免疫磁性活化细胞分选方法优化及纯化后细胞的生物学特性检测

目的:改良常规免疫磁性活化细胞分选(MACS)的分离纯化方法,提高分选后细胞的纯度并确保细胞仍具有良好活性及功能。方法:以干细胞抗原-1(Sca-1)标记的Sca-1+造血干/祖细胞(Sca-1+HSC/HPC)为例,分别用改良后和常规MACS法分选出小鼠骨髓细胞Sca-1+细胞,流式细胞术检测两种分选方法获得Sca-1+细胞纯度;计算阳性细胞回收率;台酚蓝染色检测分选细胞存活百分率;CCK-8检测细胞增殖,混合造血祖细胞(CFU-Mix)体外培养评价分选Sca-1+细胞分化能力。结果:改良MACS法分选获得的Sca-1+细胞纯度达93%以上(常规MACS法仅为87%),阳性细胞的回收率可达73%(常规法仅为62.3%);细胞存活率、细胞增殖和CFU-Mix集落形成能力两种分选方法无明显差别。结论:改良法能明显提高细胞分选纯度及回收率,细胞活性和功能保持良好,值得各种细胞免疫磁性分选参考采用。     

Sca1+间充质干细胞支持造血干细胞向树突细胞分化

目的 研究Sca1+间充质干细胞对HSC向DC分化的支持作用,并对获得的DC进行形态、表面标志以及功能的鉴定。方法 取健康Balb/c小鼠骨髓,通过MACS系统分离、纯化CD117＋造血干细胞;以小鼠Sca1+间充质干细胞做饲养层,诱导CD117+造血干细胞定向分化为树突细胞,显微镜观测形态、流式细胞仪检测表面标志,并通过激光共聚焦显微镜和动物实验检测诱生细胞的功能。结果 培养第10天诱生的DC细胞表面树突较短小,呈毛刺状,高表达CD11b,低表达Ia,对外源颗粒具有吞噬功能,在动物器官移植实验中具有免疫抑制功能。结论 Sca1+间充质干细胞对CD117＋HSC向DC分化具有支持作用。     

骨髓间充质干细胞和心脏Sca1阳性细胞移植治疗心肌梗死的效果比较及其机制研究

目的探讨骨髓来源的间充质干细胞(MSCs)和心脏来源的Sca1阳性干细胞移植对小鼠急性心肌梗死后的心功能恢复的影响。方法分别从成年C57BL/C小鼠的骨髓分离获取骨髓间充质干细胞,从心脏利用流式分选获取Sca1阳性干细胞,并在体外进行培养、扩增。C57BL/C小鼠雄性小鼠24只,按照以下方式分组,每组6只,假手术组,生理盐水对照组,MSCs治疗组和Sca1阳性细胞治疗组。小鼠麻醉后开胸,利用结扎心脏冠状动脉的左前降支建立急性心肌梗死模型,建模成功后分别在梗死区周围心肌内注射上述细胞或者生理盐水,假手术组小鼠不结扎冠状动脉。4周后,利用心脏超声观察小鼠左心室射血分数(LVEF)以及左心室舒张末期容积,以此评估心功能改变。细胞培养至第4代,采用荧光半定量PCR的方式分析细胞表达血管内皮生长因子(VEGFa和VEGFb)的情况。结果分离培养的骨髓MSCs贴壁生长,呈梭形;Sca1阳性干细胞在心脏组织的阳性率约为18%,培养后细胞贴壁生长,成短梭形,形态较MSCs更饱满。在细胞移植治疗后,与Sca1阳性干细胞治疗相比,MSCs治疗可以增加心梗后小鼠的存活率。细胞移植治疗4周后,骨髓来源MSCs治疗组的LVEF明显高于心脏来源Sca1阳性干细胞,且更有利于减少心梗后左心室舒张末期容积的扩大,改善心肌重塑。骨髓来源的MSCs表达VEGFa和VEGFb明显高于Sca1阳性细胞。结论心脏来源的Sca1阳性干细胞和骨髓来源的MSCs均可提高LVEF,促进心功能的恢复,且后者优于前者,这可能与MSCs高表达VEGF有关。     

免疫磁珠分选系统在分离大鼠骨髓干细胞群中的应用

采用免疫磁珠分选系统(MACS)分离大鼠骨髓Thy-1.1 干细胞群。收集大鼠胫骨和股骨的骨髓细胞,Percoll密度梯度离心分离单个核细胞,Thy1.1单抗标记,间接MACS分离纯化Thy-1.1 干细胞群,流式细胞仪检测其纯度和分选前后CD34 百分比,台盼兰拒染法检测细胞活力,计算回收率。结果表明分选后的Thy-1.1 细胞纯度达94.2%,回收率64.7%;分选后细胞活力为99.6%,与分选前99.8%无明显差异;分选前CD34 百分比为1.2%,与分选后1.3%无差异。MACS能有效分选大鼠骨髓Thy-1.1 干细胞群,所得细胞纯度高,细胞活力保持好。大鼠Thy-1.1抗原与CD34分子无明显相关性。     

免疫磁性细胞系统分离筛选和荧光标记骨髓干细胞亚群Thy—1 low LinˉSca-1＋的研究

目的：探讨免疫磁性细胞分选系统(MACS)分离纯化骨髓干细胞亚群Thy-1 low LinˉSca-1 和绿色荧光蛋白(CFDA SE)标记它的效果。方法：收集小鼠股骨骨髓细胞，用MACS系统，通过3步分选步骤选择Thy—1low Sca-1 细胞，去除Lin 细胞，得骨髓干细胞亚群Thy—1low Lin—ˉSca-1 ，流式细胞仪分析其纯度，计算回收率；用CFDA SE与Thy—1 low LinˉSca-1 细胞共孵育标记。结果：MACS分选Thy-1low LinˉSca-1 细胞纯度和回收率高分别为72．36％和82．43％；CFDA SE标记强度高。结论：MACS系统能有效分选骨髓干细胞亚群Thy—1 low LinˉSca-1 ；CFDA SE能对Thy—1 low LinˉSca-1 细胞进行有效标记。     

两个不同骨髓干细胞亚群体外成肝潜能的比较研究

目的研究与比较骨髓造血干细胞(hematopoieticstemcells,HSCs)和间充质干细胞(mesen-chymalstemcells,MSCs)肝分化潜能。方法常规法分离培养大鼠骨髓MSCs。以Thy-1.1为标志,免疫磁珠法(magenicactivatedcellsorting,MACS)分离纯化HSCs。探寻MSCs、HSCs的诱导条件,从形态学、RT-PCR和免疫细胞化学法鉴定肝分化结果。结果MACS分选后Thy-1.1 细胞纯度94.20%,细胞活力99.62%。纤维状MSCs诱导后呈圆形,表达白蛋白及其mRNA,不表达甲胎球蛋白。诱导的HSCs为多角形,白蛋白表达逐渐减少,甲胎球蛋白表达逐渐增强。结论MACS方法能有效分选大鼠骨髓Thy-1.1 干细胞群。MSCs和HSCs二者具有不同的肝系分化潜能。MSCs在HGF/FGF-4的作用下表达成熟肝细胞的特异性基因,分化为成熟肝细胞样细胞;HSCs在HGF/FGF-1/FGF-2的作用下表达早期肝特异性基因,分化为肝干细胞样细胞。     

恒河猴骨髓来源未成熟树突状细胞的培养及鉴定

目的建立一种体外诱导恒河猴骨髓CD34+细胞分化为树突状细胞(DC)的方法,并对其细胞形态及表面标志进行鉴定。方法用免疫磁珠分选系统(MACS)分选恒河猴骨髓细胞,收集高纯度的CD34+造血干细胞;加入重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素4(IL-4)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α),诱导其分化为骨髓来源的树突状细胞,并采用电镜观察细胞形态。用树突状细胞表面标志CD1a及成熟树突状细胞(mDC)表面标志CD83流式抗体染色后分析。结果细胞因子诱导6d后成功培养出表面呈绒毛状和树枝状突起的典型DC样细胞,流式细胞术分析结果显示92.35%的细胞为DC,27.61%的细胞为m DC。结论用此方法可在体外培养出高纯度且典型的恒河猴骨髓源性未成熟树突状细胞(im DC),为进一步研究其生物学特性及功能奠定了基础。     

健康人骨髓CD34~+造血干/祖细胞衰老与年龄的相关性研究

目的探讨增龄过程中健康人CD34~+造血干/祖细胞(CD34~+HSC/HPCs)衰老的变化过程。方法由重庆医科大学附属第一医院血液科骨穿室提供正常人骨髓9例,将其分为青年组3例(女性31岁、男性26岁、男性28岁)、中年组3例(男性59岁、男性57岁、女性52岁)和老年组3例(男性70岁、男性70岁、女性62岁)。提取骨髓单个核细胞(BMNCs)后,免疫磁性细胞分选法分离纯化CD34~+细胞群,流式细胞术检测细胞纯度,台盼蓝染色检测细胞活性,衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色观察各年龄组阳性细胞百分比;造血干/祖细胞混合集落培养比较各年龄组CD34~+造血干/祖细胞形成混合集落能力。结果分选前每106个BMNCs中CD34~+细胞群比例为(1. 31±0. 54)%;免疫磁性分选后每106个细胞中CD34~+细胞群比例为(92. 5±0. 39)%。各年龄组人骨髓CD34~+造血干/祖细胞存活率可达99. 1%以上。人骨髓CD34~+造血干/祖细胞的SA-β-gal染色阳性率出现明显的随增龄变化趋势,老年组明显高于中年组及青年组。CD34~+造血干/祖细胞形成的干细胞混合集落能力随年龄增加降低。结论随年龄增加人骨髓CD34~+造血干/祖细胞出现明显衰老,表现为造血增殖能力下降,可能是造成一些老年人血液学疾病的原因。     

骨髓间充质干细胞在致敏与非致敏BALB/c小鼠造血干细胞移植中的应用

背景：造血干细胞移植对多种疾病具有治疗作用,但其取材不便,且细胞数量受年龄限制等原因,故而应用具有一定局限性。 目的：探索骨髓间充质干细胞在致敏与非致敏BALB/c小鼠造血干细胞移植中的应用价值。 方法：将BALB/c小鼠骨髓细胞在体外进行分离,采用贴壁培养的方法获得间充质干细胞,使用流式细胞仪对细胞表面的分子标记进行检测。应用异基因脾细胞输注方法建立致敏动物模型,用绿色荧光染料标记骨髓间充质干细胞,分别移植到致敏和非致敏的受体小鼠体内,并在移植后的不同时间点对间充质干细胞的归巢情况进行检测。对致敏BALB/c小鼠进行照射预处理,联合应用异基因骨髓细胞与同基因间充质干细胞移植,观察BALB/c小鼠的生存情况。 结果与结论：移植48 h后,间充质干细胞在致敏受体和非致敏受体小鼠分别归巢于脾脏和骨髓。在造血干细胞的移植实验中,致敏BALB/c小鼠接受异基因骨髓细胞与同基因骨髓间充质干细胞联合移植,结果显示致敏BALB/c小鼠全部在移植后12-15 d死亡,生存的中位时间是14 d,而仅接受异基因骨髓细胞移植的致敏BALB/c小鼠的中位生存时间为13 d。说明细胞移植后在致敏受体内间充质干细胞主要归巢为脾脏和骨髓,联合应用间充质干细胞移植对异基因造血干/祖细胞植入致敏受体体内并没有起到有效的促进作用。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

适当质量浓度黄芪注射液可增强骨髓基质细胞的表面黏附性

背景：研究发现很多益气补血类中药均是通过影响骨髓基质细胞分泌一些细胞因子来促进造血干细胞的分化增殖,或者促进骨髓基质细胞和造血干细胞的黏附而发挥作用。目的：观察黄芪注射液对小鼠骨髓基质细胞表面细胞间黏附分子1、血管细胞间黏附分子1表达的影响。方法：采用全骨髓贴壁细胞分离筛选法培养小鼠骨髓基质细胞,倒置相差显微镜、苏木精-伊红染色光镜及透射电镜观察小鼠骨髓基质细胞的形态。MTT法检测黄芪注射液促进骨髓基质细胞增殖的最佳浓度。流式细胞术检测黄芪注射液干预后小鼠骨髓基质细胞表面细胞间黏附分子1、血管细胞间黏附分子1的表达。结果与结论：倒置显微镜和光镜观察到骨髓基质细胞呈贴壁生长,细胞呈梭形或不规则形态,有突起;透射电镜观察到细胞内细胞器丰富,如粗面内质网、分泌小泡、线粒体等。黄芪注射液质量浓度为400和600 mg/L时可促进小鼠骨髓基质细胞增殖(P < 0.05),且两种剂量组间比较差异无显著性意义。600 mg/L黄芪注射液可增加小鼠骨髓基质细胞表面细胞间黏附分子1、血管细胞间黏附分子1蛋白表达。结果表明适当质量浓度黄芪注射液能够增强基质细胞的黏附性,对造血微环境有改善作用。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

小鼠干细胞抗原阳性胎肝细胞在受体鼠脑组织中的分化

为了解胎肝干细胞是否具有向神经组织细胞分化的潜能 ,本研究采用免疫磁珠法分离雄性胎鼠肝组织中干细胞抗原 1(stemcellantigen ,Sca 1)阳性细胞 ,尾静脉注射Sca 1+ 细胞 (2 0× 10 3个 小鼠 )到经致死剂量 (10 0Gy)放射线照射的 10～ 12周C5 7BL 6J雌性小鼠。免疫组化和FISH双染色检测结果显示移植 2、4、6月后受体雌鼠脑组织内存在大量Y染色体阳性细胞 ,约占脑组织总细胞为 4 5 %± 0 5 % ,分布包括 :侧脑室脉络膜丛、脑室室管膜、大脑白质灰质、小脑等。这些Y染色体阳性细胞表达神经组织细胞特异标志 ,如神经元特异核蛋白 (Neuron specificnucleiprotein ,Ne uN)、神经纤维细丝蛋白M(neurofilament 16 0Ka,NF M)、微管蛋白Ⅲ (tubulinⅢ ,TuJ 1)、或者胶质纤维酸性蛋白 (Glialfibrillaryacidicprotein,GFAP)等 ,其中Y染色体和NeuN均阳性的细胞为 1 2 %± 0 3%、Y染色体和GFAP均阳性的细胞为 1 0 %± 0 2 %。这说明胎肝Sca 1+ 细胞能迁移进入脑组织 ,并且分化成神经细胞和星形胶质细胞。     

免疫磁性细胞系统分离筛选和荧光标记骨髓干细胞亚群Thy-1low Lin- Sca-1+的研究

目的：探讨免疫磁性细胞分选系统（MACS）分离纯化骨髓干细胞亚群Thy-1^low Lin^- Sca-1⁺和绿色荧光蛋白（CFDASE）标记它的效果。方法：收集小鼠股骨骨髓细胞，用MACS系统，通过3步分选步骤选择Thy-1^low Sca-1⁺细胞，去除Lin⁺细胞，得骨髓干细胞亚群Thy-1^low Lin^- Sca-1⁺，流式细胞仪分析其纯度，计算回收率；用CFDASE与Thy-1^low Lin^- Sca-1⁺细胞共孵育标记。结果：MACS分选Thy-1^low Lin^- Sca-1⁺细胞纯度和回收率高分别为72.36%和82.43%；CFDASE标记强度高。结论：MACS系统能有效分选骨髓干细胞亚群Thy-1^low Lin^- Sca-1⁺；CFDASE能对Thy-1^low Lin^- Sca-1⁺细胞进行有效标记。     

免疫磁珠分离脐血CD133阳性细胞的方法研究

目的探讨免疫磁珠分离脐血CD133阳性细胞的方法。方法6%羟乙基淀粉(HES)和Ficoll-Paque联合应用分离出脐血中单个核细胞,再用MACSCD133磁珠分离试剂盒分选其中的CD133+细胞。结果经MACS分离的脐血中CD133+细胞数平均为(6.3±2.9)×105/ml,占单个核细胞的(1.41±1.14)%,经流式细胞仪检测CD133+细胞纯度为75%￣85%。结论免疫磁珠法是分离脐血CD133阳性细胞的较好的方法。     

黄芪多糖对小鼠骨髓及外周血造血干细胞的增殖及动员作用

探讨APS-P对正常或化疗后小鼠的骨髓、脾及外周血造血干细胞的促增殖及外周动员作用。给正常或经环磷酰胺化疗后的C57BL／6小鼠注射APS-P，然后取骨髓细胞、外周血细胞及脾细胞，并用荧光抗体PerCP-Sca-1，APE-c-kit及PE-Lineage(CD3，CD4，CD8，Trll9，B220 CDllb，Gr-1)进行染色标记，用流式细胞仪检测小鼠造血干细胞(Lin c-kit^ Sca-1^ )数量变化。注射APS-P能使正常及化疗小鼠骨髓、脾及外周血中的造血干细胞有不同程度的增加。这一作用可能是由于APS-P促进骨髓造血干细胞的增殖，而在外周血及脾中的增加则可能是由于APS-P对骨髓造血干细胞的外周动员作用。     

CD34~+CD38~+造血干细胞移植MISTRG小鼠的人源化免疫特征研究

目的研究人脐带血CD34~+CD38~+造血干细胞移植入MISTRG免疫缺陷小鼠体内的人源化免疫特征。方法利用Ficoll密度梯度离心法从新生儿脐带血中分离单个核细胞,并结合免疫磁珠法分选hCD34~+造血干细胞,然后经体外扩增培养后利用流式细胞技术检测CD34~+CD38~+细胞的比例。取2×105细胞数注射至辐照后的新生MISTRG小鼠肝脏内,分别于第3、6、9、12周采血检测人源免疫细胞的分化与表达情况。结果免疫磁珠法分选人的CD34~+CD38~+造血干细胞纯度高达92.0%。移植小鼠外周血中的hCD45~+细胞初始浓度水平大于10.0%,淋巴细胞群包含人源T(hCD3~+CD45~+)、B(hCD3-CD19~+)和NK(hCD3-CD56~+)淋巴细胞,其中B(hCD3-CD19~+)淋巴细胞所占比值最大(初始水平为49.0%±7.4%),髓系细胞群则主要由巨噬细胞组成(初始水平为82.3%±4.5%)。小鼠外周血中hCD45~+细胞比值和T细胞占免疫细胞的比值随着时间的推移逐渐下降,B淋巴细胞和巨噬细胞所占的比例逐渐升高,而NK细胞基本完全消失。结论人源CD34~+CD38~+造血干细胞在新生MISTRG小鼠中可有效分化为人源淋系和髓系免疫细胞。在移植后的12周内hCD45~+细胞的比例逐渐下降,MISTRG免疫缺陷小鼠最佳的人源化免疫系统维持时间为第3～6周。     

人参皂苷Rg1对白血病干细胞衰老的影响

目的对比健康人群造血干细胞(HSCs)与白血病患者HSCs衰老的生物学特征,并探讨人参皂苷Rg1对促进白血病干细胞衰老的效果,为白血病的防治提供新的思路和方法。方法取正常人骨髓15例(正常组),慢性髓细胞白血病患者骨髓16例(白血病组),正常组与白血病组分别再分为对照组与Rg1组。对照组进行常规培养;Rg1组在培养体系中加10μg/m L的人参皂苷Rg1,其他条件同对照组。2 d后提取各组人骨髓单个核细胞(BMNCs),免疫磁性吸附细胞分选法(MACS)分离纯化出CD34~+/CD38~-细胞群,流式细胞术检测细胞纯度,台盼蓝染色检测细胞活性,流式细胞术检测细胞周期时相,衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色观察各组阳性细胞百分比,CCK-8检测各组CD34~+/CD38~-增殖能力。结果分选前每1×106个BMNCs中CD34~+/CD38~-细胞群比例为(1.76±0.34)%;免疫磁性分选后每1×106个细胞中CD34~+/CD38~-细胞群比例为(91.15±2.41)%。白血病Rg1组人骨髓CD34~+/CD38~-细胞的SA-β-gal染色阳性率明显高于白血病对照组,差异具有统计学意义(P0.05);正常对照组与正常Rg1组比较,差异无统计学意义(P0.05),但均高于白血病对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。CCK-8结果显示,白血病对照组CD34~+/CD38~-细胞增殖速度明显增加,高于其余各组,差异具有统计学意义(P0.05)。各组人骨髓CD34~+/CD38~-细胞存活率可达99.1%以上。细胞周期时相结果显示,白血病对照组CD34~+/CD38~-细胞G1期阻滞明显低于其余3组,差异具有统计学意义(P0.05)。结论慢性髓细胞白血病患者骨髓CD34~+/CD38~-细胞增生活跃,出现明显逆衰老现象,这可能是造成一些慢性髓细胞白血病的原因之一,而人参皂苷Rg1可以通过促进白血病干细胞衰老延缓这一过程。     

小鼠胚胎期注射抗CD4单克隆抗体对胸腺和脾脏CD4单阳性细胞的影响

胚胎期注射抗CD4 MAb后,通过FACS(流式细胞分选仪)分析出生后小鼠胸腺和脾脏中CD4单阳性细胞的变化,结果表明脾脏中CD4单阳性细胞比例非常显著地减少,而胸腺中CD4单阳性细胞比例几乎不受影响。     

CFSE标记神经祖细胞方法的建立与验证

目的建立并验证羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE)荧光探针标记神经祖细胞(NPCs)的方法。方法在胚胎期小鼠侧脑室注射CFSE以标记室周区(VZ)细胞,在注射后的1 h和3 h分别收集组织,通过免疫荧光方法检测其特异性。在注射后的1 h分离出背侧新皮质,通过流式细胞荧光分选术(FACS)分选强阳性细胞,并通过干细胞标志物、神经元标志物等验证。结果 CFSE能够瞬时标记VZ区细胞,标记窗在3～6 h。CFSE进行长时程标记会出现衰减。利用CFSE分选所得细胞70%为神经祖细胞,少量为神经元等。结论 CFSE能够用于瞬时及长时程在体标记。CFSE还可用于分选神经祖细胞,但尚需调整分选策略以提高特异性(FACS)。     

Pqlc2基因缺失对小鼠稳态、衰老、饥饿、急性髓系白血病条件下造血系统的影响

目的：探讨在稳态、衰老、饥饿及急性髓系白血病条件下Pqlc2(PQ loop repeat containing 2)基因缺失对小鼠造血系统的影响。方法：（1）应用流式细胞术检测稳态下Pqlc2基因缺失小鼠骨髓造血干/祖细胞的比例；利用造血干细胞体内移植模型检测Pqlc2基因缺失对造血干细胞重建造血能力的影响；（2）分析衰老下Pqlc2基因缺失小鼠外周血中各类血细胞的数目，脾脏中B细胞、T细胞及髓系细胞比例，胸腺中四类T细胞比例，以及骨髓中造血干/祖细胞的比例；（3）建立能量限制压力模型，检测在连续3 d的饥饿处理下，Pqlc2基因缺失对小鼠造血干/祖细胞的影响；（4）构建野生型和Pqlc2基因缺失的急性髓系白血病（MLL-AF9 AML）小鼠模型，检测Pqlc2基因缺失对白血病小鼠生存率及造血系统的影响。结果：（1）与野生型小鼠相比，Pqlc2基因缺失导致稳态下小鼠造血干细胞比例显著升高（P<0.01），造血祖细胞比例无显著差异（P>0.05），造血干细胞重建造血能力显著下降（P<0.05）;(2)Pqlc2基因缺失对衰老小鼠的造血系统无显著影响（P>0.05...     

C57BL/6小鼠骨髓单核细胞分离、培养、纯化及向破骨细胞的分化

背景：目前骨髓单核细胞的分离提取国内外文献报道,大多是利用RAW264.7细胞诱导分化为破骨细胞。 目的：探讨分离、培养、纯化和鉴定C57BL/6小鼠骨髓单核细胞的方法,观察小鼠骨髓单核细胞体外生长特征,诱导其向破骨细胞分化。 方法：无菌分离C57BL/6小鼠股骨和胫骨,取出骨髓细胞,提取过程中先用红细胞裂解液去除红细胞;骨髓细胞过夜培养后(大于16 h),第2天分离出悬浮细胞,在含有巨噬细胞集落刺激因子的培养基中继续培养获得贴壁的小鼠骨髓单核细胞。通过换液对小鼠骨髓单核细胞进行纯化和扩增培养。进行形态学观察,测定生长曲线,用流式细胞仪检测原代小鼠骨髓单核细胞细胞表面抗原,加入巨噬细胞集落刺激因子和核因子κB受体活化因子配基诱导分化为破骨细胞。 结果与结论：新分离的小鼠骨髓单核细胞呈小圆形,两端伸出触角,培养5 d后,细胞成椭圆形,两端的触角更明显,增殖依赖巨噬细胞集落刺激因子。流式结果显示分离的小鼠骨髓单核细胞纯度较高,能够诱导分化为破骨细胞。利用间充质干细胞与单核细胞的贴壁能力不同及巨噬细胞集落刺激因子显著促进单核细胞贴壁增殖的特性能有效分离获得稳定生长的小鼠骨髓单核细胞。培养的小鼠骨髓单核细胞性状稳定,表型稳定均一,适于做进一步研究。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程全文链接：