枸杞多糖对小鼠胸腺细胞程序化死亡的影响

采用电镜、ＤＮＡ琼脂糖电泳和ＦＡＣＳ分析的方法，对枸杞多糖（ＬＢＰ）对小鼠胸腺细胞凋亡的效应进行了研究。结果发现１００μｇ／ｍｌ和４００μｇ／ｍｌＬＢＰ可明显抑制小鼠胸腺细胞培养７小时和２４小时自发出现的细胞凋亡（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ），而对１０－７ｍｏｌ／Ｌ地塞米松诱导的细胞凋亡则没有影响。说明ＬＢＰ具有抑制小鼠胸腺细胞自发凋亡的作用，显示出枸杞多糖的一种新的免疫调节效应。     

两种小鼠胸腺基质细胞对胸腺细胞凋亡的不同作用

采用两种体外建系的小鼠胸腺基质细胞（ＴＳＣ）系，即上皮样ＴＳＣ（ＭＴＥＣ１）和树突状ＴＳＣ（ＭＴＳＣ４），观察其对胸腺细胞凋亡的影响。小鼠胸腺细胞在体外培养过程中，可自发地出现细胞凋亡的特征，表现为ＤＮＡ呈梯度断裂片段，细胞经ＦＡＣＳ分析出现亚二倍体ＤＮＡ波峰，以及Ｆｅｕｌｇｅｎ′ｓ染色镜检所见的ＤＮＡ凝聚和断裂。胸腺细胞在与ＴＳＣ共育后，在ＭＴＥＣ１组可见其凋亡过程受到抑制和存活率的增加；在ＭＴＳＣ４组，仅在共育１２至１８小时时，见到胸腺细胞凋亡加强，而其存活率不受影响。结果提示在胸腺细胞发育过程中，其阴性选择作用的主要机制之一的ＰＣＤ过程受不同来源的胸腺基质细胞的调节。     

CD4单克隆抗体在体内诱导小鼠胸腺细胞凋亡

为研究抗ＣＤ４ ＭｃＡｂ引起胸腺细胞减少的机理，本课题探讨了ＣＤ４ ＭｃＡｂ诱导胸腺细胞发生凋亡的可能性。小鼠注射抗ＣＤ４ ＭｃＡｂ后，皮质胸腺细胞体积缩小，染色质凝聚；ＰＩ染色后经流式细胞计测定，显示大量的亚二倍体细胞（凋亡细胞，Ａｐｏｐｔｏｔｉｃ ｃｅｌｌｓ），与正常小鼠相比Ｐ〈０．００１；片断化ＤＮＡ的百分比也明显高于正常小鼠，Ｐ〈０．０１。片断化ＤＮＡ在凝胶电泳上呈现典型的阶梯现象。细胞内     

人参抑制小鼠胸腺细胞凋亡的实验研究

用大肠杆菌脂多糖（ＬＰＳ）所致小鼠胸腺细胞凋亡模型和琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术及免疫组织化学等方法，研究不同浓度高丽人参水提取物体内对小鼠胸腺细胞的影响。结果表明，每只小鼠腹腔注射１０￣２０ｍｇ人参提取物可防止ＬＰＳ所致小鼠体重及胸腺减重，提高胸腺细胞存活力，抑制胸腺细胞ＤＮＡ降解和促凋亡蛋白Ｂａｘ的过量表达，免疫组织化学研究结果在蛋白水平上初步解释了人参抑制小鼠胸腺细胞凋亡的作用机制。     

胸腺细胞的凋亡部位:在胸腺内还是在胸腺外

ＣＤ４－ＣＤ８－前体细胞（Ｐｒｅｃｕｒｓｏｒｔｈｙｍｏｙｔｅｓ，Ｐｒｅ－Ｔ）进入胸腺后，随即开始γ、δ和βＴＣＲ基因的重排，其中一个结局是发展成ＣＤ４－ＣＤ８－γδ＋Ｔ细胞，而另一个结局是发育成ＣＤ４＋ＣＤ８＋双阳性（ｄｏｕｂｌｅｐｏｓｉｔｉｖｅ，Ｄ...     

白色念珠菌诱导小鼠胸腺细胞凋亡

目的　研究白色念珠菌（ 白念菌） 在体内对小鼠胸腺细胞凋亡的诱导作用。方法　小鼠经尾静脉注射白念菌后,以流式细胞仪（ＦＣＭ） 分析、ＤＮＡ 琼脂糖凝胶电泳分析及细胞形态学改变为指标检测细胞凋亡。静脉注射ＮＯＳ 抑制剂观察对白念菌诱导胸腺细胞凋亡的影响。结果　白念菌能诱导小鼠胸腺细胞产生特征性的细胞凋亡形态学改变;流式细胞仪分析显示特征性的凋亡峰;琼脂糖凝胶电泳显示胸腺细胞出现典型的ＤＮＡ“梯状带”;用荧光染色（ＡＯ＋ ＥＢ） 以及ＦＣＭ 检测凋亡细胞百分率,发现白念菌注射后２４ 小时,胸腺细胞凋亡百分率随白念菌剂量增加而增高;用４ ×１０６ 白念菌经尾静脉注射后,胸腺细胞凋亡百分率于６ 小时开始增高,２４ 小时达高峰,以后迅速降低;小鼠胸腺萎缩,胸腺重量于１２ 小时明显降低,且于７２ 小时达到最低水平;ＮＯＳ 抑制剂氨基胍仅能部分抑制白念菌诱导的小鼠胸腺细胞凋亡;热灭活的白念菌不能诱导胸腺细胞凋亡。结论　白念菌菌血症能诱导小鼠胸腺细胞凋亡,而且呈时间和剂量依赖性;白念菌诱导小鼠胸腺细胞凋亡有赖于真菌的代谢;白念菌诱导小鼠胸腺细胞凋亡的过程可能与ＮＯ 部分相关。     

初代培养的胸腺基质细胞对小鼠胸腺细胞的粘附和吞噬作用

目的 探讨胸腺基质细胞（TSC）对胸腺细胞的调节作用。方法 应用光镜、电镜和流式细胞术等，观察初代培养的TSC对胸腺细胞发育的调节作用。结果 光镜和电镜均可见，TSC可大量粘附和吞噬胸腺细胞，其中部分胸腺细胞发生凋亡。尽管与TSC共培养的胸腺细胞存活率高，凋亡率低，但其总数却显著减少。结论 TSC可通过粘附和吞噬作用，清除部分胸腺细胞。     

CD4T细胞缺乏对胸腺细胞凋亡影响的研究

通过对ＬＥＣ大鼠和正常对照鼠胸遥细胞的凋亡的研究，探讨了ＣＤ４Ｔ细胞缺乏对胸腺细胞凋亡的影响。电子显微镜，抗ｓｓ－ＤＮＡ抗体免疫细胞化学染色及ＤＮＡ片段梯形电泳带结果提示：ＣＤ４Ｔ细胞缺乏可诱导不成熟Ｔ细胞凋亡，对成熟Ｔ细胞无明显影响。     

超抗原SEB体外诱导胸腺细胞凋亡的研究

目的：观察超抗原SEB能否在APC的辅助下体外诱导胸腺细胞凋亡，并研究其机制。方法：SEB作用于与APC混合培养的胸腺细胞，用DNA凝胶电泳、DNA片段测定等判定胸腺细胞凋亡并作定量分析；用间接免疫荧光法标记并以流式细胞仪检测Fas、FasL的表达。结果：SEB处理组胸腺细胞有凋亡表现且凋亡率明显高于对照组，Fas、FasL的表达明显高于对照组。结论：SEB可以于体外在APC辅助下诱导胸腺细胞凋亡，Fas、FasL的高表达可能在凋亡中起重要作用，这可能为体外研究胸腺细胞阴性选择过程提供一种方法。     

Fas与体外胸腺细胞自发凋亡的关系

目的 探讨体外培养的胸腺细胞表达Fas、Fas-L与自发凋亡的关系。方法 应用流式细胞术,检测体外培养不同时间的胸腺细胞的凋亡率及Fas、Fas-L表达的阳性率。结果 体外培养的胸腺细胞自发凋亡率和Fas表达阳性率,均呈时间依赖性增加,Fas-L在体外培养24h时明显增加,体外培养的胸腺细胞Fas的表达与自发凋亡明显相关。结论 Fas是介导体外培养的胸腺细胞自发凋亡的重要分子。     

放线菌酮诱导大鼠胸腺细胞凋亡的电镜观察

利用透射电镜详细观察了放线菌酮体内诱导大鼠腺细胞凋亡的形态学变化。观察显示，腹腔注射放线菌酮４小时后，大鼠胸腺细胞发生凋亡，凋亡胸腺细胞胞核和胞质发生一系列形态学变化，产生凋亡小体。主要表现为染色质断裂、浓缩、边集、大部分细胞核变成花瓣状，其它细胞核变成半月状、黑洞样和空泡状；粗面内质网大量增殖，并包裹细胞成分形成自噬体；线粒体增多，嵴紊乱并空泡化。凋亡细胞及其形成的凋亡小体被其它细胞吞噬清除。结     

雌酮诱导小鼠胸腺细胞和腹腔巨噬细胞凋亡

研究雌酮对培养的小鼠胸腺细胞和腹腔巨噬细胞的影响，发现雌酮能够诱导胸腺细胞和巨噬细胞产生典型凋亡的形态学改变和特征性ＤＮＡ“梯形”结构。用２０μｍｏｌ／Ｌ，６０μｍｏｌ／Ｌ和８０μｍｏｌ／Ｌ的雌酮处理胸腺细胞２小时，或用２０μｍｏｌ／Ｌ和４０μｍｏｌ／Ｌ雌酮处理巨噬细胞２４小时，均可出现典型的ＤＮＡ“梯形”结构。２０μｍｏｌ／Ｌ雌酮介导巨噬细胞出现ＤＮＡ“梯形”结构的效应呈时间依赖性。１０μｍｏｌ／Ｌ的它莫西芬能够有效抑制由２０μｍｏｌ／Ｌ雌酮诱导胸腺细胞和巨噬细胞产生凋亡的特征性ＤＮＡ片段；这种抑制效应具有剂量依赖性。Ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ和放线菌酮亦能够抑制雌酮诱导胸腺细胞和巨噬细胞产生ＤＮＡ“梯形”结构的作用。     

雌二醇诱导小鼠胸腺细胞程序性死亡

研究雌二醇对培养小鼠胸腺细胞的影响，发现用１μｍｏｌ／Ｌ、１００ｎｍｏｌ／Ｌ和１０ｎｍｏｌ／Ｌ１７β－雌二醇处理胸腺细胞２ｈ能诱导胸腺细胞产生典型的程序性死亡形态学和特征必一ＤＮＡ“梯形”结构，并具有剂量依赖性。同时，Ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ和放线菌酮亦能抑制雌二醇诱导的胸腺细胞程序性死亡。     

地塞米松诱导小鼠胸腺细胞线粒体去极化与凋亡进程研究

目的研究地塞米松(DEX)诱导小鼠胸腺细胞凋亡进程中线粒体去极化作用特点。方法无菌获取Balb/c小鼠胸腺细胞,设对照组和DEX组;在5 h时点,利用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡;利用DiOC6(3)/PI双染流式细胞术检测细胞线粒体去极化与死亡;利用DiOC6(3)/Annexin V-PE双染流式细胞术检测凋亡过程中的去极化现象。结果在1×10-6mol/L DEX诱导下,小鼠胸腺细胞在5 h凋亡百分率为(36.20±5.11)%,对照组为(4.10±0.98)%,差异显著(P<0.01);DEX组坏死百分率为(4.07±0.24)%,对照组为(1.25±0.25)%,差异显著(P<0.01)。DEX组线粒体去极化增强仍存活的细胞所占百分率为(46.77±6.21)%,显著高于对照组的(12.80±4.55)%(P<0.01)。DEX组线粒体去极化增强且已启动凋亡的细胞为(35.34±4.19)%,显著高于对照组的(7.21±0.61)%(P<0.01)。DEX组线粒体去极化作用增强未凋亡的细胞为(13.68±1.27)%,显著高于对照组的(6.85±0.92)%(P<0.01)。结论DEX诱导小鼠胸腺细胞发生典型细胞凋亡和线粒体去极化增强,在该进程中,线粒体去极化增强发生在细胞膜磷脂酰丝氨酸外翻之前。     

胸腺细胞的发育与凋亡

骨髓淋巴干细胞进入胸腺后，经过初期、中期、后期阶段的分化，最终成熟为具有免疫功能的Ｔ细胞。胸腺细胞的成熟过程实质上是一选择过程，不合要求的细胞如自身反应性细胞随时被淘汰（负向选择），而正常分化的细胞被保留下来（正向选择）。细胞凋亡是负向选择时细胞死亡的主要机制，与正向选择也有密切关系。对于外周成熟Ｔ细胞而言，激活诱导的Ｔ细胞凋亡（ＡＩＣＤ）在控制免疫反应的强度、维持外周耐受方面具有重要的意义。象细胞增殖一样，细胞凋亡也受到严格地调控。     

地塞米松诱导大鼠胸腺细胞凋亡

细胞凋亡是细胞受到特异刺激后启动内在“自杀”程序而引起的一种控制性死亡。为观察糖皮质激素对免疫器官──胸腺的调节作用,本文加地塞米松与大鼠胸腺细胞共同孵育,胸腺细胞是现了凋亡的典型形态学改变;提取该培养细胞的ＤＮＡ进行琼脂糖凝胶电泳可见典型“阶梯状”条带,提供了该细胞发生凋亡的生物化学依据。本研究结果表明糖质激素能诱导胸腺细胞凋亡。     

白色念珠菌诱导小鼠胸腺细胞凋亡的基因调控

目的　探讨白色念珠菌诱导小鼠胸腺细胞凋亡过程中的基因调控作用。方法　经小鼠尾静脉注射白色念珠菌后 ,采用FCM技术测定胸腺凋亡细胞上 5个凋亡相关基因 ( p5 3,bax ,bcl 2 ,fas和c myc)产物的水平在不同时间组的变化。结果　p5 3和bax两个基因产物的水平明显增加 ;而bcl 2 ,fas和c myc基因产物的水平无明显改变。 结论　白色念珠菌诱导小鼠胸腺细胞凋亡 ,可能是经由基因调控的转录途径机制而发生 ,p5 3和bax基因在此过程起重要作用     

BAD和Bcl-X/L基因在小鼠胸腺细胞凋亡时的表达及其意义

目的检测BAD和Bcl-X/L基因在小鼠胸腺细胞凋亡的表达,探讨细胞凋亡调控基因在小鼠胸腺细胞凋亡时的作用。方法应用免疫组织化学染色法,观察不同剂量糖皮质激素诱导的小鼠胸腺细胞凋亡时BAD和Bcl-X/L基因的表达。结果免疫组织化学结果表明,正常对照组胸腺内BAD呈低表达,地塞米松组随剂量的增加BAD的表达成递增趋势,地塞米松各组与对照组比较差异有有统计学意义(P<0.05);正常对照组胸腺内Bcl-X/L呈高表达,地塞米松组随剂量的增加Bcl-X/L的表达成递减趋势,地塞米松各组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论促凋亡蛋白BAD和抗凋亡蛋白Bcl-X/L在糖皮质激素诱导引起的胸腺细胞凋亡调控中起重要作用。     

胸腺细胞凋亡的电镜观察和DNA裂解原位标记

目的：观察胸腺细胞凋亡的超微结构及其与ＤＮＡ裂解的相互关系。方法：对大鼠进行腹腔内糖皮质激素注射，对胸腺进行光、电镜观察，并作ＴｄＴ介导的ｄＵＴＰ缺口末端标记（ＴｄＴ－ｍｅｄｉａｔｅｄ－ｄＵＴＰｎｉｃｋｅｎｄｌａｂｅｌｉｎｇ，ＴＵＮＥＬ）。结果：皮质胸腺细胞出现凋亡的超微结构改变，少数细胞出现管网状结构。ＴＵＮＥＬ可标记不同阶段的凋亡细胞。结论：糖皮质激素可引起胸腺皮质细胞凋亡，上皮性网状细胞对凋亡细胞具有活跃的吞噬和降解作用。ＴＵＮＥＬ可选择性标记石蜡切片中的凋亡细胞，但对凋亡的判定需结合形态特点并与坏死鉴别     

地塞米松影响小鼠胸腺细胞c-Myc表达以及凋亡研究

目的: 研究在地塞米松(DEX)诱导的小鼠胸腺细胞凋亡过程中c-Myc信号变化特点及其与下游caspase-3变化的相关性,以进一步探讨c-Myc在小鼠胸腺细胞凋亡过程中的作用机制。方法:以终浓度1 μmol/L地塞米松诱导小鼠胸腺细胞凋亡,通过Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术测定30 min、3 h、6 h和9 h凋亡和坏死细胞比率,在6 h时点电镜观察细胞形态,利用SDS-PAGE及Western blot检测0 min、30 min、1 h和3 h细胞内c-Myc和caspase-3信号变化特点。结果:在1μmol/L DEX诱导下,小鼠胸腺细胞在30 min、3 h、6 h和9 h凋亡比率分别为(5.70±0.46)%、(35.79±1.13)%、(50.61±2.15)%和(35.52±1.66)%,对照组分别为(5.97±0.25)%、(10.20±0.71)%、(12.10±0.66)%和(15.45±0.51)%,组间差异显著(P＜0.01)。相应DEX组坏死比率分别为(4.58±0.51)%、(4.66±0.67)%、(25.36±1.64)%和(46.99±2.67)%,对照组分别为(4.38±0.39)%、(4.19±0.73)%、(9.63±1.25)%和(13.38±0.72)%,组间差异显著(P＜0.01);电镜观察结果显示DEX处理6 h见较多典型凋亡细胞。对照组在0 min即可检测到c-Myc的明显表达,30 min略见增多,1 h和3 h呈微弱的下降趋势;DEX组c-Myc在0 min表达强于对照组,30 min最强,而在1 h和3 h显著减弱;对照组caspase-3随培养时间延长而逐渐增多,而DEX组caspase-3在0 min表达增多,30 min最多,而在1 h和3 h显著减少。结论:本研究结果提示DEX诱导的小鼠胸腺细胞凋亡呈现c-Myc介导的细胞凋亡模式,而且在该过程中c-Myc和caspase-3信号存在着反馈抑制调节的可能性。