管花苷B对抗H2O2诱导的PC12细胞凋亡

目的：观察肉苁蓉提取物管花苷B对H2O2诱导的PC12细胞损伤的影响。方法：用MTT法检测细胞存活率，以激光共聚焦显微镜荧光染色法检测细胞内活性氧的产生和线粒体膜电位的变化，DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测细胞凋亡的发生，并用荧光酶标仪测定caspase-3的活性。结果：100μmol·L^-1H2O2处理细胞24h显著降低细胞的存活率；诱导细胞发生凋亡，凋亡率达48．0％；细胞内活性氧水平及caspase-3的活性显著升高；而线粒体膜电位却明显降低，红／绿荧光强度的比值由正常的5．97降低为0．41左右。而预先给予1、10或100mg·L^-1浓度的管花苷B处理细胞12h，可显著提高细胞存活率；并可有效抑制DNA ladder的发生；流式细胞仪检测凋亡率分别降低到30．9％、18．3％和6．2％；激光共聚焦显微镜结果显示管花苷B可明显降低细胞内活性氧的水平；并可逐渐恢复线粒体的高能量状态；caspase-3的活性不断降低，并呈现了一定的剂量依赖性。结论：管花苷B能显著地抑制H2O2诱导的PC12细胞凋亡，其神经细胞保护作用可能与其降低细胞内活性氧水平，维持线粒体膜电位的高能状态和抑制caspase-3的活性有关。     

管花苷B对抗H202诱导的PCI2细胞凋亡

目的:观察肉苁蓉提取物管花苷B对H:O:诱导的PCI2细胞损伤的影响.方法:用MTr法检测细胞存活率,以激光共聚焦显微镜荧光染色法检测细胞内活性氧的产生和线粒体膜电位的变化,DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测细胞凋亡的发生,并用荧光酶标仪测定caspase-3的活性.结果:100 μmol稬-1H2O2处理细胞24 h显著降低细胞的存活率;诱导细胞发生凋亡,凋亡率达48.O％;细胞内活性氧水平及caspase-3的活性显著升高;而线粒体膜电位却明显降低,红／绿荧光强度的比值由正常的5.97降低为0.41左右.而预先给予l、10或100 mg.L-1浓度的管花苷B处理细胞12 h,可显著提高细胞存活率;并可有效抑制DNA ladder的发生;流式细胞仪检测凋亡率分别降低到30.9％、18.3％和6.2％;激光共聚焦显微镜结果显示管花苷B可明显降低细胞内活性氧的水平;并可逐渐恢复线粒体的高能量状态;easpase-3的活性不断降低,并呈现了一定的剂量依赖性.结论:管花苷B能显著地抑制H2O2诱导的PCI2细胞凋亡,其神经细胞保护作用可能与其降低细胞内活性氧水平,维持线粒体膜电位的高能状态和抑制caspase-3的活性有关.     

N-乙酰半胱氨酸保护PC12细胞对抗化学性低氧诱导的损伤

目的 探讨活性氧( ROS)清除剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)能否保护PC12细胞对抗化学性缺氧引起的损伤.方法 应用化学性低氧模拟物氯化钴(CoCl2)处理PC12细胞,建立化学性缺氧损伤PC12细胞的实验模型.在CoCl2处理PC12细胞前60 min将NAC加入培养基中,作为预处理.应用CCK-8比色法检测细胞存活...     

木犀草素对H2O2氧化损伤的血管内皮细胞的影响

目的： 探讨木犀草素（luteolin）对氧化损伤的血管内皮细胞（endothelial cells）的影响。方法： 体外培养内皮细胞，将细胞分为7组，即空白对照组（control）、溶剂对照组（DMSO）、氧化损伤组（H₂O₂）、氧化损伤加入槲皮素对照组(quercetin+H₂O₂)、氧化损伤加入木犀草素低、中、高浓度组(luteolin-L+H₂O₂、luteolin-M+H₂O₂、luteolin-H+H₂O₂)。将750 μmol/L H₂O₂作用于加入槲皮素及不同浓度木犀草素预培养24h的内皮细胞，继续培养18h（半胱氨酸蛋白酶表达测定时间为14h），然后观察木犀草素对细胞培养液内乳酸脱氢酶（LDH）、一氧化氮（NO）、乳酸脱氢酶（LDH）丙二醛（MDA）含量和细胞活力的影响, 并对细胞进行流式细胞和免疫组化分析，观察该药对细胞凋亡和半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）表达的影响。 结果： 木犀草素呈剂量依赖性降低H₂O₂对内皮细胞生长抑制率，降低MDA、LDH量，增加培养液中 NO^-₂/NO^-₃含量，并显著抑制半胱氨酸蛋白酶-3阳性表达，减少细胞凋亡数量，各指标差异显著（P<0.01）。结论： 木犀草素可拮抗和修复过氧化氢诱导的血管内皮细胞的损伤，其作用可能与抗氧化、促进NO释放，抑制caspase-3表达有关。     

硫化氢对抗过氧化氢对PC12细胞的损伤作用

目的探讨硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)对抗过氧化氢(hydrogen peroxide,H2O2)对PC12细胞的损伤作用及有关机制。方法应用H2O2在PC12细胞建立氧化应激损伤的实验模型;应用甲氮甲唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,碘化丙啶(PI)染色流式细胞技术(FCM)检测细胞凋亡率,罗丹明123(Rhodamine 123,Rh123)染色FCM检测细胞线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP),双氢罗丹明123染色FCM检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)的含量。应用硫化氢钠(sodium hydrosulfide,NaHS)作为H2S的供体。结果200μmol和400μmolH2O2作用PC12细胞24h均使细胞的存活率明显降低及凋亡率显著增加,200μmolH2O2引起PC12细胞的MMP明显降低及ROS生成显著增多。当NaHS与H2O2(200或400μmol/L)共同作用于PC12细胞时,NaHS(100～400μmol/L)浓度依赖性的阻断H2O2引起PC12细胞的存活率降低及细胞凋亡率增加。400μmolNaHS明显地阻断200μmolH2O2引起PC12细胞的MMP降低及ROS增多。结论H2S能明显地保护PC12细胞对抗H2O2引起的损伤,阻断MMP降低及ROS生成可能是H2S的细胞保护机制之一。     

As2O3诱导肿瘤细胞凋亡依赖H2O2途径

目的：探讨三氧化二砷（arsenic trioxide，As₂O₃）对人乳头瘤病毒（HPV）阳性宫颈癌HeLa细胞和HPV阴性胰腺癌AsPC-1细胞的 凋亡诱导作用与细胞内H₂O₂水平的关系。方法：采用不同浓度的As 2O3处理HeLa细胞和AsPC-1细胞不同时段，显微镜下观察细胞的凋亡，噻唑蓝（MTT）法 测定细胞生长抑制情况；不同浓度的As₂O₃处理细胞2、5、8、12、24 h后，用DCFH-DA 标记检测细胞内的H₂O₂水平。结果：2 μmol/L As₂O₃处理HeLa 细胞48 h后细胞的生长受到明显抑制，表现出细胞凋亡的特征，随着As₂O₃浓度的增加 和作用时间的延长效果更加明显。而 1 μmol/L As₂O₃处理AsPC-1细胞24 h 即呈 现明显 的生长抑制和凋亡特征。As₂O₃处理HeLa细胞2 h细胞内H₂O₂的水平比对照组升高(1 0 μmol/L组达51.30%)，持续到8 h达到高峰（升高84.19%），12 h后下降，24 h水平与 对照组接近，并有明显的剂量依赖性。As₂O₃处理AsPC-1细胞2 h后，细胞内H₂O₂的 水平也明显升高（10 μmol/L组达79%），持续到5 h达到高峰（增高169%），且该细胞内H₂O₂水平升高比HeLa细胞更明显，12 h之后的变化情况与HeLa细胞类似。结论:As₂O₃诱导HeLa细胞和AsPC-1细胞凋亡与细胞内的H₂O₂水平改变有关,而与HPV的感染无明显相关性。H₂O₂积累是As₂O₃诱导细胞凋亡途径中的早期事件,H₂O₂可能在As₂O₃诱导肿瘤细胞凋亡途径中扮演类似第二信使的作用。     

红景天苷对MPP+诱导的PC12细胞凋亡的保护作用

目的:探讨红景天苷对MPP+诱导的PC12细胞凋亡是否具有保护作用.方法:采用MPP+诱导的具有多巴胺能神经元特性的PC12细胞凋亡作为PD的体外模型.实验分对照组、 500 μmoL/L MPP+诱导组、红景天苷(10、 50、 100 μmol/L)3个浓度预处理组.用MTT法测定细胞活性, 流式细胞术检测细胞凋亡, TUNEL法检测细胞凋亡断裂的DNA片段.结果:10、 50、 100 μmoL/L红景天苷对MPP+诱导的PC12细胞具有一定的保护作用.与MPP+组(50.2±1.8)%相比, 10、 50、 100 μmoL/L红景天苷预处理细胞活力分别上升为(65.1±1.0)%、 (69.5±2.3)%、 (80.9±2.0)%(P<0.05).流式细胞术检测提示正常组、 MPP+组、红景天苷预处理组(10、 50、 100 μmoL/L)凋亡百分率分别为0.9%、 34.5%、 26.9%、 20.1%、 14.2%.经红景天苷预处理后, 与MPP+组相比较细胞断裂的DNA片段明显减少.结论:红景天苷对MPP+诱导的细胞凋亡具有浓度依赖性的保护作用.     

红景天苷通过激活Nrf2减轻MPP~+诱导的PC12细胞凋亡

目的:研究红景天苷(对-羟基苯乙基-β-葡萄糖,p-hydroxyphenethyl-b-D-glucoside,Salidroside,SAL)对1-甲基-4-苯基吡啶离子(1-methy-4-phenylpyridinium,MPP+)诱导PC12细胞凋亡的影响及其可能机制。方法:4-甲基偶氮唑蓝(MTT)检测PC12细胞活性;Hochest 33258染色,观察细胞凋亡的变化;Western blot检测核因子2相关因子2(nuclear factor-erythroid 2 p45,related factor 2,Nrf2)蛋白的表达情况。结果:MPP+(500μmol/L)作用于PC12细胞24 h后,与正常组比较,细胞存活率降低(53.3%±3.4%,P<0.01);细胞内染色质固缩,呈致密浓染。SAL(10,100μmol/L)预处理24 h后,细胞存活率增加(60.8±1.9)%和(87.1±1.8)%(P<0.01);细胞核固缩明显减少,且具有剂量依赖性关系。此外,MPP+可使PC12细胞中Nrf2蛋白表达减少,而SAL预处理后,PC12细胞中Nrf2蛋白表达水平明显升高。结论:SAL对MPP+诱导的PC12细胞凋亡具有浓度依赖性的抑制作用,其作用机制可能与促进Nrf2蛋白的激活有关。     

栀子苷联合美满霉素拮抗PC12细胞凋亡的作用

目的:观察栀子苷和美满霉素联合应用对H_2O_2诱导PC12细胞凋亡的作用,并对其机制进行初步探讨。方法:处于对数生长期的PC12细胞随机分为对照组、模型组、栀子苷组、美满霉素组以及栀子苷/美满霉素联合应用组。用300μmol/L H_2O_2诱导6 h建立PC12细胞凋亡模型。MTT法测定细胞存活率,比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)活性,倒置相差显微镜观察细胞形态,Hoechest 33258荧光核染色观察细胞凋亡状况,Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western Blot测定Caspase-3蛋白表达。结果:与模型组相比,栀子苷组和美满霉素组PC12细胞存活率提高,LDH释放量减少,细胞凋亡率降低,同时Caspase-3蛋白表达减少(P均0.05);与栀子苷组和美满霉素组相比,栀子苷/美满霉素联合应用组PC12细胞的存活率进一步提高,LDH释放量进一步减少,细胞凋亡率进一步降低,同时Caspase-3蛋白表达进一步减少(P0.05或P0.01)。以上指标相比,差异均有统计学意义。结论:栀子苷与美满霉素联合应用较单一应用能更有效拮抗PC12细胞凋亡,其机制可能与抑制Caspase-3蛋白表达有关。     

脂联素激活AKT抑制H2O2诱导的大鼠心肌细胞凋亡

目的: 观察脂联素(adiponectin)对H₂O₂诱导的大鼠心肌细胞(H9c2)凋亡的影响并探讨其作用机制。方法: 应用脱氧三磷酸尿苷缺口末端标记(TUNEL)法观察脂联素对H₂O₂诱导的H9c2细胞凋亡的影响;应用Western blotting法观察脂联素对Akt和caspase-3活性的影响。结果: 脂联素对H₂O₂诱导的H9c2细胞凋亡具有显著的抑制作用(P<0.01)。脂联素直接激活Akt并增加了H₂O₂诱导的Akt活性,对H₂O₂诱导的caspase-3激活有显著抑制作用(P<0.01)。 Akt上游激酶PI3K的特异抑制剂LY294002 不但增加了H₂O₂诱导的H9c2细胞凋亡率,而且消除了脂联素的抗凋亡作用。结论: 脂联素对H₂O₂诱导的H9c2细胞凋亡具有抑制作用,其机制可能与其激活PI3K/Akt通路、抑制caspase凋亡信号通路有关。     

Diazoxide对缺氧大鼠肺动脉平滑肌细胞内氧自由基的变化及细胞增殖的作用

目的： 研究线粒体膜上ATP敏感钾通道（MitoK_ATP）开放剂diazoxide和线粒体膜电位（ΔΨm）在缺氧导致的大鼠肺动脉平滑肌细胞内氧自由基的变化及细胞增殖/凋亡失衡中的作用，探索缺氧性肺动脉重建和肺动脉高压形成的发生机制。方法： 取大鼠正常肺组织，分离出肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）进行常氧或慢性缺氧培养。将样本分为6组：① 正常对照组；② 线粒体膜上ATP敏感钾通道（MitoK_ATP）开放剂diazoxide组；③ MitoK_ATP 阻断剂5-HD组；④ 慢性缺氧(CH)组；⑤ CH+diazoxide组；⑥ CH+5-HD组。利用激光共焦显微镜（Leica SP-1 USA）成像检测线粒体膜电位，荧光染色检测细胞内氧自由基含量，流式细胞仪检测细胞周期和MTT法检测细胞增殖情况。结果： ① Diazoxide作用24 h后，R-123荧光强度明显强于正常对照组，线粒体膜电位去极化，细胞内氧自由基含量明显高于正常对照组，细胞增殖明显多于正常对照组、凋亡少于正常对照组，P<0.05；而5-HD作用24 h后，上述指标与正常对照组相比较，均无显著差异,P>0.05；②慢性缺氧24 h，结果与diazoxide组相似，R-123荧光强度明显强于正常对照组，线粒体膜电位去极化，细胞内氧自由基含量明显高于正常对照组，细胞增殖明显多于正常对照组、凋亡少于正常对照组，P<0.05；CH+diazoxide组，R-123荧光强度和线粒体膜电位去极化明显强于缺氧组，细胞内氧自由基含量明显高于缺氧组，细胞增殖明显多于缺氧组、凋亡少于缺氧组，P<0.05；CH+5-HD组，R-123荧光强度和线粒体膜电位去极化明显弱于缺氧组，细胞内氧自由基含量明显低于缺氧组，细胞增殖明显少于缺氧组、凋亡多于缺氧组，P<0.05;R-123荧光强度、MTT的A值与细胞内氧自由基含量均呈显著正相关；凋亡细胞百分比与细胞内氧自由基含量呈显著负相关。结论： 本实验结果显示，diazoxide能够通过开放线粒体膜上ATP敏感的钾通道，引起ΔΨm去极化，ΔΨm的变化影响细胞内氧自由基的含量，氧自由基可能作为信号分子通过影响肺动脉平滑肌细胞的增殖/凋亡的平衡，参与了缺氧性肺动脉重建和肺动脉高压的发生和发展过程。     

原花青素对Aβ_(25-35)作用下PC12细胞的保护作用

目的:探讨原花青素对Aβ_(25-35)作用下PC12细胞的保护作用及机制。方法:25μmol/L的Aβ_(25-35)作用于PC12细胞48 h,预先加入25、50和100 mg/L的原花青素干预24 h。采用MTT法检测细胞存活率,DCFH-DA单染法检测细胞活性氧簇(ROS)的含量,JC-10单染法检测细胞线粒体膜电位,AnnexinⅤ/PI双染法检测细胞凋亡,Western blot检测凋亡蛋白caspase-3的蛋白水平。结果:原花青素可提高Aβ_(25-35)作用下PC12细胞的存活率,降低胞内ROS含量,阻止线粒体膜电位下降,抑制caspase-3的活化(P0.05或P0.01),从而抑制Aβ_(25-35)诱导的PC12细胞凋亡。结论:原花青素对Aβ_(25-35)作用下的PC12细胞具有明显的保护作用,其作用机制可能是通过清除Aβ_(25-35)诱导产生的ROS而减轻对线粒体膜的损伤作用,从而抑制细胞凋亡的发生。     

ERK1/2信号通路介导同型半胱氨酸对PC12细胞的损伤作用

目的观察同型半胱氨酸(Homocysteine,Hcy)对PC12细胞的损伤作用,探讨胞外信号调节蛋白激酶1/2(extracellular signal-regulated protein kinases1and2,ERK1/2)通路在其中的作用。方法台盼蓝拒染法和MTT比色法检测细胞存活率,相差倒置显微镜观察细胞形态,Hoechst33258染色荧光照相术检测细胞凋亡,罗丹明123染色荧光照相术和流式细胞术检测细胞线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP),Western blot检测ERK1/2磷酸化的水平。结果Hcy(2.5～20mmol/L)作用24h后,可浓度依赖性地抑制PC12细胞的存活率;10mmol/L Hcy处理24h后,PC12细胞出现核固缩等典型的凋亡特征;Hcy能明显地降低PC12细胞的MMP;Hcy能诱导ERK1/2磷酸化,特异性的ERK1/2阻断剂U0126可显著抑制Hcy对PC12细胞的损伤作用。结论Hcy可引起PC12细胞损伤,此作用与其抑制MMP及诱导ERK1/2磷酸化有关。     

nmhaFGF对过氧化氢诱导的NRK52E细胞凋亡的拮抗作用

目的：研究过氧化氢诱导NRK52E细胞凋亡模型的制作方法，探讨非促分裂型人酸性成纤维细胞生长因子（non-mitogenic human acidic fibroblast growth factor，nmhaFGF）对过氧化氢诱导的大鼠肾小管上皮细胞（NRK52E细胞）凋亡是否具有拮抗作用。方法： 用MTT、Hoechst33342染色以及流式细胞仪检测确定诱导细胞凋亡的过氧化氢的浓度，制作NRK52E细胞凋亡模型，以不同浓度的nmhaFGF作用于凋亡细胞，并以haFGF作为对照，观察nmhaFGF对NRK52E细胞凋亡的影响。结果： 0.4 mmol/L过氧化氢作用NRK52E细胞18 h是诱导NRK52E细胞凋亡的最佳条件。nmhaFGF 0.01、0.03、0.10、0.30、1.00 mg/L剂量范围，随着nmhaFGF浓度升高，细胞凋亡率明显降低，而相同浓度haFGF各剂量组细胞凋亡率呈现不同程度的降低，但haFGF剂量组量效关系不明显。结论： 切除促分裂序列的haFGF可以发挥对NRK52E细胞凋亡的保护作用，该保护作用可能是通过其非促分裂活性实现的。     

一氧化氮和caspase-3在多巴胺诱导PC12细胞

目的：探讨一氧化氮（NO）和半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）在多巴胺诱导PC12细胞凋亡中的可能作用。方法：流式细胞仪定量检测PC12细胞的凋亡率,原位末端标记法（TUNEL）观察凋亡细胞的形态,Griess法测定NO₂^-的浓度,荧光分光光度计法检测caspase-3的活力,半定量RT-PCR法检测诱导型一氧化氮合酶（iNOS）mRNA的表达水平。结果：多巴胺（0.15-0.60 mmol/L）可剂量依赖性地诱导PC12细胞凋亡,表现为凋亡细胞的TUNEL染色阳性;iNOS mRNA的表达、NO的合成及caspase-3的活力均有明显的增加（P<0.01）;特异性的iNOS抑制剂aminoguanidine和caspase-3抑制剂Ac-DEVD-CHO通过减少NO的生成和抑制caspase-3的激活阻断PC12细胞凋亡。结论：NO的生成可能是多巴胺诱导PC12细胞凋亡的触发因子,caspase-3的激活是其中的效应因子。     

Thapsigargin-induced apoptosis was prevented by glycogen synthase kinase-3 inhibitors in PC12 cells

Uncontrolled calcium stress has been linked causally to a variety of neurodegenerative diseases, including ischemia, excitotoxicity and Alzheimer's disease. Thapsigargin, which increases [Ca²⁺]_i, induces apoptotic cell death (chromatin condensation and DNA fragmentation) accompanied by caspase-3 activation in PC12 cells. We examined whether GSK-3 is involved in thapsigargin-induced cell death by using GSK-3 inhibitors in PC12 cells. Cells treated with 0.1 μM thapsigargin for 24 h shrank. The injured cells underwent chromatin condensation and nuclear fragmentation, indicating apoptotic cell death. We assayed the effects of selective GSK-3 inhibitors, SB216763, azakenpaullone and alsteropaullone on thapsigargin-induced apoptosis. These inhibitors completely protected cells from thapsigargin-induced apoptosis. Alsterpaullone did not reduce the GRP78 protein expression induced by thapsigargin, suggesting that GSK-3 activation is not involved in induction of GRP78. In addition, GSK-3 inhibitors inhibited caspase-3 activation accompanied by thapsigargin-induced apoptosis. We showed in this report that thapsigargin-induced apoptosis is prevented by GSK-3 inhibitors, suggesting that thapsigargin induces caspase-dependent apoptosis mediated through GSK-3 activation in PC12 cells.     

低剂量亚硝酸钠预适应对过氧化氢损伤PC12细胞的保护作用

目的:研究亚硝酸钠(NaNO2)预适应对过氧化氢(H2O2)损伤鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞的保护作用。方法:分别以系列浓度的NaNO2作用PC12细胞24h,细胞的增殖活性采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和活细胞计数法,用Hoechst 33258染色计数凝集和碎核细胞占细胞总数的百分比为细胞凋亡率。以3mmol/L浓度的NaNO2预适应细胞24h后,加或不加一氧化氮清除剂亚铁血红蛋白(hemo),再用1.1mmol/L H2O2暴露6h,细胞存活率检测用MTT、凋亡检测用流式细胞术和Hoechst 33258/PI染色。比色法测定丙二醛(MDA)含量和酶活性。结果:NaNO2对PC12细胞增殖作用呈典型的β型曲线,最大低促效应出现在第24h,最大低促效应剂量为1.4mmol/L,最大促增殖效应为对照组的156%,未观察到不良效应水平(NOAEL)为6mmol/L,细胞增殖半数抑制率(IC50)值为45mmol/L。用3mmol/L NaNO2预适应24h,然后用1.1mmol/LH2O2暴露6h,细胞增殖活性比单纯H2O2组明显升高(P0.05)。用1.1mmol/L H2O2暴露6h,非预适应组细胞凋亡率为44.9%;3mmol/L NaNO2预适应组细胞凋亡率为19.1%,差异显著(P0.05),这种现象可以被一氧化氮清除剂亚铁血红蛋白(hemo)所抑制。3mmol/L NaNO2预适应组细胞超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平升高,MDA含量降低(P0.05)。结论:低于6mmol/L NaNO2暴露能够引起PC12细胞的低促效应。低浓度NaNO2预适应,通过降低细胞脂质过氧化,提高抗氧化酶活性,保护过氧化氢毒害的PC12细胞。亚硝酸盐还原为一氧化氮在细胞保护过程中起关键作用。