抗钠钙交换体特异位点抗体对大鼠单个心室肌细胞钙瞬变的影响

目的:观察抗钠钙交换体(Sodium calcium exchanger,NCX)特异位点124HNFTAGDLGPSTIVGSAAFNMF145 抗体对正常成年大鼠心室肌细胞钙瞬变的影响。方法:利用Langendorff 灌流方法,分离得到单个大鼠心室肌细胞;负载荧光染料Fura-2/ AM 和2%牛血清白蛋白后,利用离子影像分析系统记录激发光为340 nm 和380 nm 时心室肌细胞成对系列图像,计算钙瞬变峰值(F340/ F380)、细胞钙恢复90%时程(TR90 )以及钙敏感性(F340/ F380 与细胞缩短数值的比值)。结果:抗NCX 特异位点抗体可以增加正常成年大鼠单个心室肌细胞F340/ F380,缩短TR90 ,对钙敏感性无显著影响;尼卡地平和KB-R7943 分别预处理心室肌细胞可以抵消大部分抗体对F340/ F380 和TR90 的增加或缩短效应,联合使用二者预处理心室肌细胞后,该抗体对钙瞬变不再有显著影响。结论:抗NCX 特异位点124 HNFTAGDLGPSTIVGSAAFNMF145 抗体可以增加心室肌细胞钙瞬变峰值,同时缩短细胞钙恢复时程,这种效应主要与其激动L-型Ca2+通道和NCX 的作用有关。     

抗钠钙交换体特异位点抗体对心肌钠钙交换电流的激活作用及其与钙通道、钠泵的交叉反应

目的：通过制备抗钠钙交换体（NCX）特异位点（α1重复序列124HNFTAGDLGPSTIVGSAAFNMF145）抗体探讨激动NCX的新途径，同时观察该抗体对于细胞膜上其它主要的离子通道和转运蛋白是否具有交叉反应。方法：将按照上述序列合成的肽段作为抗原， 对健康Wistar大鼠进行连续9周的主动免疫，用SA-ELISA法检测其血清中抗体的滴度，并对抗体滴度大于1∶〖KG-*2〗640的样本血清进行IgGs的提取和纯化。用膜片钳全细胞电流记录方法观测在10 nmol/L、20 nmol/L和40 nmol/L时该抗肽抗体对大鼠心室肌细胞钠钙交换电流（INa/Ca）、L-型钙电流（ICa-L）、钠泵电流（INa/k pump）、钠电流（INa）、瞬时外向钾电流（Itko）、内向整流钾电流（Ik1）以及豚鼠延迟整流钾电流（IK）的影响。结果：该抗肽抗体对于内向和外向的INa/Ca电流成分均产生剂量依赖性地激活作用，同时对IL-Ca和INa/k pump也有一定程度的激动，对检测的其余电流无显著影响。结论：该抗NCX特异位点抗体可以激动大鼠心肌钠钙交换电流，并且与L-型钙通道和钠泵具有交叉反应。     

小鼠抗人B7-1(CD80)单克隆抗体的制备及其对肿瘤细胞的抑制作用

目的制备小鼠抗人B7-1(CD80)单克隆抗体(mAb),研究其对天然表达B7-1的恶性肿瘤细胞体外生长和迁移的影响。方法以人B7-1基因转染的L929-B7-1细胞免疫BALB/c小鼠,采用B淋巴细胞杂交瘤技术制备mAb,并通过流式细胞术检测mAb对肿瘤细胞膜型B7-1的识别。以天然表达B7-1的Daudi细胞、Raji细胞及8266细胞为观察对象,分别加入(5、10、20、40)μg/m L B7-1 mAb处理,采用噻唑蓝(MTT)法检测mAb对肿瘤细胞体外增殖的影响,TranswellTM法分析mAb对肿瘤细胞体外迁移的影响,流式细胞术分析mAb对肿瘤细胞凋亡的诱导作用。结果成功制备1株能稳定分泌小鼠抗人B7-1 mAb的杂交瘤,命名为5G10。经流式细胞术分析,该抗体与Daudi、Raji、8266、U266、BEL-7402及MCF-7肿瘤细胞的阳性结合率分别为(96.30±2.12)%、(95.70±1.79)%、(96.80±2.48)%、(23.20±2.35)%、(1.68±0.35)%、(0.55±0.04)%;与对照组相比,20μg/m L 5G10 mAb明显抑制Daudi细胞、Raji细胞及8266细胞的增殖,肿瘤细胞迁移率明显降低,细胞凋亡率明显增加。结论小鼠抗人B7-1 mAb能特异性识别和结合不同肿瘤细胞膜表面的B7-1,并能显著抑制天然表达B7-1的肿瘤细胞的体外生长、迁移并促进其凋亡。     

缬沙坦对心力衰竭大鼠心肌细胞钙通道和钠-钙交换体电流的影响

目的：探讨缬沙坦对心力衰竭大鼠心肌细胞钙通道和钠-钙交换体电流的影响。 方法： 结扎大鼠冠状动脉左前降支8周后，复制心力衰竭模型，随机分2组，即心力衰竭治疗组与心力衰竭对照组，分别用缬沙坦和安慰剂治疗，另设假结扎对照组。治疗16周后，用急性酶解法获得单个大鼠心室肌细胞和标准全细胞膜片钳技术记录通道电流。 结果： (1) 心力衰竭对照组左室舒张末压（LVEDP） 和细胞膜电容（Cm）明显大于假结扎对照组（P<005），左室最大收缩压（LVSP）和左室内压的最大上升和下降速率（±dp/dtmax）明显少于假结扎对照组（P<005）；而心力衰竭治疗组LVSP和±dp/dtmax明显高于心力衰竭对照组（P<005），LVEDP和Cm明显少于心力衰竭对照组（P<005），3组心率（HR）和血压(BP)无明显差异（P>005）。（2）心力衰竭对照组钙通道电流密度峰值明显少于假结扎对照组(P<005)，心力衰竭治疗组明显大于心力衰竭对照组(P<005)，但激活电位、峰电位和翻转电位差异均无显著(P>005)。（3）3组钙通道电流激活、失活和复活动力学特征均无显著差异（P>005）。（4）心力衰竭对照组钠钙交换体电流密度明显大于假结扎对照组（P<005），心力衰竭治疗组明显少于心力衰竭对照组（P＜005）。 结论：缬沙坦治疗能明显减缓充血性心力衰竭的心功能恶化和心肌肥厚，可能与改善心力衰竭心肌细胞膜钙通道电流和钠钙交换电流变化有关。     

抗白细胞介素-2受体单克隆抗体制备及其应用研究的进展

自1981年Uchiyama等建立第一株抗白细胞介素 2受体(IL_2R)杂交癌抗Tac以来,国外从事这方面的研究工作越来越多。在早期,研究者门试图得到以下几种类型的抗iL_2R的单克隆抗体(McAb)杂交瘤:(1)可以阻断IL_2对IL_2R的作用。(2)有类似于IL_2作用。(3)不同于前两种作用的抗体。目前,所获得的抗IL_2R的杂交瘤细胞系主要是小鼠抗人IL_2R、大鼠抗小鼠iL_2R及小鼠抗大鼠IL_2R。应用这些杂交瘤细胞系分泌的McAb对上述三个种源的IL_2R的分子结构、基因组成及定位、受体的分布与疾病的关系,以及某些免疫学疾病的诊断和治疗方面的研究都取得了重大的进展。并且展示了远大的发展前景。本文就这方面的研究进展作以下综述。     

抗钠钙交换体特异位点抗体对离体大鼠心脏功能和血管张力的影响及其与哇巴因、（±）Bay K8644作用的比较

 目的：比较抗钠钙交换体（NCX）特异位点（α-1重复序列124HNFTAGDLGPSTIVGSAAFNMF145）抗体、传统强心药哇巴因以及L型Ca2+通道激动剂（±）Bay K8644对离体大鼠心脏和血管功能的影响,以探求新的强心作用靶点。方法：选用成年大鼠,体重250~300 g,快速分离心脏和胸主动脉,利用Langendorff离体心脏灌流装置和血管环张力测定系统观察10 nmol/L、20 nmol/L和40 nmol/L抗NCX特异位点抗体以及哇巴因（0.5 mmol/L）、（±）Bay K8644（0.1 mmol/L）对心脏血流动力学指标左室发展压、左心室内压上升/下降最大速率（±dp/dtmax）、冠脉阻力以及胸主动脉环张力的影响。结果：10 nmol/L、20 nmol/L和40nmol/L抗NCX特异位点抗体剂量依赖性地使大鼠离体心脏左室发展压、＋dp/dtmax和－dp/dtmax增加,表明心脏收缩和舒张效率均增强。给药过程中均没有发生心律失常。哇巴因（0.5 mmol/L）和（±）Bay K8644（0.1 mmol/L）对正常离体灌流大鼠心脏左室发展压及＋dp/dtmax也有增强作用,作用强度与抗NCX特异位点抗体（40 nmol/L）的作用相当,但（±）Bay K8644（0.1 mmol/L）对－dp/dtmax无明显影响,哇巴因（0.5 mmol/L）则有使－dp/dtmax下降的趋势。哇巴因（0.5 mmol/L）在给药5 min后,多数离体心脏出现≥5 beats/min的早博,（±）Bay K8644（0.1 mmol/L）给药过程中离体大鼠心脏没有出现心律失常。结论：抗NCX特异位点抗体可以同时增强离体灌流大鼠心脏的收缩和舒张活动,并且不增加心律失常的发生率,同时对灌流心脏冠脉阻力以及离体大鼠的胸主动脉环张力也没有显著影响。     

鉴定单克隆抗体F(ab'''')2段及其结合物抗体活性方法的建立

鉴定单克隆抗体（monoclonal antibody，mAb）的抗体活性通常采用免疫组化法或免疫印迹法。因为失去了Fc段，mAb的F（ab’）2片段的抗体活性不适合用常规免疫组化法或免疫印迹法进行鉴定。尤其是当鉴定mAbF（ab’）2段与其他蛋白质结合物的抗体活性时更为困难。我们用SPDP化学胶联法制备了抗人原发性肝细胞癌（以下简称肝癌）的mAb HAb18的F（ab’）2段与超抗原葡萄球菌肠毒素A（SEA）的结合物HAb18F（ab’）2-SEA，以用于肝癌导向免疫治疗的研究。为了鉴定HAb18F（ab’）2-SEA的抗肝癌抗体活性，本实验建立了用于鉴定mAbF（ab’）2及其结合物抗体活性的专用间接免疫组化法。     

1-甲基-2-巯基-5-(3-吡啶基)-咪唑(KC-6141)在试管内的免疫抑制作用

近来报导咪唑类的niridazole,甲硝哒唑,以及甲氮咪唑胺,可能有免疫抑制剂的作用。苯并咪唑类的miconazole在试管内可抑制PHA和PWM诱发的淋巴母细胞转化试验,本文报导另一种咪唑,1-甲基-2-巯     

~(131)I-抗胃癌单克隆抗体369及其F(ab′)_2片段在人胃癌移植瘤裸鼠体分布的研究

抗胃癌单克隆抗体3G9(McAb3G9)系本所生化室制备,与管癌组织和细胞有较好的选择性结合,其亚类为IgG_1。 用~(131)I标记3G9及其F(ab′)_2进行体内生物学分布和显像研究,用~(125)I标记正常小鼠     

Zn~(2+)预处理对离体大鼠缺血再灌注损伤心肌的保护作用

目的 :观察Zn2 + 预处理诱导金属硫蛋白 (MT)在心肌细胞的表达及对离体大鼠缺血再灌注损伤心肌的保护作用。方法 :3 2只Sprague Dawley大鼠随机分为对照组及实验组 ,实验组按腹腔注射ZnSO4 到建立再灌注模型的时间分为E1 2h,E2 4h及E4 8h组 ,每组各 8只。检测LDH ,CK、ATP含量及心功能指标 (LVSP与±dp/dtmax) ,用1 0 9Cd/血红素饱和法测量心肌组织中金属硫蛋白的含量。结果 :E2 4h及E4 8h组MT表达量较对照组高 (P <0 .0 1) ,E1 2h组虽有表达 ,但其与对照组间差异无显著性。E2 4h及E4 8h组LDH与CK较其它二组低 ,而ATP较其它二组高 ,心功能指标较其它二组改善。E1 2h组及对照组之间相应各指标 (LDH ,CK、ATP、LVSP与±dp/dtmax)间差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论 :Zn2 + 预处理可诱导MT在心肌细胞的表达而对离体大鼠缺血再灌注损伤心肌具有保护作用。     

单抗TIGTC—Ⅲ片段F(ab')2的制备及其放射免疫显像研究

目的:将抗人原发性肝癌(PLC)单抗TIGTC-Ⅲ,用胃蛋白酶法消化成F(ab′)2片段,标记131I后进行裸鼠人肝癌移植瘤的体内定位研究.方法:采用胃蛋白酶消化法,进行裸鼠体内核素显像.结果:消化产率为31.7%±2.4%,经细胞结合实验证明F(ab′)2具有良好的免疫活性,抗体片段进入裸鼠体内后,与完整抗体比,进入肿瘤的速度快,生物学分布特异性高,定位指数上升,血清本底下降迅速,生物半衰期明显缩短.结论:F(ab′)2与全抗体比较可使成像时间提前,定位清晰.     

S-O_2-1菌苗对S_(180)肿瘤细胞DNA合成的抑制作用

用小鼠 S_(180)肿瘤细胞作为靶细胞,以~3H-TdR 的掺入抑制百分率作为抗肿瘤活性的指标,在体外培养条件下,S-O_2-1 菌苗能刺激正常小鼠及带瘤小鼠的免疫活性细胞,释放对 S_(180)肿瘤细胞 DNA 合成有明显抑制作用的可溶性物质。实验提示,该类免疫因子的产生能增强免疫细胞对肿瘤细胞的细胞毒效应。同时发现 S-O_2-1菌苗本身对 S_(180)肿瘤细胞还具有直接杀伤作用。     

α-亚麻酸在缺血性心衰中的保护作用及其对缺血早期炎症小体NLRP3的抑制作用

目的探讨α-亚麻酸(α-linolenic acid,ALA)在缺血性心衰中的保护作用及其对TNF-α、IL-6和炎症小体NLRP3(pyrin domain containing 3)等炎症介质的影响。方法通过结扎冠状动脉建立大鼠心肌梗死(myocardial infarction,MI)模型,给予ALA或其对照,监测MI后1周、2周和4周大鼠血清中TNF-α和IL-6炎症因子变化,检测MI后1周心肌组织中NLRP3相关蛋白及和MI后4周心脏功能的变化。结果与假手术组比较,血清中TNF-α和IL-6水平在MI后1周和2周均显著增加。MI后1周缺血区心肌组织中NLRP3表达显著增加,半胱氨酸蛋白酶1(cysteinyl aspartate specific protease-1,caspase-1)活性升高,IL-1β和TNF-α蛋白含量显著升高。补充ALA不仅显著降低大鼠MI后1周和2周血清中TNF-α和IL-6水平,而且减少MI后1周心肌组织中的NLRP3含量和caspase-1活性,进而降低了IL-1β和TNF-α含量,减少了中性粒细胞在心肌组织中的浸润,改善了MI 4周后的心脏功能。结论 MI前补充ALA可减少MI后1周炎症小体NLRP3相关蛋白表达,抑制TNF-α、IL-1β及IL-6炎症因子的生成,改善MI 4周后的心脏功能,延缓缺血性心衰的发生发展。     

SF_(82018)大鼠肝聚核蛋白体及其核糖核酸酶天然抑制物的联合制备

以1M蔗糖垫超离心法制备了大鼠肝聚核蛋白体(以下简称Rp),同时从去Rp上清中又经35～50％饱和度的硫酸铵盐析和DEAE-52氯化钠梯度柱层析制备了核糖核酸酶天然抑制物(以下简称RI)。Rp经紫外光谱分析,蔗糖梯度超离心分析及麦胚无细胞体系翻译活力的测定表明制备过程中基     

缺血预处理对大鼠心肌Na~ ,K~ -ATP酶和Ca~(2 ),Mg~(2 )-ATP酶活性的影响

离体大鼠心脏经１０ｍｉｎ左冠状动脉缺血加３０ｍｉｎ再灌注后，心肌中Ｎａ＋，Ｋ＋－ＡＴＰ酶的活力显著降低，Ｃａ２＋，Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶的活力稍上升。离体心脏经３次３ｍｉｎ全心缺血加５ｍｉｎ再灌注的缺血预处理后，显著减轻随后缺血－再灌注引起的Ｎａ＋，Ｋ＋－ＡＴＰ酶活力降低，并有进一步增高Ｃａ２＋，Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶活力的趋势。缺血预处理也显著减轻缺血－再灌注时的心肌收缩力下降和心律失常的发生。在体大鼠心脏缺血预处理对这些酶活力的影响与离体缺血预处理的结果相似，表明缺血预处理对这些酶活力的影响是作用于心脏本身所致。     

抗甲3型流感病毒多克隆抗体和单克隆抗体对当前毒株(H_3N_2)的抗原性分析

我国被认为是流感病毒大流行株的发源地及新变异株的多发地［１］。当前流感病毒在人群中仍同时流行着Ｈ３Ｎ２和Ｈ１Ｎ１亚型及乙型流感病毒，优势毒株为Ｈ３Ｎ２亚型［２］。因此，很有必要了解甲３型流感病毒的变异动态。作者分别以鸡抗甲３型多克隆抗体和抗血凝素（Ｈ...     

C3-4、T9-10、L2-3椎间盘与相邻椎体弯曲(屈曲)的力学特性

对正常国人新鲜尸体C3-4、T9-10、L2-3椎间盘与相邻椎体进行弯曲(屈曲)实验,分析C3-4、T9-10、L2-3椎间盘与相邻椎体的弯曲(屈曲)力学性质,确定不同部位的椎间盘与相邻椎体是否具有不同的弯曲(屈曲)力学性质。取C3-4、T9-10、L2-3椎间盘与相邻椎体标本各13个,以电子万能试验机进行弯曲(屈曲)实验。以统计学分析和t检验的方法处理实验数据。结果表明,L2-3组最大载荷、最大弯距、最大应力大于C3-4、T9-10组,差异显著(P<0.05),T9-10组最大载荷、最大弯距、最大应力大于C3-4组,差异显著(P<0.05)。C3-4、T9-10、L2-3椎间盘与相邻椎体标本的弯曲(屈曲)力学性质有一定区别,标本的横截面积越大,承受的载荷和应力越大,但不成正比关系。     

链亲和素-补体3d(SA-C3d)融合蛋白的制备及其功能检测

目的原核表达链亲和素-补体3d(SA-C3d)融合蛋白,体外探索蛋白活性。方法以C3 c DNA为模板扩增出C3d段DNA,使用一步克隆法将C3d段与酶切后的质粒p ET-24a-6His-SA-IL15相连,获得SA-C3d原核表达质粒。将测序正确的质粒转化入表达感受态大肠杆菌Rosetta中,诱导蛋白表达。使用镍柱亲和层析及梯度逐级减低的变性剂脲素透析复性的方法获得目的蛋白。通过锚定生物素化的MB49细胞实验反映SA的功能,通过促进Raji细胞生长的实验检测C3d的功能。结果成功构建SA-C3d原核表达质粒,通过镍柱纯化与透析复性获得高纯度目的蛋白。该蛋白特异性的与生物素化的MB49细胞结合,促进Raji细胞增殖并呈现剂量依赖效应,体现蛋白SA-C3d具有双功能活性。结论成功制备的SA-C3d融合蛋白可在体外与生物素化的MB49细胞结合并促进Raji细胞增殖。     

缺氧对大鼠肺动脉平滑肌细胞~(45)Ca~(2 )跨膜内流及细胞内钙含量的影响

为探讨缺氧时血管平滑肌细胞的钙动力学改变及其在HPV发生中的意义,我们研究了:(一)肺泡性缺氧对大鼠灌流肺的肺动脉压和肺动脉平滑肌细胞~(45)Ca~(2 )跨膜内流的影响:Wistar大鼠22只,随机分为缺氧组     

SVHRP对Aβ_(1-40)处理后大鼠海马突触形态学改变的抑制作用

目的:探索蝎毒耐热蛋白(SVHRP)对淀粉样β蛋白(Aβ)神经毒性的抑制作用。方法:在大鼠海马内每侧注射Aβ1-40(10μg/2μl)后1d,给予腹腔SVHRP(0.5～2μg/100g),1次/d,连续10次。建模16d后分别进行海马部位的突触体素免疫组织化学分析和突触超微结构计量观察。结果:与对照组比较,Aβ组大鼠突触体素免疫反应强度和电镜下突触密度明显下降(P0.01),小突触丢失为主,突触终末可见突触小泡大量集聚,突触活性区平均长度增加。SVHRP干预组大鼠实触体素免疫反应强度和电镜下突触密度明显高于Aβ组大鼠(P0.01),突触终末内未见突触小泡过量集聚,但小突触比例显著增加(P0.01)。结论:以上结果强有力的提示,Aβ是突触退变的始动因素,SVHRP可抑制Aβ引起的突触退变,有可能成为治疗Alzheimer病(AD)的一种药物。