质谱技术分析多发性骨髓瘤患者血清差异蛋白

目的应用双向电泳(2-DE)和质谱技术分析多发性骨髓瘤(MM)患者血清中的差异表达蛋白,寻找MM特异性蛋白标记物。方法收集MM患者5例、其他血液系统恶性肿瘤患者及正常对照者血清各10例,三组样本等体积混合,去除高丰度白蛋白和IgG,应用2-DE分离3组血清样本,凝胶经银染显色和图像数据分析识别差异蛋白质点,以基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对差异蛋白质点进行鉴定。结果通过凝胶软件分析MM与疾病对照组及正常对照组血清2-DE图谱,共得到51个三倍以上差异蛋白点,对上述差异蛋白进行MALDI-TOF-MS质谱分析,共鉴定出22种阳性蛋白,其中13种蛋白表达上调,包括高表达蛋白如丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶RIO1亚型2、Rab相关蛋白Rab37亚型2、HP蛋白、锌指结构α2糖蛋白等;9种蛋白表达下调,包括α2-HS-糖蛋白、转铁蛋白、多聚素-1等。结论 MM组与疾病对照组和正常对照组间存在差异表达的蛋白质,这些差异蛋白有助于MM早期诊断和鉴别诊断,并为MM发病机制的进一步研究提供线索。     

多发性骨髓瘤患者外周血CD3ε基因的表达特点

目的:建立荧光定量PCR法检测CD3ε链表达水平的方法,了解多发性骨髓瘤(MM)T细胞信号传导分子CD3ε基因的表达特点。方法:采用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR和相对定量分析法检测22例MM患者及22例正常人外周血单个核细胞CD3ε基因的表达情况,以β2微球蛋白基因(β2M)作为内参,22例健康人作为对照,采用相对定量公式:2-△Ct×100%,计算MM患者CD3ε基因相对mRNA表达量。结果:MM患者和正常人外周血单个核细胞均表达CD3ε基因,具体表达量呈现很大的个体差异性。MM患者CD3ε基因mRNA相对表达量最高为39.78%,最低为0.48%,正常人CD3ε基因mRNA相对表达量最高为5.15%,最低为0.01%。MM患者CD3ε基因表达量明显高于正常人(P0.05)。结论:成功建立SYBR GreenⅠ荧光定量PCR法检测CD3ε链表达水平的方法,率先报道了多发性骨髓瘤中CD3ε基因高表达的特点,为了解多发性骨髓瘤T细胞免疫学特点提供新的资料。     

脓毒症患者中性粒细胞差异表达基因及信号通路的生物信息学分析

目的寻找脓毒症患者中性粒细胞中发生差异变化的致病相关基因及关键通路。方法从基因表达汇编(GEO)数据库下载GSE6535、 GSE49755、 GSE49756、 GSE49757,其中包含143个实验组样本及65个对照组样本的基因芯片数据。采用R软件的相关程序包筛选鉴定出中性粒细胞差异表达基因(DEG)。通过两两交集,得到共93个DEG,进一步用DAVID、 STRING及Cytoscape里的ReactomeFIPlugIn和Cytohubba应用程序等多种方法进行基因功能和通路富集分析、 PPI网络分析和关键基因分析。结果确定中性粒细胞最重要的关键DEG,包括Toll样受体2(TLR2)、原癌基因SRC、基质金属蛋白酶9(MMP9)、白细胞介素1受体2(IL1R2)、抑制蛋白β1(ARRB1)、白细胞介素1受体相关激酶3(IRAK3)、白细胞介素18受体1(IL18R1)、白细胞介素18受体相关蛋白(IL18RAP)、丝氨酸/苏氨酸激酶17b(STK17B);发现了一些涉及脓毒症患者致病相关的通路以及免疫相关的生物学过程。结论这些基因可能通过多种信号通路引起脓毒症的发生发展。     

肾脏纤维化大鼠模型尿液中差异表达基因筛选及生物信息学分析

目的研究大鼠肾脏纤维化(RF)模型尿液中差异表达的基因,并对其进行生物信息学分析。方法将大鼠分为对照组和纤维化模型组,单侧输尿管结扎术建立大鼠肾脏纤维化模型,收集尿液。提取总RNA,构建测序文库并进行转录组测序。对差异表达的mRNA进行了GO分析和KEGG分析,并对miRNA的前体和lncRNA的家族进行预测和分类。结果肾脏纤维化模型组的尿液和对照组相比,得到813条表达上调转录本数据以及213条表达下调的转录本数据。结论利用转录组高通量测序结合相关生物信息学分析,可为肾脏纤维化诊断靶点提供新的可能。     

多发性骨髓瘤干细胞的来源及分化

背景：多发性骨髓瘤干细胞可能源于正常干细胞的积累突变和通过基因突变重新获得自我更新能力的祖细胞或已经完全分化的成熟细胞,其特异标志物正处于研究阶段。 目的：概述多发性骨髓瘤干细胞的来源、生物学特性以及研究进展。 方法：应用计算机检索1998年1月至2012年5月万方数据库相关文章,检索词“多发性骨髓瘤干细胞”,并限定文章语言种类为中文。同时计算机检索1998年1月至2012年5月PubMed数据库相关文章,检索词“stem cells,multiple myeloma,tumors”,并限定文章语言种类为English。共检索到文献251 篇,最终纳入符合标准的文献31篇。 结果与结论：多发性骨髓瘤干细胞可能来源于记忆B细胞,具有自我更新和分化潜能,CD19和CD20是目前应用得最多的多发性骨髓瘤干细胞表面标记物,多发性骨髓瘤干细胞的研究对阐明多发性骨髓瘤发生机制、生物学行为及临床治疗、预后判断都具有重要意义。     

系统性硬化症线粒体功能相关的差异表达基因的生物信息学分析

目的通过分析线粒体功能相关基因在系统性硬化症(SSc)患者皮肤活检组织中的表达情况来研究线粒体和SSc之间的关系。方法使用基因表达汇编(GEO)数据库中SSc皮肤活检组织基因芯片表达谱数据,采用t检验和倍数变化(FC)的差异基因分析方法筛选出线粒体功能相关的差异表达基因(DEG),并对其进行功能注释、功能富集和蛋白质相互作用网络分析。结果在SSc组织中共识别出422个显著差异的DEG,其中23个DEG是线粒体功能相关基因。对这23个基因进行功能注释和富集分析,发现异常表达的线粒体功能相关基因主要影响线粒体能量供应、细胞代谢等生物学过程。结论 SSc的发生发展伴随着线粒体功能相关基因的异常表达,提示线粒体功能异常与SSc发病相关。     

胰腺癌患者中miR-34a 表达及其靶基因生物信息学分析

目的:应用生物信息学分析方法检测miR-34a及其靶基因在胰腺癌发生发展过程中的作用。方法:运用Oncomine工具检测胰腺癌患者miR-34a靶基因差异表达水平;使用miRecords在线软件进行靶基因预测,并结合Genecards数据库中胰腺癌相关基因,对所得到的靶基因进一步进行GO富集分析和KEGG通路分析。结果:miR-34a在胰腺癌患者中表达水平明显降低,其核苷酸序列在多物种间呈高度保守性,受miR-34a调控且与胰腺癌相关的潜在靶基因共73个,包括BCL2、MYC、Met、CDK6、SIRT1等。GO分析发现miR-34a的靶基因参与生物过程调节、细胞过程调节、器官发育、多细胞有机体发育、系统开发、胚胎发育等多个生物过程; KEGG分析发现miR-34a显著富集在结肠癌通路、小细胞肺癌通路、膀胱癌通路、Notch、Wnt等信号通路中。结论:miR-34a通过靶向作用及其靶基因调控,影响胰腺癌患者体内多种信号通路的网络调控,从而参与胰腺癌疾病的发生和发展。     

系统性红斑狼疮患者中miR-410 表达及其靶基因生物信息学分析

目的:检测miR-410 在系统性红斑狼疮患者(SLE)中的表达水平,运用生物信息学方法研究miR-410 及其靶基因在SLE 发生发展过程中的作用。方法:定量检测miR-410 在SLE 患者外周血单个核细胞中的表达水平,并通过miR-410序列分析,靶基因预测和Genecards 数据库分析,进一步对其靶基因进行GO 富集和KEGG Pathway 分析。结果:miR-410 在SLE 患者中表达显著降低,其核苷酸序列在多物种间呈高度保守性。受miR-410 调控且与SLE 疾病相关的潜在靶基因包括FASLG、CSF2、IFNAR2、MAPK1、PLCG2、IL4 等。GO 分析发现miR-410 的靶基因参与细胞生长增殖、程序性死亡、细胞分化、免疫系统发育等多个生物过程。KEGG Pathway 分析发现miR-410 的靶基因显著富集在肿瘤途径信号通路、细胞因子-细胞因子受体相互作用信号通路、胶质瘤信号通路、黑色素瘤信号通路、TGF-β和JAK-STAT 信号通路等。结论:miR-410 可能通过直接靶向作用其调控靶分子,影响SLE 患者体内多条信号通路的网络调控,从而参与SLE 疾病的发生和发展。     

造血干细胞移植治疗难治性多发性骨髓瘤

背景：近年来,多发性骨髓瘤发病率有所增长,然而治疗相当棘手。造血干细胞移植技术不断改进,新的药物应用于临床,以及移植联合新药治疗,为患者带来新的希望。 目的：总结近年来造血干细胞移植及其与新药联用方案治疗难治性多发性骨髓瘤的新进展。 方法：应用计算机检索PubMed、ISI平台BP+Medline数据库及万方、维普数据库1990年1月至2012年4月有关造血干细胞移植及免疫调节剂、蛋白酶体抑制剂联合移植的文献报道,排除陈旧的、内容重复的文章。 结果与结论：检索及筛选后保存22篇中英文文献,并对其进行分析,得出造血干细胞移植以及联合新药的治疗策略使得大剂量化疗和自体干细胞移植治疗的效果得到显著改善。移植前加用新药诱导和移植后用新药维持治疗可以延缓进展期,提高总体生存率。异基因造血干细胞移植治疗可以使多发性骨髓瘤患者获得长期的分子生物学缓解并治愈。多种治疗方法的组合及优缺点比较,可更好的为临床医师在实践中根据患者实际情况进行决策,最大程度满足患者的需要。     

多发性骨髓瘤相关基因MMSA-1的表达及定位研究

目的:研究多发性骨髓瘤(MM)相关基因MMSA-1的表达谱,蛋白表达水平与细胞增殖的关系及其细胞定位。方法:应用实时荧光定量PCR检测MMSA-1基因在MM、白血病、非肿瘤疾病患者及正常人中的表达水平,并同DKK1基因进行相关比较。使用不同浓度伊班磷酸对骨髓瘤RP-MI8226细胞进行处理,流式细胞术(FCM)检测处理后8226细胞细胞周期的变化及早期凋亡情况,免疫组化法检测8226细胞MMSA-1蛋白表达水平的变化。构建pCMV-Myc真核表达载体,采用抗体免疫组化法确定MMSA-1蛋白的细胞定位。结果:MMSA-1基因在MM、白血病、非肿瘤疾病及正常人中均有表达,在MM细胞中mRNA表达显著高于其他组;MM-SA-1与DKK1基因在MM中的高表达具有一致性,且含量呈正相关。伊班磷酸可以使8226细胞生长受阻于S期,并减少细胞成熟促进因子的释放,从而使细胞周期停滞,促进其早期凋亡,同时可以下调MMSA-1蛋白的表达。MMSA-1主要表达于细胞膜上,但在细胞质内也可见少量蛋白。结论:MMSA-1与MM细胞增殖和溶骨破坏密切相关,为进一步研究其功能及基于该抗原的免疫治疗奠定了基础。     

差异表达基因分析

细胞在增殖、分化及对外界刺激反应过程中 ,可伴随某些特殊基因的表达。利用这一特性 ,通过比较细胞在不同状态及不同分化阶段基因表达的差异 ,可以发现与细胞分化 /生长相关的基因。近年来国外学者发展了几种能有效进行差异表达基因分析的技术和方法 ,包括差异显示 PCR、代表性差异分析、抑制性消减杂交及 DNA微阵列等。本文主要对目前主要技术方法作一综述。     

HTGF-β1基因转染脂肪干细胞及其表达

目的探讨携带人转化生长因子β1(hTGF-β1)的腺病毒载体(adeno-hTGF-β1)转染人脂肪干细胞(ADSCs)及其表达的可行性。方法重组adeno-hTGF-β1经293细胞包装、扩增后,转染人ADSCs。转染72h后,RT-PCR检测重组腺病毒转染后ADSCs的hTGF-β1 mRNA表达,免疫细胞化学染色定性和酶联免疫吸附(ELASA)定量测定hTGF-β1蛋白的表达。结果转染后72h,ADSCs能有效表达hTGF-β1 mRNA,免疫细胞化学证实重组腺病毒转染后ADSCs胞浆内有大量棕黄色的hTGF-β1蛋白表达,ELISA结果提示其hTGF-βl表达量是转染Adeno-lacZ的3.85倍(<0.05)。结论重组腺病毒adeno-hTGF-β1能够被导入ADSCs并表达hTGF-β1蛋白,为hTGF-β1基因转染的ADSCs在软骨组织工程应用中奠定了基础。     

多发性骨髓瘤患者校正血钙的临床分析

目的 分析我院多发性骨髓瘤患者校正前后血钙的差异,及校正后血钙与疾病的相关性。方法 回顾性分析我院2011年1月~2017年5月确诊的58例初发多发性骨髓瘤患者实验室检查、影像学检查等临床资料,对其血清白蛋白、血钙水平、血红蛋白、血肌酐、β2-微球蛋白、血清LDH、溶骨性病变等多项指标进行分析。结果 经血清白蛋白公式校正后D-S分期Ⅲ期的患者高钙血症发生率比较正前升高,Ⅰ期、Ⅱ期校正前后血钙差异无统计学意义（P＞0.05）;高钙组血清LDH、溶骨性病变均高于非高钙组,差异有统计学意义（P＜0.05）,而两组血红蛋白、肌酐、β2-微球蛋白相比,差异无统计学意义（P＞0.05）;肾功能不全组血钙升高明显,校正后血钙更能准确提示患者病情严重程度。结论 多发性骨髓瘤校正后的血钙更能真实反映与之相符的疾病状态下真实的血钙水平,更能有效预测病情严重程度。     

多发性骨髓瘤中p15基因高甲基化的研究

目的：探索p15（MST INK4b）基因在多发性骨髓瘤中的作用特点和甲基化发生的规律。方法：用甲基化特异的PCR的方法-MSP（methylation-specific PCR）,检测23例多发性骨髓瘤（multiple myeloma, MM）p15基因甲基化的发生率。结果：MM中甲基化的发生率为73.5%(17/23),扩增产物为148 bp片段。其中4例Ⅰ期,骨髓象为浆细胞型的MM p15基因未发生甲基化;1例Ⅱ期和1例Ⅲ期,骨髓象为分化成熟的浆细胞的MM中p15基因未发生甲基化;在Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ期中多数为浆细胞型或混合型中的幼稚浆细胞的病例易发生甲基化。Ⅰ、Ⅱ期和Ⅲ期中甲基化的发生率分别为55%(5/9)、100%(7/7)和71.4%(5/7)。结论：p15基因甲基化可能是MM发病原因之一,与病程的进展和预后有一定的关系。     

2型糖尿病患者血浆microRNA差异表达及生物信息学分析

目的:构建2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)患者血浆microRNA(miRNA)差异表达谱,探讨miRNA作为T2DM诊疗靶标的可能性。方法:采用miRNA芯片技术检测T2DM患者血浆中miRNA差异表达情况,用实时荧光定量PCR(real-time quantitative p...     

多发性骨髓瘤负性相关基因DAZAP2的真核表达及定位

目的 构建无精症相关蛋白2（DAZAP2）真核表达重组载体, 对基因进行细胞定位. 方法提取1例正常人骨髓单个核细胞总RNA, 以逆转录产物作为模板,PCR扩增DAZAP2的开放阅读框（ORF）.采用定向克隆法与真核表达载体pEGFP-N1连接,转染大肠杆菌DH5α,经双酶切及测序证实.脂质体法转染COS7细胞后,运用Western 印迹及免疫定位技术检测表达产物.结果 测序证实真核表达重组质粒的阅读框没有发生改变,转染重组质粒的细胞表达融合蛋白DAZAP2-EGFP,主要在COS7细胞质中表达.结论 成功获得了DAZAP2真核表达重组质粒并有效地表达重组融合蛋白,DAZAP2主要定位在细胞质中的泡状分泌结构上.     

多发性骨髓瘤负性相关基因DAZAP2的真核表达及定位

目的 构建无精症相关蛋白2(DAZAP2)真核表达重组载体, 对基因进行细胞定位. 方法提取1例正常人骨髓单个核细胞总RNA, 以逆转录产物作为模板,PCR扩增DAZAP2的开放阅读框(ORF).采用定向克隆法与真核表达载体pEGFP-N1连接,转染大肠杆菌DH5α,经双酶切及测序证实.脂质体法转染COS7细胞后,运用Western 印迹及免疫定位技术检测表达产物.结果 测序证实真核表达重组质粒的阅读框没有发生改变,转染重组质粒的细胞表达融合蛋白DAZAP2-EGFP,主要在COS7细胞质中表达.结论 成功获得了DAZAP2真核表达重组质粒并有效地表达重组融合蛋白,DAZAP2主要定位在细胞质中的泡状分泌结构上.     

自体造血干细胞移植治疗多发性骨髓瘤的新进展

背景：自体造血干细胞移植是治疗多发性骨髓瘤的有效手段,诱导化疗后行自体造血干细胞移植已成为多发性骨髓瘤的标准治疗方案,多单位、多中心进行了大规模的研究报道。如何减少药物毒副反应、移植相关并发症及改善长期生存是目前关注的重点。 目的：综述自体造血干细胞移植治疗多发性骨髓瘤的新进展。 方法：应用计算机检索2006年1月至2012年11月PubMed、CNKI数据库、维普数据库、万方数据库、free medicaljournals.com网络资源关于自体造血干细胞移植治疗多发性骨髓瘤的文献。英文检索词“Autologous hematopoietic stem cell transplantation, multiple myeloma”;中文检索词“自体造血干细胞移植,多发性骨髓瘤”。选中相关性强的46篇进行综述。 结果与结论：大剂量化疗联合自体造血干细胞移植治疗多发性骨髓瘤的疗效优于传统化疗。但单次自体造血干细胞移植后仍有许多患者不能得到很好的缓解,疾病最终难免复发;异基因造血干细胞移植受到供体来源限制,且治疗相关病死率高,运用受到限制。因此目前的新发展方向包括：在单次自体造血干细胞移植的基础上进行2次自体造血干细胞移植、自体联合减低预处理强度的异体移植以及药物巩固维持治疗。新型药物蛋白酶体抑制剂及免疫调节剂在诱导缓解、预处理、尤其是巩固维持阶段的使用,使多发性骨髓瘤的治疗总体反应率及长期生存得到显著改善。