拟血管性痴呆小鼠海马CAl区细胞定量分析及电针的影响

目的：观察拟血管性痴呆小鼠海马CAl区细胞数目变化及电针的影响。方法：复制拟血管性痴呆小鼠模型，给予电针肾俞、膈俞、百会穴和药物喜德镇治疗15d，运用高清晰度病理图文分析系统对海马CAl区细胞数目做定量分析。结果：模型组海马CAl区的场数目、面数密度、面密度均显著减少，电针和药物可明显增加以上各参数，且以电针作用为优。结论：电针肾俞、膈俞、百会穴可显著抑制海马CAl区细胞坏死、脱失，抑制其细胞数目减少，可能为针刺有效治疗血管性痴呆的作用机制之一。     

拟血管性痴呆小鼠海马CA1区细胞定量分析及电针的影响

目的 :观察拟血管性痴呆小鼠海马CA1区细胞数目变化及电针的影响。方法 :复制拟血管性痴呆小鼠模型 ,给予电针肾俞、膈俞、百会穴和药物喜德镇治疗 15d ,运用高清晰度病理图文分析系统对海马CA1区细胞数目做定量分析。结果 :模型组海马CA1区的场数目、面数密度、面密度均显著减少 ,电针和药物可明显增加以上各参数 ,且以电针作用为优。结论 :电针肾俞、膈俞、百会穴可显著抑制海马CA1区细胞坏死、脱失 ,抑制其细胞数目减少 ,可能为针刺有效治疗血管性痴呆的作用机制之一。     

拟血管性痴呆小鼠模型皮层及海马细胞病理组织学动态观察

目的:观察拟血管性痴呆小鼠模型大脑皮层及海马细胞病理形态学的较长期演变。方法:复制拟血管性痴呆小鼠模型,分别于术后7d、15d、30d脑部取材,石蜡切片,HE与Nissl染色,对皮层及海马细胞病理形态学进行较长期动态观察。结果:7d模型小鼠大脑皮质变薄,部分神经细胞核固缩,局限性神经元数目减少,出现筛网状结构,胶质细胞增生,15d、30d镜下与7d基本相同。海马CA₁区细胞脱失,随时间推移逐渐加重,至术后30d,海马CA₁区细胞几乎完全脱失,胶质细胞大量增生,形成结节,CA₂、CA₃区细胞也严重脱失,呈现海马硬化。结论:海马锥体细胞的迟发性坏死是缺血性脑血管病致痴呆的病理学基础。     

银杏叶提取物对拟血管性痴呆大鼠海马CA1区的保护作用

为了观察银杏叶提取物(EGb761)对拟血管性痴呆(vascular dementia,VD)大鼠海马CA1区神经细胞的保护作用,本研究通过反复夹闭再通大鼠双侧颈总动脉,同时腹膜腔内注射硝普钠制作拟血管性痴呆大鼠模型,选出造模成功者随机分为模型组及用药组,各为30只。另以条件匹配的30只大鼠为假手术组。采用Morris水迷宫和尼氏染色方法分别观察大鼠空间学习记忆能力及海马CA1区细胞形态学改变和细胞数目。结果显示:模型组大鼠在1、2和4月不同时间点测得的Morris水迷宫逃避潜伏期(EL)均较假手术组明显延长(P<0.01),药物组EL均显著短于模型组,但仍长于假手术组(P<0.05或P<0.01);各时间点模型组海马CA1区锥体细胞及其树突丢失,但药物组锥体细胞数多于模型组。上述结果说明EGb761对海马CA1区的保护作用可能是其改善VD大鼠学习记忆障碍的重要机制。     

血管性痴呆大鼠海马超微结构的变化及药物干预

目的：探讨血管性痴呆病理机制及黄精口服液的作用机制。方法：结扎双侧颈总动脉建立血管性痴呆模型,黄精口服液灌胃,应用透射电镜观测神经细胞、胶质细胞、微血管病理变化和突触结构参数的变化。结果：血管性痴呆大鼠海马CAI区神经组织线粒体肿胀、嵴断裂、模糊或消失,微管断裂、排列紊乱,神经毡中突起肿胀、变性,突触结构参数明显改变;毛细血管内皮细胞局部基膜和星形胶质细胞也有病理改变。黄精口服液干预的大鼠海马组织病理变化明显减轻;海马CAI突触界面曲率增大、突触后致密物增厚、突触活性区增长。结论：(1)突触结构变化是血管性痴呆的病理机制之一;(2)黄精口服液促进突触重建、改善血管性痴呆大鼠学习记忆能力。     

血管性痴呆大鼠海马synapsin I及其磷酸化水平的动态变化

目的:观察血管性痴呆大鼠海马区突触结构和突触蛋白syrmpsin I及其磷酸化水平的变化,探讨血管性痴呆大鼠突触传递障碍的可能机制.方法:采用双侧颈总动脉夹闭再灌注同时腹腔注射硝普纳建立血管性痴呆模型,在15 d、1月、2月和4月等时点,电镜观察大鼠海马CAI区突触结构的病理改变,应用免疫组织化学染色法测定血管性痴呆大鼠海马synapsin I及其磷酸化水平的变化.结果:假手术组大鼠海马CAl区未见明显病理改变,突触前小泡聚集成簇.模型组突触前后膜界限不清,突触后致密物减少,突触前囊泡分布分散、聚集囊泡簇减少,并随造模时间的延长,病理改变加重;模型组大鼠海马CAI区synapsin I阳性产物表达明显减少(P<0.01),DG;区分子层无明显变化(P>0.05);模型组大鼠海马磷酸化synapsin I(P-synapsin I)阳性细胞明显减少(P<0.01,P<0.05),15 d和1月时点大鼠海马DG区和CAI区P-synapsin I阳性细胞表达较假手术组增强(P<0.01),2月和4月时点CAI区P-synapsin l阳性细胞表达较假手术组减弱(P<0.01),而DG区无明显变化(P>0.05).结论:VD模型大鼠海马突触结构受损,突触小泡簇减少;synapsin I及其磷酸化水平表达降低,突触传递前机制受损可能是VD突触传递障碍的机制之一.     

穴位埋线对血管性痴呆大鼠海马CA1区神经细胞凋亡的影响

目的 观察穴位埋线疗法对血管性痴呆（VD）大鼠海马CA1区神经细胞凋亡和Bcl-2 mRNA及Bax mRNA表达的影响,探讨穴位埋线对VD大鼠脑缺血性损伤的神经保护机制。 方法 采用改良Pulsinelli’s 4血管阻断法建立VD大鼠模型,随机数表法分为VD模型组、穴位埋线组、尼莫地平组,并设置假手术组作为对照。两个治疗组分别施行穴位埋线和尼莫地平治疗。Morris 水迷宫检测各组大鼠学习记忆能力后,取含海马的脑组织,TUNEL法检测海马CA1区神经细胞凋亡,原位杂交法检测其Bcl-2 mRNA及Bax mRNA表达,观察并比较各组大鼠海马神经细胞凋亡、蛋白表达的变化。 结果 VD模型组大鼠海马CA1区可见大量凋亡细胞、Bcl-2 mRNA 表达降低、Bax mRNA 的表达增高,与假手术组比较差异均有统计学意义（P＜0.01）。VD模型组表现出明显的学习记忆障碍,与假手术组相比差异有统计学意义（P＜0.01）;与VD模型组比较,穴位埋线组大鼠学习记忆能力显著提高（P＜0.01）,CA1区凋亡细胞明显减少（P＜0.01）,可见一定数量的Bcl-2 mRNA阳性细胞表达,而Bax mRNA阳性细胞表达较少。 结论 穴位埋线可通过上调VD大鼠海马CA1区Bcl-2 mRNA的表达、下调Bax mRNA 的表达,抑制海马神经细胞凋亡,改善VD大鼠学习记忆能力。     

血管性痴呆大鼠海马突触结构参数的变化

目的 :观察血管性痴呆大鼠海马突触结构特点 ,探讨血管性痴呆学习记忆障碍的神经病理机制。方法 :采用永久性结扎双侧颈总动脉的方法建立血管性痴呆动物模型 ,利用Morris水迷宫和Y型电迷宫检验大鼠的学习记忆能力 ,应用透射电镜和形态计量学分析血管性痴呆大鼠海马GrayⅠ型突触的突触结构参数的变化。结果 :血管性痴呆大鼠海马CA1区GrayⅠ型突触的体积密度、面积密度、比表面和面数密度均减小 ,突触平均面积增大 ;突触界面曲率、突触间隙宽度、突触后致密物厚度均减小。结论 :永久性结扎双侧颈总动脉使大鼠海马CA1区GrayⅠ型突触数量减少和形态结构发生显著变化 ,导致学习记忆障碍     

血管性痴呆大鼠海马神经元P-GP和胶质细胞GLT-1的表达变化

目的:探讨血管性痴呆(VD)模型大鼠海马CA1区P精蛋白(P-GP)及谷氨酸转运体1(GLT-1)长时间表达变化及其神经元保护机制。方法:采用反复脑缺血再灌注复制VD大鼠模型在15 d和1月两个时间点采用Morris水迷宫检测大鼠空间学习记忆能力,用神经颗粒素(Ng)/P-GP和GFAP/GLT-1免疫荧光双标法,观察海马区神经元P-GP和胶质细胞GLT-1的表达变化。结果:(1)模型组大鼠各时间点的Morris水迷宫逃逸潜伏期比假手术组均明显延长(P0.01)。(2)与假手术组相比,模型组大鼠海马CA1区Ng/P-GP阳性神经元的数量明显降低(P0.01)而GFAP/GLT-1阳性胶质细胞数以及海马区神经元上P-GP和胶质细胞上GLT-1表达均明显升高(P0.01);与模型组15 d时间点比较,模型组1月时间点的海马CA1区Ng/P-GP阳性神经元的数量明显降低而GFAP/GLT-1阳性胶质细胞数以及P-GP和GLT-1的表达均明显升高(P0.01)。(3)积分光密度值测定显示:模型15 d时间点Ng/P-GP和GFAP/GLT-1阳性细胞的IOD值比假手术组各时间点均明显变大(P0.01);模型1月时间点Ng/P-GP和GFAP/GLT-1阳性细胞的IOD值较15 d时间点更大(P0.01)。结论:神经元的P-GP和胶质细胞的GLT-1可能参与VD大鼠海马神经元的保护。     

银杏叶提取物对血管性痴呆大鼠海马突触素表达的影响

目的：研究银杏叶提取物(EGb761)对血管性痴呆模型大鼠海马突触素表达的影响。方法:以双侧颈总动脉反复夹闭再通同时腹腔注射硝普钠建立血管性痴呆模型大鼠，采用Morris 水迷宫和免疫组化方法分别观察大鼠空间学习记忆能力及海马突触素(SYN)表达情况。结果:模型组大鼠在1月、2月和4月不同时点测得的Morris水迷宫逃避潜伏期(EL)均较假手术组明显延长(P<0.01)，药物组EL均显著短于模型组，但仍长于假手术组(P<0.05或P<0.01)；模型组海马SYN表达弱于假手术组，而药物组海马SYN表达高于模型组(P<0.01)。结论:EGb761增加海马结构SYN表达可能是其改善VD大鼠学习记忆障碍的重要机制。     

血管性痴呆大鼠记忆障碍与海马Bcl-2蛋白表达的研究

目的：探讨Bcl-2参与血管性痴呆（VD）大鼠学习记忆障碍的作用机制。方法：采用4血管阻断的方法，复制大鼠VD模型，用免疫组化法检测海马Bcl-2蛋白表达水平的变化；并用Nissl染色方法，结合图象分析统计海马神经元丢失比率；同时采用Y-型迷宫，进行行为学检测，定量测定其学习记忆成绩。结果：在VD大鼠空间分辩发生严重障碍时，海马CA₁、CA₃、DG区神经元丢失比率高于对照组，同时Bcl-2蛋白表达水平高于对照组。结论：Bcl-2抑制细胞凋亡，对VD大鼠海马神经元起保护作用，减轻VD大鼠学习记忆障碍。     

血管性痴呆大鼠海马synapsinⅠ及其磷酸化水平的动态变化

目的：观察血管性痴呆大鼠海马区突触结构和突触蛋白synapsin I及其磷酸化水平的变化，探讨血管性痴呆大鼠突触传递障碍的可能机制。方法: 采用双侧颈总动脉夹闭再灌注同时腹腔注射硝普纳建立血管性痴呆模型，在15 d、1月、2月和4月等时点，电镜观察大鼠海马CA1区突触结构的病理改变，应用免疫组织化学染色法测定血管性痴呆大鼠海马synapsinⅠ及其磷酸化水平的变化。结果: 假手术组大鼠海马CA1区未见明显病理改变，突触前小泡聚集成簇，模型组突触前后膜界限不清，突触后致密物减少，突触前囊泡分布分散、聚集囊泡簇减少，并随造模时间的延长，病理改变加重；模型组大鼠海马CA1区synapsin I阳性产物表达明显减少(P<0.01)，DG区分子层无明显变化(P>0.05)；模型组大鼠海马磷酸化synapsin I（p-synapsin I）阳性细胞明显减少(P<0.01,P<0.05)，15 d和1月时点大鼠海马DG区和CA1区p-synapsin I阳性细胞表达较假手术组增强(P<0.01)，2月和4月时点CA1区p-synapsin I阳性细胞表达较假手术组减弱(P<0.01)，而DG区无明显变化(P>0.05)。结论: VD模型大鼠海马突触结构受损，突触小泡簇减少；synapsinⅠ及其磷酸化水平表达降低，突触传递前机制受损可能是VD突触传递障碍的机制之一。     

血管性痴呆学习记忆障碍小鼠行为学变化及醒脑启智胶囊的影响

目的：观察血管性痴呆学习记忆障碍小鼠行为学的变化，以及中药醒脑启智胶囊的影响，验证醒脑启智胶囊对血管性痴呆的疗效。方法：复制脑缺血再灌注血管性痴呆小鼠模型，灌胃给药，并与银杏叶、尼莫地平对照，分别于术后7 d、15 d、30 d，采用水迷宫法、跳台法检测各组小鼠行为学变化。结果：模型小鼠学习与记忆能力下降，表现为学习反应时间延长，记忆潜伏时间缩短，游全程时间延长，错误次数增加。醒脑启智胶囊可使模型小鼠学习反应时间缩短，记忆潜伏时间延长，游全程时间缩短，错误次数减少，优于对照药物。结论：醒脑启智胶囊对模型小鼠学习与记忆能力下降有改善或提高作用。     

Cycloheximide-induced inhibition of protein synthesis in hippocampal pyramidal neurons is time-dependent: Differences between CA1 and CA3 areas

Cycloheximide (CHI), an inhibitor of protein synthesis, is widely used for studying the mechanisms of consolidation of long-term memory (LTM). High concentrations of CHI inhibit the protein synthesis in brain homogenates by more than 80% and impair LTM consolidation. For understanding the mechanisms of consolidation, it is important to know how protein synthesis inhibitors affect hippocampal neurons. However, the effect of CHI on protein synthesis in CA1 and CA3 hippocampal pyramidal neurons is still poorly understood. In the present work, the state of ribosomes in CA1 and CA3 pyramidal neurons from the dorsal hippocampus of Wistar rats 1, 2, 4, and 72 h after the introcerebroventricular (i.c.v.) injection of a high concentration of CHI was determined using the fluorescent dye acridine orange. We showed that CHI induces great differences in the dynamics of the intensity of protein synthesis in CA1 and CA3 pyramidal neurons. The suppression of the intensity of protein synthesis in CA1 pyramidal neurons 1 h after the injection of CHI was more than threefold stronger than in CA3, and by 4 h, it was most pronounced in CA3 neurons. We suggest that the protein synthesis in CA1 pyramidal neurons contributes significantly to the synaptic consolidation of declarative memory in the first critical period.     

Physiological heterogeneity of nonpyramidal cells in rat hippocampal CA1 region

Summary Functional differentiation of nonpyramidal cells was studied by intracellular recording and staining of cells located in the stratum pyramidale or along the border between the stratum radiatum and the stratum lacunosum-moleculare of slices prepared from rat hippocampal CA1 region. In the stratum pyramidale, nonpyramidal cells (fast-spiking cells, type I cells) exhibited brief-duration action potentials (mean spike-width at one-half amplitude = 0.28 ms, N = 9) and little or no frequency adaptation of spike discharge to depolarizing current pulse. These cells ramified axon collaterals mainly in the stratum pyramidale or in the apical side of the stratum oriens. The HRP-injected nonpyramidal cells located between the stratum radiatum and the stratum lanunosum-moleculare (type II cells) showed different physiological characteristics from fast-spiking cells in the stratum pyramidale. The spike width was longer than that of fast-spiking cells (mean duration measured at one-half amplitude = 0.61 ms, N = 11) and these cells exhibited adaptation of spike discharge in response to depolarizing current pulses. Following hyperpolarizing current pulses, a depolarizing potential was produced in some type II cells. Although most cells of this group sent axon collaterals into the stratum radiatum or into the stratum lacunosum-moleculare, there were also cells whose axon collaterals extended to and ramified in the stratum pyramidale. In contrast to pyramidal cells, spikes of both types of nonpyramidal cells did not broaden during repetitive firing evoked by large depolarizing current pulses. Stimulation of the stratum radiatum caused excitatory and inhibitory postsynaptic potentials in both type I and II cells. These results suggest that hippocampal nonpyramidal cells are divided into at least two groups; type I cells (fast-spiking cells) and type II cells.     

当归芍药散对SAM-P8小鼠海马CA1区、齿状回锥体细胞的影响

目的观察当归芍药散(DSS)对快速老化小鼠海马CA1区、齿状回锥体细胞数量的影响。方法选用雌性SAM-P8鼠36只,分成4组:预防组(3月龄)、预防对照组(3月龄)、治疗组(6月龄)、治疗对照组(6月龄),治疗组以DSS(浓度为0.5g/mL)灌胃1个月,预防组自由饮用DSS(0.02%,v/v)4个月,对照组给予冷开水,给药结束后取脑、冰冻切片、尼氏染色,Leica图像分析系统分析海马CA1区、齿状回锥体细胞层尼氏染色的平均灰度。结果海马CA1区锥体细胞层尼氏染色的平均灰度各组间差异不明显(P>0.05)。预防组齿状回锥体细胞层尼氏染色的平均灰度明显多于其余各组(P<0.05)。结论低剂量长期服用DSS可增加老年性痴呆模型SAM-P8小鼠的齿状回锥体细胞数量。     

当归芍药散对SAM—P8小鼠海马CA1区、齿状回锥体细胞的影响

目的观察当归芍药散（DSS）对快速老化小鼠海马CA1区、齿状回锥体细胞数量的影响。方法选用雌性SAM-P8鼠36只，分成4组：预防组（3月龄）、预防对照组（3月龄）、治疗组（6月龄）、治疗对照组（6月龄），治疗组以DSS（浓度为0．5g／mL）灌胃1个月，预防组自由饮用DSS（0．02％，v／v）4个月，对照组给予冷开水，给药结束后取脑、冰冻切片、尼氏染色，Leica图像分析系统分析海马CA1区、齿状回锥体细胞层尼氏染色的平均灰度。结果海马CA1区锥体细胞层尼氏染色的平均灰度各组间差异不明显（P〉0．05）。预防组齿状回锥体细胞层尼氏染色的平均灰度明显多于其余各组（P〈0．05）。结论低剂量长期服用DSS可增加老年性痴呆模型SAM-P8小鼠的齿状回锥体细胞数量。