应用PCR技术检测解脲支原体

应用ＰＣＲ技术检测解脲支原体孔繁荣，朱学骏，张耕耘，周骏马，陈受宜解脲支原体（ｕｒｅａｐｌａｓｍａｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍ）是非淋菌性尿道炎的病原体之一［１］。目前的检测方法主要为培养法和免疫学方法［２］。我们建立了聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃ...     

斑点免疫结合试验斑点免疫金渗滤试验和培养法用于解脲支原体检测的对比研究

目的：探讨斑点免疫结合试验（ＤＩＢＡ）、斑点免疫金渗滤试验（ＤＩＧＦＡ）和培养法检测解脲支原体的优缺点。方法：同时用ＤＩＢＡ、ＤＩＧＦＡ和培养法检测疑诊非淋菌性尿道炎、阴道炎或宫颈炎患者泌尿生殖道标本中的解脲支原体，并相互比较。结果：ＤＩＢＡ和ＤＩＧＦＡ两法的敏感性、特异性分别为９２．３％、９３．８％和９４．２％、９６．４％。配对计数资料χ２检验，两法分别与培养法比较均无显著性差别（Ｐ＞０．０５）。结论：ＤＩＧＦＡ具有较为省时和操作简便的优点，是一种有效、快速和简便的检测方法，具有广泛应用于临床实验室检测解脲支原体感染的潜力。     

解脲支原体液体培养及电镜观察

目的：用液体培养基分离解脲支原体（ＵＵ），并电镜下观察其形态特征。方法：用选择性ＵＵ液体培养基分离尿生殖道标本中的ＵＵ，阳性结果经ＰＣＲ方法证实，电镜下观察其形态。结果：阳性者为尿素酶阳性，培养液呈透明红色，ＰＣＲ检测为阳性，电镜观察可见大小不等、无细胞壁的圆形、椭圆形、杆状、发芽状多形性特征的ＵＵ细胞，大小为０．０３～０．１２μｍ×０．１２～０．３５μｍ，未见细菌细胞。结论：选择性液体培养基能充分利用ＵＵ在液体培养基中生长迅速、分解尿素和缺乏细胞壁的特性，有效地抑制尿生殖道标本中的细菌生长，获得ＵＵ纯培养物。液体培养法操作简单，重复性好。     

复合PCR同时检测淋球菌沙眼衣原体和解脲支原体

目的：建立复合ＰＣＲ同时检测淋球菌（ＮＧ）、沙眼衣原体（ＣＴ）和解脲支原体（ＵＵ）。方法：用复合ＰＣＲ检测了１１６例尿道（宫颈）拭子，与传统方法及单对引物ＰＣＲ对照。结果：与ＮＧ涂片或培养、ＣＴ直接免疫荧光检查、ＵＵ培养比较，复合ＰＣＲ检测ＮＧ、ＣＴ、ＵＵ敏感性分别为１００％、９６．９％和３３．３％，特异性分别为９４．３％、９２．９％和９４．４％，与ＮＧ－ＰＣＲ、ＣＴ－ＰＣＲ、ＵＵ－ＰＣＲ的符合率分别为１００％、９７．４％和４１．３％。结论：复合ＰＣＲ可快速、敏感、特异地一次性检出ＮＧ、ＣＴ、ＵＵ泌尿生殖道感染，并可初步区分ＵＵ正常寄居抑或致病二种不同状态。     

聚合酶链反应技术在解脲支原体尿道炎中的应用

聚合酶链反应技术在解脲支原体尿道炎中的应用戴勇，曾真深圳市人民医院（邮政编码５１８０２０）根据解脲支原体（Ｕｕ）尿素酶基因序列，设计出的聚合酶链反应（ＰＣＲ）引物，检测尿道中解脲支原体，以期了解它在尿道炎中发病情况。对象与方法一、对象检查１０７４例患...     

加味八正散治疗非淋菌性尿道炎68例

临床资料男６１例，女７例。年龄１８～５２岁。所有病例做分泌物涂片革兰染色及ＮＧＤＮＡ ＰＣＲ均阴性，其中检出沙眼衣原体（ＰＣＲ法）３２例，解脲支原体（ＰＣＲ法）２８例，念珠菌镜检３例，其它杂菌５例（生物学培养法）。治疗方法用八正散（木通、车前子、蓄、...     

聚合酶链反应检测解脲支原体

我们根据已知的解脲支原体尿素酶基因序列，设计了一对聚合酶链反应引物，该组引物对解脲支原体１４个血清型均能扩增出２８６ｂｐ片段，但对实验所用的其它支原体或细菌不能扩增出任何片段，该２８３ｂｐ片段能被限制性内切酶ＨｉｎｃⅡ降解为１５１，１３２ｂｐ两条片段，使用３５个ＰＣＲ循环，可检测出１０＾－１４ｇ的模板ＮＤＡ，约相当于２０个解脲支原体。通过梯度稀释试验证明４０个ＰＣＲ循环时，ＰＣＲ的敏感性与培养法的     

尖锐湿疣患者合并解脲支原体沙眼衣原体和淋球菌感染的结果分析

对６５例确诊的尖锐湿疣患者，用ＰＣＲ法检测其泌尿生殖道的淋球菌、沙眼衣原体、解脲支原体。结果显示６５例患者中，有３５例合并淋球菌和（或）沙眼衣原体、解脲支原体感染，合并单一病原体感染者２５例，合并两种病原体混合感染者１０例。３５例合并感染者中，男１２例，女２３例。提示ＳＴＤ患者易合并（两种或两种以上）病原体感染，ＳＴＤ患者应进行全面的病原菌检查，以尽早发现隐匿性感染，及时进行针对性治疗     

蛋白表达在支原体研究中的应用

目的探讨蛋白表达技术在支原体研究中的作用。方法以解脲脲原体（ｕｒｅａｐｌａｓｍａｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍＵＵ）为例，根据所研究ＵＵ的目的ＤＮＡ片段设计一对特异性引物，经ＰＣＲ扩增得到目的ＤＮＡ，克隆后运用表达质粒载体ｐＧＥＸ ２Ｔ在ＩＰＴＧ诱导下成功诱导了蛋白的表达，并用Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法检测其抗原活性。结果所表达的蛋白具有很好的抗原活性。结论蛋白表达应用于支原体研究中，为研究支原体的致病性与种类或型别的关系提供了重要的手段。实验中我们体会到：（１）在设计引物时，要注意避开ＵＧＡ，可用ＵＧＧ代替。（２）ＩＰＴＧ的浓度从０．１ｍｍｏｌ／Ｌ～１ｍｍｏｌ／Ｌ均有报道，我们实验证实两种浓度在诱导蛋白表达中无差别，因而推荐使用０．１ｍｍｏｌ／Ｌ。（３）蛋白诱导的时间以４～４．５ｈ为最佳。     

聚合酶链反应检测生殖支原体的研究

具有致病性的生殖支原体（Ｍｇ）生长缓慢，不易培养，而血清学诊断与肺炎支原体又有交叉反应，这给Ｍｇ的临床诊断带来困难。为了进一步解决Ｍｇ的临床检测问题，本研究采用Ｍｇ粘附因子基因序列合成一对引物ＭｇＰａ１和ＭｇＰａ３，用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法检测Ｍｇ。结果表明，对Ｍｇ能产生特异性扩增，片段大小为２８１ｂｐ，而对肺炎支原体、解脲支原体、人型支原体、沙眼衣原体及淋球菌等则不能扩增出任何片段。作者认为，ＰＣＲ为一种高度特异和敏感性的方法，它为Ｍｇ的临床检测提供了重要的手段。我们还对引物浓度、退火温度及模板量对ＰＣＲ扩增结果的影响进行了初步探讨。     

PCR＋膜杂交法CT／UU／NG三联检测在临床临病筛查中的应用及与实时荧光PCR法的比较研究

目的：探讨PCR＋膜杂交法CT／UU／NG三联检测在临床性病筛查中的应用价值。方法：分别采用PCR＋膜杂交法和实时荧光PCR法检测CT、UU、NG,并分析比较两种方法的一致性以及相关性。结果：PCR反向膜杂交法和实时荧光PCR法的CT、UU、NG的筛查结果接近（P〉0．05）,而男女筛查结果差异较大（P〈0．05）。结论：PCR反向膜杂交法操作简便,筛查快速、准确,有与实时荧光PCR法相当的检测准确性,具有较高的临床应用价值,值得在临床中推广应用。     

男性不育症精液的淋球菌、沙眼衣原体、支原体感染情况的研究

目的:探讨男性不育症精液的淋球菌(NG)、沙眼衣原体(CT)、解脲支原体(UU)感染的情况及其对精液质量和精子功能的影响。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应技术对105例男性不育者的精液进行NG、CT、UU检测并做精液常规检查。结果:105例中,NG阳性2例(1.90%),CT阳性11例(10.48%),UU阳性46例(43.80%),NG、CT、UU阳性组与未检到病原体相比,精液液化时间延长(P<0.001),精子活动率低(P<0.005),活动力得分低(P<0.001)。结论:NG、CT、UU感染是男性不育的主要原因之一。     

荧光PCR技术对200例淋球菌、沙眼衣原体、解脲支原体检测结果分析

目的:了解重庆地区疑有泌尿生殖道感染的女性患者淋球菌(NG)、沙眼衣原体(CT)、解脲支原体(UU)的感染情况。方法:运用荧光探针PCR法(FQ-RCR)对妇科门诊200例疑有泌尿生殖道感染的女性患者同时进行NG、CT和UU检测。结果:NG阳性率为5.0%(10/200),CT阳性率为7.0%(14/100),UU阳性率为8.0%(16/200),三者之间阳性率比较无显著性差异(P>0.05),其中仅有2例NG和CT同时阳性。结论:(1)重庆地区妇科病人泌尿生殖道感染中NG、CT和UU占有一定比例,三者之间感染率比较无显著性差异。(2)荧光PCR技术检测NG、CT和UU具有操作简单、反应时间短、结果客观准确、敏感性和特异性好的优点。     

宫颈糜烂与解脲支原体、沙眼衣原体感染关系的临床研究

目的　研究解脲支原体、沙眼衣原体感染与宫颈糜烂的关系。方法　用聚合酶链反应 (PCR)法对 3 2 4例宫颈糜烂患者 (观察组 )、3 2 4例无宫颈糜烂的宫颈炎患者 (对照组 )进行解脲支原体、沙眼衣原体的检测。结果　观察组解脲支原体、沙眼衣原体总检出率为 2 0 .68% ,显著高于对照组的 9.2 6% (P <0 .0 1) ;其中轻度糜烂患者检出率为 6.5 9% ,中度 2 7.18% ,重度 5 1.85 %。轻、中、重度宫颈糜烂各检出率经统计学处理有显著性差异 (P均 <0 .0 1) ;单纯解脲支原体检出率为 12 .65 % ,单纯沙眼衣原体检出率为 5 .2 5 % ,两者混合感染检出率为 2 78% ,解脲支原体检出率显著高于沙眼衣原体 (P <0 .0 1) ;有不洁性生活史者阳性检出率为 44 .74% ,显著高于无不洁性生活史者的 13 .3 1% (P <0 .0 1)。结论　解脲支原体、沙眼衣原体感染是引起宫颈糜烂的重要因素。     

慢性前列腺炎患者5种支原体检测

目的 了解慢性前列腺炎与5种支原体感染的相关性。方法 采用巢式聚合酶链反应法（nPCR)检测慢性前列腺炎（CIP）患者前列腺液中UU、MG、MPN、MH和MF5种支原体。结果 48例CIP中31例支原体阳性，阳性率64.6%；其中UU阳性20例、MG阳性5例，MPN阳性5例、MH阳性4例、MF阳性3例；UU MG阳性2例，UU MH阳性1例，MPN MF阳性1例，UU MG MPN阳性1例。结论 支原体感染是CIP的重要致病原因，应当引起重视；用1种通用引物查5种支原体有较大的临床应用价值。     

解脲脲原体的耐药性分析及其耐氟喹诺酮的分子机制研究

目的检测128株临床分离解脲脲原体(UU)对9种药物的敏感性,并检测喹诺酮类耐药UU对5种喹诺酮药物的MIC以及gyrA和parC基因突变情况。方法应用支原体分离鉴定、计数药敏试剂盒检测UU对9种药物的敏感性,用微量肉汤稀释法检测耐药UU菌株对5种喹诺酮类药物的MIC,用PCR和DNA测序及序列比较检测基因突变。结果UU对多西环素最敏感,其次为米诺环素、交沙霉素、司帕沙星及克林霉素,对大环内酯类药物阿奇霉素和罗红霉素高度耐药。而司帕沙星、加替沙星和左氧氟沙星的MIC范围在0.25～8μg/mL,抑制UU活性强于氧氟沙星和环丙沙星。10株喹诺酮类耐药UU中有3株只有parC基因第80位TCA→TTA的突变,氨基酸由丝氨酸→亮氨酸,1株GyrA基因第95位密码子GAC→GAA的突变,氨基酸由天冬氨酸→谷氨酸。6株两者同时存在。结论在UU治疗中可首选多西环素,其次为米诺环素和交沙霉素。gyrA基因95位密码子和parC基因80位的突变密码子与UU耐喹诺酮类药物密切相关。     

解脲支原体药敏与tetM基因检测及生物群的研究

目的：了解泌尿生殖道支原体的耐药性机理，指导临床治疗。方法：采用微量肉汤稀释法测定281株UU对5种抗菌药物的最低抑菌浓度（MIC），用PCR法扩增tetM基因并酶切，用UU MB抗原基因引物对 tetM基因阳性UU株进行生物群的研究。结果：281UU 82株对四环素MIC为16－256ug/ml,39株为8ug/ml，7株为4ug/ml,153株MIC＜4ug/ml；121株MIC大于等于8ug/ml及2株MIC＝4ug/ml者均出现377bp tetM基因阳性带；阳性检测率为43．77％。158株UU MIC小于等于4ug/ml未见类似扩增带，扩增产物用Hpa II酶切和电泳分析，均产生279bp和98bp两个特异性片段。281株UU用群特异性PCR分析，生物群1有166株，生物群2有115株，123株tetM阳性UU株，属生物群1，2者分别有54株和69株，分别占32．53％（54／166）和60．0％（69／115）（X2＝7．94，P＜0．05），结论：（1）PCR技术检测泌尿生殖道感染患者UU耐药性tetM基因具有特异，敏感，快速等优点；（2）载有tetM基因的UU株可能成为四环素耐药株，应进行监测及随访；（3）我国衡阳地区UU四环素耐药株以生物群2占优势。     

2003年我院门诊泌尿生殖道支原体感染状况及药敏分析

目的为了解来我院诊治的泌尿生殖道解脲支原体(UU)和人型支原体(MH)的感染状况及其对抗生素的敏感性.方法应用支原体培养、鉴定、药敏试剂盒,对2003年2305例可疑支原体感染患者的泌尿生殖道标本进行UU和MH的检测,并测定其对9种常用抗生素的敏感性.结果检出830例支原体阳性者,检出率为36.01%,其中UU、MH及UU、MH混合感染者分别占90.84%、1.33%及7.83%.UU对交沙霉素最敏感,其次为米诺环素及多西环素,MH对交沙霉素最敏感,其次为多西环素、克林霉素及米诺环素,UU合并MH感染者对9种抗生素均存在不同程度耐药.结论昆明地区UU、MH对抗生素的敏感性已发生了较大的变迁,UU合并MH混合感染者已出现多重耐药.     

解脲脲原体对四环素类药物耐药性变化及机制研究

目的分析解脲脲原体(UU)对四环素类药物的耐药性变化,并探讨其耐药机制。方法取疑似泌尿生殖道感染患者的分泌物进行解脲脲原体培养,同时检测其对多西环素、米诺环素的敏感性;分离对上述两种药物耐药的UU菌株,采用PCR试剂盒检测四环素类耐药基因TetM。结果2003～2005年间共培养检测泌尿生殖道分泌物2845例,UU阳性1213例,3年间UU对多西环素、米诺环素的耐药性没有明显变化,2003年耐药率为5.6%和7.7%,2004年为5.4%和5.5%,2005年为8.2%和7.6%。同时对多西环素、米诺环素耐药的20株UU中均检出四环素类耐药基因TetM。结论四环素类药物仍然是治疗UU感染的敏感药物;TetM耐药基因是导致UU对四环素类药物耐药的主要机制。