日本三角涡虫自发荧光组织结构的研究

目的 研究涡虫自发荧光的组织结构,为其发育和再生生物学提供资料. 方法采用HE、Masson和Van Gieson染色显示日本三角涡虫(Dugesia japonica)部分组织结构,并观察其紫外激发的自发荧光.每个染色组和自发荧光组有6条涡虫. 结果 其表皮、咽的外表皮、原肾管上皮、肠上皮、光感受器细胞和纵神经索都能自发蓝色荧光;交配囊上皮游离面可见自发黄绿色荧光,上皮中部发蓝色荧光,基底部发的蓝色荧光较弱;精巢几乎不发荧光,眼点的色素上皮不发荧光. 结论对于涡虫眼点结构和自发荧光的研究可能会对无脊椎动物眼的起源及系统演化规律的研究提供帮助.     

日本三角涡虫自发荧光组织结构的研究

目的 研究涡虫自发荧光的组织结构,为其发育和再生生物学提供资料. 方法 采用HE、Masson和Van Gieson染色显示日本三角涡虫 (Dugesia japonica) 部分组织结构,并观察其紫外激发的自发荧光.每个染色组和自发荧光组有6条涡虫. 结果 其表皮、咽的外表皮、原肾管上皮、肠上皮、光感受器细胞和纵神经索都能自发蓝色荧光;交配囊上皮游离面可见自发黄绿色荧光,上皮中部发蓝色荧光,基底部发的蓝色荧光较弱;精巢几乎不发荧光,眼点的色素上皮不发荧光. 结论 对于涡虫眼点结构和自发荧光的研究可能会对无脊椎动物眼的起源及系统演化规律的研究提供帮助.     

传统与光谱流式细胞仪对自发荧光样本检测的比较

目的 比较传统与光谱流式细胞仪检测自发荧光样本的性能。方法 以annexin V(AV)/碘化丙啶(PI)染色检测细胞凋亡为模型，制备带有自发荧光的单细胞样本，分别用传统与光谱流式细胞仪采集同一样本荧光信号。结果 自发荧光干扰异硫氰酸荧光素(FITC)通道荧光信号，传统流式细胞仪应避免使用FITC通道的荧光素；而光谱流式细胞仪可以清楚分辨FTIC通道的荧光素和自发荧光。同时优化了样本制备方法和annexin V/PI染色方案。结论 光谱流式细胞仪对于自发荧光样本的检测在一定条件下具有相对优良的性能。     

普通墨汁对中、小血管行荧光染色

自发荧光的生物物质或经荧光染料标记的物质可在荧光显微镜下发荧光。但市售普通墨汁对组织结构可行荧光染色 ,经查未见报告。我们给小鼠、大鼠、幼兔注射普通墨汁 ,分别取肺、肾、肝、肠系膜 ,均可见其中、小血管显现很强的黑色荧光 ,其他组织无荧光。碘化钾对血管荧光有很强的猝灭作用。现报道如下 :1　材料与方法1 .1　材料　 ( 1 ) A液　即市售普通墨汁原液。( 2 ) B液　取墨汁 1 0 0 ml,明胶 3g,隔水加温 ,使明胶溶解于墨汁中即成。 ( 3) C液蒸馏水 1 0 0 ml,明胶 3g,加温溶解。1 .2　动物　实验动物分三组 ,每组小鼠、大鼠、幼兔各…     

内源性二氧化硫及其生成酶在大鼠体内的生成与分布

目的：探讨内源性二氧化硫(SO2)及其生成酶谷氨酸草酰乙酸转移酶(GOT)在大鼠体内的正常分布。 方法：选用Wistar大鼠，分别留取心、肝、肺、肾、主动脉、肺动脉、肠系膜动脉、肾动脉和尾动脉，应用高效液相色谱荧光法(HPLC)检测各组织中亚硫酸盐的含量；应用酶学法测定各组织中GOT酶活性及荧光定量PCR测定各组织中GOT mRNA的含量；原位杂交检测血管组织中GOT mRNA的分布。结果：心、肝、肺、肾、主动脉、肺动脉、肠系膜动脉、肾动脉和尾动脉中均含有一定量的亚硫酸盐，且以动脉血管中的含量较高；心、肝、肾等组织中的GOT酶活性及GOT mRNA含量明显高于动脉血管的含量；GOT mRNA主要位于血管内皮细胞和近内皮的血管平滑肌细胞。结论：SO2可在心血管系统内源性产生，动脉血管中SO2含量高于组织器官中的含量，GOT酶及GOT mRNA的含量在动脉血管中较低，这可能与局部代谢及作用有关。     

苏丹黑B降低大鼠肠道自发荧光及其在免疫荧光染色中的应用

目的 探讨降低大鼠肠道组织自发荧光的简便可行方法。方法 取正常SD大鼠（n=5）肠道做冷冻切片,荧光显微镜下观察自发荧光（AF）,检测苏丹黑B（SBB）对AF的影响及其在肠道免疫荧光（IF）染色中的应用。结果 大鼠各肠段组织在FITC和TRITC通道存在大量明显的AF,且不受血清封闭的影响;应用0.3% SBB处理组织10 min,可显著降低AF;IF染色加SBB处理后的肠道可见AF显著降低,目的蛋白的荧光表达不受影响。结论 0.3% SBB染色10 min能显著降低大鼠肠道组织的AF,使IF特异性染色更加鲜明。     

多光谱成像系统在病理诊断中的应用

目的探讨多光谱成像(multispectral imaging,MSI)系统在病理诊断中的应用及其价值。方法利用量子点免疫荧光双重标记技术同时检测肺癌组织中CD147和p53蛋白的表达,以及乳腺癌组织中HER-2和CK蛋白的共表达。利用显色原位杂交(chromogenic in situ hybridization,CISH)技术检测乳腺癌组织中Her-2基因的扩增;以及子宫颈癌组织中HPV16/18的感染。对获得的图像均进行MSI系统分析处理。结果 MSI系统可以获得不同染料(如量子点、DAB、苏木精)标记的蛋白和DNA以及自发荧光的光谱曲线,然后通过复杂的光谱学算法,清除自发荧光,最后获得各指标的形态学、定量、空间分布和共定位信息。结论 MSI系统明显提高了组织切片的信噪比,还可将每种信号进行单独分离、定量,为多指标检测提供可行性,使之在病理诊断中有着很好的应用价值。     

成年大鼠脊髓厚片自发荧光特异性消除新方法

目的改良成年大鼠脊髓厚片自发荧光的特异性消除方法。方法利用染色前0.01 mol/L柠檬酸钠缓冲液(pH=6.0)80℃水浴热抗原修复45 min和染色后醋酸铵缓冲的0.01 mol/L硫酸铜溶液(p H=5.0)浸润的独立或者联合处理,特异性消除成年大鼠脊髓厚片漂片法免疫荧光染色中的自发荧光。结果染色前柠檬酸钠酸性缓冲液水浴热抗原修复能够显著消除成年大鼠脊髓厚片自发荧光。在此基础上,染色后短时间醋酸铵缓冲的酸性硫酸铜溶液浸润,即可完全消除这些自发荧光,并不减弱漂片法免疫荧光染色的目标荧光信号。结论柠檬酸钠酸性缓冲液水浴热抗原修复-醋酸铵缓冲的酸性硫酸铜溶液浸润的联合处理比较理想地特异性消除成年大鼠脊髓厚片漂片法免疫荧光染色中的自发荧光。     

老化相关的自发荧光可作为细胞衰老的标志物

目的 观察衰老的脑组织内自发荧光的波长特点,探讨如何合理地利用和消减老化相关的自发荧光。方法 选取3月龄和24月龄自然老化的C57BL/6J雌、雄性小鼠。以衰老相关β-半乳糖苷酶染色（SA-β-Gal）和脂褐素的沉积评估老年鼠脑组织衰老的程度。以激光共焦显微镜分析老化相关自发荧光的波长特点,免疫组织化学和免疫荧光的方法标记星形胶质细胞。结果 老年鼠海马和下丘脑第三脑室室周旁出现强SA-β-Gal染色、脂褐素的聚集及自发荧光。老化相关的自发荧光发射波长介于500～565nm,下丘脑第三脑室室周旁的星形胶质细胞不仅高表达SA-β-Gal,而且出现很强的自发荧光。采用针对脂褐素的自发荧光消除剂处理脑组织后,老化相关的自发荧光几乎完全消失。 结论 老化相关的自发荧光可以作为特定表型细胞衰老的标志物;恰当的处理老化相关的自发荧光,可极大的提高衰老脑组织免疫荧光检测的特异性。     

近红外二区荧光探针在宫颈癌成像与治疗中的应用

宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一，早期、有效的诊断与治疗对提高患者生存率及生活质量具有重要意义。荧光成像已被广泛应用于癌症的早期检测，但由于光在深层组织内传播时，受穿透深度和散射的影响，不利于实现深层组织高清成像。近红外二区（near-infrared-Ⅱ，NIR-Ⅱ；900～1 700nm）成像技术与近红外一区（near-infrared-Ⅰ，NIR-Ⅰ；760～900 nm）成像技术相比，具备更高的信噪比和对比度、更低的自发荧光和更高的空间分辨率，是当前光学、生物医学等多学科的研究热点，非常适合宫颈癌的高质量荧光成像。高质量的荧光成像需要借助良好的荧光探针来精确定位肿瘤组织及其边界并监测治疗过程。目前已开发了一系列基于有机和无机材料的NIR-Ⅱ荧光探针。本文概述了几种典型的NIR-Ⅱ荧光探针及其辅助的NIR-Ⅱ荧光成像技术在宫颈癌成像及治疗方面的应用。     

组织化学染色技术在超薄生物塑化标本中的应用

目的 探讨组织化学染色技术是否可以应用于塑化标本并验证染色塑化标本是否具有自发荧光。 方法 选取1个手掌标本经超薄生物塑化技术做成组织块,进行连续切片,切片数量56张,并按切片顺序进行染色处理：原始切片,苏木素-伊红染色,凡尔霍夫- 酸性品红染色,亚甲蓝-天青Ⅱ号染色,在扫描仪、光学显微镜和激光扫描共焦显微镜下观察染色效果和组织结构特点并进行比较。 结果 3种染色技术都可应用于塑化切片染色。苏木素-伊红染色显示肌肉、结缔组织呈红色或紫红色,骨质呈紫蓝色或蓝色。凡尔霍夫-酸性品红染色显示弹力纤维呈黑色,胶原呈红色,其他组织为黄色或棕黄色。亚甲蓝-天青Ⅱ号染色显示肌腱呈紫红色,骨质呈粉红色,软骨呈紫罗兰,其他组织呈紫色。但细胞内结构的染色效果并不理想。在激光扫描共焦显微镜下,胶原纤维、弹力纤维和肌肉纤维具有自发荧光,结构清晰可辨。结论 常用的组织化学染色技术适合于超薄塑化切片染色,染色切片的各种组织结构比未染色的观察效果好。染色后,塑化切片中具有自发荧光的结构在激光扫描共焦显微镜下亦可清晰显影。     

大鼠动脉螺旋血流的荧光成像

目的 建立大鼠动脉螺旋血流的实时荧光成像法。方法 随机将SD大鼠分为静脉造影组(股静脉注射,1 mL/kg)与小剂量动脉造影组(腹主动脉注射,0.1 mL/kg),其中小剂量动脉造影组又分为荧光素钠组、罗丹明B组、FITC-dextran组和量子点组(每组n=7)。通过体式荧光显微镜实时观察大鼠股动脉血液流动现象,用高速摄像机拍摄动态图像,通过图像阈值分割算法及形态学后处理算法标定荧光区域,测算大鼠股动脉螺旋血流的轴向速度与切向速度,并计算其螺距和壁剪切应力。结果 与静脉造影组相比,小剂量动脉造影组可以清晰显示大鼠股动脉的血流呈顺时针螺旋样流动,在FITC-dextran造影剂组可计算出大鼠螺旋血流的轴向速度为(198.4±112.7)mm/s,切向速度为(3.3±0.8)mm/s,螺距为(126.1±76.3)mm,壁剪切应力为(9.5±5.6)Pa。每只大鼠重复3次注射,测得的轴向、切向速度结果无差异。结论 实时荧光成像法可以用于在体观察大鼠动脉螺旋血流并对螺旋血流的血流动力学特征进行定量分析。     

SHRsp与WKY大鼠肠系膜动脉的左旋精氨酸舒张反应

左旋精氨酸(L-arginine,L-arg)作为一氧化氮(NO)的前质,在血管舒缩调节中有重要的作用。我们曾证实自发高血压大鼠(SHR)肠系膜动脉内皮依赖性舒张减弱并与EDRF有关.为进一步探讨此减弱的机制,本文应用微量生物测定法观察成年卒中SHR(SHRsp)和WKY大鼠的肠系膜动脉在PHE预收缩基础上对L-arg舒张反应,与左旋硝基精氨酸(NG-nitro-L-arginine,L-NNA)对此舒张的影响.     

早期胃癌窄带成像放大内镜半定量诊断进展

窄带成像放大内镜（NBI—ME）是一种具有潜在应用前途的新技术,可观察胃肿瘤相关的腺开口形态和微血管结构。文章通过半定量分析、新分类与边界界定等方法综合评估早期胃癌（EGC）,并阐述NBI—ME诊断EGC与组织病理学之间关系．结合NBI—ME联合自发荧光视频内镜（AFI）诊断EGC的实际情况,较全面地分析NBI—ME诊断EGC应用的新进展。     

自体荧光在组织中的传输规律研究

利用一系列蒙特卡罗(Monte Carlo)模拟研究自体荧光在组织中的传输规律，分析组织的光学参数、结构、边界条件以及组织荧光团的量子产量等因素对荧光光谱的影响。首先模拟分析半无限大介质模型中的荧光，认为最终逸出组织表面的荧光在组织中的产率是深度的函数；然后分别对正常组织和粘膜癌变组织，进行模拟分析，结果表明，粘膜下层对产生荧光的影响较小，即当粘膜层随着癌变的发展而不断增厚时，癌变组织产生的荧光总量并不会发生太大的变化。     

大鼠全脑性缺血及再灌过程中某些脑生理、生化及形态学变化的观察

全脑性缺血多见于临床急性心衰等症,其预后取决于缺血时间的长短及循环恢复前后的处理。本实验用Wistars大鼠,观察了三动脉结扎(基底+双侧颈总)造成实验性全脑性缺血及再灌不同时程对EEG,行为,组织形态和脑内核团cAMP含量的影响。 大鼠造成缺血模型后EEG显示平线,缺血15分钟再灌后,EEG出现自发棘波的时间为     

慢病毒介导的SHP-1过表达抑制模型小鼠动脉粥样硬化

目的:研究含SH2结构域的酪氨酸磷酸酶-1(SHP-1)慢病毒载体在动脉粥样硬化模型小鼠中的作用。方法:将45只8周龄雄性Apo E基因敲除小鼠随机分为3组,即对照组、绿色荧光蛋白(GFP)转染组、SHP-1转染组。3组小鼠右侧颈总动脉植入套环并高脂喂养8周,随后分别转染GFP空载体和SHP-1慢病毒(SHP-1-LV)。分别于转染第1、2、6周检测硬化斑块荧光强度、小鼠体重、血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)水平变化,并利用real-time PCR和Western blot检测右侧颈总动脉中SHP-1、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9等的表达,最后制作切片染色观察斑块病理变化。结果:荧光显微镜下观察到慢病毒转染第1、2、6周后斑块有明显荧光,且在第2周时荧光强度最高,SHP-1慢病毒转染对小鼠体重和血清TC、TG水平无显著影响,但可显著上调右侧颈总动脉中SHP-1的mRNA和蛋白的表达,同时抑制IL-6、TNF-α、MMP-2、MMP-9等的表达水平。SHP-1慢病毒转染也降低右侧颈总动脉斑块面积比及脂质含量。结论:过表达SHP-1可能促进小鼠动脉粥样硬化斑块消退,从而为预防和治疗动脉粥样硬化提供靶点。     

人脐带间充质干细胞不同输注途径对急性肾小管坏死的影响

背景:研究已证实外源性间充质干细胞能够迁移、定居于缺血再灌注损伤后的肾组织中分化为肾小管上皮细胞,恢复肾脏组织结构和功能。目前对以动脉注射或静脉注射途径移植干细胞哪种更好仍存在争议。目的:观察人脐带间充质干细胞经不同途径移植对家犬急性肾小管坏死的影响。方法:建立健康家犬急性肾小管坏死模型,以随机编号法分为2组,分别以外周静脉注射及右股动脉介入经肾动脉直接注射DAPI标记的人脐带间充质干细胞。移植后24h,光镜下观察肾组织形态改变,荧光显微镜下观察人脐带间充质干细胞植入实验动物体内后的存活情况。结果与结论:普通光镜下观察可见两组动物肾小管上皮细胞均出现广泛肿胀、变性、坏死等病理变化。经外周静脉注射及经肾动脉直接注射的人脐带间充质干细胞均在病损肾脏中成活,且两组荧光强度差异无显著性意义(P0.05)。说明两种途径移植人脐带间充质干细胞均可在肾脏内定殖,修复肾脏组织结构的效果相当,相对于动脉注射途径,经静脉注射移植途径创伤较小。     

人类Thy-1抗原:在淋巴组织内的分布及可能的功能

用自人脑组织提取的Thy-1抗原免疫BALB/C小鼠后经细胞融合技术制得单克隆抗人Thy-1抗体。尔后采用荧光激活细胞收集器(FACS)和免疫荧光技术,检测了人外周血淋巴细胞、胸腺、脾脏及淋巴结细胞及组织内Thy-1抗原的分布。结果表明:外周血淋巴细胞上几乎没有Thy-1存在。胸腺细胞只有少数(7％)呈微弱的荧光着色,胸腺小叶的周围、脾的边缘区及某些动脉周     

兔静脉动脉化对腓肠肌组织结构影响的观测及临床意义

目的观察完全与不完全离断兔小腿静脉动脉化后腓肠肌组织结构的变化规律,并与传统断指(肢)再植手术成活的腓肠肌组织进行比较,为临床选择断指(肢)再植手术方式及治疗肢体缺血症提供实验依据。方法用15只兔分3组:A组为完全离断小腿胫后动脉缝接胫后静脉动脉化组;B组为部分离断小腿胫后动脉缝接胫后静脉组;C组为完全离断小腿应用传统的胫后动脉缝接胫后动脉对照组。3组均结扎胫前动脉,保留胫前静脉等未动脉化的静脉及缝接其它组织结构。术后28d麻醉下切取各组腓肠肌内侧头制成标本,经HE、Mallory、PCNA、肌动蛋白、Ⅰ型胶原蛋白、琥珀酸脱氢酶、vitc等染色和HYP含量测定等方法处理后进行光学显微镜观测。结果AB组明显可见腓肠肌的肌纤维变细变少,肌动蛋白含量减少,PCNA阳性,肌卫星细胞增多,白肌纤维为主的腓肠肌肌纤维转变较多的红肌纤维等变化,Mallory染色示肌纤维间隙变大,结缔组织增生。C组变化明显少于AB组。结论静脉动脉化有利于减少离断腓肠肌等组织结构萎缩和变性。