抗霉素A抑制PC12细胞线粒体COⅡ基因表达

采用不同浓度的抗霉素 A(一种能提高线粒体内活性氧水平的线粒体抑制剂 )处理 PC12细胞 ,利用血细胞计数、台盼蓝排除法以及 MTT法进行细胞活性检测。实验证明 ,当抗霉素 A的浓度达到 15 0 μmol/L时 ,PC12细胞开始出现损伤 ;进一步采用 RNA斑点杂交和 RT-PCR技术分析发现抗霉素 A所致的细胞损伤和线粒体内细胞色素 C氧化酶亚基 (CO )基因表达下降有关。本研究证实线粒体介导的活性氧的产生能早期诱导线粒体细胞色素氧化酶的活性的改变 ,逐步引起 PC12细胞损伤     

β-淀粉样蛋白(1-42)对PC12细胞的氧化损伤

目的：探讨Aβ（1-42）对PC12细胞的氧化损伤作用。 方法: 利用不同浓度的Aβ(1-42)处理PC12细胞，采用MTT法、抗氧化酶活性测定以及RT-PCR分析观察Aβ(1-42)对PC12细胞的影响，分析Aβ(1-42)与SeGPx、MnSOD基因表达的关系。 结果: 随着Aβ(1-42)浓度的增加，SeGPx的表达不断下降；0.1 μmol/L Aβ(1-42)能诱导MnSOD的活性增加，Aβ(1-42) 对PC12的损伤作用能被acetovanilon（一种抑制内源性自由基产生的化合物）所抑制。 结论: Aβ(1-42)能介导PC12细胞内源性自由基的产生增多。     

原花青素对Aβ_(25-35)作用下PC12细胞的保护作用

目的:探讨原花青素对Aβ_(25-35)作用下PC12细胞的保护作用及机制。方法:25μmol/L的Aβ_(25-35)作用于PC12细胞48 h,预先加入25、50和100 mg/L的原花青素干预24 h。采用MTT法检测细胞存活率,DCFH-DA单染法检测细胞活性氧簇(ROS)的含量,JC-10单染法检测细胞线粒体膜电位,AnnexinⅤ/PI双染法检测细胞凋亡,Western blot检测凋亡蛋白caspase-3的蛋白水平。结果:原花青素可提高Aβ_(25-35)作用下PC12细胞的存活率,降低胞内ROS含量,阻止线粒体膜电位下降,抑制caspase-3的活化(P0.05或P0.01),从而抑制Aβ_(25-35)诱导的PC12细胞凋亡。结论:原花青素对Aβ_(25-35)作用下的PC12细胞具有明显的保护作用,其作用机制可能是通过清除Aβ_(25-35)诱导产生的ROS而减轻对线粒体膜的损伤作用,从而抑制细胞凋亡的发生。     

氧化应激诱导HepG2肝癌细胞凋亡的研究(英)

目的：直接暴露细胞于活性氧能诱导发生凋亡，本文研究氧化应激诱导HepG2肝癌细胞的死亡及其机制。方法：暴露细胞于2 mmol/L过氧化氢产生氧化应激，用DNA凝胶电泳检测细胞凋亡，用荧光染色法检测细胞线粒体膜电位变化，Western blotting检测细胞浆中细胞色素c变化，fluorometric assay kit检测caspase活性变化。结果：氧化应激作用于HepG2细胞后12 h开始发生凋亡；氧化应激作用后4 h，细胞线粒体膜电位明显下降；胞浆中细胞色素c浓度呈时间依赖性增高；氧化应激作用8 h、12 h后细胞内caspase-3、caspase-9活性分别升高6.7及3.6倍，但caspase-8活性无变化。结论：氧化应激能诱导HepG2肝癌细胞发生凋亡，其途径与线粒体通路及caspase激活有关。     

管花苷B对抗H2O2诱导的PC12细胞凋亡

目的：观察肉苁蓉提取物管花苷B对H2O2诱导的PC12细胞损伤的影响。方法：用MTT法检测细胞存活率，以激光共聚焦显微镜荧光染色法检测细胞内活性氧的产生和线粒体膜电位的变化，DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测细胞凋亡的发生，并用荧光酶标仪测定caspase-3的活性。结果：100μmol·L^-1H2O2处理细胞24h显著降低细胞的存活率；诱导细胞发生凋亡，凋亡率达48．0％；细胞内活性氧水平及caspase-3的活性显著升高；而线粒体膜电位却明显降低，红／绿荧光强度的比值由正常的5．97降低为0．41左右。而预先给予1、10或100mg·L^-1浓度的管花苷B处理细胞12h，可显著提高细胞存活率；并可有效抑制DNA ladder的发生；流式细胞仪检测凋亡率分别降低到30．9％、18．3％和6．2％；激光共聚焦显微镜结果显示管花苷B可明显降低细胞内活性氧的水平；并可逐渐恢复线粒体的高能量状态；caspase-3的活性不断降低，并呈现了一定的剂量依赖性。结论：管花苷B能显著地抑制H2O2诱导的PC12细胞凋亡，其神经细胞保护作用可能与其降低细胞内活性氧水平，维持线粒体膜电位的高能状态和抑制caspase-3的活性有关。     

PXD101诱导人前列腺癌细胞PC3凋亡的线粒体信号通路

目的:探讨PXD101(又称belinostat)诱导人前列腺癌PC3细胞凋亡的线粒体通路。方法:PXD101以不同刺激时间和剂量处理PC3细胞,CCK-8法检测细胞的活力;流式细胞术检测细胞的凋亡率和线粒体膜电位;Western blot检测线粒体凋亡相关蛋白Bcl-2、细胞色素C(Cyt C)和Bax;caspase-3活性检测试剂盒检测caspase-3活性。结果:PXD101能以时间和剂量依赖的方式抑制PC3细胞的存活(P0.05),流式细胞术检测结果表明PXD101处理后PC3细胞的凋亡率明显增加(P0.01)。PXD101能时间依赖性致线粒体膜电位降低和Bcl-2蛋白含量明显下降,Bax蛋白含量上升,促进线粒体释放Cyt C蛋白,caspase-3活性明显增强。结论:PXD101通过线粒体途径诱导人前列腺癌细胞系PC3细胞凋亡。     

槲皮素抑制异烟肼诱导的L-02细胞线粒体氧化应激性DNA损伤

目的:探讨活性氧(ROS)介导的线粒体氧化损伤在异烟肼(INH)诱导L-02细胞DNA损伤中的作用及槲皮素对细胞的保护作用。方法:建立体外培养INH致肝细胞L-02损伤的模型,将细胞分为对照(control)组、INH组、槲皮素低剂量(Que low)及高剂量(Que high)组。利用彗星试验评价细胞DNA损伤;制备L-02细胞线粒体,应用荧光探针DCFH-DA和rhodamine 123检测细胞线粒体ROS水平及线粒体膜电位(ΔΨm);采用TBA法测定丙二醛(MDA)含量;应用黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)的活性;采用Western blotting法检测细胞中Bcl-2和Bax蛋白表达,计算Bax/Bcl-2值。结果:INH可诱导L-02细胞DNA损伤,使细胞线粒体ROS水平、细胞MDA含量及Bax/Bcl-2值明显增高,并使细胞ΔΨm值和SOD活性明显下降。而槲皮素能减轻细胞DNA损伤,减少细胞ROS水平,增加细胞ΔΨm值,降低细胞MDA含量,增加SOD活性,减少Bax/Bcl-2值。结论:INH可通过诱导细胞线粒体氧化应激导致L-02细胞DNA损伤。槲皮素能减轻INH诱导L-02细胞的DNA损伤,对L-02细胞具有保护作用,可能与其抑制ROS介导的线粒体氧化损伤有关。     

促血小板生成素对化学性缺氧诱导的PC12细胞凋亡的影响

目的:研究促血小板生成素(TPO)对化学性缺氧诱导的大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞凋亡的影响及保护作用。方法:将PC12细胞进行相应实验处理,分为对照组、氯化钴(Co Cl2)处理组、Co Cl2+TPO组及TPO对照组。检测各组PC12细胞的存活率并用Annexin V/PI双染流式细胞术分别检测细胞凋亡率,线粒体膜电位的变化及细胞内活性氧簇的变化。结果:化学性缺氧模拟剂Co Cl2可以明显抑制PC12细胞的生长(P0.01);与对照组比较,Co Cl2组的细胞凋亡率明显升高(P0.05),而Co Cl2+TPO组的细胞凋亡率显著低于Co Cl2组(P0.05);TPO能减少细胞内活性氧簇生成以及抑制细胞线粒体膜电位的降低(P0.01)。结论:TPO能对抗Co Cl2缺氧所致的细胞凋亡,稳定线粒体膜电位,发挥细胞保护作用。     

iPSC-MSCs对CoCl_2诱导的PC12细胞损伤时线粒体功能的影响

目的:观察诱导性多能干细胞来源的间充质干细胞(i PSC-MSCs)对氯化钴(Co Cl2)诱导的PC12细胞损伤的影响,并探讨其可能机制。方法:用Co Cl2处理PC12细胞建立化学损伤模型,加入i PSC-MSCs共培养。用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)比色法检测细胞存活率,Annexin V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡比率,JC-1染色流式细胞术检测细胞线粒体膜电位,免疫荧光观察i PSC-MSCs向PC12细胞转移线粒体的情况。结果:用Co Cl2(400μmol/L)处理PC12细胞24 h可使其凋亡明显增多,线粒体膜电位明显下降。与i PSC-MSCs共培养能减轻PC12细胞的凋亡,使其膜电位恢复。i PSC-MSCs可以与PC12细胞间形成隧道纳米管并向PC12细胞转移线粒体。结论:i PSC-MSCs可以减轻Co Cl2诱导的PC12细胞损伤,机制可能与其向PC12细胞转移线粒体有关。     

管花苷B对抗H2O2诱导的PC12细胞凋亡

目的：观察肉苁蓉提取物管花苷B对H₂O₂诱导的PC12细胞损伤的影响。方法：用MTT法检测细胞存活率，以激光共聚焦显微镜荧光染色法检测细胞内活性氧的产生和线粒体膜电位的变化，DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测细胞凋亡的发生，并用荧光酶标仪测定caspase-3的活性。结果：100 μmol·L^-1 H₂O₂处理细胞24 h显著降低细胞的存活率；诱导细胞发生凋亡，凋亡率达48.0％；细胞内活性氧水平及caspase-3的活性显著升高；而线粒体膜电位却明显降低，红/绿荧光强度的比值由正常的5.97降低为0.41左右。而预先给予1、10或100 mg·L^-1浓度的管花苷B处理细胞12 h，可显著提高细胞存活率；并可有效抑制DNA ladder的发生；流式细胞仪检测凋亡率分别降低到30.9%、18.3%和6.2%；激光共聚焦显微镜结果显示管花苷B可明显降低细胞内活性氧的水平；并可逐渐恢复线粒体的高能量状态；caspase-3的活性不断降低，并呈现了一定的剂量依赖性。结论：管花苷B能显著地抑制H₂O₂诱导的PC12细胞凋亡，其神经细胞保护作用可能与其降低细胞内活性氧水平，维持线粒体膜电位的高能状态和抑制caspase-3的活性有关。