人骨髓间充质干细胞体外诱导分化成心肌细胞及其在心肌细胞移植术中的潜能性研究

目的培养人骨髓间充质干细胞（human marrow mesenchymal stem cell，hMMSCs），体外诱导分化成心肌细胞（cardiomyocytes，CM），将细胞移植入裸鼠皮下，观察其在细胞移植中有无成瘤改变，是否具有细胞移植的潜能性。方法体外培养扩增hMMSCs，流式细胞仪鉴定其纯度；用5-氮杂胞苷（5-Aza，10μmol／L）体外诱导成CM，并进行鉴定；将诱导成CM的hMMSCs接种于裸鼠皮下，移植后18d分别取接种局部皮下及心肌组织，进行组织化学染色。结果体外培养扩增出hMMSCs，流式细胞检查CD44阳性，表达Vimentin；hMMSCs经5-Aza诱导可分化成CM，表达心肌特异性标记TroponinⅠ及Desmin，透镜观察可见肌丝样结构；进行细胞移植的裸鼠注射局部皮下组织没有形成结节样结构，但发现有表达TroponinⅠ、Desmin及Vimentin的细胞；此外，在心肌组织中也发现有表达这三种抗体的hMMSCs。结论hMMSCs可体外分离培养扩增，具有向CM分化的潜能，体外诱导分化成CM的hMMSCs在细胞移植中并没有成瘤性，且经皮下细胞移植诱导分化成CM的hMMSCs具有向心脏归巢的现象，可用于心肌损伤的细胞移植。     

5-氮胞苷与HGF因子体外联合诱导人骨髓间充质干细胞诱导分化为心肌样细胞实验探讨

目的探讨5-氮胞苷(5-Aza)与肝细胞生长因子(HGF)作为诱导剂,对人骨髓间充质干细胞(hMSCs)分化为心肌样细胞的影响。方法采用密度梯度培养法与贴壁培养法相结合分离培养hMSCs,取第3代hMSCs随机分为3组,分别为HGF因子诱导分化组、5-Aza诱导分化组、HGF因子与5-Aza联合诱导分化组,诱导后培养4周,采用免疫细胞化学法对分化的心肌样细胞进行鉴定。结果结果表明hMSCs贴壁呈集落生长,有成纤维细胞样外观。各组诱导后细胞均呈梭形,排列方向渐趋一致,有肌管样结构形成。免疫细胞化学法检测心肌特异性蛋白结蛋白(Desmin)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)表达阳性,未经诱导的同培养天数的hMSCs中均未见表达。HGF不能诱导hMSCs向心肌细胞转化,但HGF因子与5-Aza联合诱导分化组心肌样细胞分化率明显高于其他两组。结论 hMSCs体外在HGF诱导下可定向分化为心肌样细胞,5-Aza与HGF体外联合应用可以提高hMSCs的诱导分化效率。     

Study on Induce and Differentiation of Mesenchymal Stem Cells into Cardiomyocyte-like cells by 5-Aza and HGF

目的 探讨5-氮胞苷(5-Aza)与肝细胞生长因子(HGF)作为诱导剂,对人骨髓间充质干细胞(hMSCs)分化为心肌样细胞的影响.方法 采用密度梯度培养法与贴壁培养法相结合分离培养hMSCs,取第3代hMSCs随机分为3组,分别为HGF因子诱导分化组、5-Aza诱导分化组、HGF因子与5-Aza联合诱导分化组,诱导后培养4周,采用免疫细胞化学法对分化的心肌样细胞进行鉴定.结果 结果表明hMSCs贴壁呈集落生长,有成纤维细胞样外观.各组诱导后细胞均呈梭形,排列方向渐趋一致,有肌管样结构形成.免疫细胞化学法检测心肌特异性蛋白结蛋白( Desmin)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)表达阳性,未经诱导的同培养天数的hMSCs中均未见表达.HGF不能诱导hMSCs向心肌细胞转化,但HGF因子与5-Aza联合诱导分化组心肌样细胞分化率明显高于其他两组.结论 hMSCs体外在HGF诱导下可定向分化为心肌样细胞,5-Aza与HGF体外联合应用可以提高hMSCs的诱导分化效率.     

心肌营养素1诱导骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞

目的: 探索心肌营养素1(CT-1)对小型猪骨髓间充质干细胞(MSCs)向心肌样细胞分化的影响。方法: 获取、扩增稳定的成体西藏小型猪MSCs,鉴定成脂、成骨潜能。分4组诱导向心肌样细胞分化,包括空白对照组、5-氮杂胞苷(5-Aza)组、CT-1组、5-Aza和CT-1合用组。取诱导后4周的细胞加肌动蛋白(α-actin)和心肌肌钙蛋白T(cTnT)抗体,进行免疫荧光染色,最后计数红色荧光阳性染色率。结果: 分组诱导分化结果,合用组的诱导分化心肌样细胞α-actin阳性率为29.90%±4.76%,明显大于5-Aza组(17.73%±2.35%,P<0.01)、CT-1组(6.63%±0.55%,P<0.01)和空白对照组(1.62%±0.09%,P<0.01);5-Aza组明显大于CT-1组(P<0.01)和空白对照组(P<0.01);CT-1组明显大于空白对照组(P<0.05)。cTnT红色荧光染色结果显示:合用组的诱导分化心肌样细胞cTnT阳性率为36.50%±4.09%,明显大于5-Aza组(14.37%±1.65%,P<0.01)、CT-1组(7.50%±0.61%,P<0.01)和空白对照组(1.12%±0.23%,P<0.01);5-Aza组明显大于CT-1组(P<0.01)和空白对照组(P<0.01);CT-1组明显大于空白对照组(P<0.01)。结论: 适宜浓度的5-Aza(10 μmol/L)和CT-1(0.1 μg/L)能够在体外诱导小型藏猪骨髓MSCs转化为心肌样细胞,诱导后的细胞获得部分心肌细胞特异性蛋白的表达。CT-1与5-Aza联合可明显提高诱导率。     

环磷酸腺苷葡甲胺诱导骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化的实验研究

目的: 探讨环磷酸腺苷葡甲胺(MCA)对骨髓间充质干细胞(BMSCs)向心肌细胞分化的影响。方法: 采用全骨髓贴壁培养法培养BMSCs,流式细胞术鉴定细胞表面抗原CD71、CD45和CD44的表达情况。用含各浓度MCA的细胞培养液干预后:(1)MTT法测定MCA对细胞活性的影响;(2)ELISA法测定细胞内cAMP水平;(3)荧光定量RT-PCR测定BMSCs心肌特异性基因表达情况;(4)利用流式细胞术比较MCA和5-氮杂胞苷(5-Aza)的诱导分化率。结果: 采用全骨髓贴壁培养法获得BMSCs,流式细胞术测定细胞表面抗原结果符合BMSCs标准。 MCA抑制BMSCs细胞活性,表现为时间和剂量依赖性,其中10^-2mol/L对细胞活性的抑制作用尤为显著。随着MCA浓度的升高细胞内cAMP浓度也升高。BMSCs经10^-3 mol/L、10^-4 mol/L和10^-5 mol/L MCA干预后均有GATA-4、β-MHC和Cx43 mRNA的表达,其中10^-3 mol/L MCA诱导干预3 d,能发挥最佳的诱导分化作用。给予PKA抑制剂H89干预后,GATA-4、β-MHC和Cx43 mRNA的表达量显著减少(P<0.05)。流式细胞术测定MCA组诱导分化率略高于5-Aza组的诱导分化率(20.24%±1.02% vs 18.39%±0.58%,P<0.05)。 结论: MCA可以进入BMSCs细胞内,升高cAMP水平,抑制BMSCs活性,通过cAMP/PKA信号通路促进BMSCs表达心肌特异性基因。     

L-抗坏血酸促进人胚胎干细胞向心肌细胞分化的研究

目的 用不同浓度的L-抗坏血酸（VitC）作为分化基础培养液中的诱导剂，观察其对人胚胎干细胞（hESC）分化为心肌细胞的影响，探寻一种成分明确、成本低廉且高效的诱导方法。方法 复苏hESC，使用干细胞培养液培养至细胞融合度90%后，分别用含不同浓度（0、10、20、30、40、50、60、70μmol/L）VitC的分化培养液对其进行诱导分化，在光学显微镜下观察分化过程。用实时定量聚合酶链式反应（real-time PCR）分别检测干细胞特异性标志物Nanog和性别决定因子同源盒2(Sox2)，心肌细胞特异性标志物心肌肌钙蛋白T(cTnT)、心脏特异性同源盒转录因子（Nkx2.5）的表达。用免疫荧光检测Nanog、cTnT、Nkx2.5的蛋白表达变化。结果 在分化基础培养液中，低浓度VitC(10～30μmol/L)不能诱导h ESC向心肌分化，随着VitC浓度的增高，干细胞逐渐往心肌方向分化，心肌分化效率逐渐提高，Nanog和Sox2的表达量逐渐下降；VitC浓度为40μmol/L或50μmol/L组在第8天开始出现自发跳动细胞，且有cTnT和Nkx2.5阳性表达。realtime ...     

体外电刺激诱导大鼠骨髓间充质干细胞心肌特异性标志物MEF-2C和Cx43的表达

骨髓间充质干细胞(BMSCs)由于具有向心肌方向分化的潜能,目前已成为一种新的能够修复心脏组织损伤的重要治疗选择。在本实验中我们探讨了体外不同的电刺激时间对BMSCs向心肌方向分化的影响。实验共分为三组:1电刺激组,完全培养基培养的大鼠骨髓间充质干细胞(rBMSCs)受到电压为2V,频率为2 Hz,脉宽为5ms的电刺激,作用时间为30min/d、2h/d、4h/d、6h/d,连续作用10d;25-氮胞苷(5-Aza)组,5-Aza(10μmol/L)诱导rBMSCs 24h,然后采用完全培养基培养10d;3空白对照组,完全培养基静态培养rBMSCs 10d。通过实时荧光定量PCR方法检测各组rBMSCs的肌细胞特异性增强因子-2C(MEF-2C)mRNA和缝隙连接蛋白43(Cx43)mRNA的表达;通过Western blot方法检测各组rBMSCs的MEF-2C蛋白和Cx43蛋白的表达。实验结果显示:不同持续时间的电刺激组及5-Aza组的MEF-2CmRNA、Cx43mRNA表达量及MEF-2C蛋白、Cx43蛋白表达量均明显高于空白对照组(P0.05)。本实验结果提示,体外电刺激可以诱导rBMSCs向心肌方向分化,其中2h/d作用效果最佳,但其机制尚未明确。     

大鼠骨髓间充质干细胞体外诱导分化为心肌样细胞

目的 采用骨髓间充质干细胞(MSCs)体外诱导为心肌样细胞,为干细胞移植治疗心衰提供一种新的细胞材料.方法 取SD大鼠四肢骨骨髓,分离培养MSCs,分别用终浓度为5、10、15、20 μmol/L的5-氮胞苷(5-aza)定向诱导,相差显微镜观察细胞形态学变化,应用免疫细胞化学、激光扫描共焦显微镜技术检测结蛋白(desmin),α-横纹肌肌动蛋白(α-sarcomeric actin)、心肌特异性肌钙蛋白(C-TnT)的表达,透射电镜鉴定.在诱导后7d、21 d和28 d,3个时间点以半定量RT-PCR方法检测细胞心肌早期转录因子GATA4和心肌特异性肌凝蛋白重链αMHC的表达.结果 MSCs体外经5-aza诱导后分化的细胞desmin、α-sarcomericactin、C-TnT均表达阳性,5 μmol/L组阳性表达较高,透射电镜下可见到平行排列的肌丝.RT-PCR结果显示,GATA4于诱导后7 d弱表达,21 d表达增强,28 d表达减弱.αMHC在诱导后7 d不表达,21 d弱表达,28 d表达明显.结论 骨髓间充质干细胞能够在体外被诱导分化为心肌样细胞,是自体心肌细胞一种良好的供体来源.     

脉冲电磁场诱导大鼠骨髓间充质干细胞体外心肌样细胞分化的研究

观察脉冲电磁场(PEMFs)诱导大鼠骨髓间充质干细胞(rBMSCs)在体外向心肌样细胞分化的影响。选用第3代rBMSCs用于实验。实验分为PEMFs诱导组、5-氮胞苷(5-Aza)诱导组和对照组:PEMFs诱导组给予rBM-SCs 50 Hz1、mT低频脉冲电磁场刺激,30 min/d,分别刺激10 d、15 d和20 d;5-Aza诱导组给予rBMSCs 10μmol/L 5-Aza诱导1d,对照组不予处理;后两组与PEMFs诱导组同步培养10、15和20 d。通过倒置相差显微镜逐日连续观察细胞的生长状况和形态特征,采用实时荧光定量PCR检测肌钙蛋白T(TNNT2)mRNA和α-辅肌动蛋白(ACTN2)mRNA表达量的变化。结果显示:对照组rBMSCs呈纺锤形、多角形或梭形,随时间延长,细胞形态无明显变化;5-Aza或PEMFs诱导后,细胞形状逐渐变长,大量细胞聚集生长,且随着诱导时间的延长,聚集趋势不断增加,刺激20 d,细胞聚集呈长链状,高倍镜下可见细胞伸长明显,且部分细胞与邻近细胞融合。与对照组相比,5-Aza诱导组TNNT2 mRNA在3个时间点的表达量分别为相应对照组的19.40倍(P<0.01)...     

体外诱导骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化的实验研究

目的:采用5-氮胞苷(5-aza)诱导骨髓间充质干细胞(M SCs)为心肌样细胞,对比分析诱导细胞与正常心肌细胞表型的差异,从而分析5-aza的诱导效应。方法:分离培养大鼠骨髓M SCs,通过检测不同浓度的5-aza诱导后M SCs表面CD 45、CD 54、CD 90分子的表达并与正常心肌细胞表型进行比较,以观察5-aza对间充质干细胞体外分化诱导的影响和作用。结果:5-氮胞苷能有效地诱导间充质干细胞分化为心肌样细胞,诱导后的细胞表面均表达M H C和desm in分子。浓度为10μm ol/L的5-aza诱导组细胞表型更接近于心肌细胞。结论:M SCs在体外条件下经5-aza诱导可以分化为心肌样细胞,10μm ol/L的诱导浓度为最优浓度。     

The universal muscular chain reaction,muscle spasm,Torsions, ruptures and extravasations. Chameleons of pathology and some manifestations of simple muscular disorders

Most bodily functions require the coordinated actions of complementary and supplementary paired muscle groups. Where this essential muscular cooperation is lacking, hollow organs may burst and others become literally screwed up, giving rise to many similar spastic diseases such as Torticollis, Twisted ovarian cyst, Torsion of the Testis, Volvulus of the intestines, Varicose Veins, Megacolon, Aortamegaly, Scoliosis, Erb's Palsy, Peyronie's Disease, Main-en-Griffe, Undescended Foot (Pes Cavus), Talipes, Strabismus. Spasm is “panenepidemic” and unclassified examples of Torsion Dystonia and Dyskinesia really are as common as debt and taxes.     

Hypo- und Hypermagnesämie aus kardiologischer Sicht

Zusammenfassung Eine Reihe pathologischer Zustände bedingen Magnesiummangel. Zustände mit Hypermagnesämie sind ebenfalls bekannt, doch wesentlich seltener. Für den Kardiologen beachtenswert ist, daß unter Therapie mit bestimmten Diuretica bei Herzinsuffizienz, bei Herzinfarkt, Kardiomyopathie, Digitalisintoxikation und bestimmten Herzrhythmusstörungen Hypomagnesämie beobachtet wurde. Leider kann in der klinischen Routine nur ein extracelluläres Magnesiumdefizit durch Serumbestimmungen gemessen werden; über Magnesiummangel einzelner Organe kann nichts ausgesagt werden. Hinweise für Magnesiummangel geben aber neben der Messung des Serumspiegels Anamnese, klinischer Befund, bestimmte EKG-Veränderungen wie auch evtl. Hypokalämie, ein Zustand, bei dem sich oft — besonders bei Aldosteronismus — parallele Veränderungen zeigten.Tierexperimente deuten darauf hin, daß infarktähnliche Läsionen unter Magnesiummangel entstehen, doch ob Herzinfarkt beim Menschen durch Magnesiummangel ausgelöst werden kann, ist noch ungeklärt. In Leichenherzen zeigte sich im Infarktgebiet neben Calciumakkumulation signifikanter Magnesiumverlust, wobei unklar blieb, ob sich Ursache oder Folge des Infarktes widerspiegelten. Falls ein ursächlicher Zusammenhang besteht, ist er im Myokardstoffwechsel selbst zu suchen, wie bei der Alkoholkardiomyopathie, wo myokardialer Magnesiummangel zumindest als pathogenetischer Teilfaktor anerkannt wird. Andererseits versucht man aber auch Beziehungen zwischen Atherosklerose, Blutgerinnung und Hypomagnesämie herzustellen, in der Meinung, daß Magnesiummangel auch über den coronaren Pathomechanismus des Herzinfarktes wirken könnte. Sicher scheint, daß gewisse EKG-Veränderungen und Herzrhythmusstörungen durch einen irritierten Magnesiumhaushalt bedingt sein können, da sie bei Gabe bzw. Entzug von Magnesium verschwinden. Daß Magnesiummangel die Glykosidtoleranz verringert, wird tierexperimentell bestätigt. Unter Hypomagnesämie bewirkt Acetylstrophanthidin eher und länger Rhythmusstörungen als ohne, außerdem lassen diese sich durch Magnesiumgaben eliminieren. Da in gewissen Fällen spontane und digitalisinduzierte Herzrythmusstörungen durch Magnesiuminjektionen beseitigt wurden, scheint Magnesium als Therapeuticum angebracht. Einsatz verschiedener Magnesiumsalze bei Angina pectoris, degenerativen Herzerkrankungen und Herzinsuffizienz ohne geprüften und offensichtlich gestörten Magnesiumhaushalt ist fragwürdig, weil keine eindeutigen klinischen Erfolgsbeweise vorliegen. Immerhin mag es aber larvierte, durch Serumbestimmungen nicht erfaßbare Mangelzustände geben. Allgemein erscheint es aus kardiologischer Sicht ratsam, den Magnesiumhaushalt zu überwachen und in entsprechenden Fällen auszugleichen, um möglichen Myokardläsionen oder fatalen Herzrhythmusstörungen entgegenzuwirken.     

Environmental risk factors and their role in the management of atopic dermatitis

Introduction: The etiology of atopic dermatitis (AD) is multifactorial with interaction between genetics, immune and environmental factors.

Areas covered: We review the role of prenatal exposures, irritants and pruritogens, pathogens, climate factors, including temperature, humidity, ultraviolet radiation, outdoor and indoor air pollutants, tobacco smoke exposure, water hardness, urban vs. rural living, diet, breastfeeding, probiotics and prebiotics on AD.

Expert commentary: The increased global prevalence of AD cannot be attributed to genetics alone, suggesting that evolving environmental exposures may trigger and/or flare disease in predisposed individuals. There is a complex interplay between different environmental factors, including individual use of personal care products and exposure to climate, pollution, food and other exogenous factors. Understanding these complex risk factors is crucial to developing targeted interventions to prevent the disease in millions. Moreover, patients require counseling on optimal regimens for minimization of exposure to irritants and pruritogens and other harmful exposures.     

HLA genes in Amerindians from Mexico San Vicente Tancuayalab Teenek/Huastecos

Huastecos or Teenek Amerindians are presently living at North East Mexico (San Luis Potosi State). They have probably one of the most ancient culture of Mexico and Central America together with Mayas and Olmec groups with which also show close relationships. Proximity to Atlantic Ocean/Mexican Gulf originated that Spaniards had very early contact with them at about 1519 CE or before. In the present paper we have aimed to study HLA gene profile which may be useful for HLA and disease epidemiology and transplant programs in Teeneks. HLA-DRB1*04:07, -DRB1*14:06 and -DRB1*04:11 have been found in high frequency like in other Amerindian groups. High frequency typical Amerindians HLA extended haplotypes have been found, such as A*02-B*35-DRB1*04:07-DQB1*03:02; A*68-B*39-DRB1*04:07-DQB1*03:02 and A*02-B*39-DRB1*04:07-DQB1*03:02; also new haplotypes have been described, like A*02-B*52-DRB1*04:11-DQB1*03:02, A*68-B*35-DRB1*14:02-DQB1*03:01 and A*68-B*40-DRB1*16:02-DQB1*03:01. Genetic proximity is observed not only to linguistically close Mayans, but also to Mazatecans, Mixtecans and Zapotecans, who speak an altogether different languages; it shows once more that genes and languages do not correlate. This population was greatly diminished after European contact between 1500 and 1600 years CE; in fact, North and South America First Inhabitants population was brought from 80 down to 8 million people because of diseases (i.e.: measles, smallpox or influenza), slavery and war.     

État de l’art : nouveaux anticoagulants et transfusion

Direct oral anticoagulants (DOAC) are indicated for stroke prevention in atrial fibrillation and for the prevention and treatment of venous thromboembolism. As any anticoagulant, they are associated with a bleeding risk. Management of DOAC-induced bleeding is challenging. Idarucizumab, antidote for dabigatran, is currently available and is part of the therapeutic strategy, whereas antidotes for anti-Xa agents are under development. Activated or non-activated prothrombin concentrates are proposed, although their efficacy to reverse DOAC is uncertain. We propose an update on DOAC-associated bleeding management, integrating the availability of idarucizumab and the critical place of DOAC concentration measurements.     

Die Bindungsfähigkeit des Serum-Albumins für Bromsulphthalein bei Patienten mit chronischer Urämie während Hämodialyse-Behandlung

Zusammenfassung Im Verlauf der Hämodialysc chronisch Nierenkranker verhält sich die mit der Acrylamidgel Elektrophorese nachweisbare Bindung von Bromsulphthalein und Albumin etwa umgekehrt proportional zur Konzentration unveresterter Fettsäuren. Diese Fettsäuren verdrängen den Farbstoff aus seiner Albuminbindung. Der Effekt ist in vivo durch die vorübergehende Zunahme von Fettsäuren infolge der Postheparin-Lipolyse anläßlich der Heparinisierung bei der Hämodialyse auslösbar und auch nach Zugabe von Ölsäure zu einer reinen Albumin-Bromsulphthalein-Lösung in vitro nachweisbar. Bereits bei physiologischen Hyperlipacidämien wird dieser Verdrängungsmechanismus wirksam. Er kann möglicherweise — dem Bromsulphthalein vergleichbar — Medikamente aus ihrer Albuminbindung verdrängen, wodurch deren Wirkung auf die Gewebe und/oder die Ausscheidung durch die Nieren beeinflußt wird.