高脂饮食导致大鼠肝脏胰岛素抵抗的作用机制研究

目的: 本研究旨在建立SD大鼠胰岛素抵抗模型,观察高脂饲料喂养的SD大鼠肝脏中氧化应激以及胰岛素抵抗的发生,分析胰岛素抵抗状态下活性氧(ROS)的变化,初步探讨ROS的主要来源。方法: 以高脂饲料喂养6只4周龄雄性SD大鼠12周,建立大鼠胰岛素抵抗模型。用优越血糖仪以电子感应法测定血糖,放射免疫法检测血清胰岛素水平。二氢乙啶(DHE)染色观察肝脏组织中的ROS水平。Western blotting检测NADPH氧化酶3(NOX3)的表达。结果: 以高脂饲料喂养12周后,大鼠空腹血糖水平略有上升,但与对照组的大鼠相比无显著差异,而胰岛素敏感指数降低。蒽酮法的检测结果显示高脂饲料喂养大鼠肝组织糖原含量显著降低,高脂饮食大鼠肝组织中NOX3的表达显著增加,DHE染色显示肝组织ROS水平显著增加,提示ROS在肝胰岛素抵抗发生中起重要作用。结论: 高脂饲料喂养SD大鼠胰岛素敏感指数降低,肝组织中NOX3表达和ROS水平显著增加,糖原含量显著降低。     

妊娠和高脂妊娠大鼠胰腺胰高血糖素的表达

目的:探讨在生理妊娠和高脂饮食诱导的病理妊娠状态下胰腺胰高血糖素的变化特点,同时观察2种妊娠状态葡萄糖耐量试验各点血糖和血清胰岛素的变化。方法:32只雌性SD大鼠随机分为对照组、高脂组、妊娠组和高脂妊娠组,高脂饲料喂养16周后,妊娠组大鼠进行配对受精,妊娠第14天,采用实时荧光定量PCR和免疫印迹法分别检测大鼠胰腺胰高血糖素原mRNA和胰高血糖素蛋白表达。结果:葡萄糖耐量试验结果显示各组大鼠的血糖最高点均在服糖后30min。对照组胰岛素分泌最高点在15min,而高脂组、妊娠组和高脂妊娠组胰岛素分泌高峰为30min。妊娠组空腹胰岛素高于对照组(P0.05),高脂妊娠组空腹胰岛素高于对照组(P0.01),同时胰岛素AUC也高于对照组(P0.05)。妊娠组胰腺胰高血糖素原mRNA相对表达量高于对照组1.46倍(P0.05),高脂妊娠组胰腺胰高血糖素原mRNA相对表达量高于对照组1.77倍(P0.01),高于高脂组1.54倍(P=0.01)。妊娠组胰高血糖素高于对照组2.57倍(P0.01),高脂妊娠组胰高血糖素高于对照组3.44倍(P0.01),高于高脂组2.9倍(P0.01)。结论:高脂和妊娠两种状态均导致胰岛素高峰分泌延迟,生理妊娠中期胰岛素抵抗以基础胰岛素增高为主,而高脂妊娠中期同时存在基础和糖负荷后高胰岛素血症和胰岛素抵抗。妊娠中期胰腺胰高血糖素增高可能是妊娠胰岛素抵抗增加的组成部分。     

利拉鲁肽对非酒精性脂肪肝大鼠脂联素及胰岛素抵抗的影响

 目的：观察利拉鲁肽（Lira）对非酒精性脂肪肝（NAFLD）大鼠血清和肝组织脂联素（ADP）及胰岛素抵抗的影响。方法：雄性SD大鼠30只,随机分为3组,分别予普通饮食（ND组）10只、高脂饮食（HFD组）10只和高脂饮食加利拉鲁肽腹腔注射（Lira组）10只。高脂饮食12周建立大鼠NAFLD模型,建模成功后Lira组予利拉鲁肽腹腔注射治疗4周。16周末处死各组大鼠,生物化学法检测丙氨酸氨基转移酶（ALT）、空腹血糖（FBG）、甘油三酯（TG）及总胆固醇（TC）,分光光度计测定游离脂肪酸（FFAs）,酶联免疫吸附法测定胰岛素和ADP。结果：与HFD组比较,Lira组大鼠体质量、肝指数、胰岛素抵抗指数、血清TG、TC、ALT、FBG及肝匀浆TG、TC、FFAs显著下降（均P<0.05）,血清及肝组织ADP明显升高（P＜0.05）,肝脏脂肪变性程度明显减少至恢复正常（P<0.05）,肝组织ADP含量与肝脏FFAs含量呈负相关。结论:利拉鲁肽改善胰岛素抵抗和肝脏脂肪变的可能机制之一与其升高血清及肝组织脂联素水平有关。     

Effect of diets with different fat content on metabolic syndrome of rats and mice

目的 探讨不同脂肪含量的高脂纯化配方饲料对大、小鼠体重、血糖、血胰岛素、血脂、脂肪肝及白蛋白尿的影响.方法 雄性SD大鼠及C57BL/6小鼠随机分为MD10％、MD45％和MD60％脂肪含量饲料组,喂养3个月,检测动物体重、血糖、血胰岛素水平、血脂和蛋白尿水平,以及主要脏器重量及肝脏脂质含量.结果 与正常组(MD10％脂肪含量)相比,高脂组(MD45％和MD60％脂肪含量)动物体重显著增加,出现明显的糖耐量异常、胰岛素抵抗和血脂水平升高,同时伴有肝脏脂质含量和蛋白尿水平的增加,并且以MD45％高脂组体重增加及胰岛素抵抗更加显著.结论 MD45％和MD60％高脂配方饲料均可在大、小鼠较好地诱导代谢综合征的发生,而且前者优于后者.     

二甲双胍对高脂饮食诱导的胰岛素抵抗大鼠LPIN1表达及AMPK通路的作用

目的: 观察腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)激动剂二甲双胍对高脂饮食诱导的胰岛素抵抗大鼠LPIN1表达和AMPK通路的影响,探讨LPIN1在肝脏胰岛素抵抗中的可能作用机制。方法: 将36只4周龄雄性Wistar大鼠随机分为2组:(1) 对照组 (Con)12只;(2) 高脂饮食组 (HF)24只。8周后高脂组再随机分为高脂(HF)组和二甲双胍干预(MET)组,继续喂养8周。测定肝脏甘油三酯和胆固醇水平,应用高胰岛素-正常葡萄糖钳夹技术测得葡萄糖输注率,以评价胰岛素敏感性。RT-PCR检测LPIN1、AMPKα1和AMPKα2 mRNA表达,Western blotting方法检测LPIN1、AMPKα1、AMPKα2和p-AMPKα蛋白表达。结果: HF组大鼠空腹血糖、胰岛素、血清以及肝脏中甘油三酯、胆固醇水平均高于Con组;二甲双胍干预后上述指标下降;HF组葡萄糖输注率低于Con组(P<0.01),MET组高于HF组(P<0.05)。3组大鼠肝脏AMPKαl、AMPKα2 mRNA和蛋白表达无显著差异(P>0.05);HF组大鼠肝组织p-AMPKα和LPIN1蛋白表达低于Con组(P<0.01),MET组高于HF组(P<0.01)。结论: 高脂饮食导致大鼠胰岛素抵抗,AMPKα活性及LPIN1表达降低, 应用二甲双胍干预后AMPKα活性以及LPIN1表达均增加,LPIN1和AMPK信号通路之间可能存在相互作用。     

不同脂肪含量的高脂纯化配方饲料对大、小鼠代谢综合征发生的影响

 摘要： 目的 探讨不同脂肪含量的高脂纯化配方饲料对大、小鼠体重、血糖、血胰岛素、血脂、脂肪肝及白蛋白尿的影响。 方法 雄性SD大鼠及C57BL/6小鼠随机分为MS10%、MS45%和MS60%脂肪含量饲料组,喂养3个月,检测动物体重、血糖、血胰岛素水平、血脂和蛋白尿水平,以及主要脏器重量及肝脏脂质含量。 结果 与正常组（MS10%脂肪含量）相比,高脂组（MS45%和MS60%脂肪含量）动物体重显著增加,出现明显的糖耐量异常、胰岛素抵抗和血脂水平升高,同时伴有肝脏脂质含量和蛋白尿水平的增加,并且以MS45%高脂组体重增加及胰岛素抵抗更加显著。 结论 MS45%和MS60%高脂配方饲料均可在大、小鼠较好地诱导代谢综合征的发生,而且前者优于后者。 关键词： 高脂饲料;胰岛素抵抗;肥胖;代谢综合征     

小檗碱改善高脂饮食大鼠的胰岛素抵抗

目的:观察小檗碱是否能改善高脂饮食诱导的胰岛素抵抗,以探讨小檗碱干预糖耐量受损(IGT)的可能性。方法:8周龄雄性SD大鼠29只,分为正常组(NC,n=9)和高脂组(HF,n=20)。高脂饲料喂养14周后高脂组分为二组,10只大鼠继续喂养高脂饮食,另一小檗碱组(HF B,n=10)每天灌胃小檗碱150mg/kg体重,治疗6周后进行口服葡萄糖耐量试验和胰岛素耐量试验(ITT),评估小檗碱对胰岛素敏感性的影响。结果:HF组大鼠体重、肝重和附睾脂肪重量均明显高于HF B和NC组(均P<0.01),HF B组空腹血糖和葡萄糖负荷后2h血糖明显低于HF组(分别为5.70±0.52mmol/Lvs6.66±0.51mmol/L和7.88±0.46mmol/Lvs8.85±1.01mmol/L),空腹和葡萄糖负荷后2h胰岛素HF B组也显著低于HF组(分别为0.63±0.25ng/mlvs1.64±0.68ng/ml和1.20±0.21ng/mlvs3.60±0.36ng/ml)。各时间点血糖和胰岛素HF组均显著高于NC组(均P<0.01)。Homa胰岛素抵抗指数HF组明显高于HF B组(P<0.01)。ITT腹腔注射胰岛素后各时间点血糖下降幅度HF B组均高于HF组,15min时HF B组血糖下降23%,而HF组仅下降7%。结论:长期高脂饮食可导致大鼠胰岛素抵抗,小檗碱明显降低高脂大鼠的高胰岛素血症,改善胰岛素抵抗,因此适合于IGT的干预。     

姜黄素活化肝细胞Nrf2抗氧化系统效应及缓解胰岛素抵抗作用机制研究

目的探讨姜黄素对HepG2细胞Nrf2信号功能的调控作用与其改善胰岛素抵抗的效应关系,并进一步研究高脂饮食诱导小鼠胰岛素抵抗时姜黄素干预对肝脏Nrf2系统功能及糖异生作用的影响。方法在人肝癌细胞HepG2上分别用葡萄糖氧化酶（GO）或长期胰岛素处理,分别制成氧化应激和高胰岛素血症胰岛素抵抗模型;用蛋白印迹方法（WB）检测姜黄素对Nrf2抗氧化系统的作用。另外,对细胞进行短时胰岛素刺激,观察胰岛素信号（PKBSer473磷酸化水平）变化。为研究姜黄素的整体动物药物作用,在高脂诱导的胰岛素抵抗小鼠模型用姜黄素进行干预（雄性C57BL/6J小鼠,给予高脂饲料加上3%的姜黄素）,在第25周进行丙酮酸耐量实验,并于第27周取肝脏组织检测Nrf2系统功能变化。结果姜黄素可明显激活HepG2细胞Nrf2系统,并对抗GO氧化应激所致的PKB磷酸化损害。在高脂饲喂小鼠胰岛素抵抗模型,姜黄素可改善丙酮酸耐量,提示其增强胰岛素作用（抑制肝脏糖异生）,从而缓解肝脏糖代谢异常;姜黄素还明显激活高脂肥胖小鼠肝脏受抑制的Nrf2信号功能。结论姜黄素通过增强内源性Nrf2系统功能对抗氧化应激,是其缓解肝细胞胰岛素抵抗的重要药理机理。     

高脂饲养致小鼠胰岛素抵抗对脂肪肝形成的影响

目的:探讨高脂饲养致小鼠脂肪肝形成的机制。方法:随机将8周雄性C57BL/6J小鼠分成高脂饲养组(给予含60%卡路里的高饱和脂肪酸饲养)和正常对照组,饲养12周。监测体重、肝重、血甘油三酯、血总胆固醇、血糖和血胰岛素水平,通过高胰岛素正葡萄糖钳夹实验反映胰岛素敏感性,HE染色、苏丹IV染色及肝脂含量反映肝组织脂质沉积情况,确定高脂饲养致小鼠脂肪肝的形成。通过Western blot法检测磷酸化胰岛素受体底物1(IRS1)和蛋白激酶B(Akt)水平反映胰岛素信号通路激活情况,检测固醇调节元件结合蛋白1(SREBP-1)和脂肪酸合成酶(FAS)蛋白水平反映肝内脂质合成的情况。结果:高脂饲养组小鼠体重及肝重较正常对照组小鼠明显增加。与正常对照组相比,高脂组血和肝组织内甘油三酯和总胆固醇含量显著升高,血清胰岛素水平升高,葡萄糖输注率减少,磷酸化IRS1和Akt水平降低。肝组织HE染色可见高脂组肝细胞胞浆内充满大量脂肪空泡,苏丹IV染色可见肝细胞内存在大量大小不一的红色脂滴;SREBP-1和FAS蛋白水平明显升高。给予外源性油酸干预原代正常肝细胞48 h,磷酸化IRS1和Akt水平呈浓度依赖性减低,而SREBP-1和FAS蛋白表达明显升高。结论:高脂饲养导致小鼠肝脏发生胰岛素抵抗,并通过激活SREBP-FAS脂肪合成途径,促进肝脏脂质沉积,从而诱发脂肪肝。     

白杨素对胰岛素抵抗小鼠的干预研究

目的:研究白杨素对胰岛素抵抗小鼠模型的干预作用及其相应机制。方法:40只雄性C57小鼠,根据饮食随机分为对照组、胰岛素抵抗组、白杨素低剂量组及高剂量组,每组各10只。喂养24周后检测各组小鼠体重、肝指数和脂肪指数,评价胰岛素抵抗状况(血糖、胰岛素水平及HOMA-IR)及氧化应激水平(SOD、GSH-Px和MDA);real-time PCR检测肝脏胰岛素信号通路分子(IR、IRS1、IRS2、Glut2和Glut4)及炎症分子(TNF-α、IL-1β、IL-6和NF-κB)mRNA表达水平。Western blot检测肝脏关键信号蛋白(IRS1和p65)及其磷酸化的水平。结果:经过24周干预后,胰岛素抵抗组小鼠明显肥胖,体脂沉积显著(P0.01),血糖、胰岛素水平及HOMA-IR指数均高于对照组(P0.01),且肝脏氧化应激增加(P0.05),成功建立胰岛素抵抗模型。白杨素干预后,无论低剂量组还是高剂量组小鼠体重、血糖较胰岛素抵抗组上升缓慢(P0.05),血清胰岛素水平及HOMA-IR亦明显降低(P0.05),肝脏氧化应激水平明显下降(P0.05)。白杨素能够上调胰岛素信号通路中IR、IRS1、IRS2、Glut2及Glut4的mRNA表达,同时降低各炎症因子的表达,对NF-κB有抑制作用(P0.05)。其中高剂量组在炎症抑制方面更强(P0.05)。Western blot实验结果提示白杨素的改善作用与上调p-IRS1及下调p-p65相关。结论:白杨素降低了肥胖、高血糖及高胰岛素血症,缓解了胰岛素抵抗及氧化应激,这一作用可能与其调控胰岛素信号通路及抑制炎症因子表达密切相关。