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1.
背景:组织工程血管构建的关键依赖于理想的支架。猪血管作为组织工程血管构建材料已有广泛应用,但其较高的免疫原性及较差的力学强度限制了该材料作为组织工程支架的应用。目的:应用猪主动脉脱细胞基质制备一种新的具有良好机械性能及生物相容性的组织工程血管支架。方法:对猪主动脉进行脱细胞处理和热交联改性制备脱细胞血管基质支架,采用苏木精-伊红染色及生物力学分析评估其脱细胞效果及血管基质的力学性能。将人脐静脉血管内皮细胞接种于脱细胞血管基质支架中进行体外培养,评估其生物相容性。结果与结论:用1%的TritonX-100溶液处理猪主动脉84h可完全脱除血管细胞,同时不破坏血管基质结构;经真空下120℃热交联处理12h,脱细胞基质的拉伸断裂强度得到明显提高,达到1.70MPa。在该改性血管基质支架上接种人脐带静脉内皮细胞体外培养7d,扫描电镜显示内皮细胞呈现典型的血管内皮层状结构。表明猪主动脉经过脱细胞处理能够维持血管基质完整,冷冻干燥和真空热交联处理可有效提高其拉伸强度,且对血管内皮细胞具有良好的相容性。  相似文献   

2.
目的:完全脱除猪胸主动脉细胞,对脱细胞血管基质进行改性,增强基质的力学强度,制备组织工程血管支架材料。方法:取家猪的新鲜去除外膜胸主动脉20根,随机分成4组,分别采用胰蛋白酶、TritonX-100及十二烷基硫酸钠(SDS)作为脱细胞试剂对猪胸主动脉进行脱细胞处理,并对脱细胞后的血管基质进行改性,采用HE染色、弹力纤维染色、力学性能测试,以评价脱细胞效果以及材料的力学性能。结果:采用1%TritonX-100单独作用84h既能完全脱除细胞,同时又可完整保留血管基质的三维结构,对胶原纤维、弹力纤维的损伤小,是一种较理想的脱细胞方法。对脱细胞后的基质进行冷冻干燥及真空热交联处理,能有效提高材料的机械强度,冷冻干燥24h后真空120℃下热交联处理12h所获得的材料的机械强度最好,断裂强度可达到1.70MPa。结论:以脱细胞血管基质经冷冻干燥和真空热交联处理后,可以作为血管组织工程的支架材料。  相似文献   

3.
比较两种方法制备脱细胞小血管支架   总被引:2,自引:0,他引:2  
目的:比较0.5%Triton X-100 0.05%NH4OH和酶法制备脱细胞小血管支架的效果.方法:分别用含0.5%Triton X-100 0.05%NH4OH处理3 d或1.0H Triton X-100 0.125%胰蛋白酶 Dnase Rnase孵育48 h,脱去犬股静脉中的细胞成分,50Co辐照消毒,血清浸泡24 h,将平滑肌细胞和内皮细胞接种到脱细胞支架中;进行H-E染色、胶原纤维和弹力纤维染色,扫描电镜观察及力学检测.结果:0.5%Triton X-100 0.05%NH4OH法完全地脱去了血管细胞;细胞外基质较完整地保留下来,其形态结构与脱细胞前无明显改变;见种植细胞在支架内生长良好,连成片,支架具有良好的生物相容性;力学结果显示其弹性回复率和最大断裂强度好于酶组.结论:两种方法比较,0.5%Triton X-100 0.05%NH4OH法简便易行,成本低,脱细胞效果好,组织相容性佳,对力学性状影响小,是比较理想的制备脱细胞小血管支架的方法.  相似文献   

4.
背景:利用脱细胞血管基质作为血管支架具有以下优点:脱细胞血管基质保留了自然血管的复杂三维结构;脱细胞基质表面的生长因子和结构域有利于细胞的黏附和浸润。目的:制备脱细胞血管基质并对其体内外生物相容性进行评价。方法:采用胰蛋白酶、Triton X-100逐步处理猪颈动脉制备脱细胞血管基质。采用皮下植入实验、急性毒性实验和体外细胞毒性实验等评价其生物相容性。结果与结论:脱细胞基质材料具有良好的化学稳定性,未释放对红细胞产生破坏溶解作用的有害元素,未引起急性溶血反应,对细胞的生长无毒性影响。脱细胞基质材料在动物体内植入后早期有较多炎性细胞浸润,到实验观察的后期无明显炎性细胞浸润,脱细胞基质内可见成纤维细胞。另外,脱细胞基质材料对周边组织未产生毒性作用,伤口Ⅰ期愈合。同时组织学切片显示:支架材料与周边组织相容性好,未产生排斥反应。说明脱细胞基质材料在动物体内具有很好的生物相容性。  相似文献   

5.
周虹  张涛 《中国组织工程研究》2012,16(27):4979-4984
背景:组织工程心脏瓣膜是利用组织工程技术将种子细胞种植于瓣膜支架上所构建的一种人工瓣膜,目前国内外研究主要集中于种子细胞来源及支架选择上。 目的:探讨人脂肪间充质干细胞体外向内皮细胞诱导分化后的细胞作为种子细胞,脱细胞猪主动脉瓣膜作为支架体外构建组织工程心脏瓣膜的可行性。 方法:利用吸脂术采集脂肪组织,分离、培养脂肪间充质干细胞,流式细胞仪鉴定细胞表型;免疫细胞化学方法及RT-PCR检测细胞分化标志物;应用Triton X-100联合胰蛋白酶的方法制备脱细胞猪主动脉瓣支架,将体外培养扩增的诱导分化后的内皮细胞种植于支架上构建组织工程心脏瓣膜,光镜及电镜下观察组织工程心脏瓣膜的组织学结构。 结果与结论:脂肪组织分离培养的脂肪间充质干细胞向内皮细胞诱导分化后表达CD31、CD34、CD144、Ⅷ因子和内皮型一氧化氮合成酶等内皮细胞特异性抗原;脱细胞猪主动脉瓣膜支架脱细胞完全,弹力纤维及胶原纤维保持完整;构建的组织工程心脏瓣膜可见支架上排列连续的单细胞层。提示脂肪间充质干细胞在体外向内皮细胞诱导分化后已初步具有内皮细胞功能,在脱细胞猪主动脉瓣膜支架上生长良好,可以在体外初步构建组织工程心脏瓣膜。  相似文献   

6.
目的:优化心脏脱细胞支架的制备方法,评价所制备的脱细胞支架的基本生物学特征。方法:联合应用十二烷基硫酸钠(SDS)和聚乙二醇辛基苯基醚(Triton X-100)对大鼠心行逆行主动脉灌流制备心脏脱细胞支架。同时,将间充质干细胞(MSCs)接种到支架上构建细胞支架复合体,采用H-E染色及扫描电镜分别对制备支架及复合体进行评价。结果:心脏脱细胞支架大体呈半透明囊状。组织学染色及扫描电镜观察示支架呈多孔网状或束状结构,未见细胞核残留。荧光显微镜观察示MSCs沿支架纤维黏附生长,未见明显坏死细胞。结论:本研究运用灌流法成功制备脱细胞彻底且细胞外基质保留较完整的心脏脱细胞支架,既拥有天然三维结构且具有良好的生物相容性。  相似文献   

7.
脱细胞血管组织基质的制备和平滑肌细胞的种植   总被引:3,自引:0,他引:3  
目的组织工程血管的研制成功将为先天性心脏病外科提供一种新的理想的修补材料,本文研究血管脱细胞组织基质的制备,平滑肌细胞的体外培养和种植方法.方法取成年羊胸主动脉,用胰酶消化去除细胞成分,保存弹性蛋白和胶原蛋白,获得血管脱细胞组织基质,经点状注射法,种植体外培养的小牛平滑肌细胞.结果羊主动脉经脱细胞处理,得到的组织基质最大负载下降20%,最大伸长无显著改变;脱细胞组织基质的胶原蛋白含量与新鲜主动脉相似;基质的纤维结构完整,为网状或多孔状;种植的小牛平滑肌细胞生长良好.结论采用多步骤方法获得的血管脱细胞组织基质可用作为制备组织工程血管的支架,适宜于血管平滑肌细胞的生长.  相似文献   

8.
文题释义:去垢剂:又称表面活性剂,是一类既具有亲水基又具有疏水基的物质,一般具有乳化、分散和增溶作用,可分阴离子、阳离子和中性去垢剂等多种类型,中性去垢剂在蛋白提取中应用较多。  巨噬细胞的极化:巨噬细胞可分化为包括M1、M2a、M2b、M2c在内的极化表型,其中的M2表型巨噬细胞在组织修复和伤口愈合中发挥了重要作用。M1型巨噬细胞可促进单核巨噬细胞的聚集,分泌大量促症因子包括白细胞介素12、白细胞介素6、肿瘤坏死因子等,然而M2型可以分泌大量抗炎症因子,诱导巨噬细胞清除凋亡细胞及组织修复的作用。背景:去垢剂作为目前较成熟的脱细胞方法,具有操作简便、破坏小、实验条件容易控制等优点,有研究将不同的去垢剂联合应用于脱细胞中取得了不错的效果。 目的:对比两种去垢剂联合方案脱细胞的效果,以及两种脱细胞血管材料植入动物皮下后的免疫反应。 方法:采用两种方案对猪颈动脉进行脱细胞处理,一组置于1%十二烷基硫酸钠与1%脱氧胆酸钠混合溶液内处理72 h(SDS+SDC组),另一组置于1%十二烷基硫酸钠与1%Triton X-100混合溶液内处理72 h(SDS+Triton X-100组),脱细胞后分别进行组织学分析、扫描电镜分析、力学分析与DNA含量检测。将两组脱细胞血管材料分别植入SD大鼠背部皮下,术后1,2,4,8周取出移植血管材料,进行苏木精-伊红染色与免疫荧光染色。实验已通过江南大学实验动物伦理委员会批准。 结果与结论:①组织学分析显示,SDS+SDC组方案有效去除了细胞成分,较完整的保留了细胞外基质结构,脱细胞效果优于SDS+Triton X-100组;②SDS+SDC组DNA含量明显低于SDS+Triton X-100组(P < 0.05),两组爆裂强度与缝合耐受强度比较差异无显著性意义(P > 0.05);③扫描电镜显示,SDS+Triton X-100组细胞外基质破坏程度大于较SDS+SDC组;④皮下植入实验中,术后1周时两组颈动脉材料周围均可见大量炎性细胞浸润,术后8周时SDS+SDC组脱细胞材料周围已无炎性细胞浸润,SDS+Triton X-100组脱细胞材料周围仍可见明显的淋巴细胞浸润;SDS+Triton X-100组脱细胞材料主要诱导巨噬细胞向M1型分化,SDS+SDC组脱细胞材料主要诱导巨噬细胞向M2型分化;⑤结果表明相对比1%十二烷基硫酸钠联合1%Triton X-100脱细胞处理方案,1%十二烷基硫酸钠联合1%脱氧胆酸钠脱是较有前景的脱细胞细胞处理方案。ORCID: 0000-0002-3120-0203(尹晶) 中国组织工程研究杂志出版内容重点:生物材料;骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性;组织工程  相似文献   

9.
全生物化组织工程血管构建的初步研究   总被引:3,自引:0,他引:3  
为探索在体外初步构建全生物化组织工程血管,采用以酶消化为主的方法制备猪颈总动脉脱细胞支架,再种植犬胸主动脉的平滑肌细胞,培养四周。经组织学染色和电镜观察显示:在猪颈总动脉脱细胞支架上,犬血管平滑肌细胞大量生长,组织学和电镜结构与正常血管壁结构类似。结果表明,我们初步成功地构建了全生物化组织工程血管,为临床血管替代物的基础研究提供了有意义的实验资料。  相似文献   

10.
背景:异体血管移植之所以至今未能在临床应用,关键是异体组织抗原性排斥反应的难题未能得到解决。 目的:制备动脉脱细胞血管基质,探讨脱细胞血管异体移植的可行性。 方法:采用不同去垢剂(1%Triton X-100、1%SDS)多步骤对犬血管进行脱细胞处理,通过组织学和力学观测,建立犬动脉血管脱细胞的方法;并进行脱细胞血管的异体移植。 结果与结论:经胰蛋白酶、低渗溶液和去垢剂Triton X-100、SDS等多步骤处理,犬颈总动脉血管的细胞基本脱除,细胞外基质保持完好,血管的弹性、韧性保存较好;用该法制备的犬颈总动脉(直径约4.0 mm)进行异体移植,经10个月观察,4/5通畅。提示经去垢剂Triton X-100、SDS加低渗溶液、胰蛋白酶和蛋白酶抑制剂处理的多步法,可以脱除血管的细胞成分,细胞外基质和力学特性保持完好,是一种较好的方法;用该法制备的犬颈总动脉可以直接进行异体移植,是一可选择的血管移植材料。 关键词:动脉血管;犬;脱细胞;同种异体移植;血管基质 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.12.014  相似文献   

11.
目的 用不同的脱细胞方法对猪胆总管进行处理,比较脱细胞前后的组织学变化,筛选适宜的脱细胞方法,为组织工程胆管支架材料的应用提供理论依据。 方法 30例猪胆总管随机分为5组:对照组(A组):0.05% 胰蛋白酶+核酸酶(B组):0.1%十二烷基硫酸钠(SDS)+核酸酶(C组):1.0% Triton X-100+核酸酶(D组):1.0% Triton X-100+0.1% SDS +核酸酶(E组)。通过HE染色光学显微镜下观察脱细胞基质的组织结构和细胞残留情况;用紫外分光光度法检测脱细胞基质的DNA含量,计算脱细胞率。结果 脱细胞B组有少量细胞残留,纤维有损伤;脱细胞C组、D组、E组的细胞均被去除,纤维无明显损伤。A组的DNA含量为(71.24 ± 2.56)μg /100 mg。B、C、D、E4个脱细胞组的DNA含量与A组的差异有统计学意义(F =15.29, P<0.01),均有明显的脱细胞效果(P<0.01)。B组的脱细胞率为77.03%,比C组、D组、E组的脱细胞效果稍差(P<0.05),E组的脱细胞率高达99.03%。 结论 应用1.0% Triton X-100+0.1% SDS +核酸酶的脱细胞效果好,能更好地降低胆总管的免疫原性,是一种比较理想的猪胆总管脱细胞方法。  相似文献   

12.
目的:探讨脱细胞猪主动脉瓣叶构建组织工程心脏瓣膜支架的可行性。方法:经胰酶-EDTA、表面活性剂、核酸酶处理,去除瓣叶的细胞成分,测定脱细胞瓣叶的生物力学特性,同时行大鼠皮下包埋实验,观察其免疫反应性。结果:瓣叶中的细胞成分能完全去除,获得无细胞的纤维网状支架。脱细胞瓣叶与新鲜瓣叶有基本相同的应力-应变曲线及应力-松弛曲线,而弹性模量、面积比、松弛强度、断裂强度和断裂伸长率两者无显著差异。脱细胞瓣叶的免疫反应性明显降低。结论:猪主动脉瓣叶经脱细胞处理后可以作为组织工程心脏瓣膜的支架材料。  相似文献   

13.
心脏瓣膜组织工程支架的制备及细胞种植   总被引:6,自引:0,他引:6  
为了探讨心脏瓣膜组织工程支架的制备及细胞种植 ,我们将新鲜猪心瓣膜用胰蛋白酶及 DNA酶消化去除细胞 ,光镜和电镜观察其结构 ,并将人脐静脉内皮细胞株、猪颈动脉内皮细胞和狗肌成纤维细胞滴种在脱细胞猪心瓣膜上 ,HE和免疫组化染色观察。结果显示胰蛋白酶联合 DNA酶消化去除了所有细胞 ,而瓣膜的三维结构保持完好。种植的人内皮细胞几乎完全覆盖了瓣膜的表面 ,猪内皮细胞在瓣膜上呈斑块状生长 ,狗肌成纤维细胞不但生长于瓣膜表面 ,且渗透到基质内部生长。这表明 ,胰蛋白酶联合 DNA酶消化是一种较为理想的猪瓣膜脱细胞方法 ;人和猪血管内皮细胞及狗肌成纤维细胞均能在猪瓣膜支架上较好地黏附和生长。  相似文献   

14.
背景:以脱细胞脊髓基质材料为构架的脊髓生物支架,已被证实可恢复或部分恢复受损的脊髓神经功能。 目的:介绍脱细胞脊髓基质支架的制备方法和部分生物特性,对近年来其在脊髓组织工程中的应用及进展作一概述。 方法:应用计算机检索 CNKI 和 PubMed 数据库中 2005年1月至2014年10月关于脱细胞脊髓基质支架材料在脊髓损伤中应用的文章,在主题和摘要中,中文以“脱细胞脊髓,支架材料,脊髓损伤,组织工程学”为检索词检索,英文以“acellular spinal cord;engineering tissue;spinal cord injury;scaffold”为检索词进行检索。 结果与结论:脱细胞脊髓基质支架具有较低的抗原性、优良的生物相容性及类似脊髓的三维支架结构,但存在力学性能差及结构不稳定等缺点。通过京尼平、戊二醛等交联剂改性后可明显提高支架的生物性能。目前国内外已对脱细胞脊髓基质支架在神经修复再生方面的应用做了一些探索,为脊髓组织工程学打下了基础。由于脱细胞脊髓基质支架的诸多优点,脱细胞脊髓基质材料有望成为脊髓组织工程学的理想材料。中国组织工程研究杂志出版内容重点:生物材料;骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性;组织工程  相似文献   

15.
目的 用振荡法制备脊髓脱细胞支架修复同种异体大鼠脊髓缺损,观察术后大鼠行为学及组织再生情况。为脊髓缺损后修复提供新的研究思路。方法 将30只SD大鼠脊髓分别用50 ml 3%聚乙二醇辛基苯基醚(Triton X-100)和2%脱氧胆酸钠溶液在摇床上做振荡处理,对比处理前后细胞残留情况及组织的空间结构,了解支架本身的组织构成。将90只SD大鼠随机分成空白对照组、单纯脊髓缺损组和支架移植组。切除单纯脊髓缺损组和支架移植组大鼠腰椎9~10节段,移植脱细胞支架至支架移植组大鼠。术后饲养12周,期间进行行为学评分观察,分别在4、8及12周时取大鼠损伤部位的脊髓进行HE染色及神经再生相关蛋白免疫荧光检测。结果 通过HE、Masson、甲苯胺蓝染色显示,脱细胞处理后的脊髓脱细胞支架上神经细胞及轴突彻底清除,保留了脊髓细胞外基质。扫描电子显微镜观察发现,支架保留一定多孔网状支架结构。脱细胞支架在体实验中,Basso-Beattie-Bresnahan(BBB)评分显示,移植有脱细胞支架的大鼠后肢运动功能恢复优于单纯损伤组大鼠。组织学HE染色显示,脱细胞支架能够填补缺损的脊髓节段,加快损伤脊髓的修复过程。免疫荧光显示,支架移植组大鼠的损伤部位有一定轴突再生。结论 脊髓脱细胞支架保留了细胞外基质并具有一定空间结构,能够一定程度加快脊髓缺损修复,对神经再生具有一定的促进作用。  相似文献   

16.
背景:去细胞肌肉生物支架联合人脐带间充质干细胞移植将是治疗脊髓损伤的一项重要措施。但两者是否具有良好的相容性,人脐带间充质干细胞能否在去细胞肌肉生物支架中长期存活并均匀分布,尚未得到证实。 目的:观察大鼠去细胞肌肉生物支架与人脐带间充质干细胞的相容性。 方法:改良化学法制备大鼠去细胞肌肉生物支架,将第3代人脐带间充质干细胞Hoechest33342荧光标记后分为3组进行实验,细胞+支架组、细胞+支架大鼠体内组和单纯细胞组。分别应用苏木精-伊红、Masson染色方法观察去细胞肌肉生物支架的组织形态,以荧光倒置相差显微镜和扫描电镜观察人脐带间充质干细胞的吸附和生长情况。 结果与结论:人脐带间充质干细胞与去细胞肌肉生物支架充分附着,生长增殖活跃,细胞在支架内分布均匀。细胞+支架体内组与细胞+支架组相比在移植后1-7 d人脐带间充质干细胞数量差异无显著性意义(P > 0.05),在移植14 d细胞+支架体内组人脐带间充质干细胞数量大于细胞+支架组(P < 0.05)。提示去细胞肌肉生物支架与人脐带间充质干细胞有较好的相容性,体内环境更有利于细胞增殖和两者融合。  相似文献   

17.
目的 用不同的脱细胞方法对猪胆总管进行处理,比较脱细胞前后的生物力学变化,筛选适宜的脱细胞方法,为组织工程胆管支架材料的应用提供理论依据。 方法 30例猪胆总管,随机分为5组,A组:对照组, B组:0.05 % 胰蛋白酶+核酸酶,C组:0.1 % SDS+核酸酶,D组:1.0 % Triton X-100+核酸酶,E组:1.0 % Triton X-100+0.1 % SDS +核酸酶。在Test Resources生物力学试验机上进行加载一卸载试验和极限抗张强度试验。计算出生物力学材料常数(α1、β1、α2、β2)、弹性模量、极限抗张强度和断裂伸长率等指标。 结果 D组、E组的生物力学材料常数(α1、β1、α2、β2)与A组的差异无统计学意义(F = 12.21, P = 0.06),B组、C组比A组、D组和E组的小(P < 0.01);D组、E组的弹性模量比A组的稍增大,但差异不明显(P > 0.05),B组、C组比A组的小(P < 0.05);D组、E组的UTS值和SOF值与A组差异不明显(P > 0.05);B组、C组的UTS值明显小于A组(P < 0.05),SOF值明显大于A组(P < 0.05)。 结论 应用1.0 % Triton X-100+核酸酶和1.0 % Triton X-100+0.1 % SDS +核酸酶的脱细胞效果好,且不会影响猪胆总管的生物力学特性,是一种比较理想的猪胆总管脱细胞方法。  相似文献   

18.
Extracellular matrix is the gold standard for tissue regeneration. In this study, we directly made the extracellular matrix of the tissue or organ into scaffold for spinal cord injuries, a strategy that is seldomly tried in spinal cord engineering. The aim of this study was to determine if the chemically extracted acellular muscle could be a potential scaffold for spinal cord injury. The chemically extracted acellular muscle was implanted in the lateral hemisected adult rat thoracic spinal cord. Control rats were similarly injured. After 1 and 4 weeks, scaffold integration and biocompatibility, axon sprouting, and myelination were evaluated. The chemically extracted acellular muscle scaffolds were found to be well integrated with the host tissue. Sprouting axons grew into the full length of the scaffold in a strikingly parallel and linear fashion. A few remyelinated axons were also detected in the scaffolds. The tracing results in another six rats showed that labeled fibers entered the chemically treated muscle grafts. Furthermore, there were no apparent quantitative differences in the ED-1 and glial fibrillary acidic protein positive cells between groups. Neuron counting showed more surviving neurons in the acellular muscle treated group than those of the injured only group. Vascularization of the grafts was also confirmed. These findings clearly demonstrated that chemically extracted acellular muscle grafts provided useful biomatrices to enhance axon sprouting in the injured spinal cord.  相似文献   

19.
背景:研究表明新西兰兔软骨组织可作为组织工程支架材料,其中关节软骨及耳软骨的脱细胞基质的研究较多,但采用肋软骨作为组织工程软骨支架的研究较少。 目的:制备新西兰兔肋软骨脱细胞基质,探讨天然软骨支架作为组织工程支架的可行性。 方法:用联合去垢剂-酶法获得软骨支架,根据脱细胞过程中Triton X-100第2次处理时间0,24,48,96 h分为4组。脱细胞完毕后各组支架固定行扫描电镜采集图像观察计算支架孔隙率、孔径长度,并对支架进行苏木精-伊红染色、甲苯胺蓝及Ⅱ型胶原免疫组织化学染色,并将脱细胞支架植入异体新西兰兔皮下观察其相容性。 结果与结论:兔肋软骨脱细胞基质呈乳白色,大小均一,染色示支架结构完整,仍保存大量酸性黏多糖及Ⅱ型胶原成分,扫描电镜观察经一定时间的脱细胞处理后可得到结构完整,孔隙均匀的天然软骨支架,其孔隙率为(61.31±8.45) %;孔径长度为(32.80±5.15) μm,符合正态性分布,各组脱细胞支架植入异体新西兰兔皮下7 d后生物相容性良好,周围软组织无明显充血、化脓等炎症排斥反应出现。结果显示,兔肋软骨脱细胞支架具有良好的基质组成,有较完整、均匀的孔隙结构及孔径分布,可作为组织工程支架材料。  相似文献   

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