血管性血友病因子的研究进展

血管性血友病因子(von Wilebrand Factor,vWF)是由内皮细胞和巨核细胞合成并分泌的糖蛋白,在初期止血及血栓形成中起重要作用,并与临床出血及血栓性疾病密切相关,因此研究vWF的生物学特性和功能对临床相关疾病的诊治具有重要意义。     

血管性血友病因子与缺血性疾病

在血管损伤部位 ,vWF能够迅速结合暴露的胶原 ,从而易化血小板的粘附和聚集。损伤部位被一层血小板覆盖之后 ,vWF有助于血小板之间相互连接 ,最终形成血栓。由此可见 ,vWF参与血栓的整个过程 ,尤其在血栓的起始阶段起至关重要的作用。vWF的异常与缺血性疾病密切相关     

遗传性血管性血友病分子发病机制研究进展

血管性血友病因子（von Willebrand Factor,VWF）是一种在一期和二期止血中都起着重要作用的糖蛋白,其缺乏将导致患者出现血管性血友病(von Willebrand disease,VWD)。遗传性VWD可根据表型分为1型、2型和3型。其中2型又可进一步分为2A、2B、2M和2N四种亚型。三种类型及各亚型间具有不同的分子发病机制,阐明这些机制对研究VWF分子结构和功能以及VWD诊断和治疗具有重要意义。     

二氧化碳气腹对妊娠期大鼠血管性血友病因子影响的实验研究

目的:检测大鼠在妊娠中晚期不同的二氧化碳(CO2)气腹时间和气腹压力下血液中血管性血友病因子(vWF)的含量变化。方法:采用固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA)检测妊娠中、晚期大鼠在不同CO2气腹压力及时间内大鼠血液中vWF的含量变化。结果:(1)成功建立妊娠大鼠CO2气腹模型;(2)妊娠晚期胎盘血管损伤加重,但与CO2气腹无关。低CO2气腹压力即使长时间气腹对胎盘血管影响不大,高CO2气腹压力短时间气腹也对胎盘血管影响不大,但高CO2气腹压力长时间会对胎盘血管有严重影响(P0.05)。结论:长时间高气腹压力可能导致胎盘血管的损伤,但继续妊娠对胎盘功能的影响尚不明确,妊娠期腹腔镜手术建议在妊娠中期进行,采用低气腹压力,手术时间在2h内为宜。     

两个3型遗传性血管性血友病家系表型和基因型分析

目的 对2例遗传性血管性血友病家系进行临床表型诊断和基因型分析,探讨其分子发病机制.方法 分别采用出血时间、活化部分凝血活酶时间、瑞斯托霉素诱导的血小板聚集试验、血管性血友病因子(von Willebrand factor,vWF)瑞斯托霉素辅因子试验、vWF抗原、vWF活性、vWF胶原结合实验和多聚体分析对2例遗传性血管性血友病先证者和家系成员进行表型诊断.抽提先证者外周血基因组DNA,PCR法扩增VWF基因的52个外显子及侧翼序列,通过直接测序分析VWF基因突变.结果 2例先证者出血时间和活化部分凝血活酶时间均延长,血浆瑞斯托霉素诱导的血小板聚集、vWF瑞斯托霉素辅因子活性、vWF抗原、vWF活性、vWF胶原结合功能均显著降低,多聚体分析显示2例先证者多聚体均缺无,先证者A基因分析发现第17外显子的纯合插入突变g.82888_82889insCATG,导致740位蛋氨酸往后编码10个异常氨基酸后终止.先证者B基因分析发现第20外显子g.94865G＞A(Trp856X)和第28外显子g.110698_110699delinsG导致1481位甘氨酸往后编码42个异常氨基酸后终止的复合杂合突变.结论 g.82888_82889insCATG纯合插入突变和g.94865G＞ A(Trp856stop)与g.110698_110699delinsG的复合杂合突变分别导致了2例先证者的3型遗传性血管性血友病.     

Fogarty球囊导管取栓对兔静脉内皮形态及血管性血友病因子表达的影响

目的：观察Fogarty球囊导管取栓治疗兔急性静脉血栓后，兔病变段静脉内皮细胞形态及血管性血友病因子（vWF）的变化情况。方法：家兔95只，70只建血栓模型，并分为取栓（thrombectomy，TX）组、非取栓（non-thrombectomy，N-TX）组各35只；另25只为假手术组（shamoperation，SH）。于取栓后不同时段，获取病变段血管。扫描电镜观察内皮细胞形态学变化，免疫组化观察vWF的改变情况。结果：TX组术后1天内皮损伤为Ⅰ～Ⅱ级，4、7天时Ⅲ～Ⅳ级，14～28天Ⅱ～Ⅲ级，与N-TX和SH组比较，内皮细胞损伤重（P〈0．05）；vWF表达在取栓后7天时最强，14～28天有所降低。结论：急性深静脉血栓取栓后早期（7天内），静脉内皮形态学上损伤较为严重，促血小板聚集增强；取栓后期（14～28天）内皮形态部分修复，促血小板聚集有所减弱，但均未恢复到正常水平。     

血管性血友病因子裂解蛋白酶活性在系统性红斑狼疮并抗磷脂综合征中的临床意义

目的了解血管性血友病因子裂解蛋白酶(ADAMT-13)活性与系统性红斑狼狼疮(SLE)合并抗磷脂综合征(APS)临床特点的关系以及其价值。方法采用残余胶原结合试验检测22例SLE患者、13例SLE并APS(SLE-APS)患者和22例正常人血清中的ADAMT-13水平,并分析其与SLE-APS患者及SLE患者临床表现、实验室指标、疾病活动度及预后的关系。统计学分析采用t检验、χ~2检验和Spearman检验。结果 (1)SLE-APS患者的血清ADAMTS-13活性下降,且与血栓及血小板减少的表现相关。(2)SLE-APS患者的血清ADAMTS-13活性与SLE疾病活动度成反比。结论 SLE-APS的患者可能存在更多的自身抗体以及存在更严重的血栓表现及血小板减少,因此可能导致体内血管性血友病因子(vWF)生成增加;存在抗ADAMTS-13抗体,从而最终导致血清ADAMTS-13的活性下降。     

N-钙黏蛋白抗体对毛霉菌丝感染人肺微血管内皮细胞组织因子和血管性血友病因子表达水平的影响

目的:观察毛霉菌丝对人肺微血管内皮细胞(HPMVEC)分泌凝血因子的影响及N-钙黏蛋白抗体的干预作用。方法:取增殖期HPMVEC,分为毛霉菌丝感染模型组(毛霉菌丝组,用1×104 CFU毛霉菌丝与HPMVEC在37℃、5%CO_2饱和湿度下共培养12h)、人N-钙黏蛋白单克隆抗体干预组[N-钙黏蛋白抗体组,在HPMVEC与毛霉菌丝共培养前,先用该抗体(1mg/ml)与HPMVEC室温作用1h,之后按毛霉菌丝组操作]和空白对照组(用无菌去离子水代替毛霉菌丝悬液,且不行N-钙黏蛋白抗体作用,按毛霉菌丝组方法平行实验)。分别于0h、1h、2h、6h、12h收集各组培养上清液,采用ELISA检测其组织因子(TF)和血管性血友病因子(vWF)水平。结果:组内比较,毛霉菌丝组TF和vWF水平随培养时间增加而升高(均P0.05或P0.01);组间比较,毛霉菌丝组各时相TF和vWF水平均较空白对照组升高(P0.05或P0.01),而N-钙黏蛋白抗体组各时相TF和vWF水平均较毛霉菌丝组显著降低(P0.05或P0.01)。结论:毛霉菌丝感染HPMVEC所致TF、vWF水平升高可被N-钙黏蛋白单克隆抗体有效下调,或可用于防治由毛霉菌丝感染引起的血管内皮细胞损伤和血栓形成。     

糖尿病视网膜病变与血管性血友病因子和纤维蛋白原的关系

目的 :探讨糖尿病视网膜病变 (DR)与纤维蛋白原 (FIB)及vonWillebrand因子 (vWF)水平的关系及其临床意义。方法 :2型糖尿病人 10 4例根据病史及是否合并糖尿病微血管病变进行如下分组 :无并发症组 5 3例 (男 2 6例 ,女 2 7例 ) ,合并糖尿病视网膜病变组 5 1例(男 2 5例 ,女 2 7例 ) ,正常对照组 5 6例 (男 2 8例 ,女 2 8例 )。三组分别采用硫酸胺比浊法及双抗酶联免疫吸附法 (EUA)分别进行FIB、vWF的测定 ,并测定血压、糖化血红蛋白等指标。结果 :糖尿病患者血浆vWF、FIB水平较正常对照组明显升高 (P <0 .0 1) ,合并糖尿病视网膜病变组较无并发症组显著升高 (P <0 .0 1)。结论 :血浆FIB及vWF水平的升高与糖尿病视网膜病变的发生发展有关。     

人胰腺癌裸鼠移植瘤浸润和转移方式的研究

为了探讨胰头癌浸润及转移规律，我们用自建的三株人胰头癌裸鼠移植瘤，接咱在鼠背部、腹腔及抓垫皮下。结果表明：三株移植瘤背部接种均以局部浸润为主，可经淋巴疲乏转移至局部淋巴结（ＰＣＴ－３转移率为３３％；ＰＣＴ－４为４０％；ＰＣＴ－５为３３％），无远处淋巴结和（或）脏器转移；腹腔接种及抓垫接种与背部皮下接种结果相似。肿瘤的生长速度和浸润及转移的能力与肿瘤分化程度有一定关系。     

Effects of prolonged treatment with decarbazine on tumour metastatic potential in mice bearing Lewis lung carcinoma

The effects of decarbazine on tumour growth and metastatic dissemination upon treatment protracted for 10 tumour transplant generations were examined in mice bearing Lewis lung carcinoma. Primary tumour growth is unaffected by the drug, independently from the duration of the treatment. In contrast, dacarbazine significantly inhibits the formation of lung metastasis. The proportion of mice with metastasis decreases for an increasing number of transplant generations of treatment, and after 10 transplant generations of treatment metastatic capacity is completely lost in immunocompetent mice. The reduction in metastatic potential is relatively stable, being retained for three successive transplant generations without treatment. The metastatic potential of treated tumours in immunosuppressed mice is substantially similar to that in immunocompetent hosts, indicating that chemical xenogenization of tumour cells does not occur as reported for transplantable mouse leukaemias. The results obtained using clonally selected tumour lines with different metastatic potential rule out the selection by dacarbazine of tumour cell sublines with reduced metastatic potential as the mechanism of the drug's action. Upon prolonged treatment, dacarbazine appears to cause a rather stable and dramatic loss in metastatic potential, not accompanied by resistance, which might be attributed to genotypic alteration(s) of tumour cells, and which might participate into the clinical effects of the drug.     

具有不同转移潜能的前列腺癌细胞亚系的分离鉴定

目的 克隆具有不同转移潜能的癌细胞亚系,并应用体内外实验对各亚系的侵袭转移能力进行检测。方法 应用倍比稀释法对前列腺癌细胞系ＰＣ－３Ｍ进行单细胞克隆,并应用体内外实验包括生长曲线,人工基底膜侵袭实验,软琼脂集落形成,裸鼠异种接种及自发性转移实验检测各亚系的生物学特性及侵袭转移能力。结果 从前列腺癌细胞系ＰＣ－３Ｍ成功分离建立了４个具有不同转移潜能的亚系,经体内外多项实验检测证明：１Ｅ８为高转移亚系     

趋化因子受体CXCR4在人肺癌高转移细胞株的表达和意义

目的：以人肺癌高、低转移细胞株95D、95C为研究对象，研究趋化因子受体CXCR4的表达及其在肿瘤细胞体外转移潜能中的作用和意义。方法：采用RT-PCR检测95D、95C细胞CXCR4 mRNA的表达情况；以PMA活化肿瘤细胞，研究CXCR4 mRNA表达水平与细胞活性状态的关系；应用钙离子内流实验验证其表达是否具有功能；通过趋化实验观察CXCR4特异性配件SDF-α和裸鼠组织匀浆液对95D细胞的趋化迁移作用；通过MTT法测定95D细胞对SDF-1α作用的增殖反应。结果：95D细胞功能性地高表达趋化因子受体CXCR4，且其表达水平与细胞活性状态有关；CXCR4特异性配件SDF-1α和裸鼠肺、淋巴结组织匀浆均可在体外趋化95D细胞的迁移，SDF-1α还可促进95D细胞的增殖。结论：95D细胞功能性高表达趋化因子受体CXCR4可能与人肺癌细胞株95D的体外高转移潜能有关。     

特异性ILK siRNA对膀胱癌EJ细胞EMT及移植瘤生长的影响

目的研究整合素连接激酶(ILK)特异siRNA沉默ILK基因对膀胱癌EJ细胞上皮间质转化(EMT)及移植瘤生长的影响。方法用特异性ILK siRNA表达载体p Gensil-1siRNA1质粒和对照质粒p Gensil-1siRNA3稳定转染EJ细胞,实验分为EJ siRNA组、EJ vector组和EJ细胞组;激光共聚焦显微镜下观察细胞骨架;Western blot检测p-AKT、p-GSK-3β蛋白的表达;细胞免疫荧光检测p-AKT、p-GSK-3β的表达;用免疫荧光检测整合素连接激酶和核糖核酸酶抑制因子在EJ细胞中的共定位;MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期;建立裸鼠移植瘤模型,肿瘤和肺组织切片HE染色,免疫组化检测瘤组织中ILK、RI、NM23-H1和E-cadherin蛋白的表达;免疫荧光检测p-AKT、p-GSK-3β和CD31蛋白的表达。结果 EJ siRNA组细胞运动能力减弱;EJ siRNA组p-AKT、p-GSK-3β蛋白表达明显降低(P0.05);MTT法结果提示实验组细胞增殖明显受到抑制;下调ILK通过阻滞G0/G1期抑制细胞增殖;下调ILK抑制膀胱癌EJ细胞移植瘤生长转移。结论特异性ILK siRNA可以改变EJ细胞特性,抑制EMT的发生,引起增殖侵袭能力下降。     

Morpho-physiological changes in the adrenal cortex and thymus during growth of a transplanted glioblastoma multiforme in the rat brain

A study of the morpho-physiological changes in the adrenal cortex and thymus growth of a transplanted glioblastoma multiforme in the rat brain revealed marked activation of the glucocorticoid function of the adrenal cortex accompanied by inhibition of thymic function. In aniamsl not developing the disease activation of the thymic reticulo-epithelium was observed whereas the indices of adrenocortical function remained within normal limits.Laboratory of Age Pathology and Laboratory of Histopathology of the Central Nervous System, Institute of Human Morphology, Academy of Medical Sciences of the USSR, Moscow. (Presented by Academician of the Academy of Medical Sciences of the USSR A. P. Avtsyn.) Translated from Byulleten' Éksperimental'noi Biologii i Meditsiny, Vol. 78, No. 10, pp. 111–114, October, 1974.     

凝血酶受体-1在肺癌组织中的表达及其与转移的关系

目的研究凝血酶受体（PAR）-1在肺癌组织中的表达及其与肺癌侵袭、转移的关系。方法免疫组织化学sP法、形态学计量及逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测肺癌原发灶和转移灶组织（36例液氮冻存肺癌组织、80例石蜡包埋肺癌组织）中PAR-1的表达。结果具有侵袭和转移部位的癌巢、脉管内癌栓、癌周围的肺泡上皮不典型增生灶及支气管腺导管上皮不典型增生灶均呈现较强的阳性反应。肺癌组织PAR-1蛋白表达阳性率为73．8％（59／80例）;转移组85．7％（48／56）与非转移组45,8％（11／24）之间差异有统计学意义（P〈0．05）。转移和非转移（P〈0．05）、原发灶和转移灶（P〈0．05）、肿瘤组织和肺组织（P〈0．01）各组之间PAR．1蛋白含量差异有统计学意义;而肿瘤大小、组织学类型和组织学分化各组间差异无统计学意义（P〉0．05）。肺癌组织PAR．1mRNA表达阳性率63．9％（23／36例）;转移组78．3％（18／23例）与非转移组38．5％（5／13）之间差异有统计学意义（P〈0．05）。结论PAR-1过度表达与肺癌的转移表型、组织发生及恶性表型有关;PAR-1可能是肺癌转移过程中发挥重要作用的因素之一。     

具有不同转移潜能的肺癌细胞亚系的分离鉴定

自人肺巨细胞癌系分离了多个单细胞克隆，经体外侵袭实验和裸鼠体内接种相结合进行了初步鉴定后，挑选其中３个克隆化细胞亚系（ＰＧＢＥ＿１、ＰＧＣＬ＿３和ＰＧＬＨ＿７）进行形态、染色体众数、体外生长和侵袭，以及棵鼠体内成瘤率和自发性转移率检测。结果显示ＰＧＢＥ＿１、ＰＧＣＬ＿３和ＰＧＬＨ＿７在裸鼠体内的成瘤率均为１００％，淋巴结转移率分别为９４％、９４％和５０％，肺转移率则分别为８８％、６７％和４４％。表明人肺巨细胞癌母系为一异质性的细胞群体。     

小鼠移植瘤淋巴管分布及细胞间粘附分子-1的表达

目的：观察小鼠移植瘤内淋巴管的分布及细胞间粘附分子（ICAM-1）在癌细胞和淋巴管内皮细胞的表达。方法：于小鼠腹股沟区皮下接种肝癌细胞株（H22），分期取材。用5＇-Nase-Alpase双重染色法和VEGFR-3免疫组化法观察淋巴管的分布；检测ICAM-1在癌细胞和淋巴管内皮细胞的表达。结果：在肿块的周边部可见少量褐色的毛细淋巴管，VEGFR-3阳性表达。ICAM-1在肿瘤细胞和淋巴管内皮细胞都有表达，随肿瘤的发展而增强。结论：在移植瘤中存在毛细淋巴管，可能为新生的；ICAM-1在肿瘤细胞及淋巴管内皮细胞的表达，可能与癌淋巴管转移有关。     

Expression and activation of pro-gelatinase A by human melanoma cell lines with different tumorigenic potential

The production of various proteolytic enzymes by tumor cells facilitate the invasion of solid tumors into surrounding tissues. We examined three cell lines (M1Dor, M4Be and M3Da) derived from malignant melanoma which exhibited different abilities to grow in nude mice following subcutaneous grafting. By in vitro invasion assay using Boyden-chambers technique, we found that none of those cell lines were able to invade the Matrigel. Several studies have substantiated the role of matrix metalloproteinases (MMP), mainly gelatinases MMP-9 and MMP-2, in melanoma cell invasion. Each cell line constitutively produced MMP-2 (but not MMP-9) in its latent form only, with stronger production for the most tumorigenic cell line in vivo (M3Da). Integrity of the MMP-2 activation process was studied since MMP-2 was also recovered as zymogen at the cell plasma membrane. All cell lines secreted TIMP-1 and TIMP-2 in a constitutive manner and again, but TIMP-2 production as well as MT1-MMP expression were found inversely related to their tumorigenic potential. Plating cells onto type I or type IV collagen did not trigger pro-MMP-2 activation; on the contrary, conversion of pro-MMP-2 to its active form could be evidenced when melanoma cell lines were seeded in a three dimensional type I collagen lattice. This revised version was published online in July 2006 with corrections to the Cover Date.