淫羊藿总黄酮的药理学研究

目的 研究淫羊藿总黄酮(total flavonoids of epimedium,TFE)对人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用.方法 将人脐静脉内皮细胞体外培养、传代后随机分为六组:空白对照组、TFE模型组、溶血性磷脂酰胆碱(LPC)损伤组、LPC+TFE(50 mg/L)组、LPC+TFE(100 mg/L) 、LPC+TFE(200mg/L)组,比较淫羊藿总黄酮对内皮细胞损伤的作用.结果 TFE模型组与空白组比较,各组数据无明显差异;LPC损伤组中MDA值、LDH值和细胞内KOS水平较空白组显著增加,而NO含量降低;在加入LPC+TFE的三组中,随着TFE的浓度增加,细胞上清液中NO含量升高,MDA和LDH含量以及ROS水平降低.结论 淫羊藿总黄酮对内皮细胞损伤具有保护作用.     

淫羊藿苷促进骨折愈合作用机制的研究进展

近年来 , 国内外学者对中药淫羊藿主要有效成分淫羊藿苷加速骨折愈合的机制做了一系列研究,目前研究结果显示, 淫羊藿苷加速骨折愈合的机制主要是通过激活 Wnts、BMP、MAPK、ER 等相关信号通路促进 BMSCs、ASCs 的迁移归巢,进行成骨性分化为成骨细胞,同时促进成骨细胞的成熟、矿化以形成骨痂,并抑制破骨细胞的骨吸收活性。本文从淫羊藿苷对相关细胞以及对血管重建的作用方面对淫羊藿苷加速骨折愈合的作用机制做一回顾综述,以期为后续的研究提供参考。     

白果内酯激活Nrf2/HO-1通路抑制星形胶质细胞的氧化应激缓解CPZ诱导的髓鞘脱失

目的:探讨白果内酯(BB)是否可以减轻星形胶质细胞的氧化应激反应抑制髓鞘脱失及其可能的机制.方法:体内采用双环己酮草酰二腙(CPZ)脱髓鞘C57BL/6小鼠模型,从第4周末开始,BB治疗组腹腔注射BB 2周.体外采用脂多糖(LPS)刺激原代星形胶质细胞24 h的炎症模型.结果:BB在体内抑制CPZ诱导的氧化应激反应,促...     

淫羊藿总黄酮(EF)对老龄大鼠Th1、Th2、Th3细胞的调节作用

目的：探讨淫羊藿总黄酮（EF）对衰老大鼠脾淋巴细胞Th1、Th2、Th3各类细胞因子的调节作用.方法：采用流式细胞仪,监测比较老龄大鼠脾脏淋巴细胞凋亡率;采用Th1、Th2、Th3 cDNA芯片,分别检测正常青年组（YC）、老龄大鼠组（OM）、EF组、NF-KB阻断剂组（PDTC）、PDTC＋EF组的Th1、Th2、Th3,各类细胞因子信号差异表达.结果：①老龄大鼠普遍存在淋巴细胞过度凋亡现象,EF可显著抑制这种过度凋亡状态.②YC组,Th1、Th2、Th3类细胞因子之间处于平衡状态（P＞0.05）;OM组Th1、Th2、Th3类细胞因子表达比YC组增高,呈Th2、Th3类细胞因子优势应答（P＜0.05）.③EF组Th1、Th2、Th3类细胞因子均较OM组明显降低（P＜0.05）,其趋势与YC组近似,并且Th1、Th2、Th3类细胞恢复平衡.④NFKB通路抑制后（PDTC组）,Th1、Th2、Th3类细胞因子平衡失调,Th2优势更加明显（P＜0.05）;而PDTC＋EF组,Th1、Th2、Th3各组表达值则较PDTC组下调,其组内Th1和Th2也重新达到一种相对平衡状态.结论：老龄大鼠脾淋巴细胞过度凋亡,Th1、Th2、Th3类细胞因子分泌增高,Th2、Th3类细胞因子优势应答;EF可以抑制淋巴细胞过度凋亡,校正老龄大鼠Th1、Th2、Th3类细胞因子之间的比例失衡,重塑Th1-Th2-Th3细胞免疫调节网络的良性平衡.     

从动物模型的视角研究多发性硬化髓鞘保护和再生的小胶质细胞靶点

小胶质细胞是定植于中枢神经系统(CNS)的免疫细胞,构成了CNS的第一道防线。多发性硬化(MS)是以炎症脱髓鞘伴轴突损伤为主要特征的CNS炎症变性疾病,小胶质细胞激活在其发生发展过程中担负着重要角色。在MS动物模型的CNS可见大量激活的小胶质细胞,其功能复杂,主要有促炎症M1表型和抗炎症M2表型两种小胶质细胞,具有破坏和保护髓鞘的双重作用:一方面M1表型小胶质细胞可通过释放促炎因子、自由基等对少突胶质细胞(OLs)及其前体细胞产生损伤,造成髓鞘破坏;另一方面M2表型小胶质细胞还可通过吞噬髓鞘碎片、分泌抗炎及再生因子等作用,加速髓鞘的修复和再生。本文对激活状态下M1/M2小胶质细胞的功能和靶向小胶质细胞转化在经典MS动物模型中的研究进展作一综述,为靶向小胶质细胞治疗CNS脱髓鞘疾病提供基础研究和临床应用的实验依据。     

脱水淫羊藿素对小鼠巨噬细胞免疫功能的影响

目的:研究脱水淫羊藿素(AHI)在体外对脂多糖(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞免疫功能的影响。方法:分离制备小鼠骨髓来源巨噬细胞;CCK-8法检测不同终浓度的AHI对巨噬细胞的毒性;采用Griess试剂盒检测AHI对巨噬细胞产生NO的影响;流式细胞术(FCM)检测AHI对巨噬细胞吞噬E.coli颗粒的影响;利用FCM结合双色免疫荧光染色技术检测AHI对巨噬细胞早期活化标志CD69的表达情况;使用流式液相蛋白定量检测技术(CBA)检测AHI对LPS刺激巨噬细胞分泌细胞因子的影响。结果:终浓度为2.5、5、10μmol/L的AHI对活化的小鼠巨噬细胞均具有明显的免疫抑制作用,特别是5μmol/L AHI能明显抑制经LPS刺激的巨噬细胞早期活化,释放NO,吞噬E.coli颗粒,以及分泌IL-6、MCP-1、TNF和IL-12p70四种细胞因子。结论:AHI对LPS诱导的小鼠巨噬细胞的活化具有明显的抑制作用,是一种潜在的免疫抑制剂。     

淫羊藿苷通过诱导细胞有丝分裂灾变抑制外阴鳞癌SW962细胞增殖

目的：探讨淫羊藿苷（ICA）能否抑制外阴鳞癌SW962细胞增殖及其潜在机制。方法：选取外阴鳞癌SW962细胞系为研究对象,ICA处理后,通过相差显微镜及HE染色、DAPI染色方法观察细胞形态变化;MTT法检测细胞增殖;免疫荧光法检测α-微管蛋白（α-tubulin）和波形蛋白（Vimentin）表达及分布;流式细胞术检测细胞周期;Western blot检测有丝分裂灾变及凋亡相关蛋白表达。结果：ICA诱导SW962细胞核发生多核分裂,抑制细胞活性,并将细胞阻滞在G2/M期。免疫荧光检测结果显示α-tubulin和Vimentin蛋白呈多极分布并凝聚在细胞核周围。ICA在12 h内显著上调有丝分裂相关蛋白Chk1、CDK1、cyclinB1和cdc25c表达,但在24～48 h持续下降。凋亡相关蛋白cleaved caspase-3表达持续升高。结论：ICA可诱导外阴鳞癌SW962细胞发生有丝分裂灾变,抑制细胞增殖,最终导致细胞凋亡。     

淫羊藿苷抑制内质网应激介导HT22细胞抗谷氨酸诱导凋亡

目的探讨淫羊藿苷(ICA)通过调控内质网应激(ERS)通路保护小鼠海马神经元HT22细胞抗谷氨酸(Glu)损伤的机制。方法筛选适当的ICA预处理浓度,以Glu(5 mmol/L)处理18 h构建细胞损伤模型。将细胞分为对照组、Glu损伤组、低剂量ICA+Glu(L-ICA+Glu)组和高剂量ICA+Glu(H-ICA+Glu)组。CCK-8法检测细胞活性,TUNEL染色显示凋亡细胞,比色法检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放量,JC-1染色检测线粒体膜电位(MMP)变化,DCFH-DA检测细胞活性氧(ROS)水平,Western blot检测ERS通路和凋亡相关蛋白含量。此外,以上各组经CHOP siRNA预处理后,分为Glu+ControlsiRNA组、Glu+CHOPsiRNA组、H-ICA+Glu+ControlsiRNA组、H-ICA+Glu+CHOPsiRNA组,检测细胞活性、凋亡率、ROS含量、MMP水平及凋亡相关蛋白表达。结果ICA在浓度低于10μmol/L时无明显毒性作用。ICA能够显著提高HT22细胞活性,降低LDH释放量,抑制细胞凋亡,降低ROS水平,恢复MMP,且呈剂量依赖性(P<0.05)。此外,ICA下调损伤后p-eIF2α和CHOP表达,同时增加Bcl2,抑制Bax(P<0.05)。CHOP siRNA预处理后,Glu的损伤作用明显减弱;同时CHOP siRNA预处理能够明显增强ICA对HT22细胞的保护作用。结论ICA可能通过部分抑制ERS诱导的氧化应激及凋亡,保护HT22细胞抗Glu损伤。     

衰老进程中大鼠淋巴细胞凋亡率的比较研究及淫羊藿总黄酮的干预作用

目的：比较研究衰老进程中各年龄段大鼠淋巴细胞凋亡率的差异及淫羊藿总黄酮（EF）对老年期细胞凋亡的干预作用。方法：选用SD大鼠脾脏分离的淋巴细胞为研究对象,用流式细胞方法,比较从出生后3天直到27月龄衰老进程中,各代表性年龄段的细胞凋亡率差异,并观察EF对老年过度细胞凋亡的影响作用。结果：刚出生3天组的凋亡率最低,随着增龄,细胞凋亡率逐渐升高,仅10月龄组例外,其凋亡率小于4月龄组,27月龄的细胞凋亡率最高。EF干预后,27月龄组的细胞凋亡率明显下降,介于10月龄与18月龄之间水平,以上差异均有显著统计学意义（P〈0.05～P〈0.001）。结论：在衰老进程中,大鼠淋巴细胞的凋亡率随增龄而逐渐升高,在老年大鼠存在过度凋亡现象,而EF可抑制老年淋巴细胞过度凋亡。     

淫羊藿总黄酮调控Wnt/β-catenin信号通路对去卵巢大鼠抗骨质疏松作用研究

目的 通过淫羊藿总黄酮(TFE)对去卵巢大鼠骨组织Wnt/β-catenin信号通路及腰椎骨和股骨生物力学性能影响研究,探讨TFE对去卵巢大鼠抗骨质疏松的可能机制.方法 选用40只90天龄的SPF级SD雌性大白鼠,随机分为4组:对照组、去卵巢组(OVX)组、去卵巢+己烯雌酚(DES)组、去卵巢+淫羊藿总黄酮(TFE)组.实验持续12周后处死全部大鼠,取腰椎骨、股骨分别测量生物力学参数及骨密度.免疫蛋白印迹法检测各组大鼠胫骨骨皮质区p-GSK3-β(thr9)、RANKL、OPG、β-catenin蛋白表达水平.结果 与对照组比较,OVX组大鼠股骨、腰椎骨的生物力学性能及骨密度下降(P＜0.05);DES组、TFE组股骨和腰椎骨的生物力学性能和骨密度较去卵巢OVX组明显改善(P＜0.05);两治疗组的组间差异无统计学意义(P＞0.05).免疫蛋白印迹法提示去卵巢大鼠分别加用TFE、DES治疗后,胫骨蛋白β-catenin、OPG表达上调,p-GSK3-β(thr9)、RANKL表达下调.结论 淫羊藿总黄酮能够改善去卵巢大鼠的骨生物力学性能,上调Wnt/β-catenin信号通路,从而改善骨质疏松.     

Olig对少突胶质细胞介导脱髓鞘大鼠髓鞘再生的影响

目的 探讨Olig在少突胶质细胞介导的脱髓鞘大鼠髓鞘再生中的作用。方法 40只健康Wistar大鼠,随机分成正常组、模型对照组、模型组、实验组,用形态学观察和免疫组织化学检测Olig1和Olig2的表达。结果 正常组Olig1位于少突胶质细胞的胞质,模型组胞核表达明显增多,实验组Oligl又重新转移至胞质;正常组Olig2表达位于胞核,模型组中有少量表达于胞质。 结论 在Olig1和Olig2同时缺失时,导致全脑不能形成少突胶质细胞,严重影响髓鞘的再生。     

淫羊藿甙对小鼠腹腔巨噬细胞体外增殖、吞噬和产生NO的影响

无菌分离小鼠腹腔巨噬细胞,制备单细胞悬液,加入不同终浓度的淫羊藿甙孵育4 h后,加入细菌脂多糖LPS(终浓度20 mg/L)48 h后以MTT法检测其增殖;加药孵育4 h后,分别加入直径1μm和2μm的微球(终浓度1×1010/L),5 h后利用流式细胞术(FCM)检测吞噬情况;加入LPS(终浓度20 mg/L)24 h后Griess试剂盒检测巨噬细胞NO的量。结果显示ICA在终浓度1.5、3.0μmol/L时能明显抑制LPS刺激的巨噬细胞增殖(P<0.01)和NO的产生,并促进其吞噬微球的功能。提示ICA可能抑制LPS信号转导从而抑制巨噬细胞增殖,并且通过抑制其活化,下调iNOS有关的炎症因子,使NO减少;对于未活化的巨噬细胞,ICA可能通过上调其吞噬功能,增强固有免疫系统来抵御病原体侵入。     

神经小胶质细胞在EAE 脱髓鞘和髓鞘再生中的作用机制进展

炎性细胞浸润和脱髓鞘是中枢神经系统(CNS)的自身免疫性疾病---多发性硬化(MS)的主要病理特征,相关的病理研究多在其动物模型实验性自身免疫性脑脊髓膜炎(EAE)中开展。神经小胶质细胞(MG)是CNS 的主要免疫效应细胞,EAE 时它的激活在脱髓鞘和髓鞘再生中表现出复杂的作用。M1 型MG 是导致脱髓鞘的重要原因,抑制髓鞘再生;而M2型MG 可以促进髓鞘再生,抵抗脱髓鞘。本文综述MG 在EAE 脱髓鞘和髓鞘再生中的直接作用机制,及其通过星形胶质细胞产生的间接作用机制及进展。     

淫羊藿苷对大鼠血管平滑肌细胞钙化的抑制作用

目的:研究淫羊藿苷(Icariin)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)钙化的抑制作用。方法:组织贴壁法培养大鼠胸主动脉VSMCs,取5-8代细胞分为对照组、钙化模型组和淫羊藿苷干预A、B、C组。对照组用DMEM培养基培养;钙化模型组用含10mmol/Lβ-甘油磷酸盐(β-GP)的DMEM培养基培养;干预A、B、C组均以钙化模型组为基础分别与10-6 mol/L、10-5 mol/L和10-4 mol/L Icariin的DMEM培养基共培养,茜素红-S染色法鉴定各组细胞钙化情况,硝基苯酚法测定各组细胞碱性磷酸酶(ALP)活性,RT-PCR检测各组细胞内骨保护素(OPG)和核因子κB(NF-κB)受体活化因子配体(RANKL)的mRNA水平,用Western blotting检测各组细胞OPG和RANKL的蛋白表达。结果:与对照组比较,钙化模型组VSMCs发生细胞钙化,并形成红色结节,ALP活性显著升高(P0.01),OPG、RANKL mRNA和蛋白表达均增加(P0.01);与钙化模型组比较,干预A、B、C组细胞钙化减少,ALP活性减低(P0.01),OPG、RANKL mRNA和蛋白表达均下调(P0.01),尤以干预B组效果最显著。结论:淫羊藿苷可能通过降低ALP活性及OPG、RANKL表达来抑制动脉钙化。     

淫羊藿苷通过抑制内质网应激减轻异丙肾上腺素诱导的H9c2细胞肥大损伤

目的:观察淫羊藿苷(ICA)对异丙肾上腺素(ISO)诱导的H9c2细胞肥大损伤的作用,并进一步探讨其机制是否与内质网应激(ERS)有关.方法:将对数生长期的H9c2细胞随机分为正常对照组、ISO(10μmol/L)组、ISO+ICA(10μmol/L)组、ISO+ICA(20μmol/L)组、ISO+ICA(40μmo...     

淫羊藿苷通过YAP促进大鼠关节软骨细胞增殖的研究

目的 研究淫羊藿苷（Icariin）通过yes相关蛋白（YAP）促进大鼠关节软骨细胞增殖的作用和机制。方法 采用细胞增殖实验、RT-qPCR和免疫荧光染色测定淫羊藿苷促进大鼠关节软骨细胞增殖的作用。采用RT-qPCR检测淫羊藿苷促进YAP表达的作用。通过沉默YAP基因的表达来确定YAP在细胞增殖中的作用以及淫羊藿苷是否通过YAP来促进细胞的增殖。结果 大鼠关节软骨细胞的增殖与YAP表达上调有关。淫羊藿苷能促进YAP表达和去磷酸化,使其进入细胞核内启动增殖相关基因的表达,从而促进软骨细胞增殖。结论 淫羊藿苷通过上调YAP表达以及激活YAP来促进软骨细胞增殖,可能有助于损伤软骨的再生修复。     

淫羊藿苷通过下调转移相关蛋白2抑制MGC803细胞的增殖、迁移和侵袭

目的探讨淫羊藿苷是否通过调控转移相关蛋白2(MTA2)表达抑制人胃癌细胞系MGC803细胞增殖、迁移和侵袭及其作用机制。方法以不同浓度淫羊藿苷干预MGC803细胞,MTT法检测细胞活力; Transwell小室法和Western blot分别检测细胞迁移和侵袭及MMP-2、MMP-9和MTA2蛋白表达;将MTA2 siRNA转染至MGC803细胞后检测细胞活力、迁移和侵袭;将pc DNA-MTA2转染至MGC803细胞,联合淫羊藿苷处理,MTT法和Traswell小室法检测细胞活力、迁移和侵袭。结果不同浓度淫羊藿苷均能有效抑制MGC803细胞活力。以200μmol/L淫羊藿苷干预MGC803细胞后,细胞迁移和侵袭能力下降(P0. 05),MMP-2、MMP-9、MTA2蛋白表达下调。敲减MTA2能够抑制细胞活力、迁移和侵袭。过表达MTA2可部分逆转淫羊藿苷对MGC803细胞活力、迁移和侵袭的抑制作用。结论淫羊藿苷能够通过调控MTA2、MMP-2和MMP-9蛋白表达,抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

淫羊藿苷通过HIF-1α/VEGF通路介导的血管生成调节大鼠种植窗期子宫内膜容受性

目的 探究淫羊藿苷通过缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)/血管内皮生长因子（VEGF）通路介导的血管生成调节大鼠种植窗期子宫内膜容受性的机制。方法 取SD雌性大鼠通过灌胃羟基脲+肾上腺素皮下注射的方法建立子宫内膜容受障碍模型,随机分为模型组、淫羊藿苷低剂量（10 mg/kg）组、淫羊藿苷高剂量（20 mg/kg）组、淫羊藿苷高剂量（20 mg/kg）+空载组、淫羊藿苷高剂量（20 mg/kg）+HIF-1α敲低组,每组20只,另选20只SD雌性大鼠灌胃+皮下注射等剂量生理盐水做对照组,将各组雌鼠与雄鼠合笼得到孕鼠并分组处理后,测定各组大鼠性激素[雌激素（E2）、孕酮激素（P）]水平、平均着床胚胎数;免疫组织化学染色检测各组大鼠子宫内膜微血管密度（MVD）;扫描电子显微镜检测各组大鼠子宫内膜超微结构;免疫组织化学染色和免疫印迹检测各组大鼠子宫内膜组织HIF-1α/VEGF通路蛋白表达。结果 与对照组相比,模型组大鼠子宫内膜表面附着大量短细微绒毛,未发现胞饮突,血清E2与P水平、平均着床胚胎数、子宫内膜MVD、HIF-1α与VEGF蛋白表达明显降低（P<0.05）;与模型组相比,淫羊...     

淫羊藿总黄酮与补肾复方对皮质酮大鼠T细胞凋亡相关基因群调控的对比研究

目的 :对比淫羊藿总黄酮 (EF)与两个含淫羊藿总黄酮的补肾复方及健脾复方对皮质酮鼠模型T细胞凋亡及其相关基因群的调控作用。方法 :采用TUNEL标记的流式细胞技术及荧光实时定量PCR技术对各组大鼠T细胞凋亡及相关基因群mRNA表达水平进行定量与比较。结果 :EF与两个补肾复方都能够降低T细胞凋亡率 ,并对促凋亡及抗凋亡基因群进行适度地调控 ,而健脾方则不能。结论 :EF对皮质酮大鼠T细胞凋亡及其相关基因的调控作用可以代表补肾复方拮抗外源性激素对T细胞的抑制作用。     

淫羊藿苷增强CIK细胞对B-MD-C1(ADR+/+)细胞杀伤敏感性的实验研究

目的观察淫羊藿苷(icariin,ICA)对CIK杀伤子宫内膜癌耐药细胞株的影响,初步探讨其作用机制。方法 MTT检测ICA对子宫内膜癌耐药细胞株B-MD-C1(ADR+/+)的增殖抑制作用;流式细胞术(FCM)检测ICA对肿瘤细胞周期分布和凋亡的影响;乳酸脱氢酶释放法(LDH)法检测CIK(细胞因子诱导的肿瘤杀伤细胞)对ICA处理前后肿瘤细胞的杀伤作用。RT-PCR法和流式细胞术检测肿瘤细胞表面粘附因子CD18和CD54基因和蛋白表达的影响。结果 12.5~50μg/ml ICA对B-MD-C1(ADR+/+)细胞活力和凋亡没有明显影响。100μg/ml ICA能明显抑制B-MD-C1(ADR+/+)细胞的增殖(P<0.01),且可诱导其凋亡。经0~100μg/ml ICA处理12 h后,S期细胞明显增加(P<0.01)。经12.5~50μg/ml ICA处理12 h后,B-MD-C1(ADR+/+)细胞CD18和CD54基因和蛋白表达均增加,且对CIK细胞的杀伤敏感性增强,呈现ICA浓度依赖性。结论 12.5~50μg/ml ICA增加了B-MD-C1(ADR+/+)细胞对CIK的杀伤敏感性,与ICA诱导肿瘤细胞CD18和CD54表达增加有关。