雌二醇诱致大鼠垂体催乳素瘤形成过程催乳素基因DNaseI敏感位？…

ＤＮａｓｅＩ敏感位点的存在，是染色质水平上基因活化调节的重要基础之一，为探讨Ｅ２诱发垂体ＰＲＬ瘤形成的表基因机制，本工作观察了Ｅ２诱发的垂体催乳素催乳素基因ＤＮａｓｅＩ敏感位点的改变，结果表明，Ｅ２诱致大鼠垂体前叶ＰＲＬ瘤细胞ＰＲＬ基因的ＤＮａｓｅＩ敏感位点较正常大鼠增多，提示在Ｅ２诱发ＰＲＬ瘤形成过程中ＰＲＬ基因处于活化状态。     

雌二醇诱致大鼠垂体催乳素瘤细胞中催乳素基因第1,2,4外显子的…

本工作探讨了雌二醇（Ｅ２）诱致的雄性ＳＤ大鼠垂体催乳素（ＰＲＬ）瘤中ＰＲＬ基因含ＣＣＧＧ位点的第１、２、４外显子中ＣＣＧＧ位点甲基化状态的改变。提取基因组ＤＮＡ并分别用对非甲基化ＣＣＧＧ位点不敏感而对甲基化ＣＣＧＧ敏感的ＨｐａⅡ及对甲基化和非甲基化ＣＣＧＧ位点均不敏感的ＭｓｐⅠ进行完全消化后，利用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法，对含有ＣＣＧＧ位点的ＰＲＬ基因第１、第２和第４外显子的部分序列进行扩增。结     

大鼠催乳素瘤形成过程中催乳素基因的表达

给ＳＤ大鼠皮下埋植内含１７β－雌二醇硅橡胶管３０、６０、１２０天后，发现大鼠垂体重量随给药时间延长呈持续性增加；用放射免疫法测定血浆催乳素含量，亦依次明显升高；用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交方法检测垂体细胞中ＰＲＬ基因，发现ＰＲＬ ｍＲＮＡ含量也依次显著增加，但其增加却远低于血浆ＰＲＬ含量的增加，提示β－雌二醇除了促进ＰＲＬ基因的转录外，还可能增加ＰＲＬ ｍＲＮＡ的翻译效率。     

雌二醇诱致大鼠垂体催乳素瘤形成过程催乳素基因DNase Ⅰ敏感位点增加

ＤＨａｓｅⅠ敏感位点的存在，是染色质水平上基因活化调节的重要基础之一。为探讨Ｅ２诱发垂体ＰＲＬ瘤形成的表基因机制，本工作观察了Ｅ２诱致的垂体催乳素瘤催乳素基因ＤＮａｓｅⅠ敏感位点的改变。结果表明：Ｅ２诱致大鼠垂体前叶ＰＲＬ瘤细胞ＰＲＬ基因的ＤＮａｓｅⅠ敏感位点较正常大鼠增多，提示在Ｅ２诱发ＰＲＬ瘤形成过程中，ＰＲＬ基因处于活化状态。     

褪黑激素对17—β—雌二醇诱致的大鼠垂体催乳素瘤细胞增殖的抑制作用

观察不同浓度的褪黑激素 (Melatonin ,MLT)对原代培养的大鼠垂体催乳素瘤细胞增殖的影响。用 80～10 0g体重的雄性Sprague Dawley(SD)大鼠 ,皮下埋置雌二醇诱致垂体催乳素瘤 (prolactinoma)形成后 ,取出瘤体 ,经消化、过滤、离心 ,用SFFD培养基重悬细胞 ,得细胞悬液 ,浓度为 0 75× 10 6/mL ,转入 2 4孔培养板中并加入相应剂量的MLT使其终浓度 (mol/L)分别为 10 -5、10 -7、10 -9、10 -11和 10 -13 ,另设空白对照组 ,于 37℃、5 %CO2 条件下培养 1h ,再在每孔中加入 2 μCi [3H] TdR继续孵育 2 4h后测counts/min值。结果显示 ,在对照组和各剂量 (mol/L)MLT用药组 10 -5,10 -7,10 -9,10 -11和 10 -13 的 [3H]-TdR掺入率分别为 2 0 38 75± 186 84,142 1 75±6 4 49,12 38 2 5± 6 1 72 ,92 4 0 0± 6 4 44 ,10 33 2 5± 12 7 2 2和 110 3 2 5± 15 1 5 3counts/min。表明 10 -5～10 -13mol/L的MLT能有效抑制 [3H] TdR在原代培养的垂体催乳素瘤细胞中的掺入 ,P <0 0 0 1。其中 ,以 10 -9mol/L的MLT的抑制作用最强 ,达 5 4 6 8%。提示在培养条件下 ,10 -5～ 10 -13 mol/LMLT能有效地抑制E2 诱导的垂体催乳素瘤细胞的增殖。     

17β-雌二醇对去势大鼠子宫内膜厚度的影响

目的:探索外源性使用雌激素对去势后大鼠子宫内膜厚度的影响。方法:96只雌性成年SD大鼠,随机分为假手术组、模型组和17β-雌二醇(17β-estradiol,E2)治疗组,模型组和E2治疗组行去势手术,并且E2组给予不同剂量、不同时间的E2背部皮下注射后处死,假手术组于动情前期处死,取子宫标本,行HE染色,在200倍显微镜下随机选取六个位置拍照,测量子宫腔上皮厚度。结果:去势E2治疗组大鼠子宫的发育与替代雌激素的用量呈明显的量效关系及时效关系。E2浓度在6μg.只-1,连续使用2 d时,去势大鼠子宫内膜形态学检查与假手术组组基本相似,子宫腔上皮厚度比假手术组大鼠增加8%,可认为是合理的雌激素替代剂量与时间。     

17β-雌二醇增加人肝细胞C-反应蛋白表达

C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)主要由肝脏合成,离体与在体实验均证实,IL-6是CRP基因表达的主要诱导者.传统观点认为,CRP是天然免疫系统的重要组分和炎症标志物.越来越多的医学基础与临床研究显示,CRP可以直接诱导炎症,是心血管疾病最为有力的预示因子与最重要的危险因子,可以直接参与动脉粥样硬化病理发生的各个重要阶段,促进疾病的发生、发展.     

男性乳房发育与高催乳素及高雌二醇血症

男性乳房发育与高催乳素及高雌二醇血症朱钦霞，徐汉明，余杏男性乳房发育症除青春期乳房发育外，病理性的可由多种因素促发，是许多原发疾病的临床表现之一。为了探讨其发病机理，我们应用放射免疫分析，检测４８例男性乳房发育患者血清睾酮（Ｔ）、雌二醇（Ｅ２）、黄体...     

17-β雌二醇对卵巢去势大鼠延髓神经元超微结构的影响

目的观察雌激素对卵巢去势大鼠延髓神经元超微结构的影响。方法30只雌性成年SD大鼠随机分为去卵巢组(A组)、雌二醇组(B组)和假手术对照组(C组),A组和B组动物卵巢切除后10天超分别皮下注射生理盐水0.1 m l/d、17-β雌二醇20μg/kg/d。C组动物,只切开腹膜,不切除卵巢,手术后10天起分别皮下注射生理盐水0.1 m l/d。各组动物连续用药6周后,观察结果。结果血清雌二醇的浓度A组明显低于C组(P<0.01),B组明显高于A组(P<0.01),而B组和C组之间比较无差异。A组动物延髓孤束核神经元和神经胶质细胞超微结构有明显的损伤表现,细胞核形状不规则,核周间隙局部明显增宽,胞浆内有空泡,线粒体肿胀,嵴断裂;神经纤维有脱髓鞘,髓鞘板层分离,有空泡,线粒体肿胀。B组动物,在应用雌激素替代治疗后,延髓神经元的损伤表现明显减轻。C组神经元形态结构正常。结论雌激素对去势大鼠延髓神经元有明显地保护作用。     

17β-雌二醇诱导大鼠脾细胞产生一氧化氮的机制研究

目的：观察17β-雌二醇(F2)对大鼠脾细胞一氧化氮(NO)产生和雌激素受体(ER)基因敲除小鼠诱导型一氧化氮合成酶(jiNOS)的影响，揭示雌激素对免疫细胞调节的信号转导机制。方法：应用正常、福氏不完全佐剂(m)或髓鞘基质蛋白(MBP)免疫的大鼠脾细胞单个核细胞培养，用Griess试剂检测培养上清NO的生成，免疫荧光方法检测脾脏iNOS表达。结果：①＆剂量依赖性地诱导正常大鼠脾细胞NO的生成，FIA或MBP免疫的EAE大鼠脾细胞有同样的表现；iNOS抑制剂LNAME或者MAPK阻断剂能抑制该效应。②在体内，＆能促进野生型小鼠脾脏iNOS的表达，但对ERa基因敲除小鼠(EPKO)无作用，EllB受体基因敲除小鼠(BERKO)的表现和野生型(WT)相同。结论：＆可通过诱导NO产生而调控免疫系统，该效应同时涉及基因组和非机制基因组机制。     

17-β-雌二醇对大鼠垂本前叶细胞转化生长因子基因表达的影响

实验采用无血清原代培养大鼠垂体前叶细胞及原位杂交方法，观察了不同剂量（１０１０、１０８和１０６ｍｏｌ／Ｌ）的１７β雌二醇（ｅｓｔｒａｄｉｏｌ，Ｅ２）对大鼠垂体前叶细胞转化生长因子α（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒα，ＴＧＦα）和转化生长因子β１（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒβ１，ＴＧＦβ１）基因表达的影响。结果表明：１０１０ｍｏｌ／ＬＥ２作用２４ｈ后，对两种生长因子的表达均无显著影响；而１０８ｍｏｌ／Ｌ和１０６ｍｏｌ／ＬＥ２则显著升高ＴＧＦαｍＲＮＡ，分别为对照组的１５倍和１６倍（ｐ＜０００１）；同时明显降低ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ，使ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ水平分别降低为对照组的７０％和５５％（ｐ＜０００１）。说明一定浓度的Ｅ２对正常大鼠垂体前叶细胞ＴＧＦα和ＴＧＦβ１基因表达有明显影响，提示这两种生长因子可能以自分泌／旁分泌机制，参与Ｅ２对垂体前叶细胞功能的部分作用     

17β-雌二醇对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响

目的 观察17β-雌二醇对大鼠心缺血再灌(I/R)损伤的保护作用并探讨其机制. 方法 30只成年雌性SD大鼠卵巢切除后,随机分成C组(I/R假手术组)、 I/R组和 I/R+E2组(17β-雌二醇预处理).17β-雌二醇预处理2周后建立大鼠心肌缺血再灌注模型,用氯化三苯甲基四氮唑(TTC)染色法测量心肌梗死范围,流式细胞术检测心肌细胞凋亡率,免疫组织化学方法检测心肌细胞原癌基因c-fos的蛋白表达. 结果 17β-雌二醇能明显减少缺血再灌注心肌梗死体积,降低心肌细胞凋亡率,减弱缺血再灌注心肌细胞c-Fos的表达. 结论 雌激素对大鼠缺血再灌注心有保护作用,其作用机制可能与抑制原癌基因c-fos的蛋白表达有关.     

17-β-雌二醇对HMGB1过表达THP1细胞的细胞周期进程的影响

目的:研究17-β-雌二醇联合HMGB1的过表达对人单核细胞系THP1细胞细胞周期和NF-κB转录因子的影响。方法:血清饥饿法同步化细胞周期后,利用脂质体法将pFLAG-CMV-HMGB1转染THP1细胞;10-9mol/L17-β-雌二醇刺激同步化THP1细胞16、30小时后,流式细胞术检测细胞周期分布,RT-qPCR检测Cyclin A、Cyclin D1的mRNA表达水平,免疫印迹检测HMGB1蛋白的表达;荧光素酶报告基因检测NF-κB的活性。结果:HMGB1过表达的THP1细胞中HMGB1蛋白的表达水平比正常THP1细胞要高3.7倍,血清饥饿法成功将THP1细胞周期同步化,同步化后G0/G1期细胞百分数由53%上升到78%;17-β-雌二醇刺激HMGB1过表达细胞30小时后出现Cyclin AmRNA表达上升为原来的7.9倍,而Cyclin D1 mRNA表达明显下降,G1期细胞百分比由53.11%下降为33.33%,S期细胞百分比由35.43%上升为53.91%,此改变在刺激后30小时达到最大值;NF-κB活性在17-β-雌二醇刺激HMGB1过表达细胞明显升高,且时间上提前于细胞周期动力学改变。结论:雌激素对THP1细胞周期调节依赖HMGB1,NF-κB可能参与其中。     

17β-雌二醇对人甲状腺乳头状癌BCPAP细胞Hsp27表达的影响及作用机制

目的探讨17β-雌二醇对人甲状腺乳头状癌BCPAP细胞Hsp27表达的影响及作用机制。方法用10-8 mol/L的17β-雌二醇(E2)处理不同时间BCPAP细胞,Western blot检测细胞中Hsp27蛋白的表达;分别用E2、PPT和DPN处理BCPAP细胞,Western blot检测细胞中Hsp27蛋白的表达;设计合成ERαsiRNA、ERβsiRNA并转染BCPAP细胞,Western blot检测细胞中ERα、ERβ和Hsp27蛋白的表达;CHIP检测ERα、ERβ对Hsp27基因启动子的影响。结果用10-8mol/L的E2处理不同时间BCPAP细胞,随着E2处理时间增加,E2对BCPAP细胞中Hsp27蛋白的表达水平逐渐增高,在24 h达到峰值(P0.05);E2作用转染ERαsiRNA的BCPAP细胞24 h,与E2处理组相比,Hsp27蛋白的表达水平降低(P0.05);E2作用转染ERβsiRNA的BCPAP细胞24 h,与E2处理组相比,Hsp27蛋白的表达水平升高(P0.05);Ch IP结果显示ERα能够与Hsp27基因启动子区域结合。结论 E2可以通过ERα促进BCPAP细胞中Hsp27蛋白水平的增高。     

17β-雌二醇及α-玉米赤霉醇对人脐静脉内皮细胞组织因子表达的影响

为探讨17β-雌二醇(17β-estrodiol，17β-E2)及植物雌激素α-玉米赤霉醇(α-zearalanol，α-ZAL)对人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells，HUVECs)组织因子(tissue factor，TF)蛋白含量及mRNA表达的影响，进行人脐静脉内皮细胞原代培养，传至2—3代后用于实验。在细胞培养液中分别加入不同浓度17β-E2及α-ZAL作用48h，采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞裂解液中TF蛋白浓度，双辛丁酸法(bicinchoninic acid，BCA)检测细胞总蛋白含量。提取细胞总RNA，用RT-PCR观察17β-E2及α-ZAL对TF mRNA表达的影响。结果发现：10^-7mol／L 17β-E2及α-ZAL均可明显降低HUVECs组织因子蛋白含量及mRNA的表达，二者的作用类似。表明17β-E2及α-ZAL可明显抑制HUVECs组织因子的表达，这可能是它们抗血栓形成、发挥心血管保护作用的机制之一。     

17β-雌二醇调节小鼠淋巴结树突状细胞的表型和吞噬功能

为探索17β-雌二醇(E2)对免疫应答能力的调节是否与树突状细胞(DC)的成熟和功能相关,用Metrizamide密度梯度离心方法分离BALB/c小鼠淋巴结内的淋巴细胞得到DC,不同浓度的E2处理DC 24 h后,使用PE标记的单抗CD11c和FITC标记的单抗MHC I/MHC II/CD40/CD54/CD80/CD86、IL-10/TNF-α以及右旋糖酐(dextran)双标DC,流式细胞仪分别检测其表型和胞内细胞因子的表达及吞噬能力的变化。结果显示,不同浓度的E2处理DC 24 h后,MHC分子、黏附分子CD54和共刺激分子CD86与对照组相比显著提高,而CD40显著降低,但CD80的表达无明显改变。胞内细胞因子IL-10和TNF-α的表达水平随E2的处理而显著增加,其中TNF-α的变化呈剂量依赖性。与对照组相比,DC的吞噬能力随E2的处理浓度增加而显著降低。以上结果表明,E2能够改变DC的成熟和功能,这提示E2对机体的免疫应答的影响可能通过DC的改变而改变。     

血管紧张素Ⅱ调节雄性大鼠催乳素和β-内啡肽的释放

本工作给清醒、自由活动的SD雄性大鼠第三脑室内注射血管紧张素Ⅱ,用放射免疫测定给药前后血浆催乳素(PRL)和β-内啡肽(β-EP)含量的变化,结果显示,注射ANGⅡ50和500ng,可显著升高血浆PRL和β-EP的含量。静脉注射多巴胺受体阻断剂spiroperidol后,也可显著升高血浆PRL水平,若在此基础上加脑室内注射50ng ANGⅡ,血浆PRL含量与单独静脉注射spiroperidol无显著差别。在体外,ANGⅡ作用于前叶垂体细胞后,可使其培养液中PRL和β-EP含量显著升高。用EGTA络合细胞外Ca~(2+)后,不影响10~(-8)M ANGⅡ所致的PRL升高,但部分抑制其升高β-EP的效应。10~(-8)M的ANGⅡ可使垂体细胞内Ca~(2+)浓度显著升高,但不影响其胞内cAMP的含量。     

17β-雌二醇通过microRNA-29b调节NK细胞干扰素γ的分泌

目的:研究17β-雌二醇(E2)对人自然杀伤细胞株NK92中干扰素γ(IFN-γ)分泌的影响及其可能的机制。方法:用E2和poly I:C处理NK92细胞,分别在4、8、12和24小时后用实时定量PCR、酶联免疫吸附法和流式细胞术测定NK92细胞中IFN-γ的表达情况,用实时定量PCR检测microRNA-29b(miR-29b)的变化。进一步,构建含有IFN-γ3’UTR的pEGFP-C1质粒,并转染pre-29b和pEGFP-IFN-γ3’UTR质粒至HEK293A细胞中,用流式细胞术检测绿色荧光蛋白(GFP)的变化。结果:E2抑制NK92细胞的IFN-γ分泌和上调miR-29b的表达;miR-29b能够直接靶向调节IFN-γ3’UTR mRNA。结论:E2可能通过调节NK92的miR-29b而影响IFN-γ的分泌水平,进而影响其免疫功能。