MiR-155靶向抑制GATA3调节银屑病患者血液中Th1/Th2比例

目的探讨银屑病患者CD4~+T细胞分化与miR-155/GATA3轴的关系。方法采用q-PCR方法检测银屑病患者CD4~+T细胞中的miR-155与GATA3 mRNA的表达,Spearman相关分析法分析两者关系;双荧光素酶方法检验miR-155与GATA3基因的3′UTR的靶向结合,Western blot方法检测miR-155对GATA3蛋白表达的调控,ELISA检测IFN-γ和IL-4的分泌。结果银屑病患者CD4~+T细胞中miR-155表达显著上调,且与GATA3基因和银屑病PASI评分呈负相关,miR-155负调控CD4~+T细胞中GATA3蛋白的表达,且miR-155能靶向结合GATA3的3′UTR区域,下调miR-155促进IL-4的表达、抑制IFN-γ的表达,干扰GATA3基因能削弱miR-155对IL-4和IFN-γ的调控。结论 miR-155能通过靶向抑制GATA3的表达调控Th1/Th2的比例,进而调控银屑病的发生发展。     

miR-199a抑制低氧诱导因子在银屑病患者皮损中的表达

目的探索miR-199a,HIF-1α在银屑病中的表达及其对表皮细胞增殖的影响。方法首先检测了27例寻常性银屑病患者皮损区和19例健康志愿者皮肤的miR-199a,HIF-1α的表达差异,分析二者之间的相关性;然后在Ha Ca T细胞中转染miR-199a mimics,用Western blot检测HIF-1α的蛋白表达水平;用双荧光素酶报告基因实验验证miR-199a与HIF-1α的靶向结合关系;最后用MTT法检测miR-199a,HIF-1α对Ha Ca T细胞增殖的影响。结果银屑病组织中miR-199a的表达下调,HIF-1α的表达上调,且两者存在负相关性;在Ha Ca T细胞中转染miR-199a mimics可下调HIF-1α的表达;HIF-1α可回复miR-199a对Ha Ca T细胞增殖的抑制作用。结论 miR-199a靶向HIF-1α调控表皮细胞的增殖从而参与银屑病的发病机制。     

MiR-486-3p在银屑病皮损的表达及对角蛋白17表达的影响

目的 探讨银屑病患者皮损与健康人皮肤中miR-486-3p表达情况及其对角蛋白17（K17）表达的调控作用。 方法　采用生物信息学方法预测出调节K17表达的微RNA（microRNA）,选取10例银屑病患者皮损和10例健康人皮肤提取RNA,用加PolyA尾法逆转录为cDNA,实时荧光定量PCR（qRT-PCR）进行荧光定量。用miR-486-3p模拟物（mimics）和阴性对照物（NC）转染人永生化角质形成细胞（HaCaT细胞）,Western印迹检测K17表达情况;构建双荧光素酶报告系统,其中包括含有K173′UTR的片段,突变1组为将种子序列删除的片段,突变2组为将种子序列间隔突变的片段,突变3组为将种子序列重复2次的片段,并检测miR-486-3p是否与K17 3′UTR种子序列结合而抑制K17表达。 结果　银屑病皮损中miR-486-3P表达水平为0.211 ± 0.120,低于健康对照的0.555 ± 0.425,银屑病皮损为健康对照的0.380,两组比较,t = 2.62,υ = 9,P < 0.05。Western印迹结果显示,miR-486-3p类似物转染HaCaT细胞后,K17表达水平明显降低。双荧光素酶报告系统检测结果,含有K173′UTR种子序列组与突变3组荧光强度分别为65.31 ± 6.32和54.18 ± 10.01,均低于对照组（P < 0.05）;突变1组和突变2组荧光强度分别为114.77 ± 16.14和110.21 ± 12.99,与对照组差异无统计学意义（P > 0.05）。 结论 miR-486-3p 在银屑病皮损中的表达水平低于健康人皮肤,miR-486-3p通过与K17 3′UTR种子序列结合抑制K17表达,提示其表达水平降低及对K17调控作用的改变可能与银屑病的发生与发展相关。     

microRNA-125a在寻常型银屑病皮损中的表达及其对HaCaT细胞增殖的影响

【摘要】 目的 检测寻常型银屑病皮损中microRNA-125a（miR-125a）的表达与皮损处炎症因子水平的相关性及其对人永生化角质形成细胞（HaCaT）增殖的影响。方法 收集2017—2018年沈阳市第七人民医院40例寻常型银屑病患者皮损及相邻非皮损组织，采用反转录实时荧光定量PCR检测组织中miR-125a的表达及皮损组织中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）、IL-6、IL-17 mRNA的表达。将miR-125a过表达质粒、过表达对照质粒、miR-125a干扰质粒、干扰对照质粒转染HaCaT细胞，在转染后0、24、48、72 h采用CCK8法检测各组HaCaT细胞增殖能力，采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）检测质粒转染后HaCaT细胞上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-17水平。相关性分析采用Spearman等级相关检验分析，两组间均数比较采用t检验。结果 寻常型银屑病皮损区miR-125a相对表达水平（2-ΔΔCt，0.389 ± 0.354）低于非皮损区（1.106 ± 0.396，t = 7.717，P < 0.001）。银屑病皮损组织中miR-125a表达与TNF-α、IL-1β、IL-17 mRNA的表达呈负相关（r = -0.447、-0.424、 -0.436，均P < 0.01）。转染相应质粒后0、24 h时，细胞增殖能力在过表达miR-125a组与过表达对照组（t = 0.282、1.445，均P > 0.05）、干扰miR-125a组与干扰对照组（t = 0.120、1.543，均P > 0.05）间差异无统计学意义；转染后48、72 h时，过表达miR-125a组细胞的增殖能力低于过表达对照组（t = 3.222、4.563，均P < 0.05），干扰miR-125a组高于干扰对照组（t = 3.036、3.269，均P < 0.05）。MiR-125a过表达组TNF-α、IL-1β的表达水平低于过表达对照组，差异有统计学意义（t = 4.318、3.813，均P < 0.05）。结论 寻常型银屑病患者皮损中miR-125a低表达，miR-125a抑制角质形成细胞增殖，可能在银屑病发生发展中发挥保护作用。     

miR-20a靶向STAT3抑制角质形成细胞增殖参与银屑病的机制

目的探讨miR-20a是否可靶向调控STAT3表达影响角质形成细胞增殖参与银屑病发生发展过程。方法QPCR检测银屑病患者正常皮肤和皮损组织中miR-20a、STAT3的表达情况,统计分析二者间的表达相关性;QPCR检测miR-20a表达变化对STAT3水平的影响;LUC验证miR-20a和STAT3间的靶向关系;miRNA mimics和STAT3过表达载体共转染后,MTT检测HaCaT细胞的增殖活性。结果miR-20a在银屑病患者皮损组织中特异性低表达,STAT3在皮损组织中高表达,且miR-20a与STAT3表达呈负相关性;QPCR检测miR-20a表达变化对STAT3的影响后发现miR-20a可抑制STAT3表达;LUC实验发现miR-20a可靶向结合STAT3;MTT功能实验结果表明STAT3过表达可增强角质形成细胞增殖活性,而过表达miR-20a不仅可抑制细胞增殖活性和STAT3的表达,还可部分逆转STAT3对细胞增殖的促进作用。结论miR-20a可靶向STAT3抑制角质形成细胞过度增殖,在银屑病发生发展中发挥保护作用。     

长链非编码RNA NEAT1通过miR-34a靶向GAS1激活PI3K-AKT信号通路对宫颈癌的增殖、侵袭和上皮细胞-间充质转化的影响研究

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)NEAT1对宫颈癌细胞增殖、侵袭和上皮细胞-间充质转化(EMT)的影响和机制研究。方法选取2019年10月购自上海生物细胞研究所的宫颈癌细胞株(Hela细胞)和人宫颈上皮永生化细胞株(H8细胞)作为研究对象。通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测NEAT1在Hela细胞和H8细胞中的差异表达,分析NEAT1对Hela细胞增殖、侵袭和EMT的影响。miRanda和双荧光素酶报告基因实验分析NEAT1和miR-34a之间的关系,检测NEAT1通过miR-34a对Hela细胞增殖、侵袭与EMT的影响,TargetScan和双荧光素酶报告基因实验分析miR-34a和GAS1的关系,检测miR-34靶向GAS1激活PI3K-AKT信号通路对Hela细胞增殖、侵袭和EMT的影响。分别用MTT、细胞侵袭实验和Western blot检测细胞的增殖、侵袭和EMT能力。结果 Hela细胞中NEAT1的表达上调(P0.01),miR-34a表达下调(P0.01),敲低NEAT1抑制了Hela细胞增殖、侵袭与EMT,NEAT1 3′UTR与miR-34a特异性结合。同时敲低NEAT1和miR-34a的表达,NEAT1表达的下调能部分逆转miR-34a下调对细胞功能的影响。同时过表达NEAT1和miR-34a, NEAT1能部分逆转miR-34a上调对细胞功能的影响。miR-34a和GAS13′UTR特异性结合,敲低GAS1抑制了Hela细胞增殖、侵袭与EMT,干扰GAS1抑制了Hela细胞p-PI3K、p-AKT蛋白的表达。和干扰miR-34a相比,同时抑制GAS1和miR-34a的表达能够逆转p-PI3K、p-AKT蛋白的上升。MK2206抑制了Hela细胞增殖、侵袭与EMT,而IGF-1促进了细胞的增殖、侵袭与EMT。结论 NEAT1通过miR-34a靶向GAS1激活了PI3K-AKT信号通路,从而促进宫颈癌的发展。     

寻常性银屑病患者外周血及皮损中miR-155的表达及其与Th17细胞的相关性

目的检测寻常性银屑病患者外周血与皮损组织中miR-155,Th17细胞特异性转录因子RORγt及效应性细胞因子IL-17的表达情况并探讨其相关性。方法实时荧光定量RT-PCR检测42例寻常性银屑病患者外周血单一核细胞(PBMCs)及8例皮损组织中miR-155表达情况及RORγt,IL-17的mRNA表达情况,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测患者血清IL-17水平。并以同期35例性别和年龄匹配的健康体检者外周血及5例正常皮肤组织标本作为对照。结果寻常性银屑病患者PBMCs中miR-155表达,RORγt与IL-17的mRNA表达及血清IL-17水平均明显高于健康对照者(P均0.01),miR-155表达与RORγt和IL-17的mRNA表达、IL-17血清水平及皮损面积与疾病严重程度评分(PASI)呈正相关(P均0.01);寻常性银屑病患者皮损、皮损周围组织及正常皮肤组织间miR-155,RORγt和IL-17 mRNA的表达差异均有统计学意义(皮损皮损周围组织正常皮肤组织,P均0.01),皮损及皮损周围组织中miR-155表达与RORγt,IL-17的mRNA表达呈正相关(P均0.01)。结论寻常性银屑病患者外周血及皮损组织中miR-155高表达,且与Th17细胞特异性转录因子及效应性细胞因子高表达相关,参与银屑病的疾病过程。     

miR-384靶向HTRA1影响瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖和凋亡

目的：明确miR-384对瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFBs)增殖和凋亡的影响。方法：RT-qPCR和Western Blot检测miR-384和靶向高温需求因子A1（HTRA1）在KFBs和人瘢痕疙瘩皮肤组织中的表达。CCK-8细胞计数试剂盒检测KFBs增殖活力;流式细胞术检测KFBs细胞凋亡;Western Blot检测Ki-67、增殖细胞核抗原（PCNA）、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）和Bcl-2相关X蛋白（Bax）表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-384对HTRA1的靶向作用。结果：KFBs和人瘢痕疙瘩皮肤组织中miR-384呈低表达,HTRA1呈高表达。转染anti-miR-384后KFBs增殖活力升高,细胞凋亡率降低,Ki-67、PCNA和Bcl-2蛋白表达升高,Bax蛋白表达降低。转染si-HTRA1后KFBs增殖活力降低,细胞凋亡率增加,Ki-67、PCNA和Bcl-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达升高。miR-384靶向负性调控HTRA1表达。结论：miR-384可能通过靶向调控HTRA1促进瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖,抑制细胞凋亡。     

miR-320及下游靶基因survivin在银屑病皮损中的表达

目的检测寻常性银屑病皮损中miR-320及其下游靶基因survivin mRNA的表达水平。方法采用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测40例寻常性银屑病患者皮损及40名健康对照皮肤中miR-320、survivin mRNA的表达水平,运用双荧光素酶报告实验验证survivin是miR-320的靶基因。miR-320和survivin表达水平两组间比较采用t检验,寻常性银屑病皮损中miR-320与survivin表达的相关性采用Pearson相关分析。结果与健康对照皮肤相比,寻常性银屑病皮损中miR-320表达量为对照组的(0.561±0.11)倍,表达明显下调(t=3.06,P0.05);survivin mRNA表达量为对照组的(2.034±0.26)倍,表达水平明显上调(t=3.35,P0.05);双荧光素酶报告实验结果提示survivin是miR-320的靶基因,寻常性银屑病皮损中miR-320与survivin mRNA呈负相关(r2=0.634,P0.05)。结论 miR-320可能通过调控其下游靶基因survivin的异常表达参与寻常性银屑病皮损的形成过程。     

miR-145靶向TLR4对尖锐湿疣患者外周血单核细胞来源树突状细胞分泌IL-18和IL-10的影响

目的探讨miR-145靶向TLR4对尖锐湿疣(CA)患者外周血单核细胞来源树突状细胞分泌IL-18和IL-10的影响。方法收集40例CA患者作为CA组,40例健康人作为对照组(Con),采用ELISA法检测两组外周血中IL-18和IL-10的表达水平。流式细胞仪检测树突状细胞表型CD1a、CD83和CD80的表达率以鉴定树突状细胞的体外诱导结果,Western blot检测树突状细胞中TLR4蛋白表达,RT-PCR检测树突状细胞中miR-145和TLR4 mRNA的表达。转染miR-145 mimics和si-TLR4至CA患者外周血树突状细胞后,ELISA法检测上调miR-145和敲低TLR4表达对树突状细胞分泌IL-18和IL-10的影响。采用TargetScan生物学软件预测,双荧光素酶报告基因实验验证miR-145和TLR4的靶向关系。转染pcDNA 3.1-TLR4载体后,观察上调TLR4表达对miR-145调控树突状细胞分泌IL-18和IL-10的影响。结果树突状细胞诱导培养7 d后,细胞表面成熟表型CD1a、CD83和CD80表达率显著升高,树突状细胞的体外诱导成功。与Con组相比,CA组外周血中IL-18、IL-10水平和树突状细胞中TLR4蛋白、mRNA的表达均显著升高,而miR-145的表达显著降低(P0.05)。上调miR-145表达或敲低TLR4使树突状细胞分泌IL-18和IL-10含量降低。双荧光素酶报告基因实验证实TLR4是miR-145的靶基因。上调TLR4表达能够明显逆转miR-145对树突状细胞分泌IL-18和IL-10的抑制作用。结论 miR-145可通过靶向TLR4抑制CA患者外周血树突状细胞分泌IL-18和IL-10。     

miR-148a-3p对银屑病患者Th细胞活化调控的影响

目的在前期研究的基础上进一步验证miR-148a-3p通过促凋亡蛋白Bim对银屑病发病机制中T细胞亚群分化的影响及相关免疫应答机制的调控。方法培养人T淋巴白血病(Jurkat)细胞;Bim siRNA、miR-148a-3p mimics、miR-148a-3p inhibitor,分别电转CD4~+T细胞,RT-qPCR检测miR-148a-3p和Bim mRNA,Western blot检测Bim蛋白;通过ELISA检测培养上清中细胞因子含量。结果 Bim siRNA、miR-148a-3p mimics、miR-148a-3p inhibitor分别电转CD4~+T细胞(Jurkat细胞),电转效率可达84.5%。与空白组相比,过表达的miR-148a-3p可有效抑制靶基因Bim mRNA及其蛋白的表达,ELISA检测培养上清中IFN-γ及IL-17均明显升高,IL-4及IL-10均明显降低(P均0.05);而抑制miR-148a-3p时Bim mRNA及其蛋白的表达升高,IFN-γ明显减少(P均0.05),而IL-17表达(P0.05)下降不明显,IL-4及IL-10均明显升高(P均0.05)。在正常CD4~+T细胞中沉默Bim的表达,IFN-γ及IL-17亦显著升高(P均0.05)。结论在银屑病患者中高表达的miR-148a-3p靶向调控Bim的表达可导致Th1、Th17细胞异常活化,Th2细胞数量减少及Treg细胞免疫抑制功能减弱,这提示miR-148a-3p参与寻常性银屑病病情的发生发展,为后续miR-148a-3p靶向干预寻常性银屑病病情提供了依据。     

丹皮酚通过抑制树突状细胞活性在咪喹莫特诱导的银屑病皮肤病中的作用研究

目的探究丹皮酚对树突状细胞(DCs)抑制作用,及对咪喹莫特(IMG)诱导的银屑病模型小鼠炎症反应的干预效果。方法选择BALB/c雄性小鼠作为实验用鼠,按照随机数字表法平均分为6组,分别为空白对照组(Con组)、模型对照组(IMQ组)、甲氨蝶呤阳性组(MTX组)及丹皮酚高(PG-H)、中(PG-M)、低(PG-L)剂量组,每组10只。通过模型建立及药物干预,以及BMDCs骨髓细胞分离及体外诱导培养,比较皮损组织白细胞介素(IL)-23、CD11c及CD3的表达水平,以及体外细胞实验对DCs细胞IL-23、IL-1β、IL-12p40 m RNA的表达水平综合评价丹皮酚对咪喹莫特诱导的银屑病的干预效果。结果皮损组织CD3~+表达水平方面,丹皮酚各剂量之间差异无统计学意义,与MTX组效果一致。皮损组织IL-23表达水平方面,高剂量效果最显著,差异有统计学意义(P0.05)。体外实验中,丹皮酚直接作用于BMDCs,IL-23 mRNA表达明显降低(P0.05),而对IL-1β、IL-12p40 m RNA的影响差异无统计学意义(P0.05)。结论丹皮酚可有效减轻咪喹莫特诱导的银屑病局部皮损,作用机制可通过减弱IL-23 m RNA表达,抑制了树突细胞的成熟和活化,最终减轻了银屑病的皮肤损伤。     

清热凉血方对IMQ诱导银屑病小鼠模型IL-17A、IL-10的影响及miR-210激动剂的干预作用

目的观察清热凉血方对咪喹莫特(imiquimod,IMQ)诱导小鼠银屑病样皮损模型辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)细胞相关细胞因子白介素17A(interleukin17A,IL-17A)和白介素10(interleukin 10,IL-10)的影响及miR-210激动剂的干预作用。方法建立IMQ诱导银屑病小鼠模型,将24只BALB/c雌性小鼠随机分为4组,分别为正常组、模型组、清热凉血方组和miR-210激动剂(AgomiR-210)组;采用荧光定量PCR和酶联免疫法(ELISA)检测小鼠皮损、脾脏及血清中,IL-17A和IL-10的mRNA及蛋白表达水平。结果与模型组比较,清热凉血方可明显降低小鼠皮损和脾脏中IL-17A mRNA表达及外周血中IL-17A的分泌水平,增加脾脏中IL-10 mRNA表达和外周血中IL-10的分泌水平,差异有统计学意义(P0.05);AgomiR-210可显著拮抗清热凉血方对IL-17A及IL-10的影响(P0.05)。各组小鼠皮损中IL-10 mRNA表达水平差异无统计学意义(P0.05)。结论清热凉血方可能通过减少IL-17A,增加IL-10,改善Th17/Treg细胞失衡发挥治疗银屑病的作用,而miR-210激动剂可拮抗清热凉血方的治疗作用。     

微RNA-125a靶向白细胞介素23受体信号通路抑制HaCaT细胞增殖机制的初步研究

【摘要】 目的 探讨微RNA（miR）-125a抑制角质形成细胞增殖的相关机制。方法 用白细胞介素（IL）-23干预处理人永生化角质形成细胞（HaCaT）24 h后,分为miR-125a组和miR-NC组,分别转染miR-125a过表达质粒和过表达对照质粒。采用细胞计数试剂盒（CCK8）法检测两组转染后0、24、48、72 h HaCaT细胞增殖能力,采用实时荧光定量PCR检测转染后24 h两组miR-125a及IL-23受体（IL-23R）mRNA的表达,采用Western印迹法测定两组转染后48 h IL-23R、Janus激酶2（JAK2）、蛋白激酶B（AKT）和磷酸化AKT（p-AKT）的表达。采用双荧光素酶报告实验验证miR-125a和IL-23R间的靶向关系。两组间均数比较采用t检验,HaCaT细胞增殖能力随时间的变化采用重复测量方差分析法评估。结果 质粒转染后,miR-125a组miR-125a相对表达水平（6.377 ± 0.745）高于miR-NC组（0.700 ± 0.222）,差异有统计学意义（t = 7.305,P = 0.002）。转染后0、24、48 h,miR-125a组与miR-NC组细胞增殖能力差异无统计学意义（t值分别为0.663、0.623、1.930,均P > 0.05）;转染后72 h,miR-125a组细胞增殖能力显著低于miR-NC组（t = 4.407,P < 0.05）。MiR-125a组IL-23R mRNA表达水平显著低于miR-NC组（t = 3.082,P < 0.05）。与miR-NC组相比,miR-125a组IL-23R、JAK2和p-AKT蛋白表达量均降低,差异有统计学意义（t值分别为11.715、6.996、12.424,P值分别 < 0.001、 = 0.002、 < 0.001）。双荧光素酶报告实验显示,miR-125a可靶向结合IL-23R。结论 MiR-125a可能通过负性靶向调控IL-23R/JAK2/AKT信号通路抑制角质形成细胞的增殖。     

白介素8及其受体CXCR2在银屑病角质形成细胞中的表达

目的 观察白介素8（IL－8）及基受体CXCR2在银屑病角质形成细胞中的表达及在银屑病的临床及病理表现中的作用。方法 培养银屑病患者皮损处角质形成细胞，通过微孔小室实验检测其上清液的趋化功能，通过酶联免疫吸附法（ELISA）检测上清液中IL－8的表达，通过流式细胞仪分析银屑病患者皮损处角质形成细胞的趋化因子受体CXCR2的表达。结果 银屑病患者皮损处角质形成细胞分泌上清液对中性粒细胞的趋化能力明显强于正常对照组，其分泌的IL－8水平也高于正常人，皮损处角质形成细胞CXCR2的表达也明显强于正常对照组。结论 银屑病患者皮损局部表面出的角质形成细胞高度增殖与角质形成细胞高分泌、高表达具有促增殖作用的IL－8及其受体CXCR2有关，同时皮损局部大量的炎性细胞的浸润部分可能是由于角质形成细胞高分泌具有趋化能力的IL－8，它们可能在银屑病的发生、发展中起着重要作用。     

寻常性银屑病患者白细胞介素表达水平及与银屑病面积和严重度指数相关性研究

目的研究分析寻常性银屑病患者血清白细胞介素(IL)-36、IL-36Ra、IL-38表达水平及与银屑病面积和严重度指数的相关性。方法选择2016年1月—2017年6月徐州市中医院皮肤科接诊治疗的寻常性银屑病患者78例,选择该院同期体检的健康志愿者78例作为对照组,采用银屑病皮损面积和严重度程度指数(PASI)对患者病情进行分级,比较对照组与不同病情分级的患者IL-36、IL-36Ra及IL-38的检测水平,分析IL-36、IL-36Ra及IL-38水平与PASI评分的相关性。结果轻度及中重度银屑病患者IL-36α、IL-36β、IL-36γ表达水平高于对照组,IL-36Ra和IL-38表达水平低于对照组,差异具有统计学意义(P0.05);中重度患者IL-36α、IL-36β、IL-36γ表达水平高于轻度患者,IL-36Ra和IL-38表达水平低于轻度患者,差异具有统计学意义(P 0.05),IL-36α、IL-36β、IL-36γ表达水平与PASI评分呈正相关性(P 0.01),IL-36Ra和IL-38表达水平与PASI评分呈负相关性(P0.05)。结论银屑病患者病情越严重,血清IL-36α、IL-36β、IL-36γ表达水平越高,IL-36Ra及IL-38表达水平越低;IL-36、IL-36Ra、IL-38表达水平与PASI评分存在显著的线性相关性(P 0.05),可以为银屑病临床诊断、治疗及病情分析提供参考。     

miR-425-5p在调控宫颈癌HeLa细胞功能中的作用及其机制

目的 miR-425-5p对宫颈癌HeLa细胞功能的调控作用及其机制。方法将体外培养的HeLa细胞分为miR-NC组(转染miR-425-5p模拟物对照)、miR-425-5p组(转染miR-425-5p模拟物)、anti-miR-NC组(转染miR-425-5p抑制剂对照)和anti-miR-425-5p组(转染miR-425-5p抑制剂)共四组。采用RT-PCR检测四组细胞中miR-425-5p的表达水平,CCK-8法、克隆形成试验、Transwell试验、划痕试验和流式细胞仪分别检测细胞增殖、克隆形成、侵袭、迁移和凋亡能力。生物信息学软件预测、双荧光素酶报告基因试验检测miR-425-5p和磷酸酯酶与张力蛋白同源物(PTEN)的靶向关系,Western blot检测miR-425-5p对PTEN蛋白表达的影响。结果转染miR-425-5p模拟物后HeLa细胞中miR-425-5p的表达水平较miR-NC组明显升高,而miR-425-5p抑制剂后miR-425-5p的表达水平较anti-miR-NC组明显降低,差异均具有统计学意义(均P0.05)。与miR-NC组相比,miR-425-5p组中细胞OD值、克隆形成率、迁移率和侵袭细胞数均明显升高,而细胞凋亡率明显降低,差异均具有统计学意义(均P0.05);与anti-miR-NC组相比,anti-miR-425-5p组中细胞OD值、克隆形成率、迁移率和侵袭细胞数均明显降低,而细胞凋亡率明显升高,差异均具有统计学意义(均P0.05)。双荧光素酶报告基因试验证实miR-425-5p能够与PTEN 3′UTR靶向结合,Western blot试验结果证实miR-425-5p可负向调控PTEN蛋白的表达。结论 miR-425-5p可促进HeLa细胞增殖、侵袭、迁移并抑制细胞凋亡,其作用机制可能与靶向调控PTEN表达有关。     

miR-545-3p抑制VEGFA/VEGFR2信号通路对前列腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨微小RNA-545-3p(miR-545-3p)对前列腺癌细胞增殖、凋亡的影响及其对血管内皮生长因子A(VEGFA)/血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)信号通路的调控作用。方法 qRT-PCR检测miR-545-3p在不同前列腺癌细胞中的表达情况;双荧光素酶报告基因检测miR-545-3p与VEGFA的相互作用;MTT实验与流式细胞术检测miR-545-3p过表达及VEGFA过表达后前列腺癌细胞增殖能力及凋亡行为的变化;Western blot检测miR-545-3p过表达及VEGFA过表达后前列腺癌细胞CDK1、Bcl2、Bax及VEGFA/VEGFR2信号通路蛋白的表达水平变化。结果 miR-545-3p在前列腺癌细胞中的表达水平降低,与其他前列腺癌细胞相比,DU145细胞中miR-545-3p的表达水平较低;双荧光素酶实验证实miR-545-3p可调控VEGFA的表达及活性;miR-545-3p过表达可减弱前列腺癌细胞增殖能力,促进细胞凋亡;miR-545-3p过表达可下调VEGFA、p-VEGFR2、CDK1、Bcl2的表达,同时过表达VEGFA后可逆转miR-545-3p对前列腺癌细胞增殖及凋亡的作用。结论 miR-545-3p过表达可通过抑制VEGFA/VEGFR2信号通路而抑制前列腺癌细胞增殖及诱导癌细胞凋亡。     

MiR-29a通过调节MMP2参与前列腺癌DU145细胞的增殖和侵袭能力的研究

目的研究miR-29a是否调节MMP2的表达参与前列腺癌DU145细胞的迁移、侵袭和增殖过程。方法通过实时荧光定量(qRT-PCR)和免疫印迹法(WB)检测在正常前列腺上皮RWPE-1细胞和激素非依赖性前列腺癌DU-145细胞内miR-29a、MMP2 mRNA和蛋白的表达水平。采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-29a与MMP2 3′-UTR的调控关系。miR-29a mimics(模拟剂)、 miR-29a inhibitor(抑制剂)和miR-NC (对照)转染DU145细胞后分组为、miR-29a mi模拟组、miR-29a in抑制组和miR-NC对照组,检测各组细胞中miR-29a、MMP2 mRNA和蛋白的表达;细胞划痕实验和侵袭实验(Transwell小室)检测各组细胞迁移和侵袭;增殖实验(CCK-8)实验检测各组细胞增殖。结果与RWPE-1细胞相比,DU145细胞中miR-29a的表达减少、MMP2 mRNA和蛋白的表达增加。miR-29a模拟剂转染细胞后,miR-29a表达升高,MMP2表达降低;miR-29a抑制剂转染细胞后,miR-29a表达降低,MMP2表达升高。双荧光素酶实验验证了MMP2为miR-29a的靶基因。MiR-29a过表达能抑制DU145细胞的迁移、侵袭和增殖;MiR-29a抑制表达能促进DU145细胞的迁移、侵袭和增殖。结论在前列腺癌DU145细胞中,miR-29a调节MMP2的表达,进而参与细胞的迁移、侵袭和增殖过程。     

黑素细胞在银屑病发病机制中的作用

T细胞生成的白细胞介素(IL)-17、肿瘤坏死因子(TNF)-α在银屑病发病中起着至关重要的作用,而银屑病皮损、皮损消退后白斑或色素沉着的形成是银屑病的常见表现,这与黑素细胞有着不可分割的联系。黑素细胞衍生的自身抗原——抗原片段样蛋白-5(ADAMTSL-5)可激活T细胞产生IL-17,IL-17又可诱导其他炎症因子的产生,最终T细胞、细胞因子、黑素细胞、角质形成细胞之间通过细胞因子相互作用引起炎症反应;另外,IL-17协同TNF-α直接或者通过其他细胞因子增加黑素细胞的数量,下调黑色颗粒生成和色素沉着信号转导通路基因,促进β-防御素3的表达而引起银屑病的炎症。因此,黑素细胞参与了银屑病的发病。