为正常组(N组),脂多糖组(L组),脂多糖+异丙酚组(LP组),每组20只(n=20)。每组再根据注射药物后1、2、4、8h的不同时间点,随机分为T1、T2、T4、T8亚组(n=5)。各组于相应时间点处死动物,留取肺标本,以RT-PCR及相关软件分析各组AQP1 mRNA表达;用ELISA法测血清TNF-α浓度。结果:脂多糖对肺AQP1 mRNA的表达有明显的抑制作用,尤其在注射1h后表达明显减少(P<0.05),2～8h逐渐上升,但仍低于对照组(P<0.05);异丙酚能使脓毒症大鼠AQP1基因上调(P<0.05),在早期(1h)差异有统计学意义(P<0.05)。血清TNF-α浓度,L组注射LPS后1hTNF-α血清水平骤然升高至峰值(P<0.05),至4h后渐趋平稳,但各时间点浓度水平均高于对照组(P<0.05),异丙酚治疗组各时间点TNF-α值较L组明显降低(P<0.05),于1h后渐升高,于4h达到峰值(P<0.05)。结论:注射LPS1h后可迅速下调肺组织AQP1基因的表达和使TNF-α血清水平骤然升高至峰值;异丙酚治疗脓毒症大鼠后,早期(1h后)肺组织AQP1mRNA表达明显上调,降低了TNF-α浓度。     

吗替麦考酚酯对重症急性胰腺炎大鼠脑损伤的保护作用研究

目的 探讨炎症因子TNF-α、IL-1β和sICAM-1在重症急性胰腺炎(SAP)并发脑损伤过程中的作用及NF-κB对炎症损伤的调控机制,并观察吗替麦考酚酯(mycophenolate mofetil,MMF)的干预性作用.方法 将104只雄性Wistar大鼠分为正常组、假手术组、SAP组、MMF组,正常组仅开腹后缝合即可(n=8),假手术组开腹后仅翻动胰腺并以钝器轻划胰腺组织5次(n=32),SAP组采用逆行胰胆管注射牛磺胆酸钠法建立SAP模型(n=32),MMF组在完成SAP模型后1 h经尾静脉注射MMF 250 mg/kg(n=32).于造模后3、6、12、24 h半麻醉状态下分批处死大鼠,采用全自动生化分析仪检测血清淀粉酶(AMS)、C反应蛋白(CRP),ELISA法检测血清TNF-α、IL-1β和sICAM-1水平,并常规HE染色进行脑组织病理学评分,荧光定量PCR法检测脑组织NF-κB mRNA表达.结果 与正常组、假手术组比较,SAP组脑组织病理评分和血清AMS、CRP、TNF-α、IL-1β、sICAM-1水平及脑组织NF-κB mRNA表达在各时间点均显著升高(P＜0.05);与SAP组比较,MMF组使用MMF干预后脑组织病理学评分和血清AMS、CRP、TNF-α、IL-1β、sICAM-1水平及脑组织NF-κB mRNA表达均显著降低(P＜0.05).结论 SAP早期阶段细胞因子的变化与脑损伤进展密切相关,MMF可通过抑制细胞免疫及炎症细胞因子的产生、减轻炎症损伤反应发挥保护作用.     

莱菔硫烷对重症急性胰腺炎大鼠肺组织内血红素加氧酶-1及环氧合酶表达的影响

目的探讨莱菔硫烷对重症急性胰腺炎(SAP)肺组织血红素加氧酶-1(HO-1)及环氧合酶(COX)表达的影响。方法将72只大鼠随机分为对照组(N组)、SAP模型组(SAP组)和莱菔硫烷组,每组各24只,分别于术后3、6、12h对各组进行肺损伤评分、检测肺组织湿干比(W/D)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、HO-1mRNA、COX mRNA的表达量。结果 SAP组的各指标均明显高于N组(P0.05);莱菔硫烷组的病理评分、肺W/D值、TNF-α、IL-1β、COX-2mRNA表达量较SAP组明显降低(P0.05),HO-1mRNA表达量较SAP组明显升高(P0.05);相关性分析示HO-1mRNA表达量与COX-2mRNA、TNF-α、IL-1β的表达水平呈明显负相关(P0.05)。结论莱菔硫烷增加了SAP肺组织中HO-1的表达量从而减轻急性肺损伤,这可能与通过抑制COX表达有关。     

髓系细胞触发受体-1对重症急性胰腺炎大鼠肠屏障功能的影响

目的 探讨髓系细胞触发受体-1（triggering receptor-1 on myeloid cells,TREM-1）的表达与重症急性胰腺炎（severe acute pancreatitis,SAP）肠屏障功能障碍的关系。方法 雄性Wistar大鼠64只,随机（随机数字法）分为假手术组(SO)和SAP组,每组32只,采用逆行胰胆管注射5％牛磺胆酸钠制备SAP大鼠模型,分别于造模后2,6,12,24h时点取血和回肠组织。改良分光光度法检测血浆D-乳酸、二胺氧化酶（diamine oxidase,DAO）和内毒素浓度。逆转录-聚合酶链反应( RT-PCR)方法检测回肠组织TREM-1、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）mRNA的表达水平。对数据进行单因素方差分析和spearman相关性分析,P＜0.05表示差异具有统计学意义。结果SAP组各时点血浆D-乳酸、DAO和内毒素的水平均高于假手术组(P ＜0.01,P＜0.05);SAP组各时点回肠组织TREM-1,IL-1β和TNF-α mRNA的表达水平较假手术组显著增高(P ＜0.01,P＜0.05),TREM-1 mRNA表达水平与IL-1β及TNF-α mRNA表达水平均呈正相关(r=0.956,P =0.044;r =0.986,P=0.015),IL-1β mRNA表达水平与TNF-α mRNA表达水平无明显相关性(P=0.133)。结论 SAP时,大鼠肠组织内TREM-1表达上调,促进炎症介质释放和肠黏膜损伤加重,TREM-1在SAP肠屏障功能障碍的发生发展中起重要作用。     

急性胰腺炎肺组织肺表面活性蛋白A的表达及功能改变

目的 探讨重症急性胰腺炎(SAP)合并急性肺损伤(ALI)时肺组织肺表面活性蛋白A(SP-A)的表达及功能改变.方法 将20只SD大鼠随机分为假手术(Sham)组(n=10)、SAP组(n=10).Sham组仅行剖腹术,翻动胰腺.SAP组用去氧胆酸钠经胰胆管逆行注射建立SAP肺损伤模型.各组动物于术后24 h取血测动脉血氧分压(PaO2)、血清淀粉酶.处死动物后取肺组织计算肺湿/干重(W/D)比值;应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组化法测定肺组织SP-A的mRNA及蛋白表达,并观察胰腺、肺组织病理变化及肺泡Ⅱ型上皮细胞的电镜下变化.结果 与Sham组比较,SAP组PaO2显著降低[(96.78±3.81)mm Hg比(79.24±5.84)mm Hg,1 mm Hg=0.133 kPa,P＜0.053;血淀粉酶显著升高[(1 193.41±192.54)U/L比(7 144.19±727.91)U/L,P＜0.05];肺W/D比值显著升高(3.70±0.90比8.57±2.45,P＜0.05);SP-A的mRNA及蛋白表达显著降低(mRNA:1.21±0.10比0.80±0.11;蛋白:7 982.22±3 689.57比3 497.99±2 958.21,P均＜0.05),且SAP组SP-A的mRNA及蛋白表达与肺损伤的程度均呈明显负相关(r1=-0.876,P＜0.01;r2=0.713,P＜0.05).结论 SAP时肺泡Ⅰ型上皮细胞功能受损、SP-A表达降低可能是ALI的发病机制之一.     

洛伐他汀联合厄贝沙坦对慢性肾小管间质纤维化大鼠HIF-1α的影响

目的:探讨HIF-1α与CTGF在慢性肾小管间质纤维化中的表达及药物干预的影响。方法:建立UUO模型,将SD大鼠分4组:假手术组、模型组、ARB组、他汀联合ARB组。观察各组大鼠第2周肾功能、24h尿蛋白和肾组织病理学改变,检测HIF-1α、CTGF的表达。结果:模型组肾功能及尿蛋白定量均显著增高(P<0.05),应用他汀联合ARB治疗后肾功能较模型组显著降低,肾小管间质病变面积减少,肾小管间质细胞HIF-1αmRNA和CTGFmRNA表达显著减少(P<0.05)。模型组肾组织有高水平HIF-1αmRNA、CTGFmRNA,且两者的表达呈正相关(r=0.697,P<0.01),结论:低氧上调了HIF-1α及相关因子的表达;他汀联合ARB治疗可能降低HIF-1α和CTGF在肾小管间质中的表达而发挥肾脏保护作用。     

重症急性胰腺炎大鼠肾脏1α-羟化酶表达与血钙变化的研究

目的 通过建立大鼠重症急性胰腺炎模型,观察大鼠肾脏1α-羟化酶表达和血清钙水平变化,探讨两者的变化是否有相关性.方法 SPF级雄性Wistar大鼠80只,按随机数字法分为假手术组(SO组)和重症急性胰腺炎组(SAP组),各组分为1、3、6、12h4个时间点,各时间点10只.经胆胰管逆行注射5％牛磺胆酸钠建立大鼠SAP模型,在各时间点处死大鼠后检测血清淀粉酶、血清钙及血清肌酐与血清尿素氮水平,酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清1,25-二羟维生素D3水平,免疫组化检测肾脏组织1α-羟化酶表达部位及表达量,Western blotting法对肾脏组织中1α-羟化酶表达进行定量分析,光镜下观察胰腺组织及肾脏组织的病理变化,电镜下观察肾脏近曲小管上皮细胞的超微结构改变.结果 与SO组比较,SAP组肾脏组织病理损伤逐渐加重,1、3、6、12 h各时间点血清淀粉酶、血清肌酐、血清尿素氮水平升高(P＜0.05),3h、6h、12h点血清钙水平及血清1,25-二羟维生素D3水平降低(P＜0.05),Western blotting肾脏1α-羟化酶表达在1h、3h升高,在6h、12h表达降低(P＜0.05).SAP组大鼠血清钙水平、1,25-二羟维生素D3水平、肾脏1α-羟化酶表达随时间点推移逐渐降低,Western blotting结果显示SAP组1、3、6、12 h各时间点肾脏1α-羟化酶表达与血清1,25-二羟维生素D3水平呈正相关(r=0.93,P＜0.01; r=0.95,P＜0.01;r =0.92,P＜0.01;r=0.88,P＜0.01),3、6、12h各时间点肾脏1α-羟化酶表达与血清钙水平呈正相关(r=0.98,P＜0.01;r=0.95,P＜0.01;r=0.75,P＜0.01).结论 SAP病程早期随着病情发展肾脏损伤逐渐加重,肾脏中1α-羟化酶表达逐渐降低,低钙血症的发生可能与肾脏中1α-羟化酶活性下降有关.     

攻下清热活血中药对重症胰腺炎大鼠胰腺肿瘤坏死因子-α和白细胞介素-1β基因表达的影响

目的:观察攻下清热活血中药影响重症胰腺炎大鼠胰腺组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)的mRNA表达。方法:采用牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射制备大鼠重症胰腺炎模型。将110只大鼠随机分为正常对照组、模型组、中药大、小剂量组、奥曲肽组。制模后,分别以16.66g/kg和8.33g/kg剂量的攻下清热活血中药灌胃,以奥曲肽16μg/kg皮下注射,正常对照组和模型组予等量生理盐水灌胃,均每8h1次,共3次。随后处死动物取血测淀粉酶含量;取胰腺组织观察病理学改变并进行病理评分;用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测胰腺组织中TNF-α和IL-β的mRNA表达。结果:模型组大鼠胰腺组织病理评分和血清淀粉酶含量明显增高(P均<0.01);各治疗组治疗后大鼠胰腺组织病理评分和血清淀粉酶均较模型组明显下降(P<0.05或P<0.01)。而3个治疗组间胰腺组织病理评分差异无显著性;中药大剂量组与奥曲肽组血清淀粉酶含量均较中药小剂量组显著降低(P均<0.05)。模型组大鼠胰腺组织TNF-α、IL-1β的mRNA表达明显高于正常对照组(P均<0.01);3个治疗组大鼠胰腺组织TNF-α、IL-1β的mRNA表达均较模型组明显下降(P均<0.01),且3组间差异无显著性。结论:攻下清热活血中药能明显改善重症胰腺炎大鼠胰腺组织病理改变,抑制胰腺组织TNF-α、IL-1β的mRNA表达可能是防治重症胰腺炎的作用机制之一。     

JAK/STAT通路对烫伤脓毒症大鼠Toll样受体基因表达的调节作用

目的：探讨Janus激酶／信号转导和转录激活子（JAK／STAT）通路在烫伤脓毒症大鼠Toll样受体2（TLR2）基因表达调控中的意义。方法：Wistar大鼠38只随机分为正常对照组（n=6)、烫伤后金黄色葡萄球菌（金葡菌）感染组（n=12)、AG490拮抗组（n=20)和雷帕霉素（Rapamycin,RPM)拮抗组（n=10), 检测动物肝、肾、肺组织中TLR2和肿瘤坏死因子－α（TNF－α）基因表达的改变。结果：烫伤合并金葡菌攻击后0．5h和2h，动物肝、肾、肺组织中TLR2 mRNA表达显著增高（P＜0．05或P＜0．01）。RPM干预可有效抑制动脉肝、肾组织TLR2 mRNA表达，但对肺脏TLR2 mRNA表达无明显影响；而AG490拮抗组动物各组织中TLR2 mRNA表达与未干预组相比均无明显差异。烫伤合并金葡菌感染后2h大鼠肝、肺、肾组织TNF－α基因表达均显著升高（P均＜0．01）。给予RPM可明显抑制各组织中TNF－α mRNA表达（P＜0．05或P＜0．01），AG490拮抗组大鼠肝、肾组织中TNF－α表达亦均显著低于未拮抗组（P均＜0．01）。结论：烫伤后金葡菌感染可促进体内TLR2基因表达，STAT可能直接或通过其诱生的炎症介质参与了对TLR2 mRNA表达的调控。     

重症急性胰腺炎大鼠模型胰腺组织信号转导与转录激活因子-1的变化

目的:探讨重症急性胰腺炎(SAP)大鼠胰腺组织信号转导与转录激活因子-1(STAT-1)活性的动态变化。方法:Wistar大鼠36只随机分为假手术组(SO组)、重症急性胰腺炎组(SAP组)。采用胆胰管逆行注射5%牛磺胆酸钠制备SAP模型。术后3、6、12h分别处死大鼠,测定血清淀粉酶水平,胰头部胰腺组织病理切片HE染色检测胰腺病理改变,免疫组化SABC法检测胰腺组织磷酸化STAT-1蛋白的表达情况。结果:SAP组各时间点血清淀粉酶逐渐升高,胰腺病理损伤逐渐加重,与SO组各时间点相比差异均有显著性(P<0.01);SAP组各时间点磷酸化STAT-1蛋白含量均高于SO组(P<0.01),术后3h达高峰,后逐渐下降。结论:SAP时胰腺组织STAT-1的活化可能在其发病过程中起到一定作用。