应用PCR/SSO方法分析湖南藉汉族人HLA—DQ位点DNA的多态性

本文用Ⅱth IHWC 提供的PCR 引物,扩增DQA1和DQB1多态性第二外显子序列,分别以17种和23种SSO 探针进行斑点杂交.分析10个DQA1等位基因和17个DQB1等位基因在湖南藉汉族人群中的分布情况.发现大多数DQA1和DQB1等位基因阳性,并与白种人的基因频率不同。提供了一种更简单、更精确的DQ 分型方法。     

沈阳汉族人群HLA—DR,DQ,DP的DNA分型研究

使用ＰＣＲ／ＳＳＯ方法对９４名沈阳汉族健康人群进行了ＨＬＡ第Ⅱ类抗原等位基因的完全分型，共发现６６种等位基因，基中ＤＲＢ１２８种，ＤＲＢ３３种，ＤＲＢ５４种，ＤＱＡ１８种，ＤＱＢ１３种，ＤＰＢ１０种，分析了ＤＲ－ＤＱ连锁的五位点单倍型，共发现３８种，其中２１种是在白人为主的人群已发现过的。本研究提出了中国东北人群ＨＬＡ第Ⅱ类抗原等位基因的遗传基本情况，可用于疾病研究的对照和其他中国群资料的比较。     

沈阳汉族人群HLA－DR、DQ、DP的DNA分型研究

使用ＰＣＲ／ＳＳＯ方法对９４名沈阳汉族健康人群进行了ＨＬＡ第Ⅱ类抗原等位基因的完全分型。共发现６６种等位基因，基中ＤＲＢ１２８种，ＤＲＢ３３种，ＤＲＢ５４种，ＤＱＡ１８种，ＤＱＢ１Ｉ３种，ＤＰＢ１１０种。分析了ＤＲ－ＤＱ连锁的五位点单倍型，共发现３８种，其中２１种是在白人为主的人群中已发现过的。本研究提出了中国东北人群ＨＬＡ第Ⅱ类抗原等位基因的遗传基本情况，可用于疾病研究的对照和其他中国人群资料的比较。     

中国汉族白血病患者及其相关人群罕见的HLA-DR/DQ连锁不平衡研究

 目的 研究中国汉族白血病患者及其相关人群罕见的HLA-DR/DQ连锁不平衡单倍型。方法 对2000－2005年在我院进行异基因造血干细胞移植前HLA配型的白血病患者及与患者有血缘关系的家系供者共1500例的血液标本，采用低分辨序列特异性引物聚合酶链反应（PCR-SSP）方法进行HLA-DR/DQ基因分型，并对两位点间连锁不平衡参数进行统计学分析。1500例中患者650例，平均年龄25岁；家系供者850例，平均年龄42岁。结果 在41例的血液标本中发现13种罕见的连锁不平衡单倍型，主要为HLA-DQ8 或HLA-DQ9与不同DR位点的连锁。其中DR14/DQ4、DR4/DQ5、DR9/DQ6、DR9/DQ7、DR8/DQ8、DR9/DQ8、DR12/DQ8、DR13/DQ8和DR14/DQ9共9种单倍型尚未见报道。650例白血病患者中有20例存在12种罕见的连锁不平衡单倍型，850例家系供者中有21例存在8种罕见的连锁不平衡单倍型。DR8/DQ8单倍型只见于家系供者，而DR14/DQ4、DR12/DQ6、DR11/DQ8、DR13/DQ8和DR14/DQ9单倍型则只见于白血病患者。41例HLA-DR/DQ基因分型结果显示，连锁不平衡单倍型与DR52（DRB3）宽抗原相关联者占58.5%（24/41），与DR53（DRB4）宽抗原相关联者占36.6%（15/41），而与DR51（DRB4）宽抗原相关联者仅占4.9%（2/41）。所发现单倍型频率最高的为DR12/DQ8（0.0023）和DR9/DQ8（0.0023），其次为DR11/DQ9（0.0020）和DR12/DQ9（0.0017）。13种连锁不平衡单倍型的绝对及相对连锁不平衡参数均为负值，说明它们在中国汉族人群中较为罕见，并处于连锁不稳定状态。结论 发现了罕见的DR/DQ连锁不平衡单倍型，对补充中国汉族人群HLA-DR/DQ基因的连锁不平衡类型，提高HLA分型结果的准确性具有一定意义；同时，DR/DQ连锁不平衡单倍型在不同人群中的差异为疾病关联研究提供了思路。     

HLA-DR位点的基因芯片分型与临床应用

目的：建立一种新型的HLA－DR位点的基因分型方法，为HLA－DR的基因分型提供一个较新的思路。方法：利用基因芯片技术HLA不同基因亚型的独特序列设计探讨，制成分型芯片；待检测样品经PCR反应标记上荧光之后，与芯片进行杂交，根据杂交产生的荧光信号值分析确定样品DR位点的基因亚型，将这一方法应用于70份标准DNA和200份医院移植供受者的HLA－DR基因分型并将部分样品进行基因测序。结果：检测结果表明HLA－DR基因分型芯片可准确分辨出DR位点等位基因30大类，耗时3h 。结论：基因芯片用HLA－DR的基因分型，分辨率高，特异性强，重复性好，操作简便，对比常规的PCR－SSP和PCR－SSO方法，HLA－DR基因芯片方法更为直观，并具有集成化优势。可以在一张芯片上同时检测HLAⅠ类的A、B位点，并实现一张芯片多人份，适合于临床应用和骨髓库，脐血库的建立。     

湖南汉族人群HLA-DR位点等位基因多态性与鼻咽癌的相关性研究

目的：探讨湖南汉族人群HLA-DR位点等位基因多态性与鼻咽癌遗传易感性之间的关系。 方法： 应用PCR/SSO基因分型技术对93例湖南汉族鼻咽癌患者和93例健康对照作HLA-DRB1、-DRB3、-DRB4、-DRB5基因分型，采用χ2检验比较两组各位点等位基因频率、单倍型频率分布的差异。 结果： NPC组DRB1*1101明显低于对照组，DRB1*0801明显高于对照组, 但P值经Bonferroni校正后，差异均无显著（Pc>0.05）。 结论： 湖南汉族人群HLA-DR位点与鼻咽癌无明显相关。     

用地高辛标记的PCR/SSO方法进行HLA-B27等位基因检测

目的建立检测ＨＬＡ－Ｂ２７等位基因的聚合酶链反应／顺序特异的寡核苷酸探针方法，并分析其实用性。方法采用４对引物Ｅ４０ｓ、Ｅ９０ａｓ；Ｅ９１ａｓ、Ｅ１３６ａｓ；Ｅ９１ｂｓ、Ｅ１８１ａｓ；Ｅ４０ｓ、Ｅ１３０ａｓ分别扩增靶ＤＮＡ，用１０个探针ＣＬ－１～９和ＰＡＮ－Ｂ２７分别进行杂交，探针用地高辛系统标记和检测，可检定Ｂ＊２７０１～２７０８共８个等位基因。结果通过对Ｂ２７等位基因已明确的８个阳性对照ＤＮＡ、５例Ｂ２７阴性标本及７５例阳性标本的检测，表明本方法技术稳定结果可靠，不会与其它ＨＬＡⅠ类基因产生交叉杂交而影响结果的指定。结论本研究为ＨＬＡ－Ｂ２７多态性和强直性脊椎炎关联研究提供了一种有效方法，也为ＨＬＡⅠ类分子基因分型研究积累了经验。     

河北汉族人群D1S8位点DNA结构多态性

目的 研究小卫星变异重复序列（ｍｉｎｉｓｔａｅｌｌｉｔｅ ｖａｒｉａｎｔ ｅｒｐｅａｔ,ＭＶＲ）位点Ｄ１Ｓ８的结构多态性,为ＤＮＡ指纹数据库的构建及法医学应用提供基础资料。方法 应用ＭＶＲ－聚合酶链反应和聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳银染法,检测２４０名河北汉族针关个体Ｄ１Ｓ８位点重复序列的变异并进行数字编码。结果 每一个体得到约３０个数字编码,未发现任何两个无关个体编码相同,３０个编码完全相同的概率为３     

洛阳地区汉族HLA—DRB1^＊04等位基因的PCR—SSO分型

对河南洛阳地区汉族进行了ＨＬＡ－ＤＲＢ１＊０４等位基因的ＰＣＲ－ＳＳＯ分型，采用第１２届国示组织相容性专题讨论会推荐的引物和序列特异性寡核苷酸探针，可检测１７个ＤＲＢ１＊０４组特异性等位基因，在１１６份无血缘关系健康人ＤＮＡ村洒中有１６份为ＤＲＢ１＊０４，其中１份为纯合，ＤＲＢ１＊０４的基因频率为０．０７１５。ＤＲＢ１＊０４等位基因分布于５个不同的型别，分别是ＤＲＢ１＊０４０１、０４０３、０４０４     

Real-time PCR分型法检测苏南地区汉族人群KIR基因多态性

目的利用SYBR Green I Real-time PCR分型方法检测杀伤细胞免疫球蛋白样受体(killer cell immunoglobulin-likereceptor,KIR)基因,探讨苏南地区汉族人群KIR基因的分布特点。方法应用SYBR Green I Real-time PCR法对191名苏南地区汉族非亲缘健康人群进行KIR基因分型。结果 SYBR Green I Real-time PCR法有效地进行了KIR基因分型。已知的16种KIR基因在苏南地区汉族人群均被检出。框架基因2DL4、3DL2、3DL3和假基因3DP1存在于所有受检个体中。最常见的非框架基因为2DL1、2DL3、3DL1、2DS4以及假基因2DP1。共检出33种KIR基因型,最常见的为AA1(39.27%),其次为BX2、BX4和BX8。发现仅在新加坡华人报道的罕见基因型BX331和BX337,及仅在墨西哥人群罕见的基因型BX427。结论苏南汉族人群中检测出已知的16种KIR基因,共发现33种基因型,最常见的为AA1,并见到3个罕见基因型BX331、BX337和BX427。     

HLA-DR、DQ基因多态性与遵义地区汉族流行性出血热相关性的研究

目的：探讨HIA-DR、DQ基因多态性与遵义地区汉族流行性出血热（EHF）的关联性。方法：采用群体研究方法，应用聚合酶链反应-序列特异性引物（PCR-SSP）技术对100例流行性出血热患者（患者组）和100例健康对照者（健康对照组）进行HIA-DR、DQ基因分型，比较其等位基因频率（GF），并计算其相对危险度（RR）。结果：EHF患者组HLA-DRB1＊16基因频率较对照组明显增高（Pat=3．58，χ^2=4．916，P=0．0266〈0．05）；患者组HIA-DQ各等位基因频率与对照组比较差异无显著性。结论：研究提示在遵义地区汉族人群中，HLA-DRB1＊16基因与EHF呈正相关，HLA-DRB1＊16基因可能是EHF的易感基因。     

大连地区汉族人群HLA-A,-B,-DRB1 位点基因多态性研究

目的:了解大连地区汉族人群HLA-A,-B,-DRB1 位点基因多态性分布特征。方法:采用基因测序及序列特异性寡核苷酸探针的方法对10 000 名居住在大连地区健康汉族造血干细胞捐献者进行HLA-A,-B,-DRB1 基因分型,从而得到等位基因频率。利用ARLEQUIN 软件估算单倍型频率及连锁不平衡参数,使用poptree2 软件计算两人群间遗传距离(DA)。结果:大连地区汉族人群中共检出HLA-A 基因18 个、HLA-B 基因32 个、HLA-DRB1 基因13 个,HLA-A*02(31.65%)、B*40(14.84%)、DRB1*15(15.82%)最为常见。三位点单倍型中A*30-B*13-DRB1*07(4.56%)频率最占优势,A*02-B*46-DRB1*09(2.43%)次之。A*30-B*13(6.00%)与B*13-DRB1*07(59.89%)为频率最高的两位点单倍型。A*33-B*58与B*13-DRB1*07 为大连地区汉族人群中最强连锁不平衡两位点单倍型,连锁不平衡参数分别为0.336 6 和0.665 1。大连汉族人群与国内某些人群进行比较,遗传距离最近的是黑龙江(0.001),其次为吉林(0.002)和山东(0.002),遗传距离最远的是台湾(0.047)。与国外其他人群进行比较,遗传距离最近的是泰国(0.029)和韩国(0.03),而遗传距离最远的是意大利(0.183)。结论:大连地区汉族人群HLA-A,-B,-DRB1 基因具有较为丰富的多态性,其分布符合北方人群的特点。     

PCR—SSP用于上海地区汉族人群HLA—DRB1基因分型的研究

通过建立顺序特异特异引物聚合酶链反应方法，对１０２名上海地区汉族人，１１２例肾移植供受者和１４份标准ＤＮＡ进行ＨＬＡ－ＤＲ基因分型。每份样本同时２０管ＰＣＲ反应，扩增条件为９４℃３０秒，６０℃５０秒，７２℃４０秒，共３４个循环。即可对ＤＲＢ１各等位基因作出准确分型，总耗时５小时。分型结果限制性内切酶分析和特异性探针杂交等予以确证，无一例假阳性和假阴性。     

PCR－SSP用于上海地区汉族人群HLA－DRB1基因分型的研究

通过建立顺序特异引物聚合酶链反应方法（ＰＣＲ－ＳＳＰ），对１０２名上海地区汉族人，１１２例肾移植供受者和１４份标准ＤＮＡ进行ＨＬＡ－ＤＲ基因分型。每份样本同时２０管ＰＣＲ反应，扩增条件为９４℃３０秒，６０℃５０秒，７２℃４０秒，共３４个循环。即可对ＤＲＢ１各等位基因作出准确分型，总耗时５小时。分型结果经限制性内切酶分析和特异性探针杂交等予以确证，无一例假阳性和假阴性。显示该方法快速、精确，适合于临床应用     

用限制性位点特异性PCR(RSS-PCR)对登革病毒进行快速亚型分型

登革热是危害全世界大众健康的一个主要问题。它是由四种登革病毒血清型引起的,而每种血清型又可为不同的基因亚型,毒株分型对了解其流行病学以及与疾病传播有关的病毒因子是非常重要的。然而,对发展中国家来说,大多数现有的亚型分型方法是比较昂贵的,而且从技术上也...     

应用毛细管参考链介导的构象分析法进行HLA-DR4等位基因分型

目的应用毛细管参考链构象分析法对HLA—DR4进行等位基因分型,并与测序分型结果相比较,评价该方法的准确性及实用性。方法首先应用FAM标记的引物扩增HLA-DRBl等位基因为纯合型的样本DRB1*0803、DRB1*0901的第二外显子作为参考链,与标准样品HLA-DR1第二外显子杂交获得异源双链,借助测序仪通过毛细管电泳建立中国人HLA-DR48个高频率等位基因的标准迁移率,再对30例DR4样本进行分型,并与测序分型法检测结果进行比较。结果30例样本中28例与测序法测得的等位基因结果一致。结论毛细管参考链介导的构象分析法具有准确性高、分辨率高的优势,与测序法相比具有成本低、高通量的特点,值得在移植、相关疾病等领域的HLA分型中推广应用。     

顺序特异性引物聚合酶链反应技术对HLA-DR DNA的分型

目的：应用顺序特异性引物聚合酶链反应技术(PCR—SSP)进行临床肾移植供受者HLA—DR位点DNA的分型。方法：设计并合成HLA—DR位点16对特异性引物和1对阳性对照引物，建立PCR—SSP法，对52份临床肾移植供受者的外周血淋巴细胞样本进行DR位点基因的分型。结果与微量PCR—SSP基因分型试剂盒分型方法比较。结果：所有临床样本的PCR—SSP基因分型均获得成功，结果与微量PCR—SSP基因分型试剂盒分型方法完全相同，分型时间3h，特异性和重复性100％。结论：应用合成引物为临床肾移植供受者进行HLA—DR位点PCR—SSP基因分型简便快捷，重复性好，适合于临床应用。