消肿止痛合剂通过VEGF-Dll4/Notch信号通路减轻大鼠血管内皮细胞缺氧损伤

目的:研究消肿止痛合剂对大鼠皮瓣血管内皮细胞功能及VEGF-Dll4/Notch信号通路中相关蛋白表达的影响。方法:体外分离并培养大鼠皮瓣血管内皮细胞,将细胞分为对照组、缺氧组、缺氧+消肿止痛剂组(缺氧+消肿组)、缺氧+消肿止痛剂+axitinib(VEGF受体抑制剂)组及缺氧+消肿止痛剂+MK-0752(Notch通路阻断剂)组。采用ELISA法测定血清中VEGF含量,采用细胞calcein-AM和PI双染色法判断缺氧后1 d、2 d和3 d死活细胞数量,Western blot检测了24 h和48 h细胞内VEGF-A、Notch和Dll4蛋白的表达量。结果:与对照组相比,缺氧24 h和48 h后VEGF含量显著增加,细胞死亡率显著增加,且VEGF-A、Notch和Dll4的蛋白表达量显著增加(P0.05);与缺氧组细胞相比,消肿止痛合剂干预后,VEGF的含量显著增加,细胞死亡率显著降低,且VEGF-A、Notch和Dll4的蛋白表达量显著升高(P0.05)。与消肿止痛合剂组相比,VEGF受体抑制剂干预细胞后,消肿止痛合剂对缺氧损伤的血管内皮细胞的保护作用减弱,细胞死亡率明显增加,VEGF的含量降低,且VEGF-A、Notch和Dll4的蛋白表达量降低(P0.05)。Notch通路阻断剂干预细胞后,细胞存活率不变,VEGF-A的蛋白表达水平增加,Notch和Dll4蛋白表达增加的趋势被有效抑制(P0.01)。结论:消肿止痛合剂可改善大鼠皮瓣血管内皮细胞的功能,其机制与影响VEGF-Dll4/Notch信号转导通路有关。     

丁苯酞通过激活VEGF/VEGFR2-Notch1/Dll4信号促进HUVECs形成血管

目的:探索缺血缺氧(H/I)条件下丁苯酞(NBP)通过激活血管内皮生长因子(VEGF)/VEGF受体2(VEGFR2)-Notch1/Delta样配体4(Dll4)信号促进人脐静脉内皮细胞(HUVECs)血管形成的机制。方法:利用无血清培养基和缺氧罐模拟H/I条件,HUVECs传代培养后设置正常对照(control)组、H/I组、NBP高剂量(H/I+NBP_(high))组和NBP低剂量(H/I+NBP_(low))组,其中control组为常规培养的HUVECs,H/I组为H/I条件下培养的HUVECs,H/I+NBP_(high)组为在H/I环境下使用20μmol/L丁苯酞干预的HUVECs,H/I+NBP_(low)组为在H/I环境下使用5μmol/L丁苯酞干预的HUVECs。CCK-8法检测各组细胞的细胞活力,细胞划痕实验检测各组细胞的迁移能力,体外血管形成实验检测各组细胞成管能力,Western blot法检测VEGFR2、Notch1和Dll4的表达,ELISA法检测培养基中VEGF的表达,qPCR检测VEGF、VEGFR2、Notch1和Dll4的mRNA表达水平。结果:丁苯酞可以提高H/I条件下HUVECs的存活率,促进细胞的迁移和体外血管的形成能力,且H/I+NBP_(high)组比H/I+NBP_(low)组更加显著。丁苯酞可以提高VEGF、VEGFR2、Notch1和Dll4的mRNA及蛋白表达。结论:丁苯酞可以在H/I条件下促进HUVECs形成血管,其机制可能与VEGF/VEGFR2-Notch1/Dll4信号的激活有关。     

重组人内皮抑素通过激活Dll4/Notch通路抑制大鼠动脉粥样硬化斑块内血管新生

目的:观察重组人内皮抑素(rh ES)对大鼠动脉粥样硬化(AS)斑块内新生血管的抑制作用,探讨Dll4/Notch信号通路在其中的调控机制。方法:雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组(N组)、AS组和AS+rh ES组,每组10只。N组始终喂基础饲料,其余2组采用高脂喂养、维生素D3负荷及球囊损伤动脉内膜建立大鼠AS模型。AS+rh ES组以10 mg·kg~(-1)·d~(-1)的rh ES腹腔注射4周,另2组注射等量生理盐水。采血检测各组的总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、C反应蛋白(CRP)、白细胞介素-1(IL-1)和肌钙蛋白I(Tn I)等;免疫组化CD31染色观察新生血管密度;Western blot法检测主动脉内Dll4、Notch1蛋白表达。结果:与N组比较,AS组和AS+rh ES组的TC、TG、LDL-C、CRP和L-1水平均显著升高(P0.05),但上述指标在AS组和AS+rh ES组之间差异无统计学显著性。CD31染色结果显示,AS组的新生血管表达最丰富;与AS组比较,AS+rh ES组的新生血管密度显著下降(P0.05)。AS组的Dll4和Notch1蛋白水平显著低于N组(P0.05);相比AS组,AS+rh ES组的Dll4和Notch1蛋白水平显著升高(P0.05)。结论:rh ES能够抑制大鼠AS斑块内血管新生,Dll4/Notch通路的激活可能是rh ES抑制斑块内的血管新生的信号机制。     

hUCMSCs与VEGF联合移植对MCAO大鼠微血管密度的影响

目的将体外培养的人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)与血管内皮生长因子(VEGF)联合植入脑缺血(MCAO)模型大鼠脑内,观察缺血区血管新生和神经功能缺损修复情况。方法选择75只SD大鼠分为MCAO组、hUCMSCs组、VEGF组和hUCMSCs+VEGF组,观察在缺血前、缺血后7d、14d、28d4个时间点改良神经功能评分(mNSS)变化及7d、14d、28d3个时间点免疫组织化学法检测脑缺血区域微血管密度(MVD)。结果在缺血后7d、14d、28d3个时间点mNSS评分:shamhUCMSCsorVEGF>hUCMSCs+VEGF(P<0.05),hUCMSCs组、VEGF组、hUCMSCs+VEGF组的新生血管密度均高于MCAO组(P<0.05),其中hUCMSCs+VEGF组微血管密度最高(P<0.01)。结论 hUCMSCs联合VEGF移植入MCAO模型大鼠脑内,可促进其缺血区血管新生和神经功能的恢复。     

电针结合经颅脉冲电刺激通过miRNA-150调控VEGF促进脑卒中大鼠血管新生

目的 探讨电针结合经颅脉冲电刺激促进脑卒中大鼠血管新生的作用机制。方法 60只SD大鼠被随机分为假手术组(sham)、模型组(model)、电针组(EA)、经颅脉冲电刺激组(tPCS)、电针结合经颅脉冲电刺激组(EA+tPCS)及EA+tPCS+miRNA-150 inhibitor组(miRNA-150 inhibitor),每组10只。采用线栓法制备慢性脑卒中模型。对各组大鼠神经行为学进行评分；HE染色观察大鼠脑皮质区病理损伤；免疫荧光染色测定大鼠脑组织微血管密度；qRT-PCR检测脑组织中血管内皮生长因子(VEGF)、血管生成素-2(Ang-2)mRNA及miRNA-150表达水平；Western blot检测VEGF蛋白表达。结果 与模型组相比，EA、tPCS及EA+tPCS组大鼠神经行为学评分显著降低，大鼠脑皮质病理损伤明显减轻，脑组织微血管密度显著增加，VEGF和Ang-2 mRNA表达水平显著升高，miRNA-150表达水平显著升高，且VEGF蛋白表达水平亦显著增加，上述结果尤以EA+tPCS组的效果最为显著。然而，当大鼠注射miRNA-150 inhibitor后，EA...     

血管内皮生长因子和醛糖还原酶对糖尿病大鼠股骨头结构和微血管形态的影响

目的 观察糖尿病大鼠股骨头微血管分布及形态上的变化.探讨糖尿病大鼠股骨头组织血管内皮生长因子(VEGF)mBNA在不同时间表达的差异以及醛糖还原酶(AR)活性变化对股骨头组织结构演变、微血管病变的影响. 方法 建立速发型链脲佐菌素(STZ)糖尿病大鼠模型,随机分为正常5周组(CON1)、10周组(CON2)及15周组(CON3),糖尿病5周组(DM1)、10周组(DM2)及15周组(DM3),每组10只.光镜下观察各组股骨头结构以及凝血因子Ⅷ免疫组织化学表达情况;墨汁灌注行微血管密度测定;观察VEGF mRNA原位杂交表达强度并分析;生化检测各组股骨头组织匀浆的AR活性. 结果 糖尿病大鼠股骨头随病程发展骨小梁变少变薄,骨髓腔增大;凝血因子Ⅷ因子表达上升,微血管密度增大;VEGF mRNA在骨髓腔血管内皮细胞表达上升,AR活性增大(P<0.05). 结论 糖尿病大鼠股骨头出现骨质疏松变化倾向,与VEGF mBNA促进微血管增生、血管通道性增大及AR活性增强密切相关.     

去铁胺对新生大鼠缺氧缺血性脑的保护作用

目的： 研究去铁胺对新生大鼠缺氧缺血性脑病(HIE)模型新生血管形成的影响。方法：新生7 d SD大鼠建立HIE模型，模型组和治疗组建模前24 h分别用去铁胺或生理盐水注射。第1 d、3 d、7 d和14 d处死大鼠，检测缺氧缺血（左）侧脑组织毛细血管密度(BCDI)、增生毛细血管数、脑含水量、脑萎缩程度及其血管内皮生长因子(VEGF)和低氧诱导因子-1α (HIF-1α) mRNA表达。结果：治疗组左脑含水量和左脑萎缩比显著低于模型组(P<0.01)；左侧脑组织增生毛细血管数目显著高于模型组［(2.01±0.31)条/HPF vs (0.90±0.25)条/HPF ,P<0.01］。去铁胺显著上调左侧脑组织VEGF 和HIF-1α mRNA表达［12 h时VEGF：(1.41±0.07) vs (1.10±0.15)，P<0.05；HIF-1α：(1.49±0.12) vs (1.11±0.16)，P<0.05］。结论:去铁胺可能通过上调脑组织HIF-1α和VEGF表达，促进缺氧缺血脑组织新生血管形成，减轻缺氧缺血性脑损伤。     

Dll4-Notch信号传递途径在血管发生中的作用

血管发生(angiogenesis)依赖多种促进血管发生因子和抑制血管发生因子之综合的交互作用所调控。血管内皮生长因子(VEGF)和Notch信号传递途径(Notch signaling pathway)参与此过程。之前研究已证明Notch信号传递途径在胚胎发育和肿瘤血管发生(tumour angiogenesis)中扮演重要的角色,而最近研究则发现在血管发育过程中Dll4-Notch信号传递途径扮演着前所未知的新角色,并阐明因Notch信号传递减少而引起血管缺陷之机制,从而揭示破坏肿瘤血管发生的新药物靶点。本文着重于介绍Notch信号传递途径的组成;Dll4-Notch在血管发生中的作用;以及Dll4-Notch对肿瘤治疗的意义。     

电针结合康复训练对缺血脑卒中大鼠Notch1与Notch4表达的影响

目的探讨电针结合康复训练治疗对脑卒中大鼠神经功能及大鼠大脑皮层Notch1与Notch4表达的影响。方法 60只SD大鼠随机分为3组:假手术组(S)、模型组(M)与电针+康复训练组(E),采用大脑中动脉阻塞法(MCAO)建立局灶性脑缺血动物模型。采用Longa法评定实验大鼠的神经功能缺损程度,免疫组织化学方法与Western blot和real time PCR方法检测大鼠大脑皮层Notch1与Notch4表达。结果与模型组相比,电针+康复训练组大鼠在实施治疗后,Longa评分明显改善(P0.01)。与假手术组相比,模型组大鼠大脑皮层Notch1与Notch4蛋白与mRNA表达水平显著升高(P0.01);而与模型组相比,电针+康复训练组大鼠大脑皮层Notch1与Notch4蛋白与mRNA表达水平升高更为显著(P0.01)。结论电针结合康复训练改善脑卒中大鼠的神经功能可与上调大鼠大脑皮层Notch1与Notch4的表达相关。     

白芨多糖对大鼠跨区皮瓣choke区的影响

目的 探究白芨多糖对大鼠跨区皮瓣choke区的影响和机制。方法 将32只SD大鼠随机分成两组：对照组,给予生理盐水;给药组,给予白芨多糖生理盐水溶液。手术结扎胸背动脉和肋间后动脉,保留髂腰动脉。术后7 d,统计皮瓣存活率,血管造影观察choke动脉生长情况,HE染色显微镜下观察choke区微血管密度和动脉内径,Western blot检测choke区皮瓣组织血管内皮生长因子（VEGF）蛋白表达水平。结果 术后7 d,给药组皮瓣存活率高于对照组,（86.1±1.4）%vs(61.3±4.0)%,P<0.0001;给药组髂腰动脉直径更粗,（681.60±35.48）μm vs(446.98±21.61)μm,P<0.0001;血管向皮瓣远端延伸更长,（6.50±0.33）cm vs(5.41±0.38)cm,P<0.0001;给药组choke区微血管密度更高（11.8±1.5）个vs(6.7±1.3)个,P<0.0001;动脉内径更大,（60.14±6.99）μm vs(28.01±5.07)μm,P<0.0001;VEGF蛋白表达水平增加,P<0.00...     

红景天苷上调HIF-1α减轻高糖诱导的大鼠肾小球内皮细胞损伤

目的:观察体外不同浓度葡萄糖对大鼠肾小球内皮细胞(rRGECs)表达低氧诱导因子1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子A(VEGFA)及血管内皮钙黏素(VE-cadherin)的影响,探讨红景天苷减轻高糖诱导rRGECs损伤的作用及可能相关机制。方法:体外培养rRGECs,分为正常糖组、高糖(20、30和50 mmol/L)组、高渗组及红景天苷+高糖组。采用MTT法检测rRGECs的活力;RT-qPCR法检测rRGECs内HIF-1α、VEGFA及VE-cadherin的mRNA表达;Western blot法检测rRGECs内HIF-1α蛋白的表达。结果:与正常糖组相比,培养24 h后,高糖(20mmol/L)组rRGECs HIF-1α的mRNA及蛋白表达均上调(P 0.05);培养120 h后,高糖组HIF-1αmRNA表达下调(P 0.05)。与正常糖组相比,培养24 h和120 h后,高糖组rRGECs内VE-cadherin的mRNA表达下调(P 0.05)。与正常糖组相比,培养24 h后,高糖组rRGECs内VEGFA的mRNA表达上调(P 0.05);培养120 h后,高糖组rRGECs内VEGFA的mRNA表达下调(P 0.05)。与正常糖组相比,培养24 h和120 h后,高渗组rRGECs内HIF-1α、VE-cadherin及VEGFA的mRNA表达无变化。与高糖组相比,培养24 h后,红景天苷(50μmol/L)组rRGECs的活力增加(P 0.01),且细胞内HIF-1α和VE-cadherin的mRNA及HIF-1α蛋白表达均上调(P 0.05)。结论:体外高糖培养能影响rRGECs表达HIF-1α,可能与细胞活力、葡萄糖的浓度、作用时间及HIF/VEGF通路有关。红景天苷能减轻高糖诱导的rRGECs损伤,其机制可能与增加rRGECs内HIF-1α的表达有关。     

Expression of vascular Notch ligands Delta-like 4 and Jagged-1 in glioblastoma

Jubb A M, Browning L, Campo L, Turley H, Steers G, Thurston G, Harris A L & Ansorge O
(2012) Histopathology  60, 740–747
Expression of vascular Notch ligands Delta‐like 4 and Jagged‐1 in glioblastoma Aims: The coordinated expression of the Notch ligands Delta‐like 4 (Dll4) and Jagged (Jag)1 is believed to define appropriate endothelial sensitivity to vascular endothelial growth factor (VEGF). Preclinical data suggest that Dll4‐Notch signalling may confer resistance to anti‐VEGF therapy with bevacizumab, and Jag1 may antagonize Dll4–Notch. The aims of this study were to characterize the expression of Dll4 and Jag1 in primary glioblastomas. Methods and results: Immunohistochemistry was performed on 40 glioblastomas and normal brain using validated antibodies against Dll4 and Jag1. In‐situ hybridization for Dll4 was performed on serial sections and compared with protein expression. Dll4 expression was localized to the cytoplasm and membrane of endothelial cells in all glioblastomas; it was weak or absent in normal brain. Jag1 expression was observed in the cytoplasm and membrane of glomeruloid and non‐glomeruloid endothelial cells from 76% and 67% of glioblastomas, respectively. However, endothelial Jag1 expression was less intense and less prevalent than Dll4. There was no association between Dll4 and Jag1 expression. Conclusions: In summary, Dll4 and Jag1 are expressed in glioblastoma vasculature. These data may define subsets of glioblastoma that might be sensitive (Dll4⁺/Jag1⁺) or resistant (Dll4⁺/Jag1^–) to bevacizumab. Our data also suggest that anti‐Dll4 therapy should be evaluated experimentally in glioblastoma.     

阻断Dll4-Notch信号通路对哮喘小鼠Th17细胞分化的影响

目的:探讨哮喘小鼠体内Delta样配体4(Delta-like ligand 4,Dll4)-Notch信号通路阻断对辅助性T细胞17(Th17细胞)分化的影响。方法:30只雄性BALB/c小鼠随机分为正常对照组、生理盐水对照组、哮喘模型组、Dll4单克隆抗体干预组和Ig G对照组。肺组织切片进行免疫组织化学染色,定性分析Dll4的表达。流式细胞术分析各组小鼠脾脏Th17细胞在CD4~+T淋巴细胞中的比例。采用Western blot法检测小鼠脾脏分离淋巴细胞中维甲酸相关孤儿受体γt(retinoid-related orphan receptorγt,RORγt)的蛋白表达。应用酶联免疫吸附实验(enzymelinked immunosorbent assay,ELISA)检测各组小鼠血清中白细胞介素17(interleukin 17,IL-17)的含量。结果:与哮喘模型组比较,Dll4单克隆抗体干预组Dll4表达存在明显差异。与哮喘模型组比较,Dll4单克隆抗体干预组脾脏分离CD4~+T淋巴细胞中Th17细胞的比例和RORγt表达水平均存在统计学显著性(P0.05)。Dll4单克隆抗体干预组小鼠血清IL-17的表达与哮喘模型组之间的差异也存在统计学显著性(P0.01)。结论:阻断Dll4-Notch信号通路对哮喘小鼠Th17细胞分化起到抑制作用。     

卵泡刺激素与卵泡刺激素及黄体生成素共同干预对玻璃化冻存小鼠卵巢组织血管内皮生长因子表达的影响

目的 通过在玻璃化冻存全程给予小鼠卵巢组织卵泡刺激素（FSH）及FSH和黄体生成素（LH）共同干预,观察冻融卵巢组织的形态学改变以及两种激素干预对冻存卵巢组织血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响,寻找最佳的提高冻融卵巢组织卵泡存活及VEGF表达的激素干预方式。 方法 4周龄C57BL/6J小鼠卵巢组织分为新鲜对照组（CG）,玻璃化冻存对照组（VCG）,300IU/L FSH全程干预玻璃化冻存组（OG-FSH）,以及150IU/L FSH+150IU/L LH全程干预玻璃化冻存组(OG-FSH+LH),每组30个卵巢样本。通过常规组织学、Western blotting技术,观察并分析各组卵巢组织形态结构改变及VEGF蛋白表达量;通过荧光定量PCR技术(Real-time PCR)检测VEGF mRNA表达情况。 结果 OG-FSH+LH 组正常卵泡百分比最高,且显著高于OG-FSH组（P<0.05）;VEGF蛋白表达量在OG-FSH+LH组显著高于OG-FSH组（P<0.05）;荧光定量PCR检测结果表现为VEGF mRNA表达量在OG-FSH+LH组最高,其次为OG-FSH组,最低是VCG组（P<0.05）。 结论 玻璃化冻存全程添加FSH+LH的干预方式较单独FSH干预具有更高正常卵泡百分比和更佳的VEGF蛋白表达。