南京地区婴幼儿杯状病毒感染的分子流行病学研究

目的 了解南京地区婴幼儿杯状病毒腹泻的感染状况、临床表现以及分子流行病学特征.方法 采集2010年7月至2011年6月南京医科大学附属南京儿童医院5岁以下腹泻患儿粪便标本及儿童保健中心健康婴幼儿粪便标本各428份.采用反转录-聚合酶链反应( RT-PCR)检测杯状病毒,测序确定其基因型别.结果 428份腹泻样本中有63份为杯状病毒阳性,检出率为14.72％.其中诺如病毒GⅡ型58例,未检出诺如病毒GⅠ型,札如病毒5例,以诺如病毒GⅡ-4 2006b型为主要流行株.428份健康对照组标本杯状病毒检出19例,诺如病毒6例,札如病毒11例,2例为诺如病毒GⅡ型和札如病毒混合感染.结论 南京地区婴幼儿中存在不同基因型杯状病毒感染,流行毒株以GⅡ.2006b为主.     

江苏省苏州及南京地区2010年婴幼儿腹泻中诺如病毒分子流行病学研究

目的 了解江苏地区婴幼儿腹泻患者中诺如病毒的感染情况,明确该地区诺如病毒的主要基因型别和流行病学特征.方法 收集2010年江苏省苏州市婴幼儿医院及南京市婴幼儿医院疑似病毒性腹泻粪便标本498例,采用荧光定量PCR方法检测粪便中诺如病毒RNA及其基因组别,并对部分阳性标本测序以明确基因型.结果 498份粪便标本中,GⅠ组诺如病毒阳性标本为2例,阳性率为0.4％,GⅡ组诺如病毒为190例,阳性率为38％,对本地区部分诺如病毒阳性标本进行测序,2份GⅠ标本中,一株为GⅠ1型,另一株为GⅠ3型;测序的23份GⅡ标本中21株为GⅡ4型,2株为GⅡ3型.结论 诺如病毒是本省婴幼儿病毒性腹泻的重要病原体,以诺如病毒GⅡ4型为主,同时也存在其他型别的感染流行.     

深圳市儿童秋冬季腹泻诺如病毒检测及基因型分析

目的 了解深圳市儿童秋冬季腹泻中诺如病毒（Nov）的感染状况,并对阳性株进行基因型分析.方法 收集深圳地区多家医院2009年9月至2010年1月腹泻患儿粪便标本307份,通过逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法进行诺如病毒核酸扩增,部分阳性标本的PCR产物经纯化、测序,结合GenBank参考株相应核酸序列构建系统进化树并进行基因型分析,采用SimPlot3.5.1对重组株进行分析和鉴定.结果 307份粪便标本中诺如病毒核酸阳性38例,阳性率为12.4％,以6～24个月龄婴幼儿感染为主,占全部病例数的81.6％（31 /38）,感染的发病高峰为10、11月份,占全部病例数的73.7％ （28/38）;26份测序标本中25株属于GⅡ.4型2006b变异体,1株为GⅡ.12/GⅡ.3型重组株.结论 诺如病毒是深圳市儿童秋冬季腹泻的重要病原体,优势流行株为GⅡ.4型2006b变异体,深圳首次检出的诺如病毒重组株为GⅡ.12/GⅡ.3型.     

2011年苏州地区诺如病毒GⅡ组变异株的分子特征研究

目的 了解苏州地区诺如病毒的感染状况及其变异株的分子特征.方法 收集苏州市儿童医院疑似病毒性腹泻粪便标本419例,采用荧光定量PCR方法检测粪便中诺如病毒RNA及其基因组别,并对部分阳性标本测序分析.结果 419份粪便标本中,GⅡ组诺如病毒为122例,阳性率为29％,未检测出GⅠ组诺如病毒,对本地区部分诺如病毒阳性标本进行测序,A区(RdRp区)测序的25份GⅡ标本中25株均为GⅡ.4型;C区(N-S区)测序的26份GⅡ标本中17株为GⅡ.4型,8株为GⅡ.3型,1株为GⅡ.2型;D区(P区)测序的25份GⅡ标本中16株为GⅡ.4型,9株为GⅡ.3型.结论 诺如病毒是本地区婴幼儿病毒性腹泻的重要病原体,以诺如病毒GⅡ.4-2006b亚型为主,此外发现有GⅡ.4-2010亚型(GⅡ.4 New Orleans株)的流行,这是国内首次对该亚型毒株进行报道,同时还检测到部分重组毒株,提示诺如病毒在本地区的遗传变异日趋复杂.     

2010-2011年兰州地区5岁以下腹泻患儿杯状病毒和腺病毒感染的流行特征

目的 了解兰州地区腹泻患儿中杯状病毒和腺病毒感染的分子流行病学及临床特点.方法 收集兰州大学第一医院2010年7月至2011年6月腹泻患儿粪便标本295份,采用RT-PCR或PCR的方法检测杯状病毒及腺病毒,腺病毒阳性标本利用多重PCR及巢式PCR的方法分型,并对序列进行分析.结果 295份粪便标本中杯状病毒的检出率为13.2％( 39/295),腺病毒的检出率是5.1％ (15/295).分型结果显示:杯状病毒中69.2％为诺如病毒,其余是札如病毒,诺如病毒中以GⅡ-3(13例)为主,其次为GⅡ-4(12例),GⅡ-6(2例);腺病毒主要以F组的41型(10/15)为主,同时还检测到1例A组的31型,2例B组的3型及C组的1例5型和1例6型,两种病毒均主要感染2岁以下儿童,无明显的季节高峰.结论 杯状病毒和腺病毒是2010 -2011年兰州地区病毒性腹泻患儿的重要病原,长期监测具有重要意义.     

分型引物RT-PCR法在杯状病毒分子流行病学研究中的应用

目的：应用分型引物RT-PCR法确定五个地区病毒性腹泻粪便标本中杯状病毒流行型别及感染情况。方法：对五个地区收集的〈5岁病毒性腹泻粪便标本应用针对病毒壳体区域设计的四对引物（GⅠ—SKF／GⅠ-SKR、COG2F／G2-SKR、SLV5317／SLV5749、PreCAP1／82b）进行反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）扩增诺如病毒GⅠ和GⅡ组、扎如、星状病毒（Astrovirus），扩增产物通过1．5％琼脂糖凝胶电泳鉴定。选取部分阳性标本测序研究型别流行特点。结果：本实验从663例标本中共检出单独感染诺如病毒、扎如病毒和星状病毒阳性标本数分别为84、4、11株，同时还发现3株混合感染标本。选取24株诺如病毒阳性标本测序分析发现19株为GⅡ／4型，2株为GⅡ／3型，1株为GⅡ／1型，1株为GⅡ／13型，1株为GⅡ／15型，4株扎如病毒中2株为SGⅠ／1型，1株为SGⅡ／3型，1株为SGⅡ／1型。结论：研究表明杯状病毒是我国婴幼儿腹泻重要病原体，诺如病毒流行株为GⅡ／4型毒株，同时存在其它型别的散在流行；福建、兰州检测到不同型别扎如病毒证明我国存在多种型别的扎如病毒感染。     

感染性腹泻疫情中诺如病毒的分子流行病学分析

目的 研究感染性腹泻疫情中诺如病毒的分子流行病学特点.方法 对2008-2010年湖州地区的感染性腹泻疫情标本共119份进行诺如病毒核酸检测,并选取部分阳性扩增产物经序列测定分析诺如病毒的基因型.结果 119份感染性腹泻标本荧光定量PCR检测阳性50份,其中GⅠ型9份,GⅡ型35份,GⅠ和GⅡ混合感染6份.对12份PCR扩增阳性产物进行序列分析显示：5株GⅠ型诺如病毒毒株分属于GⅠ/2和GⅠ/3两种基因型;7株GⅡ型诺如病毒毒株中除1株属于新基因型GⅡb外,其余6株均属于GⅡ/4基因型.结论 诺如病毒是引起湖州地区感染性腹泻疫情最重要的病原菌之一,且湖州地区的诺如病毒存在很高的遗传多样性,同时也存在基因型别的差异.     

北京市肠道门诊腹泻患者人杯状病毒感染调查

目的 调查北京地区肠道门诊就诊腹泻患者人杯状病毒的感染情况.方法 收集北京市2011年4月至2012年3月丰台、昌平、怀柔3个区县的肠道门诊就诊腹泻患者450例,采集患者粪便标本,使用逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)对粪便标本进行人杯状病毒RNA检测,对RT-PCR阳性标本的PCR产物进行克隆测序.结果 450例患者标本中68例人杯状病毒阳性(68/450,15.11％).选择其中18例PCR产物进行克隆测序,将获得的序列进行比对分析、构建系统发生树,结果表明,15株为诺如病毒,3株为扎如病毒.其中诺如病毒GⅡ/4型11株(11/18,61.11％),GⅡ/7型1株(1/18,5.56％),GⅡ组未定型3株(3/18,16.67％).结论 人杯状病毒是北京地区肠道门诊就诊腹泻患者的重要病原,主要流行株为诺如病毒GⅡ/4型.     

分型引物RT-PCR法在杯状病毒分子流行病学研究中的应用

目的:应用分型引物RT-PCR法确定五个地区病毒性腹泻粪便标本中杯状病毒流行型别及感染情况。方法:对五个地区收集的<5岁病毒性腹泻粪便标本应用针对病毒壳体区域设计的四对引物(GI-SKF/GI-SKR、COG2F/G2-SKR、SLV5317/SLV5749、PreCAP1/82b)进行反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增诺如病毒GI和GII组、扎如、星状病毒(Astrovirus),扩增产物通过1·5%琼脂糖凝胶电泳鉴定。选取部分阳性标本测序研究型别流行特点。结果:本实验从663例标本中共检出单独感染诺如病毒、扎如病毒和星状病毒阳性标本数分别为84、4、11株,同时还发现3株混合感染标本。选取24株诺如病毒阳性标本测序分析发现19株为GII/4型,2株为GII/3型,1株为GII/1型,1株为GII/13型,1株为GII/15型,4株扎如病毒中2株为SGI/1型,1株为SGII/3型,1株为SGII/1型。结论:研究表明杯状病毒是我国婴幼儿腹泻重要病原体,诺如病毒流行株为GII/4型毒株,同时存在其它型别的散在流行;福建、兰州检测到不同型别扎如病毒证明我国存在多种型别的扎如病毒感染。     

兰州地区5岁以下婴幼儿病毒性腹泻的分子流行病学研究

目的调查兰州地区5岁以下婴幼儿病毒性腹泻的流行情况,了解四种主要腹泻病毒在儿童中的分布情况。方法采集2009年7月至2010年6月兰州大学第一医院儿科5岁以下腹泻患儿粪便标本290份及儿童保健中心健康婴幼儿正常粪便标本114份,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测轮状病毒抗原,采用巢式聚合酶链反应对轮状病毒阳性标本进行分型;采用反转录．聚合酶链反应（RT—PCR）检测杯状病毒和星状病毒,聚合酶链反应（PCR）检测腺病毒。结果290份腹泻标本中四种病毒的阳性率分别为：轮状病毒39．31％,杯状病毒11．38％,腺病毒10．69％,星状病毒4．83％;对114份轮状病毒阳性标本G、P分型,G3型及P[8]型为优势株;114份正常标本轮状病毒检出率为0,杯状病毒检出7例,星状病毒检出1例,腺病毒检出5例。结论病毒性病原在兰州地区婴幼儿腹泻中占有重要地位,长期系统的监测具有重要意义。     

2009至2010年南京儿童医院5岁以下儿童病毒性腹泻分子流行病学特点

目的对南京儿童医院（我院）5岁以下儿童轮状病毒（HRV）、人杯状病毒（HuCV）、星状病毒（AstV）和肠道腺病毒（AdV）感染的分子流行病学进行研究,为病毒性腹泻的防治提供基础数据和理论依据。方法收集2009年7月至2010年6月于我院消化科门诊就诊的5岁以下腹泻患儿的粪便标本。采用ELISA法检测A组HRV,阳性标本采用RT-PCR法进行毒株分型鉴定;HuCV、AstV和AdV采用RT-PCR或PCR法进行检测。结果研究期间共收集病毒性腹泻患儿粪便标本300份,其中男188例,女112例。年龄1～59月龄,平均（10.5±9.2）月龄。4种病毒检测阳性率依次为HRV（37.7%,113/300）、HuCV（23.7%,71/300）、AstV（4.0%,12/300）和AdV（2.7%,8/300）。①HRVG血清型以G3型（38.9%）最常见,其次为G2型（8.8%）;P基因型以P[8]（33.6%）为主。G血清型和P基因型组合以G3P[8]（15.9%）为主。113份HRV阳性标本中,7～12月龄儿童占43.4%（49/113）,高发季节为2009年10月至2010年1月。②HuCV感染中诺如病毒检出67份,扎如病毒4份。HuCV感染于2009年8月出现一个小高峰,发病年龄高峰为7～12月龄（38/71）,24月龄以下患儿占95.8%（68/71）。③10/12例AstV感染发生于2009年10月至2010年1月,月龄分布为2～16月龄。④8例AdV阳性标本PCR产物经克隆测序,AD2、3、5、7、12和41型各1例,AD31型2例。AdV感染高发于2010年1至6月,发病高峰为7～12月龄（4/8）。⑤60.0%（180/300）至少检出4种病毒中的一种。混合感染23份,其中12份（52.2%）为HRV＋HuCV,5份（21.7%）为HRV＋AstV,2份为HuCV＋AstV,HRV＋AdeV、HuCV＋AdeV、AdeV＋AstV、HRV＋AstV＋HuCV各1份。结论 HRV是引起婴幼儿病毒性腹泻最主要的病毒病原,以G3P[8]为主要优势株。HuCV、AstV和AdV也是重要的病原。     

南京市儿童医院门诊儿童隐孢子虫病的流行病学调查

目的调查南京市儿童医院门诊儿童隐孢子虫病的流行情况,进而了解2008年夏秋季节南京及周边地区儿童人群中隐孢子虫病的流行情况。方法收集2008年7-8月份和9～10月份两个时间段南京市儿童医院门诊儿童粪样,用改良抗酸染色和金胺酚．改良抗酸复合染色法,检查粪样中的隐孢子虫卵囊。同时,随机收集部分门诊儿童的血样,通过分子生物学技术纯化特异性隐孢子虫重组蛋白SA35,用微粒子免疫检测法检测血清中抗SA35 IgG抗体水平。结果共收集儿童医院门诊儿童的粪样2268份,血样207份。粪样隐孢子虫检出率为0．97％。血检结果阳性率为29．95％,经卡方检验,粪检和血检的阳性率在性别之间差异无统计学意义（P〉0．05）：但血检阳性率1岁以上的儿童比1岁以内的儿童明显增高（P〈0．05）。结论南京及周边地区门诊儿童在夏秋季仍然存在隐孢子虫感染,需要进一步加强血检以监控隐孢子虫病的传播。     

成都地区婴幼儿病毒性腹泻分子流行病学研究

目的通过分子流行病学研究成都地区婴幼儿病毒性腹泻的病原学特点,掌握本地区病原分布特征,为疫苗研制和疫情控制提供科学依据。方法采用酶联免疫吸附试验（ELISA）及逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）对成都地区2006—2008年度376例婴幼儿腹泻粪便标本进行轮状病毒（RV）、杯状病毒（HuCV）、星状病毒（AstV）及肠道腺病毒（Adv）检测。结果RV的检出率为37．76％（142／376）,其中42例进行G分型,45例进行P分型,G分型以G3型为主21例（50％）,其次为G2和G1型,P分型以P[8]型为主21例,其次是P[4]型19例。RV感染主要为6～23月的婴幼儿,发病高峰在10—12月份（75．8％）。RT—PCR法检出HuCV、AstV及Adv的检出率分别为15．85％、1．64％及2．04％。结论RV是成都地区婴幼儿病毒性腹泻的主要病原,其流行的主要血清型为G3型、P[8]、P[4]型。除RV外,HuCV也是重要的病原。     

天津市2019年住院散发急性胃肠炎患儿中诺如病毒感染分子流行病学特征分析

目的了解天津市2019年散发急性胃肠炎患儿中诺如病毒(Norovirus,NoV)感染的分子流行病学特征。方法收集2019年1—12月就诊于天津市儿童医院住院散发急性胃肠炎患儿的粪便标本3116份,收集患儿临床资料和个人信息,采用实时荧光定量PCR方法对NoV进行初筛,应用反转录PCR方法对初筛阳性标本的聚合酶区和衣壳蛋白区进行扩增,并对序列进行比对和系统进化分析。结果3116份粪便标本中检出NoV阳性809份,阳性率为26.0%(809/3116)。不同年龄组NoV检出率差异有统计学意义(P=0.000),其中7~12月龄组检出率最高(31.6%);不同季节间NoV检出率差异有统计学意义,其中冬季为高发季节(39.0%)。序列分析发现,286份阳性标本的两个区域均测序成功,分成6个基因型,分别是GⅡ.P12-GⅡ.3,GⅡ.P16-GⅡ.2,GⅡ.P17-GⅡ.17,GⅡ.Pe-GⅡ.2,GⅡ.Pe-GⅡ.3和GⅡ.Pe-GⅡ.4。其中以GⅡ.Pe-GⅡ.4为主,占61.2%(175/286)。其次为GⅡ.P12-GⅡ.3,占33.6%(96/286);GⅡ.Pe-GⅡ.3占2.4%(7/286);GⅡ.P16-GⅡ.2占2.1%(6/286);GⅡ.Pe-GⅡ.2和GⅡ.P17-GⅡ.17均占0.3%(1/286)。GⅡ.Pe-GⅡ.4中全部为GⅡ.Pe-GⅡ.4 Sydney 2012。携带GⅡ.Pe-GⅡ.4 Sydney 2012型NoV患儿较GⅡ.P12-GⅡ.3更容易出现呕吐。结论NoV是儿童病毒性急性胃肠炎的重要病原体,GⅡ.Pe-GⅡ.4 Sydney 2012和GⅡ.P12-GⅡ.3是2019年天津地区住院散发急性胃肠炎中NoV感染的主要流行株。     

Detection and molecular characterization of noroviruses and sapoviruses in children admitted to hospital with acute gastroenteritis in Vietnam

Noroviruses (NoV) and sapoviruses (SaV) are recognized as important causes of acute gastroenteritis in children worldwide. In this study, the prevalence and genetic variability of NoV and SaV were determined in hospitalized children <5 years of age with acute gastroenteritis in Hanoi, Vietnam. A total of 501 fecal specimens collected between November-2007 and October-2008, that previously had been tested for rotavirus (RV), were tested for NoV and SaV by realtime RT-PCR. Positive samples were genotyped by conventional RT-PCR followed by sequencing. GII NoV was detected in 180 (36%) and SaV in 7 (1.4%) of the samples. NoV was detected year-round ranging from 9.5% in April to 81.5% in September among RV negative samples. NoV GII.4 Minerva (2006b) was the dominant genotype (93%) with a few other genotypes detected including GII.3 (4.4%), GII.13 (1.7%), and GII.2 (0.6%) but no GI strains. Only GI and GII SaV strains were detected in this study. No difference in NoV prevalence between age groups was noted. Frequency of vomiting or fever was similar between children with NoV and RV infection, yet, NoV caused diarrhea with longer duration. In conclusion, NoV is the second most frequent cause of diarrhea in hospitalized children in North Vietnam.     

Molecular epidemiology of human calicivirus infections in children with acute diarrhea in Shanghai: a retrospective comparison between inpatients and outpatients treated between 2006 and 2011

Human caliciviruses (HuCVs), especially noroviruses, are currently the second leading cause of acute diarrhea in children; however, data are limited in Shanghai and other regions of the world regarding the epidemic difference of HuCV infections between inpatients and outpatients. Fecal samples (n = 1110) were collected from children up to age 5 years with acute diarrhea treated as inpatients or outpatients at Children’s Hospital of Fudan University in Shanghai, between 2006 and 2011. Human calicivirus was detected and genotyped using an RT-PCR assay for the RdRp gene. Among inpatients, 206 HuCV-positive samples (30.6 %) were detected as positive for norovirus. The predominant norovirus genotype was GII.4 (75.5 %), followed by GII.12 (22.3 %), GII.7 (1.0 %), and GII.b (1.0 %). Among outpatients, 128 samples (29.4 %) were positive for HuCV. Of these, 126 were positive for norovirus and two were positive for sapovirus. The predominant norovirus genotypes causing infections in outpatients were GII.4 (71.8 %) and GII.b (15.6 %), followed by GII.12 (9.5 %), GII.7 (0.8 %), and GII.2 (0.8 %). The GII.4-2006b variant was the predominant subtype both in inpatients and outpatients. Characteristics of the HuCV epidemic differ between inpatients and outpatients. Continued surveillance is vital to determine the molecular prevalence of HuCV and to develop effective vaccines.     

2014-2015年河北省5岁以下婴幼儿病毒性腹泻病原学监测及流行特征分析

目的 了解河北省5岁以下婴幼儿病毒性腹泻病原构成及流行特点,为病毒性腹泻的防治提供参考依据.方法 收集河北省哨点医院2014年1月-2015年12月0-59月龄腹泻患儿粪便标本686份,同时填写个案调查表,采用ELISA方法检测轮状病毒(HRV),采用PCR或RT-PCR法检测杯状病毒(HuCV)、星状病毒(HAstV)和肠道腺病毒(HAdV),并对轮状和杯状阳性标本进行分型鉴定.结果 686份标本病毒性病原总检出率64.14％ (440/686),2014年62.71％(222/354),稍低于2015年的65.66％ (218/332) (x2=0.649,P=0.421),其中单纯轮状、杯状、星状和肠道腺病毒检出率分别为35.13％(241/686)、11.37％(78/686)、1.75％(12/686)和4.96％(34/686),合并感染率10.93％(75/686)(合并2种69份,合并3种6份).轮状病毒阳性检出率以13-24月龄最高(x2=22.289,P＜0.001),随月龄增长呈现先升高后降低趋势,且季节性分布明显,秋冬季(11月-次年2月)高发,以G9P[8]型为主(87.95％,270/307).杯状病毒全年呈多峰分布,3-6月份检出率较高,2015年(24.70％,82/332)高于2014年(13.56％,48/354)(x2=13.841,P＜0.001).结论 河北省5岁以下儿童病毒性腹泻病原复杂,混合感染比例较大,轮状病毒为主要致病病原体,该病毒主要侵犯2岁以下儿童,秋冬季高发,其中G9P[8]型成为本地区主要流行株.     

Prevalence of norovirus GII-4 antibodies in Finnish children

Noroviruses (NoVs) are the second most common cause of viral gastroenteritis after rotavirus in children. NoV genotype GII-4 has emerged as the major type not only in outbreaks of NoV gastroenteritis but also endemic gastroenteritis among infants and young children worldwide. Using baculovirus-insect cell system virus-like particles (VLPs) of NoV genotype GII-4 and an uncommon genotype GII-12 were produced. These VLPs were used in enzyme-linked immunosorbent assays (ELISA) for detection of NoV-specific immunoglobulin G (IgG) and IgA antibodies in 492 serum specimens from Finnish children 0-14 years of age collected between 2006 and 2008. NoV IgG antibody prevalence was 47.3% in the age group 7-23 months and increased up to 91.2% after the age of 5 years. Avidity of NoV IgG antibodies was low in the primary infections while high avidity antibodies were detected in the recurrent infections of the older children. In GII-4 infections, the homologous antibody response to GII-4 VLPs was stronger than to GII-12 VLPs but cross-reactivity between GII-4 and GII-12 was observed. Binding of GII-4 VLPs to a putative carbohydrate antigen receptor H-type 3 could be blocked by sera from children not infected with NoV during a waterborne outbreak of acute gastroenteritis. Therefore, protection against NoV infection correlated with strong blocking activity.