从OCT包埋冰冻组织提取组织RNA和检测病毒RNA

目的探讨如何从OCT包埋冰冻组织提取组织RNA和检测病毒RNA。为临床有限标本的保存和利用提供一简便的方法。方法用汉坦病毒感染的小鼠组织标本，经质量浓度25％蔗糖磷酸缓冲液固定OCT包埋，在-20℃冰箱中保存2年后，对冰冻的OCT包埋的感染组织标本进行RNA提取，用凝胶电泳、紫外分光光度计及RT—PCR等方法检测组织总RNA和病毒RNA。结果组织经质量浓度25％蔗糖磷酸缓冲液固定OCT包埋冰冻保存后，从中提取的RNA仍保持较好的完整性，可扩增出较长片段的病毒RNA。结论OCT包埋的冰冻组织标本不影响提取组织RNA并检测病毒RNA。     

在GMA包埋的半薄切片上显示几种酶的活性

1960年,Rosenberg等首先使用水溶性塑料包埋剂一乙二醇甲基丙烯酸酯(Glycol methac-rylate,缩写为GMA)作为电镜包埋剂以后,GMA的使用价值逐步受到重视,并从电镜的应用,推广到光学显微镜、组织化学等各个领域。GMA包埋的组织块,很少收缩,切成1-3μ的半薄切片后,在光镜下,几乎无细胞重叠现象,物质的分布与酶的定位清晰可见,克服了石蜡切片的收缩假象与新鲜冰冻切片质量不易保证等缺点。Feder等在应用塑料包埋技术于组织化学方面,做了许多工作。尤其是Higuchi(1979)和Namba(1983)等,在GMA包埋的切片上,进行了较详细酶活性的观察。近年来,国内也开展了GMA包埋的切片技术,张承志等做了粘多糖的     

提高脑组织冰冻切片质量的几点体会

目的:探讨减少脑组织冰冻切片脱片和增加脑组织冰冻切片免疫组织化学染色结果准确性的方法,为脑组织冰冻切片的广泛使用进一步奠定实验基础。方法:在保证实验真实性和科学性的前提下,将现有的脑组织冰冻切片技术结合在脑组织冰冻切片过程中所遇到的问题,以明胶硫酸铬钾处理载玻片,预冷的NS和4%多聚甲醛灌注固定组织,液氮速冻脑组织进行冰冻切片。结果:明胶硫酸铬钾处理载玻片的方法减少了冰冻切片脱片,预冷的NS和4%多聚甲醛提高了脑组织灌流固定效果,液氮速冻脑组织减少了冰晶产生。结论:此方法使脑组织冰冻切片脱片情况下降,冰晶产生减少,提高了脑组织冰冻切片免疫组织化学染色结果的准确性,该方法值得在临床和科研实验室中积极推广使用。     

可长期保存抗原与核酸活性的石蜡包埋法──AMeX法

可长期保存抗原与核酸活性的石蜡包埋法──ＡＭｅＸ法苏敏，田东萍，牛恕淼组织细胞经常规福马林或酒精固定后，一些脆弱抗原易丢失。冰冻切片可良好保存抗原，但冰冻切片不易保存，且镜下结构不如石蜡切片清晰。有学者曾采用干燥石蜡包埋法。国内也有学者试用塑料包埋剂...     

豚鼠颞骨三维重建的冰冻连续切片技术

目的　通过改进豚鼠颞骨冰冻连续切片技术 ,以获得更好的计算机三维图象。方法　将用甲酸脱钙后的颞骨标本 ,在低温下用明胶包埋。结果　此技术具有切片较薄、制片周期短和定位准确的优点。结论　该技术既具备切片的细节性 ,又能反映其空间特性 ,对颞骨解剖研究很有意义     

使用Epon-812包埋剂的体会

Epon-812包埋剂是目前电镜制样中较普遍采用的一种优良包埋剂.它具有许多优点,如切片性能好,超薄切片结构清晰,耐电子束轰击,特别是捞片时铜网无需做支持膜,为切片人员提供了方便,如果一次切片未捞好,可以再浸入水槽重新捞取,切片不会发生皱折.但是它也存在着一些不足:容易吸潮,对操作条件要求较高,性能不够稳定,尤其是刚开始使用时会遇到一些困难.我们使用该包埋剂多年,逐渐摸索到一些规律,主要有以下几点体会:1 试剂要成套采购.试剂成套与否直接决定了包埋剂的稳定性,如不成套,起码也应使用同一公司的产品,否则包埋剂的配方要重新调配,重新摸索,调配不当的包埋剂做出的包埋块,修块时发涩,而且毛糙,造成切薄片困难.2 试剂要保证新鲜.最理想的是一年以内生产的试剂,现买现用,这样的试剂配制出的包埋剂,做成包埋块后抗水性能强,即使包埋块丢入水中再取出,切片也不会有困难.3 试剂要保持干燥.NMA、DDSA均为酸酐,吸水能力很强,暂时不用的试剂要保存在干燥器内,使用的药品则分装成小包装放在操作箱内.4 操作条件要恒定.用Epon-812包埋时,影响因素最大的就是湿度,相对湿度超过35%以上,会出现聚合不均匀或聚合不完全,而聚合不好直接影响切片质量.上海地区湿度比较大,因此我们用Epon-812包埋的全过程均在操     

新型模具包埋方法用于皮肤冷冻组织存储的对照研究

通过对比新型模具包埋方法与传统包埋方法,观察新型模具包埋方法在低温冷冻组织包埋存储方面如:操作时间、OCT包埋剂使用量、样本体积、样本查找难易程度、空间占用量的效果,证实新型模具设备及包埋方法在低温冷冻组织包埋中的实用价值。     

一种改良的琥珀酸脱氢酶的制作方法

<正> 在组织化学方法中,琥珀酸脱氢酶(SDH)的制作方法通常采用冰冻切片片染法。近年来由于教学与科研的需要,我们对此法进行了一些改良和探讨,采用整块染色后用国产916塑料包埋剂包埋,在普通轮转式机切成2～3微米厚度的切片。其操作方法简单方便,实验可靠。具体方法介绍如下:     

大鼠视神经内微血管的三维构筑

目的:研究大鼠视神经内血管分布规律.方法:用10%明胶-墨汁混合液经心灌注SD大鼠后取出其视神经,OCT包埋,20μm连续切片,Olympus图像处理系统拍照,用Photoshop 9.0 cs对图像进行处理并用Image-J软件进行分析.用Amira 3.1.1软件将二维切片图像重建成三维可视化图像.结果:三维重建及图像分析显示大鼠视神经内血管围绕神经束排列,球后0～5 mm、5～8 mm、8 mm至视交叉的视神经内血管网形度大于0.5的百分比分别为(55.5±2.7)%、(67.4±4.6)%、(76.8±1.7)%.结论:大鼠视神经内的微血管数量多,走行变化大,从球后到视交叉沿视神经轴由横行逐渐变为纵行.     

明胶浸泡冰冻切片法与石蜡包埋法制作骨组织大切片的对比

明胶浸泡冰冻切片法与石蜡包埋法制作骨组织大切片的对比吕荣，陶惠仁，石凯军，张韬组织大切片是目前组织学上的一种研究手段，用途较广，因为能在一张切片上看到主要组织及周围组织之间结构和组织变化等整体关系。但用何种包埋方法为好，仍有进一步研究的必要，我们选用...