病毒样颗粒技术在人用疫苗中的应用

病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)是由病毒的一种或多种结构蛋白组成的、不含病毒基因组的空心颗粒.许多病毒的结构蛋白在真核或原核表达系统中能够自我组装成VLPs.VLPs具有与天然病毒相似的免疫原性而无感染性,因此是一种较为理想的候选疫苗抗原.     

SARS冠状病毒刺突蛋白的研究进展

SARS冠状病毒S蛋白是病毒颗粒最大的结构蛋白和最重要的表面抗原。该蛋白在介导病毒颗粒与宿主细胞受体结合、融合的过程中起着关键作用。它是病毒中和性抗体的靶点,在疫苗研究和抗病毒治疗研究中均占有重要地位。本文就SARS流行以来有关S蛋白的研究作一综述。     

TBE病毒E蛋白分子生物学研究的进展

森林脑炎（ＴＢＥ）病毒是黄病毒科中的成员，象其它的黄病毒一样，成熟的ＴＢＥ病毒含有单链正股ＲＮＡ、３个结构蛋白即衣壳蛋白（Ｃ）、膜蛋白（Ｍ）、包膜（Ｅ）蛋白和七个非结构蛋白。病毒的蛋白开始以一个聚蛋白的形式合成，然后通过病毒和细胞编码的蛋白酶裂解产生病毒的单个蛋白，裂解后的蛋白和病毒的基因组ＲＮＡ首先组装成含有ＰｒＭ蛋白（Ｍ蛋白的前体）的未成熟的病毒，ＰｒＭ通过细胞编码的蛋白酶裂解成Ｍ蛋白成为成熟的病毒。在３个结构蛋白中Ｅ蛋白是病毒最重要的结构蛋白，决定着病毒的组织的嗜性，介导病毒与细胞受体的结合，诱导保护性的免疫反应。Ｅ蛋白内单个氨基酸的改变可导致病毒的组织嗜性、病毒的毒力、血凝活性和融合活性的改变。因此对ＴＢＥ病毒Ｅ蛋白结构和功能的研究有助于了解病毒与宿主细胞相互作用、病毒致病性以及病毒毒力改变的机理，从而，为病毒感染的特异性诊断、疫苗的研制和抗病毒药物的设计、进而为病毒的预防、控制和治疗提供理论依据，     

病毒样颗粒技术的研究进展

病毒样颗粒( Virus-like Particles,VLPs),也称为核心样颗粒( Core-like Particles,CLPs),是由病毒单一或多个结构蛋白自行装配而成的高度结构化的介于15nm～400nm的空心蛋白颗粒[1].形态上,VLPs类似未成熟的病毒粒子,但由于缺乏调节蛋白和感染性核酸而无复制和感染能力,不存在感染宿主的危险性.但VLPs具有天然病毒的类似嗜性,能高密度地展示病毒抗原表位,通过和病毒感染一样的途径呈递给免疫细胞,引发强有力的特异性体液和细胞免疫,有效诱导机体的免疫系统产生免疫应答[2].     

乳头瘤病毒病毒样颗粒的研究进展

乳头瘤病毒病毒样颗粒(VLP)主要衣壳蛋白L1体外表达后自我组装成结构和功能类似天然病毒的颗粒,在HPV诊断、防治等方面有重要作用.本文就HPV VLP的制备、结构,病毒组装机理,病毒与细胞相互作用以及VLP在血清学检测中的应用等方面作一综述.     

乳头瘤病毒病毒样颗粒的研究进展

乳头瘤病毒病毒样颗粒（VLP）主要依壳蛋白L1体外表达后处我组装成结构和功能类似天然病毒的颗粒,在HPV诊断,防治等方面有重要作用。本文就HPV VLP的制备、结构,病毒组装机理,病毒与细胞相互作用以及VLP在血清学检测中的应用等方面作一综述。     

基于辛德毕斯病毒载体的重组丙肝病毒颗粒的制备与鉴定

目的 利用自主研发的辛德毕斯病毒载体构建含有丙型肝炎病毒( HCV)结构蛋白E1E2的重组病毒颗粒.方法 将编码HCV包膜糖蛋白的E1 E2基因克隆至辛德毕斯病毒载体,构建重组质粒pBR-XJE1E2和pVA-XJE1E2,转染BHK-21细胞后获得重组丙肝病毒颗粒.并通过RTPCR、间接免疫荧光和Western Blot方法鉴定表达E1E2蛋白的重组病毒颗粒.结果 酶切、PCR和测序分析表明重组质粒构建成功.RT-PCR、间接免疫荧光和Western-Blot鉴定结果表明重组质粒转染细胞后能包装出表达E1E2的丙肝病毒颗粒.结论 以辛德毕斯病毒载体为基础构建的重组质粒可在真核细胞中包装出重组丙肝病毒颗粒,这为进一步研究其在动物体内免疫反应奠定了基础.     

病毒样颗粒在昆虫杆状病毒表达体系中的表达、组装及其应用研究

抗生素的普遍应用,使得细菌性疾病的危害大为降低,但病毒性疾病仍严重危害着人类.对病毒样颗粒的制备及应用研究是了解、诊断、治疗和预防病毒性疾病的一条非常有效的途径.病毒样颗粒(virus like particles,VLPs)是由一个或多个病毒外壳蛋白构成,其结构类似于真正的病毒颗粒且不含有病毒核酸,已经被广泛应用于疫苗制备和病毒血清学诊断中,近来又成为基因治疗和药物运送的新型运载系统.同时作为一种有效的研究手段,为研究病毒单个蛋白的精细功能及各蛋白之间的相互作用[1],了解病毒的致病机制,尤其是对那些缺乏小动物模型,且在细胞中不能有效增殖的病毒,提供了一条研究途径.目前多数病毒的VLPs在真核表达系统以及少数病毒的VLPs在原核表达系统中都能够有效地实现自我组装,而从八十年代发展起来的昆虫杆状病毒表达系统已被证明是一种非常有效的能正确表达和重组病毒样颗粒的系统.应用昆虫杆状病毒体系表达、组装出病毒样颗粒,为VLPs后续的研究和开发应用提供了便利条件.本文综述了用该系统进行VLPs的生产和对其应用开发的研究.     

文摘

文摘１９轮状病毒２个表面蛋白之间的相互作用可能改变病毒与受体结合的特异性［英］／ＭｅｎｄｅｚＥ…／／ＪｏｕｒａｌｏｆＶｉｒｏｌｏｇｙ。－１９９６，７０（２）．１２１８～１２２２轮状病毒（ＲＶ）有两个蛋白（ＶＰ４和ＶＰ７）暴露于病毒颗粒表面，ＶＰ４介导...     

SARS-CoV E蛋白基因的扩增及原核表达载体的构建

加拿大英属哥伦比亚癌症研究所基因组科学中心已完成了SARS冠状病毒的全基因组测序 (基因库登录号 :AY2 74 119)。SARS CoV基因组编码包括S蛋白、M蛋白、N蛋白和E蛋白等结构蛋白质。E蛋白是最小的结构蛋白 (为糖蛋白 ) ,散布于SARS病毒的包膜 ,疏水性最强 ,其核苷酸序列为 2 31bp ,编码 76个氨基酸 ,其等电点为 6 .0 1,相对分子质量为 8.36 1× 10 3。推测E蛋白的作用有利于病毒形状的形成 ,在病毒颗粒形成过程中起主要作用。本文利用已公布的SARS CoV基因组序列 ,克隆了E蛋白基因 ,以期为深入研究E蛋白的生物学功能和药物或疫…     

p7蛋白--丙型肝炎病毒潜在抑制靶点

丙型肝炎（hepatitisc）是严重的慢性传染病之一，全世界病毒感染者约1．7～2亿。HCV为单链RNA病毒，一个开放读码框编码了3010个氨基酸的前体蛋白，在细胞和病毒蛋白酶共同作用下，前体蛋白被降解成结构蛋白和非结构蛋白两部分。结构蛋白包括核心蛋白（C）和膜蛋白（E1、E2）以及p7蛋白，非结构蛋白包括NS2、NS3、NS4A、NS4B、NSSA和NSSB。p7蛋白结构、功能仍然了解甚少。最近有研究发现p7蛋白可能是一个重要的病毒抑制靶点。     

人乳头瘤病毒16型晚期蛋白L1的表达及病毒样颗粒的装配

目的　在昆虫细胞中表达人乳头瘤病毒 16型 (HPV16 )哈尔滨地区分离株的晚期蛋白L1,并分离纯化由L1蛋白在细胞中自主组装成的病毒样颗粒 ,为HPV16预防性疫苗的研制奠定基础。方法　获得含有HPV16L1基因的重组杆状病毒并使目的蛋白L1在昆虫细胞中表达 ;对重组杆状病毒的扩增条件及L1蛋白的表达水平进行优化 ;电镜下观察昆虫细胞中晚期蛋白装配成病毒样颗粒的情况 ,经氯化铯密度梯度纯化病毒样颗粒 ,并经Westernblot进行验证。结果　获得了稳定表达L1蛋白的重组杆状病毒 ;以MOI值为 0 .2感染昆虫细胞可获得较高滴度的重组病毒 ,以MOI值为 10感染昆虫细胞可获得较高水平的L1蛋白表达 ;电镜下可观察到昆虫细胞核内直径为 5 5nm的病毒样颗粒 ;病毒样颗粒可通过氯化铯密度梯度离心获得。结论　获得人乳头瘤病毒哈尔滨地区分离株L1蛋白可在昆虫细胞中自主装配的病毒样颗粒并成功分离纯化。     

持续表达乙脑病毒亚病毒颗粒的一株哺乳动物细胞系的传代和特性

该作者已经培养了一株产生乙脑病毒 (JEV)亚病毒颗粒 (胞外颗粒 EPs)的分泌型的细胞系 (F细胞系 ) ,该颗粒包括 JEV的外膜糖蛋白 (E)和病毒体细胞膜蛋白 (M)的前体。F细胞从编码突变型的 Pr M c DNA加工合成的 JEV产物 ,因为表达 E蛋白和 Pr M蛋白的真正结构的稳定细胞系不能被获得 ,部分是由于包括 E和 M的 EPs的细胞融合能力。对于 EPs分泌细胞系的成功产生 ,Pr M蛋白的生化转换是严格的。F细胞产生的 EPs表现了 JEV感染细胞产生的空病毒颗粒的生化特性 ,除了 F细胞的 EPs。缺乏凝血活性和 M。 F细胞 Eps能被一组抗 E蛋…     

HIV-1Vpu拮抗Tetherin抑制逆转录病毒的释放

人体细胞可以通过阻止逆转录病毒和其他有包膜病毒颗粒的释放而发挥抗病毒效应，但此效应能被HIV-1辅助蛋白——Vpu所拮抗。IFN-α可以诱导tetherin蛋白表达，tetherin蛋白使病毒颗粒牢固的附着于被感染细胞表面，从而有助于阻止艾滋病病毒的扩散。通过基因表达分析确定这种蛋白质是一种功能未知的膜蛋白CD317（它被重新命名为tetherin）。     

病毒样颗粒疫苗的研究进展

病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)是不含病毒核酸的空壳结构,许多病毒结构蛋白都具有自动组装成VLPs的能力,在形态结构上与天然的病毒颗粒相似,具有很强的免疫原性和生物学活性.由于VLPs不含有病毒遗传物质,因此不具有感染性, 其中有些已经作为疫苗成功应用于临床.VLPs在结构上允许外源基因或基因片段的插入而形成嵌合型VLPs并将外源性抗原展示在其表面.此外,多数病毒VLPs还具有包裹核酸或其他小分子的能力,可作为基因或药物的运载工具.     

体外培养的嵌合体丙型肝炎病毒感染Huh7.5细胞的透射电镜观察

目的 通过透射电子显微镜技术观察体外培养的嵌合体丙型肝炎病毒(HCV)感染Huh7.5细胞后胞内病毒颗粒的形态学特征及细胞内部超微结构的变化.方法 将含有全长HCV嵌合基因组的质粒pFL-J6/JFH体外转录为HCV RNA,电穿孔转染至Huh7.5细胞,实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)测定培养上清中病毒数量;间接免疫荧光检测病毒蛋白的表达;收取转染后细胞培养上清感染原始Huh7.5细胞,制作超薄细胞切片,透射电子显微镜技术观察被感染细胞中病毒颗粒的形态学特征及细胞超微结构的变化.结果 qRT-PCR显示不同时间点收取的转染后细胞培养上清中含有高水平的病毒量;间接免疫荧光显示病毒NSSA非结构蛋白高表达;透射电子显微镜观察到被感染的Huh7.5细胞内含有大量有包膜或无包膜的病毒样颗粒,细胞质内部分膜性细胞器增生,出现黄病毒科病毒感染后特征性结构及某种未知结构等.结论 体外培养的嵌合体HCV具有HCV颗粒的形态学特征,并能够有效感染人源性肝细胞Huh7.5.     

体外培养的嵌合体丙型肝炎病毒感染Huh7.5细胞的透射电镜观察

目的 通过透射电子显微镜技术观察体外培养的嵌合体丙型肝炎病毒(HCV)感染Huh7.5细胞后胞内病毒颗粒的形态学特征及细胞内部超微结构的变化.方法 将含有全长HCV嵌合基因组的质粒pFL-J6/JFH体外转录为HCV RNA,电穿孔转染至Huh7.5细胞,实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)测定培养上清中病毒数量;间接免疫荧光检测病毒蛋白的表达;收取转染后细胞培养上清感染原始Huh7.5细胞,制作超薄细胞切片,透射电子显微镜技术观察被感染细胞中病毒颗粒的形态学特征及细胞超微结构的变化.结果 qRT-PCR显示不同时间点收取的转染后细胞培养上清中含有高水平的病毒量;间接免疫荧光显示病毒NSSA非结构蛋白高表达;透射电子显微镜观察到被感染的Huh7.5细胞内含有大量有包膜或无包膜的病毒样颗粒,细胞质内部分膜性细胞器增生,出现黄病毒科病毒感染后特征性结构及某种未知结构等.结论 体外培养的嵌合体HCV具有HCV颗粒的形态学特征,并能够有效感染人源性肝细胞Huh7.5.     

体外培养的嵌合体丙型肝炎病毒感染Huh7.5细胞的透射电镜观察

目的 通过透射电子显微镜技术观察体外培养的嵌合体丙型肝炎病毒(HCV)感染Huh7.5细胞后胞内病毒颗粒的形态学特征及细胞内部超微结构的变化.方法 将含有全长HCV嵌合基因组的质粒pFL-J6/JFH体外转录为HCV RNA,电穿孔转染至Huh7.5细胞,实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)测定培养上清中病毒数量;间接免疫荧光检测病毒蛋白的表达;收取转染后细胞培养上清感染原始Huh7.5细胞,制作超薄细胞切片,透射电子显微镜技术观察被感染细胞中病毒颗粒的形态学特征及细胞超微结构的变化.结果 qRT-PCR显示不同时间点收取的转染后细胞培养上清中含有高水平的病毒量;间接免疫荧光显示病毒NSSA非结构蛋白高表达;透射电子显微镜观察到被感染的Huh7.5细胞内含有大量有包膜或无包膜的病毒样颗粒,细胞质内部分膜性细胞器增生,出现黄病毒科病毒感染后特征性结构及某种未知结构等.结论 体外培养的嵌合体HCV具有HCV颗粒的形态学特征,并能够有效感染人源性肝细胞Huh7.5.     

体外培养的嵌合体丙型肝炎病毒感染Huh7.5细胞的透射电镜观察

目的 通过透射电子显微镜技术观察体外培养的嵌合体丙型肝炎病毒(HCV)感染Huh7.5细胞后胞内病毒颗粒的形态学特征及细胞内部超微结构的变化.方法 将含有全长HCV嵌合基因组的质粒pFL-J6/JFH体外转录为HCV RNA,电穿孔转染至Huh7.5细胞,实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)测定培养上清中病毒数量;间接免疫荧光检测病毒蛋白的表达;收取转染后细胞培养上清感染原始Huh7.5细胞,制作超薄细胞切片,透射电子显微镜技术观察被感染细胞中病毒颗粒的形态学特征及细胞超微结构的变化.结果 qRT-PCR显示不同时间点收取的转染后细胞培养上清中含有高水平的病毒量;间接免疫荧光显示病毒NSSA非结构蛋白高表达;透射电子显微镜观察到被感染的Huh7.5细胞内含有大量有包膜或无包膜的病毒样颗粒,细胞质内部分膜性细胞器增生,出现黄病毒科病毒感染后特征性结构及某种未知结构等.结论 体外培养的嵌合体HCV具有HCV颗粒的形态学特征,并能够有效感染人源性肝细胞Huh7.5.     

体外培养的嵌合体丙型肝炎病毒感染Huh7.5细胞的透射电镜观察

目的 通过透射电子显微镜技术观察体外培养的嵌合体丙型肝炎病毒(HCV)感染Huh7.5细胞后胞内病毒颗粒的形态学特征及细胞内部超微结构的变化.方法 将含有全长HCV嵌合基因组的质粒pFL-J6/JFH体外转录为HCV RNA,电穿孔转染至Huh7.5细胞,实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)测定培养上清中病毒数量;间接免疫荧光检测病毒蛋白的表达;收取转染后细胞培养上清感染原始Huh7.5细胞,制作超薄细胞切片,透射电子显微镜技术观察被感染细胞中病毒颗粒的形态学特征及细胞超微结构的变化.结果 qRT-PCR显示不同时间点收取的转染后细胞培养上清中含有高水平的病毒量;间接免疫荧光显示病毒NSSA非结构蛋白高表达;透射电子显微镜观察到被感染的Huh7.5细胞内含有大量有包膜或无包膜的病毒样颗粒,细胞质内部分膜性细胞器增生,出现黄病毒科病毒感染后特征性结构及某种未知结构等.结论 体外培养的嵌合体HCV具有HCV颗粒的形态学特征,并能够有效感染人源性肝细胞Huh7.5.