变异银环蛇的蛇毒及DNA分析研究

目的 比较变异与正常银环蛇蛇毒及DNA的差异，为进一步研究银环蛇在自然界的生存、进化、分类，提供分子生物学的研究基础。方法 ①利用聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析蛇毒蛋白的组分；②利用随机引物扩增（Bandom Amplified Polymorphie DNA，RAPD）的方法对1例变异银环蛇和10例华南常见银环蛇的DNA进行扩增。结果 SDS-PAGE结果发现变异银环蛇毒的蛋白组分与正常银环蛇基本相同，但在43KD大小的一条蛋白带含量明显减少；RAPD扩增的DNA条带有明显差异。结论 ①变异银环蛇的蛇毒蛋白组分含量发生改变；②该变异银环蛇与正常银环蛇DNA差异显著。     

肿瘤坏死因子基因多态性与变应性鼻炎相关性探讨

目的　探讨变应性鼻炎 (Allergicrhinitis,AR)患者中肿瘤坏死因子基因 (Tumornecrosisfactor,TNFβ)基因多态性与变应性鼻炎相关性 .方法　利用聚合酶链式反应技术对 6 9例AR及 10 3例正常对照者的TNF基因进行扩增 ,以cfoI进行限制性酶切图谱分析 .结果　①AR患者TNFβ1 / 1 频率占 8.7% ,低于正常对照组的 2 5 .2 % ,(p <0 .0 5 ) ,其余各型与正常对照组无明显差异 (p >0 .0 5 ) .②AR病人中TNFβ等位基因 1 的频率占 36 .9% ,2 的频率占 6 3.1% ,与正常对照组的 1 为 4 8.1%、2 为 5 1.9%有显著差异 (p <0 .0 5 ) .结论　提示TNFβ等位基因 1 与AR的发病呈负关联 ,2 与AR的发病呈正关联     

非小细胞肺癌生物标记物角蛋白19基因的克隆、表达及纯化

目的 克隆人角蛋白19(CK19)基因,原核表达重组蛋白并纯化,为建立一种新的非小细胞肺癌诊断方法奠定基础.方法 从宫颈癌HeLa细胞株中提取总RNA,经RT-PCR合成cDNA,设计特异性的引物,用PCR的方法扩增目的片段,构建pET-32a-CK19和pGEX-4T1-CK19表达载体,在BL21大肠杆菌中表达CK19重组蛋白纯化,并进行SDS-PAGE及Western blot鉴定.结果 经PCR扩增后得到一条420 bp的DNA片段,构建载体后DNA测序,结果与预期序列一致.初步结果鉴定表明,表达和纯化的融合蛋白,与预期结果一致.结论 成功克隆CK19基因,并获得高纯度的CK19融合蛋白,为进一步制备体外诊断试剂打下基础.     

乳腺癌相关的乳腺珠蛋白基因的克隆、表达及纯化

目的 克隆人乳腺珠蛋白(hMAM)基因,原核表达重组蛋白并纯化,为建立一种新的乳腺癌诊断方法奠定基础.方法 从人乳腺癌组织中提取总RNA,经RT-PCR合成cDNA,设计特异性的引物,用PCR的方法扩增出目的片段,构建PET-32A-hMAM和PGEX-4T1 -hMAM表达载体,在BL21菌中表达hMAM重组蛋白,纯化,并进行SDS-PAGE及Western blotting鉴定.结果 经RT-PCR、PCR扩增后得到一条207 bp的DNA片段,构建载体后DNA测序,结果与预期序列一致.表达和纯化的融合蛋白相对分子质量大约为28 000,与预期结果一致.结论 成功克隆hMAM基因,并获得高纯度的hMAM重组蛋白,为进一步开发hMAM诊断试剂打下基础.     

应用Array-based CGH技术检测先天性心脏病染色体异常的研究

目的应用高分辨芯片比较基因组杂交技术(aCGH),对先天性心脏病(先心病)患儿进行基因组拷贝数变异(CNVs)筛查,探讨染色体拷贝数异常与先心病的关系。方法对17例先心病患者进行染色体核型分析,再运用Agi-lent 8×60K DNA芯片筛查染色体拷贝数异常情况,之后查询中国人类染色体异常核型目录数据库,并结合临床资料分析染色体拷贝数异常与先心病关系。结果 17例先心病患者染色体核型正常;aCGH检测结果表明有6例患者存在不同程度的染色体DNA拷贝数的扩增或缺失,其中4例染色体变异被认为是正常多态性;另外2例染色体区段的变异可能与先心病相关。结论 aCGH技术检测染色体核型正常的先心病患者DNA拷贝数的变化,为由DNA拷贝数异常引发先心病的临床诊断提供分子依据。     

CAD基因原核表达载体的构建及表达产物的活性鉴定

目的 构建pCool-GST-ICAD/CAD的表达载体,并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达具有生物学活性的CAD核酸酶.方法 用PCR扩增CAD基因, 将扩增产物克隆入pCool-GST-ICAD载体中构建出pCool-GST-ICAD/CAD表达载体.经酶切和电泳鉴定正确后,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,表达产物经亲和层析、离子交换层析及凝胶过滤等方法分离纯化,最后用SDS-PAGE和DNA降解实验进行鉴定.结果 构建了pCool-GST-ICAD/CAD原核表达载体,重组载体转化后表达出毫克级水平的GST-ICAD/CAD蛋白复合体.经分离纯化后得到纯度很好的CAD-ICAD蛋白复合体,在SDS-PAGE电泳上呈现清晰的两条蛋白带.经DNA降解实验证明纯化所得的CAD蛋白具有非特异性降解DNA的核酸酶作用.结论 成功制备了具有生物学活性的CAD核酸酶,为进一步研究细胞凋亡的作用机制提供了有效的制剂.     

胃癌细胞p16蛋白表达与DNA定量分析的相关性研究

目的探讨胃癌细胞p16蛋白表达情况及其与DNA含量的相关性及意义.方法应用流式细胞仪(FCM)和图像分析仪(ICM)检测41例胃癌细胞p16蛋白表达量和DNA含量,10例正常胃组织也用FCM测p16蛋白表达量.结果41例胃癌p16蛋白表达量明显低于正常胃组织(荧光指数分别为0.81±0.09和1.00±0.11,P<0.01),p16蛋白表达量与胃癌病理分级有关,随病理分级增高而降低(P<0.05),与胃癌患者的性别、年龄无关.胃癌DNA相对倍体均值(U值)范围为1.14～2.98,U值随病理分级增高而升高(P<0.01).同时,胃癌p16蛋白表达量与DNA含量呈负的直线相关(P<0.01).结论p16蛋白的异常表达与胃癌的发生发展、恶性程度有关,并具有较重要临床意义.p16蛋白的表达水平可作为临床判断预后的指标之一.     

用RAPD技术分析2型糖尿病的遗传多态性

为探讨2型糖尿病和非糖尿病群体间的遗传多态性差异，寻找2型糖尿病的致病相关基因。本文应用随机扩增多态性DNA技术，从140个随机引物中筛选了25个扩增满意的引物，进行PCR扩增，研究2型糖尿病患者和非糖尿病者各10例。结果：1）5个RAPD图谱表现多态性改变；2）仅K－17的RAPD普的多态性在两组间存在显著性差异（P＜0.001)。表明K－17扩增的RAPD片段与糖尿病的遗传背景有关，可能是与2型糖尿病相关的RAPD标记。     

肿瘤坏死因子基因多态性与变应性鼻炎相关性探讨

目的探讨变应性鼻炎(Allergic rhinitis,AR) 患者中肿瘤坏死因子基因(Tumor necrosis factor,TNFβ)基因多态性与变应性鼻炎相关性.方法利用聚合酶链式反应技术对69例AR及103例正常对照者的TNF基因进行扩增,以cfoI进行限制性酶切图谱分析.结果①AR患者TNFβ1*/1*频率占8.7%,低于正常对照组的25.2%,(p<0.05),其余各型与正常对照组无明显差异(p>0.05).②AR病人中TNFβ等位基因1*的频率占36.9%,2*的频率占63.1%,与正常对照组的1*为48.1%、2*为51.9%有显著差异(p<0.05).结论提示TNFβ等位基因1*与AR的发病呈负关联,2*与AR的发病呈正关联.     

互隔交链孢酚通过PKA-CREB信号通路激活NIH3T3细胞中DNA聚合酶β表达

目的： 探讨互隔交链孢酚（AOH）诱导小鼠胚胎成纤维细胞NIH3T3中DNA聚合酶β（DNA polβ）表达增高的分子信号通路。方法: ①15 μmol/L AOH作用NIH3T3细胞16 h,利用Western blotting 方法检测细胞中DNA polβ的表达,并利用磷酸化CREB抗体检测AOH作用后NIH3T3细胞中CREB信号分子是否被激活。②利用PKA-CREB信号通路特异性抑制剂H89预处理NIH3T3细胞1 h,再加入AOH作用,分别检测磷酸化CREB和DNA polβ表达的变化。结果: ①与溶剂对照组相比,AOH诱导NIH3T3细胞中DNA polβ表达明显增高,而且磷酸化CREB蛋白含量也明显增加,差异均显著。②用PKA特异性抑制剂H89预处理,可部分抑制NIH3T3细胞中CREB蛋白的磷酸化,并且降低了AOH引起的NIH3T3细胞中DNA polβ的表达增加。结论: PKA-CREB信号通路在AOH诱导的 NIH3T3细胞中DNA polβ表达起重要作用。     

Level of functioning of siblings and parents of probands of varying degrees of retardation

A further analysis of already published data supports the position that retardates of low ability level less frequently have retarded siblings, retarded parents, and parents low in occupational level than do retardates higher in ability level. The analysis supports the position that there are two types of retarded individuals, persons retarded as a result of gene or chromosomal anomalies, brain injury, etc., who more frequently occur in the lower-level retardate group, and persons whose retardation represents polygenic segregation, who more frequently occur in the higher-level group.     

Modes of Inheritance of Errors of Refraction

Eighteen families in which both parents had refractions within the range of +4·0 D to −4·0 D and axial lengths seen in emmetropia (22·3-26·0 mm) showed coefficients of correlation of the order 0·5 indicative of polygenic inheritance. Such coefficients were seen for axial length (0·407) and for the cornea (0·487), but not for the lens (which is known to be yoked to the axial length). No such coefficients were seen in 19 families in which one of the parents had axial length outside the emmetropic range (nine families with long axes and 10 with short axes).

The pattern of polygenic inheritance for emmetropia (completely correlated optical components) and errors of refraction up to 4·0 D (inadequately correlated components: correlation ametropia) follows that seen in stature and other measurable characters. In contrast the high refractive errors with their abnormal axial lengths (component ametropia) are—like the extremes in stature—pathological anomalies with monofactorial inheritance.

     

Recovery of responsiveness of cells of lateral geniculate nucleus of rat

1. Recovery of responsiveness of single cells in lateral geniculate nucleus of rat has been determined in both P and I cells. There are three types of recovery curve among P cells; (a) early recovery, (b) early partial recovery followed by depression and then complete recovery, (c) prolonged depression followed by cyclic recovery. Type (c) is by far the commonest recovery curve. In contrast to the spike in a P cell, the synaptic potential recovers to its full amplitude in about 20 msec. All I cells exhibit similar rapid recovery curves after a prolonged depression.2. Conditioning stimuli applied to visual cortex also produce a prolonged depression in most P cells but I cells can be re-excited at short intervals from cortex. Decortication does not prevent the prolonged depression of the multineuronal response produced by optic nerve stimulation.3. A neuronal model is proposed to explain these observations. It is supposed that I cells (interneurones) are innervated by axon collaterals of the P cells (principal cells, projecting to visual cortex) and that the I cells exert an inhibitory influence on the P cells.     

局部注射辛伐他汀对骨质疏松大鼠股骨髁骨小梁的改建效应

背景：局部注射具有成骨作用的辛伐他汀,可显著增加骨质疏松大鼠股骨颈及股骨髁部的骨密度及力学强度,分析局部注射辛伐他汀对股骨髁骨小梁的影响。 目的：进一步研究骨质疏松大鼠股骨内局部注射辛伐他汀对股骨髁骨小梁的影响。为将辛伐他汀应用于临床骨质疏松局部治疗提供实验基础。 方法：18只雌性SD大鼠双侧卵巢切除后3个月,制备大鼠骨质疏松模型。实验大鼠随机数字表法均分为3组,分别在实验大鼠的右侧股骨髓腔内单次注射辛伐他汀溶液5 mg、10 mg,对照组单纯注射空白载体。分别在注射后1个月处死大鼠并取材。Micro-CT扫描并定量分析骨组织形态变化。 结果与结论：给药后1个月,Micro-CT扫描结果显示,辛伐他汀治疗组的骨微结构参数如骨皮质厚度、骨小梁密度及连接率明显优于对照组。说明疏松骨骼单次注射小剂量辛伐他汀可显著促进股骨髁部骨小梁改建,改善骨骼微结构,可为强化局部、防治骨质疏松骨折的新选择进一步提供实验基础。