藏红花素促进颈动脉损伤小鼠体内EPCs动员及损伤血管的再内皮化

目的:研究藏红花素对颈动脉损伤小鼠外周血中内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)动员的影响及其作用机制。方法:利用导丝损伤的方法构建C57BL/6小鼠颈动脉损伤模型,动物分为假手术组(sham组)、生理盐水处理模型组(model组)和藏红花素低、中、高剂量(10、50和100μmol·kg~(-1)·L~(-1))处理组。在3 d时,利用流式细胞术检测各组颈动脉损伤小鼠体内外周血中EPCs动员情况;7 d时,利用酶联免疫吸附法检测各组颈动脉损伤小鼠外周血血清中促血管修复因子——血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、基质细胞衍生因子1(stromal-derived factor-1,SDF-1)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)、表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)和基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的含量变化;14 d时,利用依文思蓝和苏木精-伊红染色分别检测各组颈动脉损伤小鼠损伤血管再内皮化和内膜增生情况;同时采用real-time PCR检测各组颈动脉损伤小鼠损伤段血管中促修复因子相关受体——血管内皮生长因子受体2(vascular endothelial growth factor receptor 2,VEGFR-2)、CXC趋化因子受体4(CXC chemokine receptor-4,CXCR4)、碱性成纤维细胞生长因子受体(basic fibroblast growth factor receptor,bFGFR)和表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)的mRNA表达水平。结果:与sham组相比,model组颈动脉损伤小鼠外周血中EPCs动员量和促血管修复因子VEGF、SDF-1、bFGF、EGF、MMP-9的含量上升(P0.05);损伤血管再内皮化面积下降而增生内膜面积和增生内膜与中层膜面积比显著升高(P0.05);损伤段血管中促修复因子相关受体VEGFR-2、CXCR4、bFGFR和EGFR的表达水平亦上升(P0.05)。而与model组相比,不同浓度藏红花素处理组颈动脉损伤小鼠外周血中EPCs动员量和促血管修复因子VEGF、SDF-1、bFGF、EGF、MMP-9含量均显著上升(P0.05);损伤血管再内皮化面积逐渐上升而增生内膜面积和增生内膜与中层膜面积比逐渐下降(P0.05);损伤段血管中促修复因子相关受体基因VEGFR-2、CXCR4、bFGF-R和EGFR的表达水平随之逐渐上升(P0.05)。结论:藏红花素能够促进颈动脉损伤小鼠体内EPCs细胞动员及损伤血管的再内皮化,从而对损伤血管发挥修复作用。     

siRNA对VEGF蛋白表达的影响及对裸鼠移植肾癌的抑制作用

目的探讨siRNA沉默血管内皮生长因子（VEGF）基因对人肾癌裸鼠移植瘤VEGF蛋白的表达水平及生长抑制作用的影响。方法化学合成针对VEGF的siRNA序列,通过脂质体将VEGF-siRNA转染到ACHN细胞中,将转染VEGF-siRNA的ACHN细胞（A组）、转染空质粒的ACHN细胞（B组）及未转染的ACHN细胞（C组）分别接种于裸鼠背部皮下。在SPF环境中饲养裸鼠并观察各组裸鼠移植瘤的生长情况,每隔5d测定移植瘤体积大小（肿瘤的长轴L,短轴W,肿瘤体积V=1/2LW2）,绘制肿瘤生长曲线,采用免疫组化及Western blot法测定裸鼠移植瘤组织切片中VEGF蛋白的表达水平。结果 A组小鼠移植瘤成瘤及生长明显缓慢,移植瘤的体积和质量均低于B、C组,差异有统计学意义（P〈0.05）;移植瘤组织切片免疫组化及Western blot法检测结果提示：与B、C组相比,A组中VEGF蛋白表达量降低,差异有统计学意义（P〈0.05）;而B、C组间瘤体的体积重量及VEGF蛋白表达差异均无统计学意义（P〉0.05）。结论 VEGF在肾癌的发生、发展中起着重要作用,化学合成的VEGF-siRNA可特异性抑制肾癌细胞中VEGF的表达,抑制肿瘤的生长增殖。     

急性白血病患者治疗前后血浆VEGF水平的临床意义

目的：探讨急性白血病患者血管内皮生长因子水平的变化。方法：应用酶联双抗体夹心法测定了34例急性白血病患者血管内皮生长因子的含量，并与35名正常健康人作比较。结果：急性白血病患者在治疗前血管内皮生长因子含量非常显著地高于正常人组（P〈0．01），经抗癌和中西医结合治疗三个月后与正常人组比较，仍有显著性差异（P〈0．05）。结论：急性白血病的发生与发展与血管内皮生长因子水平密切相关。     

姜黄素对佐剂性关节炎大鼠滑膜血管新生的影响

目的观察佐剂性关节炎大鼠血清血管内皮生长因子水平,滑膜血管新生和血管内皮生长因子及其受体的表达及姜黄素对其干预作用,探讨姜黄素治疗类风湿关节炎可能的机制。方法取sD大鼠,制成佐剂性关节炎模型,设正常组、模型组、姜黄素组、甲氨喋呤组。造模后第9天起分别予腹腔注射姜黄素50mg·kg^-1·d^-1,连续14d;甲氨蝶呤0．5mg·kg^-1·3d^-1,连续5次。计算第9天、第23天各组大鼠的AI积分。于第23天处死大鼠,ELISA法检测血清血管内皮生长因子;取膝关节滑膜,行免疫组化染色,观察滑膜微血管密度,半定量计算血管内皮生长因子及其受体的表达。结果①在第9天,各组造模后大鼠表现不同程度的关节炎症,其AI积分与正常组差异均有显著性（P〈0．01）。治疗后,第23天姜黄素组和甲氨蝶呤组大鼠AI积分与模型组相比有显著性差异（P〈0．01）;②模型组大鼠血清血管内皮生长因子明显升高（P〈0．01）,治疗后甲氨蝶呤组和姜黄素组的血清血管内皮生长因子与模型组相比差异均有显著性（P〈0．01）;③模型组大鼠滑膜微血管密度和血管内皮生长因子及其受体表达较正常组增加明显（P〈0．01）,治疗后甲氨蝶呤组和姜黄素组的微血管密度,血管内皮生长因子及其受体的表达与模型组相比差异均有显著性（P〈0．01）,且甲氨蝶呤组、姜黄素组组间比较差异无显著性（P〉0．05）。结论姜黄素能有效降低佐剂性关节炎大鼠血清血管内皮生长因子水平,抑制滑膜血管新生和血管内皮生长因子及其受体的表达,这可能是姜黄素治疗类风湿关节炎的作用机制之一。     

皮肤来源间充质干细胞对内皮祖细胞募集效应的体外观察

目的细胞的募集趋化与归巢被认为是间充质干细胞（MSCs）修复重建受损组织的重要机制,本研究拟通过体外实验观察皮肤来源间充质干细胞对在血管化中发挥重要作用的内皮祖细胞（EPCs）的募集效应。方法分离与培养胎鼠皮肤MSCs和大鼠EPCs,利用免疫组织化学法,分别检测二者的SDF-1与CXCR4表达;并利用体外迁移实验,观察MSCs是否影响EPCs的迁移。结果利用免疫组织化学检测,MSCs和EPCs可以分别表达SDF-1与CXCR4;利用双室培养系统发现,MSCs可明显促进EPCs的迁移,且阻断SDF-1表达后,这种促进效应得到抑制（P〈0.05）。结论体外实验证实了MSCs可以促进EPCs的募集趋化。     

糖尿病增加前列腺增生患者血尿发生率

目的探讨糖尿病（DM）对良性前列腺增生（BPH）患者血尿及BPH组织中血管新生的影响。方法分析295例单纯BPH及43例BPH合并DM患者的临床参数,应用免疫组化法检测其前列腺组织病理标本中血管内皮生长因子（VEGF）及CD34抗原的表达,并计算微血管密度（MVD）。结果BPH合并DM组患者血尿发生率显著高于单纯BPH组（P〈0．05）。合并DM的BPH组织中VEGF、MVD显著高于单纯BPH（P〈0．05和P〈0．01）,并且VEGF与MVD呈正相关（Rs=0．152,P〈0．01）。结论血管新生是BPH的一个重要环节,并与BPH血尿的发生有密切关系。DM能够促进BPH组织中的血管新生,从而加速BPH的发生、发展过程,并造成BPH患者血尿发生率增加。     

SDF-1和VEGF-C在结肠癌中的表达及与淋巴结转移的关系

目的探讨结肠癌组织中基质细胞衍生因子SDF-1、血管内皮生长因子-C（VEGF-C）表达的相互关系及其在淋巴结转移过程中的作用和可能机制。方法应用免疫组化法检测70例结肠癌组织和12例癌旁组织中SDF-1及VEGF-C的表达水平。结果结肠癌组织中SDF-1、VEGF-C阳性表达率分别为71．4％、64．3％，显著高于癌旁非癌组织的16．7％和8．3％（P〈0．01）。SDF-1、VEGF-C的表达与结肠癌的浸润深度、淋巴结转移及TNM分期有关（P〈0、01或P〈0．05），与结肠癌的分化程度、远处转移无关（P〉0．05）。SDF-1、VEGF-C之间表达呈正相关（r=0．608，P〈0．05）。结论结肠癌组织中SDF-1、VEGF-C表达均显著增高，两者在结肠癌淋巴结转移中可能具有协同效应，共同促进结肠癌的淋巴结转移。     

VEGF在自发性高血压大鼠肾小球内的表达

目的研究血管内皮生长因子（VEGF）在幼年及成年自发性高血压大鼠（SHR）肾小球内的表达,探讨它在高血压病肾损害中的作用。方法6周龄SHR和WKY大鼠各10只,15月龄SHR和WKY大鼠各20只,将肾组织进行常规病理和免疫组化染色（SP法）,利用计算机图像分析定量肾组织内的微血管数和VEGF的表达。结果VEGF蛋白主要分布于肾小球内的足细胞和球内系膜细胞,15月龄SHR组的阳性反应程度显著高于其余3组（P〈0．05）,而其他各组间无显著差异。结论推测VEGF可能参与高血压肾损害的发病过程。     

当归补血汤对动脉粥样硬化兔内皮祖细胞及血清VEGF、SDF-1的影响

目的: 观察当归补血汤对兔动脉粥样硬化模型外周血内皮祖细胞(endothelial progenitor cells, EPCs)功能及血清血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)、基质细胞衍生因子1(stromal cell-derived factor 1,SDF-1)表达的影响。方法: 新西兰兔25只,免疫损伤结合高脂饮食法建立动脉粥样硬化模型,模型动物随机分为5组,每组5只。模型组灌胃等量蒸馏水,辛伐他汀组灌胃辛伐他汀水悬液1.7 mg/kg,当归补血汤高、中、低剂量组分别灌胃当归补血汤6 g/kg、3 g/kg、1.5 g/kg,每天1次,2周后取兔血检测VEGF和SDF-1水平,培养并鉴定兔外周血EPCs,MTT法检测增殖能力,黏附实验检测黏附能力,Transwell小室检测迁移能力,体外血管生成试剂盒检测形成小管能力。结果: 与模型组比较,辛伐他汀及当归补血汤高、中剂量组家兔血清VEGF和SDF-1水平增高(P＜0.05),且EPCs的增殖、黏附、迁移和形成小管能力均有增强(P＜0.05)。结论: 当归补血汤可能通过提高循环VEGF和SDF-1水平来促进动脉粥样硬化EPCs的活性。     

红细胞生成素对慢性肾衰竭大鼠外周血内皮祖细胞SDF-1及其受体表达的影响*

 目的：观察红细胞生成素（EPO）对慢性肾衰竭（CRF）大鼠外周血内皮祖细胞（EPCs）归巢因子表达的影响。方法：采用分阶段5/6肾切除制备大鼠CRF模型。实验动物随机分为3组：假手术组、CRF组和EPO治疗组。从第3周开始,治疗组大鼠每次皮下注射重组人EPO 50 U/kg,每周3次,共6周。8周时取其外周血分离与培养EPCs,并检测EPCs的功能。采用实时荧光定量PCR和Western blotting检测外周血EPCs基质细胞衍生因子1 （SDF-1）及其受体（CXCR4）、EPO及其受体（EPOR）mRNA和蛋白的表达。结果：与CRF组比较,EPO治疗可上调外周血EPCs中SDF-1和CXCR4 mRNA及蛋白的表达（均P<0.05）;此外,EPO还可上调CRF大鼠外周血EPCs的 EPO及EPOR mRNA和蛋白的表达（均P<0.05）。结论：EPO对慢性肾衰竭大鼠外周血EPCs的动员可能与其增加外周血EPCs的 SDF-1及其受体表达有关。     

色素上皮衍生因子和血管内皮生长因子在糖尿病大鼠肾脏的不平衡表达

目的检测色素上皮衍生因子（PEDF）和血管内皮生长因子（VEGF）在糖尿病大鼠肾脏的表达，探讨其在糖尿病肾病（DN）发生发展中的作用。方法40只雄性Wistar大鼠随机分为：正常对照组（NC）、糖尿病模型组（DM）。4、8周末，检测血糖、糖化血红蛋白、肾重指数、尿白蛋白排泄率，免疫组织化学法检测肾脏PEDF、VEGF的表达。结果4、8周末，DM组大鼠肾脏PEDF的表达较NC组明显减少（P〈0．01）；VEGF的表达较NC组明显增多（P〈0．01）；肾脏PEDF的表达与VEGF明显负相关（r=-0．823，P〈0．01）。结论PEDF和VEGF在肾脏的不平衡表达可能参与了DN的发病。     

OSAHS患者腭咽组织血管内皮生长因子水平与微血管密度相关性分析

目的 探讨阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)患者腭咽组织中血管内皮生长因子(VEGF)水平与微血管密度(MVD)的相关性.方法 选择经多导睡眠监测仪(PSG)确诊的40例OSAHS患者组织标本(其中轻度7例,中度12例,重度21例),其中男性36例,女性4例;年龄29～62岁.6例无鼾症患者的软腭组织作为对照组,其中男性5例,女性1例;年龄18-58岁.采用苏木精-伊红(HE)染色法染色腭咽部组织,用光学显微镜观察其病理组织学改变,酶联免疫吸附分析检测血浆、腭咽组织匀浆中VEGF的含量,免疫组织化学技术检测MVD的表达情况.结果 酶联免疫吸附分析显示,OSAHS患者血浆及腭咽组织匀浆中VEGF水平均明显高于对照组,差异有显著统计学意义(P＜0.01);中、重度OSA HS组与对照组比较,MVD表达差异均有显著统计学意义(P＜0.01),轻度组与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05);组织匀浆中VEGF水平与MVD呈正相关(P＜0.01).结论 OSAHS患者腭咽部存在新生血管生成,与缺氧程度有关,VEGF在其发生发展过程中可能起到重要作用.     

兔VX2肝癌超声造影定量指标与肿瘤微血管密度及血管内皮生长因子的相关性分析

目的研究肝癌超声造影定量指标与肿瘤微血管密度（MVD）及血管内皮生长因子（VEGF）的相关性。方法25只VX2成年兔肝癌模型,兔龄3个月,体质量（2．9±0．1）kg。行超声造影检查,利用Qkab软件对造影动态图像进行时间-强度分析,得出肝癌组织与周边正常肝组织曲线增强上升斜率（AS）、开始增强时间（AT）、达峰时间（TTP）、峰值强度（PI）、曲线下面积（AUC）及相对参数,造影后对标本做MVD和VEGF检测,分析超声造影各定量指标与肝癌组织内部MVD及VEGF的相关性。结果在超声造影定量指标中,肝癌组织的AT、TTP及PI与周边正常肝组织相比[（7．29±0．73）svs（10．15±0．44）s,（10．02±0．73）s vs（17．01±0．81）S,24．24±4．29YS16．83±1．511,差异有显著统计学意义（P〈0．01）。肝癌组织的各项定量指标中,相对TTP与MVD、VEGF呈正相关（r分别为0．517、0．528,P〈0．05）,相对PI与MVD呈正相关（r=0．564,P〈0．01）。MVD与VEGF表达呈正相关,相关系数为0．641（P=0．01）。结论超声造影定量指标可在一定程度上反映肝癌组织内部微血管分布情况。有一定临床实用价值。     

COX-2、VEGF以及MVD在子宫内膜异位症中的表达及意义

目的通过探讨环氧合酶-2（COX-2）、血管内皮生长因子（VEGF）以及微血管密度（MVD）在子宫内膜异位症（EMs）在位内膜、异位内膜及正常子宫内膜组织中的表达,探讨子宫内膜异位症的发病机制。方法采用免疫组化SP法检测EMs患者32例在位内膜、28例异位内膜及40例对照组正常子宫内膜中COX-2、VEGF的蛋白表达,计数微血管密度（MVD）值,并进行相关性分析。结果 （1）COX-2、VEGF在EMs在位内膜、异位内膜阳性表达率明显高于正常对照组,差异具有统计学意义（P〈0.05）,EMs异位内膜组COX-2、VEGF阳性表达率高于在位内膜组,差异有统计学意义（P〈0.05）。（2）MVD的计数在正常对照组,在位内膜组,异位内膜组依次递增,在位内膜组、异位内膜组与正常对照组比较有统计学差异（P〈0.05）,而在位内膜组与异位内膜组比较有统计学差异（P〈0.05）。（3）EMs在位内膜、异位内膜组患者和正常对照组COX-2蛋白表达与VEGF蛋白及MVD值的变化呈正相关。结论 COX-2与VEGF在EMs中的高表达,与子宫内膜异位的血管生成有关。     

金水鲜胶囊联合放射治疗对 Lewis 肺癌小鼠肿瘤生长和血管内皮生长因子表达影响的研究简

目的观察金水鲜胶囊联合放射治疗（简称放疗）对Lewis肺癌小鼠肿瘤生长及血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法建立Lewis肺癌移植瘤小鼠模型,随机分为6组,即空白对照组、金水鲜组、放疗组、先金水鲜后放疗组、先放疗后金水鲜组和同时金水鲜＋放疗组,每组6只。放疗剂量为2Gy,金水鲜制成悬液后灌胃给药。游标卡尺测量瘤体长短径变化。绘制肿瘤生长瞳线：采用实时聚合酶链反应（real-time PCR）和免疫组织化学法检测瘤体VEGF的表达。结果肿瘤体积在接受处理后明显减小。与空白对照组相比,先金水鲜后放疗组、先放疗后金水鲜组和同时金水鲜＋放疗组肿瘤体积减小最为明显（分别为303.209mm^3±14.445mm^3,284.758mm^3±21.891mm^3,303.228mm^3±2.335mm^3）,差异有统计学意义（P〈0.05）。先金水鲜后放疗组、先放疗后金水鲜组和同时金水鲜＋放疗组与空白对照组或放疗组比较,VEGF表达阳性率降低（分别为12.97％±O.82％,15.13％±1.31％。13.62％±0.83％）,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论金水鲜胶囊与放疗联用对Lewis肺癌小鼠有抑制肿瘤的作用.其机制可能是下调VEGF的表达。     

血管内皮生长因子及其可溶性血管内皮生长因子受体-1水平与胎儿出生体重

目的本研究通过对比血管内皮生长因子(VEGF)、可溶性血管内皮生长因子受体-1(sFlt-1)水平差异与新生儿出生体重的关系,以探讨其在胎儿出生体重发生中的作用。方法采用免疫组织化学法检测40例分娩正常出生体重儿组(AGA组)、30例高出生体重儿组(LGA组)及30例低出生体重儿组(SGA组)胎盘组织中VEGF、sFlt-1的表达水平。结果①LGA组胎盘组织中VEGF的表达高于AGA组,sFlt-1的表达水平低于AGA组,差异有统计学意义(χ2=21.17,P<0.01)。SGA组胎盘组织中VEGF的表达低于AGA组,sFlt-1的表达水平高于AGA组,差异有统计学意义(χ2=8.44,P=0.04)。②胎盘组织中VEGF的表达水平与胎儿出生体重呈正相关(r=0.427,P<0.01),胎盘组织中sFlt-1的表达水平与胎儿出生体重呈负相关(r=-0.569,P<0.01)。结论孕妇胎盘组织中VEGF及sFlt-1表达水平的变化可能与胎儿出生体重有关。     

CTGF在胃癌中的表达及其促进血管生成的机制

目的研究CTGF在人胃癌标本中表达情况及其促进血管生成的机制。方法应用Real Time PCR和免疫组织化学染色检测胃癌标本中CTGF mRNA,VEGF mRNA及其在组织中蛋白表达情况;应用pcDNA3.1质粒上调AGS细胞中CTGF的表达,并用Real Time PCR和Western blot检测VEGF mRNA水平和蛋白水平表达变化;AGS稳定株细胞接种于裸鼠,成瘤后肿瘤组织切片,免疫组化染色。结果与正常组织相比,胃癌组织中CTGF mRNA,VEGF mRNA表达水平均显著增加,免疫组化亦显示CT-GF、VEGF在胃癌的标本中显色比正常对照组织强。统计显示两者mRNA水平及免疫组化表达有相关性（P〈0.05）。转染pcD-NA3.1 CTGF质粒后,AGS细胞中CTGF蛋白的表达上调,Real Time PCR及Western blot检测显示过表达CTGF后,VEGF表达上调。与对照细胞相比,过表达CTGF的AGS的肿瘤形成和生成速度明显加快（P〈0.05）。免疫组化染色显示VEGF的染色明显强于对照组。结论在胃癌中CTGF,VEGF表达明显增加,CTGF可能通过上调VEGF表达促进肿瘤血管生成。