用多次酶消化法体外培养的大鼠成骨细胞及其鉴定

目的 针对目前体外培养成骨细胞方法的不足,建立一种理想的原代培养成骨细胞的方法,为骨替代材料的研究提供成骨细胞.方法 本实验用新生1～2天大鼠颅盖骨,采用多次酶消化法进行细胞体外培养.倒置显微镜观察细胞形态,并对其碱性磷酸酶（ALP）活性及矿化能力进行鉴定.结果 所培养细胞具有成骨细胞的形态学特征及体内成骨细胞的生物学行为.结论 本实验体外培养成骨细胞的方法切实可行,可为骨替代材料的研究提供种子细胞,也可为骨细胞生物学和骨组织工程的研究提供一种客观而有效的实验手段.     

去卵巢山羊成骨细胞的体外培养

选用摘除双侧卵巢的百颅盖骨，体外分离培养成骨细胞，并对分离的成骨细胞做多方面生物学特性鉴定。结果表明：体外培养的去卵巢山百成骨细胞具有典型成骨细胞的形态特征、碱性磷酸酶活性以及在体外发生钙化的功能；证实了体外培养的去卵巢百成骨细胞具有体内成骨细胞的功能特性。为骨代谢的研究提供了新的实验手段。     

成骨细胞在旋转壁式生物反应器内的大规模扩增

目的 进行SD大鼠成骨细胞在旋转壁式生物反应器内大规模扩增培养的研究。方法利用微载体悬浮培养法在旋转壁式生物反应器内大规模扩增成骨细胞，检测其组织形态和生物功能后。作为接种到支架材料上并于反应器内三维环境中培养组织工程骨的种子细胞。结果成骨细胞在生物反应器中每代可以扩增十倍以上，同时经过倒置相差显微镜、SEM(扫描电镜)以及ALP(碱性磷酸酶)和MTT等生物学性能检测后，发现在旋转壁式生物反应器中三维培养的成骨细胞各种生物指标性能良好。结论新型旋转壁式生物反应器可以提供低剪切力的培养环境，而且细胞之间有三维联系的机会，成骨细胞表现出良好的体外扩增能力，适于建立一种理想的成骨细胞体外扩增的三维培养体系。     

Wistar大鼠成骨细胞体外分离、培养及初步研究

目的　研究体外分离、培养的Wistar大鼠成骨细胞的生物学物性。　方法　取Wistar大鼠双侧股骨 ,用胰酶冷热交替消化法收集细胞 ,以 1× 10 6 ml的细胞浓度培养 ,2周后得到贴壁生长的单层细胞。随后进入传代培养 ,通过倒置显微镜观察、HE染色、碱性磷酸酶染色、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原检测等手段对所获得的细胞进行生物学特性研究。　结果　获得的细胞呈多种形态 ,有长短不一、粗细不均 ,互相连接的胞浆突起 ,细胞互相重叠呈复层生长 ,并形成细胞结节。细胞经连续传代 ,形态与功能不变。细胞富含碱性磷酸酶活性 ,Ⅰ型胶原染色阳性 ,这与典型成骨细胞的生物学特性相似。　结论　用骨组织在体外能培养出成骨细胞 ,可作为骨组织工程体外构建的种子细胞。     

大鼠颅盖骨成骨细胞的体外培养及其弹性力学特性研究

本文以乳大鼠颅盖骨为材料,体外成功分离及培养了大鼠颅盖骨成骨细胞［１ ,２］ ,并对细胞形态、细胞内碱性磷酸酶（ＡＫＰ） 染色、营养液中骨钙素检测等方面进行了鉴定。在此基础上利用微管吸吮技术和线弹性半无限体模型研究了大鼠成骨细胞的被动变形特性,测定了大鼠成骨细胞的杨氏模量,并研究了秋水仙素对成骨细胞弹性性质的影响,经秋水仙素处理后的成骨细胞与正常组成骨细胞相比,其杨氏模量没有显著性改变。这一结果将为进一步研究成骨细胞的离体及在体的主动变形机制,提示成骨细胞的生命活动机理提供了有价值的实验数据     

大鼠颅盖骨成骨细胞的体外培养及期货间性力学特性研究

本文以乳大鼠颅盖肌为材料，体外成功分离及培养了大鼠颅盖骨成骨细胞＾「１，２」，并对细胞形态、细胞内碱性磷酸酶（ＡＫＰ）染色、营养液中骨钙素检测等方面进行了鉴定。在此基础上利用微管吸吮技术和线弹性半无限体模型研究了大鼠成骨细胞的被动变形特性，测定了大鼠成骨细胞的杨氏模量，并研究了秋水仙素对成骨细胞弹性性质的影响，经秋水仙素处理后的成骨细胞与正常组成骨细胞相比，其杨氏模量没有显著性改变。这一结果将为进     

乳鼠成骨细胞与珊瑚-羟基磷灰石支架材料在旋转式生物反应器中培养的实验研究

目的探讨联合运用成骨细胞、珊瑚-羟基磷灰石(CHA)支架材料和自行研制的旋转式生物反应器在体外构建组织工程化骨的可行性.方法运用骨片组织培养法,分离培养Wistar乳鼠的成骨细胞,传至第3代后,形成成骨细胞-CHA复合物,然后在自行研制的生物反应器中培养.通过茜素红(ARS)染色,MTT法及其他组织化学的方法来研究在生物反应器中培养14 d时的成骨潜能.结果成骨细胞和CHA支架材料有良好的生物相容性.在生物反应器中,成骨细胞-CHA复合物培养至第14天时,CHA明显促进了细胞的增殖,ARS染色呈弱阳性反应,同时,碱性磷酸酶(ALP)的分泌减少.结论CHA材料和生物反应器可以为成骨细胞提供良好的生物学及力学环境,三者联合运用有希望成为构建组织工程骨的理想方法.     

磷酸钙骨水泥的生物学研究进展

本文综述了磷酸钙骨水泥作为一种新型人工骨替代材料近年来的生物学基础及提高其生物学性能的研究 ,阐明了磷酸钙骨水泥以其良好的生物学特性 ,使其在骨缺损修复领域具有广阔的应用前景。     

磷酸钙骨水泥的生物学研究进展

本综述了磷酸钙骨水泥作为一种新型人工骨替代材料近年来的生物学基础及提高其生物学性能的研究,阐明了磷酸钙骨水泥以其良好的生物学特性,使其在骨缺损修复领域具有广阔的应用前景。     

体外培养成骨细胞对自体骨髓间充质干细胞定向成骨分化的影响

目的观察体外培养成骨细胞对自体骨髓间充质干细胞（BMSC）增殖和定向成骨分化的影响．探讨此诱导方法作为骨组织工程种子细胞来源方法的可行性。方法应用密度梯度离心联合贴壁筛选法从兔股骨骨髓中分离、纯化BMSC．取第3代BMSC常规培养设为空白对照组,利用含有钙化诱导剂的DMEM培养基诱导培养第3代BMSC．设为钙化对照组。取第3代成骨细胞,1：1的比例和第3代BMSC共同培养．设为实验组。碱性磷酸酶（ALP）染色及钙结节染色鉴定诱导结果．ALP定量测定观察共同培养中成骨细胞对BMSC诱导影响。总蛋白定量测定观测诱导成骨细胞的分化活性．结果成骨细胞与BMSC共同培养24h后．在倒置光学显微镜下可见两种细胞形态混杂生长．共同培养5d后．细胞形态趋于一致,多呈长梭形。诱导培养5d后．实验组与钙化对照组ALP染色均为阳性。诱导培养21d．两组钙结节茜素红染色均呈阳性．而BMSC空白对照组并未见钙结节形成。ALP定量测定,实验组于3、5、7、9d均低于钙化对照组,且差异均具有统计学意义。实验组与空白对照组ALP定量测定,在4个时间段差异也均具有统计学意义。总蛋白定量测定显示实验组于第3天．A值高于钙化对照组,差异具有显著统计学意义（P〈0．01）,而第5天、第7天、第9天时却低于钙化对照组．差异具有显著统计学意义（P〈0．01）。实验组于各时间段均高于空白对照组．差异亦具有统计学意义。结论成骨细胞与BMSC共同培养应用于BMSC的成骨诱导．从诱导效率和诱导后成骨细胞的分化活性方面．都能证实该共同培养方法的有效性。但与钙化诱导方法相比．共同培养的诱导效果差于钙化诱导方法。