基于栅藻延迟发光检测的不同产地及炮制方式连翘评价方法初探

以栅藻作为生物指示剂,加入不同产地及炮制方式的中药连翘煎煮液,采用YPMS-2生物光子测量仪检测其激发延迟发光强度,采用statistica10.0软件对数值进行线性拟合,得到加入不同产地两种炮制方式的中药连翘煎煮液后的栅藻K值波动范围,验证栅藻生物指示剂法在表征中药寒热药性方面的应用效果。使用SPSS19.0分别对各组数值进行独立样本t检验,比较K值差异。结果表明,栅藻生物指示剂法可以为连翘中药材评价提供更多依据。     

栅藻作为生物指示剂的生物延迟发光研究

通过测量不同实验条件下栅藻的延迟发光动力学行为,确定最优实验条件,为栅藻作为生物指示剂奠定基础。用YPMS-2生物光子测量仪检测栅藻延迟发光,将测得的数据用Statistica 10.0软件进行拟合、处理,得到表征栅藻性质的可靠参数斜率k。栅藻的最佳使用浓度为2.5~3.5×107个/m L,栅藻使用的最佳生长阶段为40~60 d,加入不同中药煎煮液的栅藻斜率k值有较大差异,为研究中药药性提供了新的方向。     

栅藻延迟发光的初步研究

采用YPMS-2生物光子测量仪检测栅藻的延迟发光。将测得的结果输入到Origin Pro 9.1软件中,与双曲线函数做最佳线性拟合并分析。栅藻有较强的生物光子辐射能力,其延迟发光的双曲线规律为生物光子辐射的相干性理论提供了证据。双曲函数拟合出来的三个参数(I0、τ、β),携带着不同浓度栅藻和液体培养基的信息,即生物光子辐射对生物系统内部的变化及外界环境的影响有高度的敏感性,为栅藻可作为液体环境的生物指示剂,奠定了一定的理论基础。     

中药生地黄对栅藻生物光子辐射的影响

通过测量生地黄、BG11培养基、栅藻的生物光子辐射，以及生地黄对栅藻生物光子辐射的影响，并将实验数据进行分析处理，我们发现生地黄会使栅藻的生物光子辐射发生明显的变化，随着生地黄汤剂体积的增大，栅藻的自发发光平均强度及延迟发光初始强度均呈先增大后减小的变化趋势，最高值位于350 ul处。在一定范围内，生地黄汤剂的体积与栅藻的自发发光平均强度呈较好的线性关系。这说明栅藻的生物光子辐射对其所处液体环境的变化具有高度的灵敏性，为栅藻作为生物指示剂奠定了基础。     

基于小鼠超微弱发光的中药药性研究初探

利用生物超微弱发光检测仪,对经典热性药当归与经典寒性药黄芩中药煎煮液灌胃小鼠体表生物超微弱发光连续16 d检测,结果显示:(1)在基于小鼠超微弱发光的中药药性研究实验中灌胃小鼠的最佳检测时间范围为第5 d至第10 d;(2)当归组与空白组、黄芩组与空白组腹部与背部自发发光强度的比值之间存在显著性差异,提示灌胃小鼠的腹背自发发光强度的比值可作为表征中药寒热药性的指标。本研究结果可以为中药药性的研究提供新的思路。     

人血清PCT直接化学发光免疫分析方法的建立及性能评价北大核心CSCD

目的:建立人血清PCT直接化学发光免疫分析方法并进行性能评价。方法:根据双抗夹心法原理制备磁微粒试剂、吖啶酯-抗体试剂与生物素化抗体试剂,3种试剂与血清PCT抗原反应后形成双抗夹心免疫复合物。利用磁场清洗复合物后,加入预激发液与激发液,化学发光免疫分析仪检测反应的发光强度,方程拟合后计算出样本中PCT浓度,并对线性范围、准确度、精密度、特异性及与干式免疫法试剂盒相关性进行性能评估。结果:本方法空白限为0.01 ng/ml,线性范围为0.02~100.00 ng/ml,准确度为95.65%,批内精密度为5.06%~5.35%,批间精密度为5.44%~5.69%,特异性均在可接受范围内,与干式免疫法试剂盒具有良好的相关性。结论:本方法各项性能指标均达到临床检验质量要求,与临床使用的干式免疫法试剂盒具有良好的相关性,有望实现临床转化应用。     

利用假病毒法检测重组人乳头瘤病毒双价(16/18型)疫苗的免疫原性

目的建立并验证重组人乳头瘤病毒双价(16/18型)疫苗中和滴度的检测方法 ,并且利用此假病毒法进行免疫原性研究。方法建立并优化以ZsGreen假病毒为基础的中和实验(ZsGreen法)测定血清中和滴度,比较荧光显微镜观察与微流式细胞分析法、流式细胞分析法的差异,并对专属性、精密度、耐用性、假病毒稳定性和不同细胞代次的影响进行了方法学验证。结果ZsGreen法的HPV16/18假病毒最佳接种量为1 600 TCID50,HPV16型与HPV18型无交叉,具有良好的专属性和精密度,采用不同细胞代次与不同批次假病毒进行检测,均能获得较好的重复性。结论 ZsGreen法假病毒中和滴度检测法准确可靠、重复性好,经方法学验证后此法适用于疫苗的免疫原性研究。     

人干扰素α2b ELISA配体结合分析检测方法的建立

目的：建立金黄地鼠血浆和组织重组人干扰素α2b定量ELISA检测法,用于药物研发检测。方法：采用双抗夹心法建立金黄地鼠血浆和组织重组人干扰素α2b含量检测方法,确定其检测范围,验证其选择性、精密度与准确度和稀释线性,并对样本稳定性进行研究。结果：建立的方法检测范围为0.50～16.00 ng/ml。选择性结果显示不同个体来源空白金黄地鼠组血浆和组织匀浆无差异,血浆质控样本准确度为78.62%～104.69%,批内精密度为0.69%～18.21%,批间精密度为6.71%～15.81%,总误差均<30%,稀释线性良好。稳定性样本在3种不同保存条件（冰上放置2 h;-80～-75℃放置4 d;反复冻融3循环）下稳定性较好,回收率均在±20%内。结论：成功建立了基于配体结合的人干扰素α2b ELISA检测法,该方法灵敏度高,重复性好,检测效率高,为新药研发提供了可靠的检测方法。     

ARCHETECT高敏肌钙蛋白Ⅰ试剂盒性能评价

目的 评价ARCHETECT高敏肌钙蛋白Ⅰ（hs-cTnⅠ）试剂盒性能,以验证其是否符合临床实验室使用要求。方法 参考CLSI的EP15-A2文件和相关文献对ARCHETECT高敏肌钙蛋白Ⅰ试剂盒精密度、正确度进行评价,EP17-A文件和相关文献对空白检测限（LoB）进行评价,EP6-A文件和相关文献对线性范围进行评价,参考NCCLS C28-A2文件,对健康体检者血浆标本分男女验证生物参考区间。结果 实验测得hs-cTnⅠ高值样本（5.702 μg/L）的批内不精密度CV为1.56%,总不精密度CV为1.27%,低值样本（0.003 μg/L）的批内不精密度CV和总的不精密度CV均为0;hs-cTnI的回收率为 97.50%;LoB为0.001 μg/L;在检测范围内,hs-cTnI理论值与测定值的线性方程为Y=1.0006X-0.13136,R2=0.9999;生物参考区间验证结果显示男性100.00%的结果在厂家提供的生物参考区间范围内,女性96.67%的结果在厂家提供的生物参考区间范围内。结论 ARCHETECT高敏肌钙蛋白Ⅰ试剂盒性能通过验证,可为临床提供准确、可靠的hs-cTnⅠ定量检测结果,为临床对心肌损伤的诊断、治疗提供重要信息。     

肿瘤免疫系统的延迟对稳定性的影响

目的 应用线性稳定性分析方法研究延迟确定性肿瘤免疫系统的稳定性。方法 在肿瘤免疫系统中,由于免疫细胞识别肿瘤细胞到做出合适反应需要一定的时间,在此过程中考虑时间延迟,采用小延迟泰勒展开对模型进行化简,求解出平衡点。利用线性稳定性分析方法,研究平衡点的稳定性。再利用数值计算方法模拟系统及平衡点附近的轨线图,用以验证理论分析的结果。结果 在小延迟条件下,系统共有4个有意义的平衡点,分别是1个稳定焦点、1个稳定结点和2个鞍点,并且这些平衡点的类型和稳定性都不受延迟影响,数值模拟验证了理论分析的结论。结论 在小延迟条件下,系统平衡点的类型和稳定性不受延迟影响。研究结果有助于深入理解肿瘤免疫反应的动力学机制,为肿瘤的生长及治疗提供参考。     

口服缓释、控释制剂的常用技术及临床应用

背景：新型缓释、控释制剂加速药物制剂的研究速度,使得药物剂型及制剂质量不断提高。 目的：分析了目前临床上常用的口服缓释、控释制剂的常用技术及临床应用情况。 方法：以“缓释,控释,生物制药,药物载体,高分子材料”或“delayed release,drug delivery carrier,polymer material;controlled release”为检索词,应用计算机检索CNKI和PubMed数据库中2000-02/2011-04关于口服缓释、控释药物的相关文章。选入文章内容与高分子药用材料及缓释、控释药物制剂技术及和临床应用有关,排除重复研究。 结果与结论：理想的剂型是指药物对靶部位选择性高,且能推迟必要的药效时间,迅速而完全地排泄,尽量不对其他脏器与组织产生不良反应。在缓释制剂的设计中,需要充分考虑药物的水溶性、油水分配系数、化学稳定性以及蛋白结合率等理化性质和生物学性质对缓释制剂释药行为的控制;生理因素对缓释制剂的设计,如给药部位、胃肠蠕动、首过效应、血流供应、患者疾病状态、药物作用的靶器官等也需考虑。     

Status of the adrenal medulla in various types of sudden cardiac death

The status of adrenal medulla was examined in 65 cases of sudden cardiac death (SCD) by using a quantitative histofluorescence technique and Wood's method. The autopsy material included a control group (11 accidental victims). In terms of postmortem changes in the myocardium, 6 groups of SCD cases were singled out. Medullary catecholamines showed greater luminescence intensity in the groups where SCD had been accompanied with hypertensive disease, scarring myocardial infarction and alcoholic cardiomyopathy than in the control group. On the contrary, lower luminescence intensity of catecholamines in chromaffin tissue of the adrenal gland was observed in the groups where SCD had been associated with acute myocardial infarction and small focal cardiosclerosis. The rate of catecholamine luminescence intensity in the group where SCD had occurred with postinfarction cardiosclerosis did not differ from that seen in controls. The findings from the quantitative histofluorescence analysis of adrenal medulla in SCD were in accord with the results obtained from a light optic study of adrenal glands in the same cases by employing Wood's method.     

Optical fiber-based setup for in vivo measurement of the delayed fluorescence lifetime of oxygen sensors

A new optical-fiber-based spectrofluorometer for in vivo or in vitro detection of delayed fluorescence is presented and characterized. This compact setup is designed so that it can be readily adapted for future clinical use. Optical excitation is done with a nitrogen laser-pumped, tunable dye laser, emitting in the UV-vis part of the spectrum. Excitation and luminescence signals are carried to and from the biological tissues under investigation, located out of the setup enclosure, by a single optical fiber. These measurements, as well as measurements performed without a fiber on in vitro samples in a thermostable quartz cell, in a controlled-atmosphere enclosure, are possible due to the efficient collection of the laser-induced luminescence light which is collected and focused on the detector with a high aperture parabolic mirror. The detection is based on a gated photomultiplier which allows for time-resolved measurements of the delayed fluorescence intensity. Thus, relevant luminescence lifetimes, typically in the sub-microsecond-to-millisecond range, can be measured with near total rejection of the sample's prompt fluorescence. The instrument spectral and temporal resolution, as well as its sensitivity, is characterized and measurement examples are presented. The primary application foreseen for this setup is the monitoring and adjustment of the light dose delivered during photodynamic therapy.     

LuxS基因缺失的变形链球菌突变株的构建及鉴定

目的 通过同源重组法构建LuxS基因缺失的变形链球菌(Streptococcus mutans)突变株.方法 运用基因同源重组方法将红霉素抗性基因(Eymr)连接到PCR扩增LuxS基因两端区域产生的2个基因片段之间,并共同插入到pUCl9载体的多克隆位点中,构建出带红霉素抗性标志的缺失突变载体pUCluxKO.将突变载体转化到含完整LuxS基因的突变受体变形链球菌标准株中,红霉素筛选出LuxS基因缺失的变形链球菌突变株,并经PCR、生物荧光检测及DNA测序鉴定.结果 构建的突变载体经限制性内切核酸酶酶切分析显示,产生的条带与设计结果完全一致.PCR方法扩增突变株LuxS和Eymr基因显示,LuxS基因已被完整敲除掉,经生物荧光检测,突变株不能诱导哈氏弧菌(Vibrio harveyi)BBl70的生物发光,说明不能产生信号分子AI-2(autoinducer-2).DNA测序证实筛选得到了LuxS基因缺失的变形链球菌突变株.连续传代培养后证实,变形链球菌LuxS基因突变株具有良好的稳定性.结论 成功构建出LuxS基因缺失的变形链球菌突变株,为研究LuxS基因对变形链球菌致龋毒力的影响奠定了基础.     

《中医方剂大辞典》胃脘痛的用药规律分析

目的 分析《中医方剂大辞典》中胃脘痛方所常用中药,以提高中医药治疗胃痛临床疗效的稳定性。方法 在文献调查、按类统计的基础上,利用频次分析方法筛选,总结中医药防治胃脘痛用药的规律。结果 502首胃脘痛方中,散剂150方,共涉及207味中药,频次≥10的药味共24味;汤剂129首方中,共涉及172味中药,其中频次≥10的药物共32味;丸剂202首方中,共涉及278味中药,其中频次≥20的药物共31味。结论 散剂、汤剂、丸剂3种剂型中,理气药、温里药、化湿药、补脾药、活血化瘀药等为治疗胃脘痛的临床常用中药。     

骨科弹道式冲击波配合中药熏洗治疗软组织劳损

背景：目前采用骨科弹道式冲击波治疗软组织劳损较为普遍,但与中药熏洗配合治疗的报道甚少。 目的：观察骨科弹道式冲击波配合中药熏洗治疗软组织劳损的临床疗效。 方法：将912例软组织劳损患者采用骨科弹道式冲击波配合中药熏洗治疗。采用目测类比定级法评定患者痛点受压时的疼痛强度。 结果与结论：经骨科弹道式冲击波配合中药熏洗治疗1周后,患者疼痛下降明显,第2周时测类比定级法评分变化不明显。2周以后,患者疼痛强度与治疗前比较明显下降(P < 0.05)。跟痛症与网球肘、屈指肌腱腱鞘炎比较,患者疼痛强度下降缓慢(P< 0.05)。结果证实,骨科弹道式冲击波配合中药熏洗治疗软组织劳损疗效显著。     

Cell cycle control and CDC28/Cdc2 homologue and related gene cloning of Cryptococcus neoformans]

In Cryptococcus neoformans the DNA content of cells having tiny buds varied rather widely, depending on growth phases and strains used. Typically, buds of C. neoformans emerged soon after initiation of DNA synthesis in the early exponential phase. However, bud emergence was delayed to G2 during transition to the stationary phase, and in the early stationary phase budding scarcely occurred, although roughly half of the cells completed DNA synthesis. The timing of budding in C. neoformans was shifted to later cell cycle points with progression of the growth phase of the culture. Similarly, a deficit in oxygen was demonstrated to delay the timing of budding, prolong the G2 phase and cause accumulation of cells after DNA synthesis, but before commitment to budding. The C. neoformans homologue of the main cell cycle control gene CDC28/Cdc2 was isolated using degenerate RT-PCR. The full-length coding region was then amplified using primers to target the regions around the start and stop codons. The gene was called CnCdk1 and was found to have high homologies to S. cerevisiae CDC28 and S. pombe cdc2. To determine its function, its ability to rescue S. cerevisiae cdc28-temperature sensitive mutants was tested. S. cerevisiae cdc28-4 and cdc28-1N strains transformed with the pYES2-CnCdk1 construct exhibited growth at the restrictive temperature. Results of the sequence analysis and the ability of CnCdk1 to complement the S. cerevisiae cdc28-ts mutations support its assumed role as the CDC28/cdc2 homologue in C. neoformans.     

离子色谱法测定液体创可贴中的氮含量

目的建立离子色谱法检测液体创可贴中氮含量的方法,对液体创可贴中氮含量进行准确定量来衡量液体创可贴中硝化棉的投料量,进而间接衡量液体创可贴的成膜性、硬度、附着力等性能。方法用DIONX ICS-1100离子色谱仪进行检测,色谱柱AS9-HC柱(4 mm×250 mm),淋洗液为5.0 mmol/L对羟基苯甲酸和5.3 mmol/L N,N-二乙基乙醇胺混合液,流速1 mL/min,电导检测器,外标法定量,用不同浓度梯度的亚硝酸根离子对照品和不同浓度梯度的硝酸根离子对照品分别绘制工作曲线,分别分析不同浓度的亚硝酸根离子和硝酸根离子的出峰时间和峰面积,选取A医疗器械厂家的液体创可贴产品为待测样品,最后将待测样品消解后与对照品平行的进行样品处理并检测。结果亚硝酸根离子在浓度2.9998~6.9995μg/mL范围内与峰面积保持良好的线性关系(r=0.9990),检出限为0.14999 g/mL(S/N=3),精密度相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为1􀆰62%(n=5),平均加标回收率为99.9%(n=9);硝酸根离子在浓度1.7015~3.9701μg/mL范围内与峰面积保持良好的线性关系(r=0.9999),检出限为0.08507μg/mL(S/N=3),精密度RSD为1.48%(n=5),平均加标回收率为100.9%(n=9)。最后对测试样本测试的结果进行计算,得出测试样本中氮的平均含量为11.24 mg/g。结论该方法具备良好的线性范围,准确度高、重复性好,样品经过前处理后,不受样品中其他组分的干扰,可用于液体创可贴中氮含量的测定。     

单味中药抗痛风效应的规律分析及其Logistic回归模型

目的 根据有关单味中药抗痛风效应的现代医学研究文献,分析中药性味归经与抗痛风效应的关系并建立相应的数学模型。方法 收集、筛选单味中药抗痛风效应的研究文献,文献中的中药均在《中华人民共和国药典》（2010版）中有所记载,统计不同功能分类、药性、药味、归经的中药数量和其中具有抗痛风效应的中药味数;用Logistic回归建立数学模型。结果 逐步Logistic回归筛选主要影响因素,结果表明归肝经、脾经,药味淡是中药抗痛风效应的重要影响因素（回归系数＞0且P＜0.05）。分析预测结果与原判定结果总符合率为86.35%。结论 中药的药味、归经与抗痛风效应关系密切,以此为基础建立的数学模型可作为中药抗痛风效应基础研究及临床用药的参考。