核酸探针在生物医学中的应用与发展

核酸探针在生物医学中的应用与发展王金良核酸（基因）探针是经某种标记物标记过的单链ＤＮＡ和ＲＮＡ，它能与解链后的靶ＤＮＡ或ＲＮＡ进行杂交。凡是具有互补核苷酸序列的核酸可以杂交，其杂交信号可依标记物的特性而检出。凡不具互补核苷酸序列者则不能杂交，故不能检...     

原位分子杂交技术的体会(摘要)

原位分子杂交技术的体会（摘要）朱春红戴晓汶（解放军第１１７医院病理科，杭州３１００１３）原位核酸杂交是一种快速而又准确地检测组织内ＤＮＡ与ＲＮＡ片段，重组ＤＮＡ的方法。灵敏度高、特异性强，已成为分子生物学中重要方法之一。我院曾开展了生物素标记探针，在...     

枝状DNA信号放大与纸层析杂交检测方法的建立

血清中病原体的核酸 (ＤＮＡ或ＲＮＡ)水平可确切地反映病原体的复制能力。现有诊断方法中多以各种模式的聚合酶链式反应 (ＰＣＲ)为主 ,该方法灵敏度较高 ,但需要依赖一些设备 ,且易出现假阳性。测定分子水平的技术多因要求高 ,一般临床较少开展。近年发展了极为敏感的枝状ＤＮＡ (ｂｒａｎｃｈｅｄＤＮＡ ,ｂＤＮＡ)分析技术 ,通过一系列的杂交反应后 ,由显示探针上的酶催化发光底物发光 ,由光电比色计可定量记录信号 ,从而达到对病原体核酸的定量分析目的。纸层析杂交试验利用了毛细作用力使ＤＮＡ分子在膜上移动 ,通过杂交作用被固定在…     

DNA芯片及其在医学上的应用

ＤＮＡ芯片又称ＤＮＡ微阵列 (ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ)、基因芯片 ,是近几年发展起来的一项前沿生物技术———生物芯片中的一种。可广泛应用在测定未知基因序列、定位与疾病有关基因、阐明基因疾病分子机制、发展基因诊断和基因治疗、药物筛选等领域。ＤＮＡ芯片技术虽然尚在起步阶段 ,但已展示出它的广阔应用前景 ,在制作技术和技术应用上进展迅速 ,本文简要综述ＤＮＡ芯片基本原理和在医学应用上的进展。1　ＤＮＡ芯片制作基本原理ＤＮＡ芯片技术是在Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ的基础上发展起来的 ,它利用核酸杂交原理检测未知分子 ,将核酸…     

三种从琼脂糖凝胶回收DNA片段方法的比较

三种从琼脂糖凝胶回收ＤＮＡ片段方法的比较胡静，温进坤探针制备是进行核酸分子杂交的首要步骤。在制备作为探针的ＤＮＡ片段时，要将经内切酶切割后所生成的载体与插入片段混合物通过凝胶电泳分离后，再把所需的ＤＮＡ片段回收。回收ＤＮＡ片段的方法很多，如透析袋电洗...     

荧光原位杂交新技术在恶性血液病听研究进展

荧光原位杂交（ＦＩＳＨ）是以非放射性物质标记核酸探针，根据核酸杂交原理，在间期核和分裂中期染色体上检测特异性ＤＮＡ序列的一种新技术，由于它克服了放射性原位杂交（ＲＩＳＨ）的一些弊端，具有快速，准确，灵敏，经济等优点，现已应用于肿瘤生物学，产前诊断和基因突变等诸多领域，因恶性血液病常规制备染色较大难度，成功率不高，检出较低等问题，而ＦＩＳＨ技术既可以分析中期核染色体，又能用于间期染色质，故该技术对恶     

应用原位核酸杂交技术检测心肌内柯萨奇病毒RNA

应用原位核酸杂交技术检测心肌内柯萨奇病毒ＲＮＡ赵晓书，牛美娟，曲章义，郭彩玲，吴法尧，李从仁利用经病理观察证实为病毒性心肌炎，心肌炎后改变（ＰＭＣ）及扩张型心肌病（ＤＣＭ）的心脏标本，通过自备的ＣｏｘＢ３ｃＤＮＡ生物素探针对这些心肌组织内的相应核酸进...     

肿瘤分子遗传学研究方法进展

肿瘤发生是具有其分子生物学基础的，自８０年代以来许多技术相继开发应用到肿瘤的分子遗传学研究，并取得了显的成效，这些检测ＤＮＡ变异的手段按检测对象分析为两类：一类主要用于基因组ＤＮＡ的检测，如肿瘤原癌基因和抑癌基因的定位克隆，比较基因组杂交，代表性差异分析；用于ｃＤＮＡ或ｍＲＮＡ水平的技术包括消减杂交，差异显示ＰＣＲ，ｃＤＮＡ代表性差异分析，ＤＮＡ芯片及探针微列阵等，这些技术的应用为肿瘤的分子遗传     

一种快捷、简便制备基因探针的方法

本文对常规随机引物标记基因探针法进行了改进，排除了已标记载体ＤＮＡ片段在核酸分子杂交反应中的影响，证明了载有特异ｃＤＮＡ片段质粒直接用于标记探针的可行性，建立了一种快捷、简便、经济的基因探针制备方法，并为特异ＤＮＡ片段酶切、回收困难质粒的应用提供了一条可行之路     

肺炎患儿咽拭标本中腺病毒DNA的检测

肺炎患儿咽拭标本中腺病毒ＤＮＡ的检测史金阳，刘兰青，吕绳敏，任舒月，刘庆随着分子生物学诊断技术的发展和应用，出现了核酸杂交［１］及聚合酶链反应（ＰＣＲ）［２］技术。而ＰＣＲ技术的发展和应用大大简化了目的基因片段的制备程序。我们用ＰＣＲ技术制备地高辛标...     

高灵敏化学发光自显影用于斑点杂交检测血清HBV DNA

高灵敏化学发光自显影用于斑点杂交检测血清ＨＢＶＤＮＡ穆仁懋唐红刘丽林勇赵连三王锦蓉伍莉萍杨秀岑应用核酸分子杂交检测血清中ＨＢＶＤＮＡ已成为诊断乙型肝炎病毒感染，判断其复制状态，考核抗病毒药物疗效的重要手段。我们应用地高辛配基标记ＨＢＶＤＮＡ探针进行血...     

地高辛标记的cDNA探针检测GM—GSFmRNA表达

采用随机引物法对人ＧＭ－ＣＳＦｃＤＮＡ探针进行地高辛标记，核酸分子原位杂交技术对人胸腺细胞，骨髓基质细胞，白血病细胞株，脐 细胞和胎肝组织的ＧＭ－ＣＳＦｍＲＮＡ的表达水平进行检测。结果表明：地高辛标记的ＧＭ－ＣＳＦｃＤＮＡ探针使用简便，灵敏度高，特异性强，杂交结果直观，探针可较长时间保存和无放射性污染等优点。     

结核病诊断新法—PCR

结核病诊断新法—ＰＣＲ３０９医院全军结核病中心研究推广的采用ＤＮＡ聚合酶链反应（ＰＣＲ）和核酸探针分子杂交技术，使结核病诊断提高到分子和基因水平，检测时间由过去的一个月左右缩短到２～３ｄ，阳性率比传统技术高２０％～３０％以上。以往常规方法直接检查结核...     

荧光原位杂交及其在肿瘤生物学中的应用

荧光原位杂交（ＦＩＳＨ）是一种应用荧光物质依靠核酸探针杂交原理在核中或染色体上显示ＤＮＡ序列位置的方法。ＦＩＳＨ具有快速、安全、经济、灵敏度高、特异性强等优点，在中期及间期细胞均可检测ＤＮＡ序列及其变化，广泛应用于细胞遗传学、产前诊断、肿瘤生物学、核组成、基因定位、基因扩增等领域。细胞内染色质含量的不平衡是引起肿瘤的根本原因，细胞遗传学上表现为染色体数目或结构异常，分子水平上表现为ＤＮＡ片段的扩增     

高危妊娠与巨细胞病毒感染的关系

为了探讨某些高危妊娠与人巨细胞病毒感染之间的关系，本研究应用酶联免疫法与核酸杂交技术对１９５例正常妊娠的孕妇和１４４例有某些异常妊娠情况孕妇本人血，部分新生儿脐血和尿进行了ＣＭＶ－ＩｇＧ，ＩｇＭ，ＣＭＶ－ＤＮＡ检测，并比较它们的阳性率。     

反义治疗与白血病靶基因研究进展

反义技术是根据碱基互补原理 ,利用与目标靶ＤＮＡ或ＲＮＡ互补的短链片断封闭基因表达。反义技术用于抗白血病的理论基础 ,是用反义核酸中止原癌基因或癌基因的表达 ,使白血病细胞分化或凋亡 ,达到治疗的目的。其特点是 ,特异性强 ,对正常细胞无明显影响。反义核酸能在核酸水平上抗白血病 ,优于在蛋白水平的作用。基本内容包括 :反义ＲＮＡ、反义ＤＮＡ、核酶 (ｒｉｂｏｚｙｍｅ)和三股螺旋ＤＮＡ(ＤＮＡ -Ｔｒｉｐｌｅｘ)。主要通过下列作用之一或联合作用抑制靶基因表达 :1 与双链ＤＮＡ形成三链结构 ,使ＤＮＡ转录受阻。 2 结合靶ｍＲ…     

霍乱弧菌O139国内外菌株分子生物学特征比较

１９９２年１０月在印度，１２月开始在孟加拉国发生了一种新型霍乱弧菌——霍乱弧菌Ｏ１３９引起的霍乱样大流行。我国新疆南部柯坪县于１９９３年５～６月也发生了由该型菌引起的典型霍乱样腹泻暴发。分子生物学研究表明：细菌染色体ＤＮＡ经核酸限制性内切酶ＳａｌⅠ消化后，用核酸脉冲场凝胶电泳（ＰＦＧＥ）分离ＤＮＡ，所有Ｏ１３９菌株表现为一致的特征性的限制性酶谱。用１６ＳｒＲＮＡ基因为探针，染色体ＤＮＡ经ＢｇｌⅠ酶切ＰＦＧＥ分离后做ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交分析，结果印度、孟加拉国和中国分离的菌株分别属于不同的核糖体基因型（Ｒｉｂｏｔｙｐｅ，ＲＴ），但与新疆菌株相比，印度和孟加拉国菌株的关系更为密切。结果还显示：霍乱弧菌Ｏ１３９菌株具有基本一致的基因组特征。     

逆向点杂交技术及其在基因诊断中的应用

逆向点杂交技术采用固化了多种特异性探针的膜条与扩增靶序列杂交，使一次杂交即可同时筛查被检ＤＮＡ中的多种突破，这种以膜上固定探针取代固定靶ＤＮＡ的方式，改变了传统杂交法一次只能检测一种突变的模式，大大提高了基因诊断的效率。近年来，此法在遗传病的基因诊断，ＨＬＡ基因分型，病原微生物鉴定，以及癌基因点突变分析等领域的应用中显示出了良好的技术优势和潜力。本文就这一技术的方法和应用作了一简要评述。     

应用增强化学发光法检测PCR扩增的人巨细胞病毒核酸

本文报道用增强化学发光法（ＥＣＬ）检测ＰＣＲ扩增的人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）核酸。该检测系统用戊二醛将辣根过氧化物酶复合物（ＨＲｐ－ＰＢＱ－ＰＥＩ＋－ＮＨ３＋）与探针结合制成酶标基因探针。探针与靶ＤＮＡ结合后ＨＲＰ可催化检测系统中的发光底物，经增强剂将光信号放大，杂交信号通过Ｘ光片显影。实验证明，用ＥＣＬ检测ＰＣＲ扩增的ＨＣＭＶＤＮＡ产物，敏感性可达０．０１ｆｇ的ＤＮＡ片段，且仅与ＨＣＭＶＤＮＡ的扩增产物杂交。临床应用表明，此方法具有快速、简便、敏感、安全的特点。     

尼龙膜快速转移作DNA印迹杂交

Southern吸印法是进行组份分析及研究其表达的基本技术之一。近年来,由于采用了尼龙膜,从而明显增加了这一技术在杂交分析中的应用。与硝酸纤维膜相比,尼龙膜在核酸杂交中具有以下几个优点:①机械强度较高;②提高了核酸的载量;③能够结合更小的寡核苷酸片段;④提高了与核酸结合的能力,因而可以多次重复杂交;⑤该膜能提